Microchip Methods in Diagnostics 1st Edition Ursula Bilitewski (Auth.)

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Microchip Methods in Diagnostics
Series Editor
John M. Walker
School of Life Sciences
University of Hertfordshire
Hatfield, Hertfordshire, AL10 9AB, UK
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www.springer.com/series/7651

ME T H O D S I N MO L E C U L A R BI O L O G Y ™
Microchip Methods in Diagnostics
Edited by
Dr. Ursula Bilitewski
HelmholtzCentreforInfectionResearch,Braunschweig,Germany

Editor
Dr. Ursula Bilitewski
Helmholtz Centre for Infection Research
Braunschweig
Germany
ISBN: 978-1-58829-955-0 e-ISBN: 978-1-59745-372-1
ISSN: 1064-3745 e-ISSN: 1940-6029
DOI: 10.1007/978-1-59745-372-1
Library of Congress Control Number: 2008939907
© Humana Press, a part of Springer Science+Business Media, LLC 2009
All rights reserved. This work may not be translated or copied in whole or in part without the written permission of
the publisher (Humana Press, c/o Springer Science+Business Media, LLC, 233 Spring Street, New York, NY 10013
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neither the authors nor the editors nor the publisher can accept any legal responsibility for any errors or omissions that
may be made. The publisher makes no warranty, express or implied, with respect to the material contained herein.
Printed on acid-free paper
springer.com

Preface
The continuously increasing degree of miniaturization of electronic circuits and the devel-
opment of corresponding fabrication technologies stimulated progress also in other fields,
such as analytical chemistry. The ideas of “labs-on-chips,” in which all manual procedures
required to obtain an analytical result are automatically performed on a chip, were pre-
sented almost 20 years ago, and fabrication technologies for DNA chips, which allowed
to obtain genetic information in a highly parallel manner, were suggested already in the
beginning of the nineties. These early dreams of miniaturized highly integrated analyti-
cal devices were based on the combination of developments in very different fields. The
development and industrial fabrication of integrated electronic circuits had shown that
by photolithography silica and glass could be precisely structured in all three dimensions
on the micrometer or even nanometer scale. In biology, amplification methods such as
the polymerase chain reactions (PCR), gene sequencing technologies, and biotechnologi-
cal production methods for proteins were established. In organic chemistry, methods of
combinatorial solid phase synthesis were developed, which made peptides and oligonu-
cleotides easily accessible, and analytical separation methods were developed in which
columns or planar surfaces were replaced by capillaries, such as in capillary electrophoresis
or gas chromatography. This was accompanied by improvements in detectors, which had
to deal with lower amounts of analyte molecules, a side effect of miniaturization.
Nowadays the field of microchip methods is rather heterogeneous, and there is even
no common definition for the different approaches and devices. In this book microchip
methods are analytical methods, which are based on miniaturized systems. This covers
not only arrays for the simultaneous determination of several analytes (DNA microarrays
and protein or peptide microarrays) or the simultaneous analysis of several samples (cell
arrays), but also labs-on-chips, for which phrases such as µTAS (micro total analytical
systems) or MEMS (micro electronic and mechanical systems) are also used. Whereas
miniaturization of arrays involves the sizes and densities of spots, labs-on-chips are mini-
aturized fluidic systems and are not necessarily multidimensional.
The present book wants to illustrate the diversity of possibilities, as they are applicable
now in medical diagnostics. Thus, only those approaches are included, which have reached
a certain degree of maturation so that they are applicable in practice also by the nonexpert,
and for some approaches the corresponding systems are even commercially available.
As mentioned earlier three types of microchips were chosen: DNA microarrays, protein
microarrays, and labs-on-chips in particular related to cell analysis. There is one chapter
for each of these areas as an introduction to the fundamentals of the respective technol-
ogy, followed by chapters describing methods related to specific applications. However,
the chosen examples are by no way comprehensive and the methods are easily applicable
to other diagnostic areas. This is in particular true for the field of DNA microarrays,
which is at present the dominating microchip technology allowing the analysis of gene
sequences and of gene expression. There is only one chapter for each of these applica-
tions (Chap.3 for gene expression analysis, Chap. 4 for gene sequence analysis), though
there are numerous publications on different diagnostic problems using different types of
arrays. However, the basic procedures are identical for all these applications, and are not
v

vi Preface
dependent on the particular diagnostic application and even not on the array platform.
Moreover, the increasing experience with these arrays shows that the comparability of
results among array platforms and laboratories is improved, if experimental protocols
are harmonized. Thus, the presentation of different protocols would be counterproductive
with respect to harmonization, if not the need for the deviations is discussed. The same
idea of representative examples was followed for the choice of contributions dealing with
protein arrays and fluidic or cell-based chips. However, compared with DNA microarrays
the number of commercially available systems is much less, and thus, the fabrication of
those systems is also included (in particular Chaps. 9 and 12, but also protein and peptide
arrays in Chaps. 7 and 8).
Although the application of DNA microarrays has developed into an essential tool for
biomedical research the applicability of this new technology in practical diagnostics is still
debated. Thus, Chap. 2 was included to discuss the comparability of diagnoses based on
microarrays and on established methods. Again leukemia profiling is to be considered just
as an example.
This handbook wants to support the introduction of diagnostic methods based on
microtechnologies, as miniaturization leads to a reduction of sample volumes for a single
analysis or allows the parallel determination of several analytes without the need for more
sample or time. Moreover, novel molecular information could be made available from
patient samples, such as more comprehensive information about gene or protein expres-
sion, improving diagnostic possibilities. Whether these expected benefits for patients prove
to be true can be verified only by application and validation in practice.
Ursula Bilitewski
Braunschweig, Germany

Contents
Preface. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . v
Contributors. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ix
1. DNA Microarrays: An Introduction to the Technology . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1
Ursula Bilitewski
2. Discussion of the Applicability of Microarrays: Profiling of Leukemias . . . . . . . . 15
Torsten Haferlach, Ulrike Bacher, Alexander Kohlmann,
and Claudia Haferlach
3. Expression Profiling Using Affymetrix GeneChip Microarrays . . . . . . . . . . . . . . 35
Herbert Auer, David L. Newsom, and Karl Kornacker
4. Genotyping of Mutation in the Beta-Globin Gene
Using DNA Microarrays . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 47
Martin Dufva and Lena Poulsen
5. Antibody-Based Microarrays . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 57
Christer Wingren and Carl A.K. Borrebaeck
6. Application of Protein ArrayTubes to Bacteria, Toxin,
and Biological Warfare Agent Detection . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 85
Ralf Ehricht, Karin Adelhelm, Stefan Monecke,
and Birgit Huelseweh
7. Detection of Known Allergen-Specific IgE Antibodies
by Immunological Methods. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 107
Barbara I. Fall and Reinhard Nießner
8. Peptide Microarrays for Serum Antibody Diagnostics. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 123
Heiko Andresen and Frank F. Bier
9. Microchips for Cell-Based Assays. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 135
Martin Dufva
10. Bio-Cell Chip Fabrication and Applications . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 145
Honggu Chun, Dong Soon Lee, and Hee Chan Kim
11. Microchip Capillary Electrophoresis . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 159
Elaine T.T. Tay, Wai S. Law, Sam F.Y. Li, and Larry J. Kricka
12. Detection of Enteropathogenic Escherichia coli
by Microchip Capillary Electrophoresis . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 169
Wai S. Law, Sam F.Y. Li, and Larry J. Kricka
Index. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 181
vii

Contributors
KARIN ADELHELM • CLONDIAG Chip Technologies, Jena, Germany
HEIKO ANDRESEN • Fraunhofer Institut für Biomedizinische Technik,
Institutsteil Potsdam, Potsdam, Germany
HERBERT AUER • Columbus Children’s Research Institute, Columbus, OH, USA
ULRIKE BACHER • Bone Marrow Transplant Unit, University Hospital
of Hamburg-Eppendorf, Hamburg, Germany
FRANK F. BIER • Fraunhofer Institut für Biomedizinische Technik,
Institutsteil Potsdam, Potsdam, Germany
URSULA BILITEWSKI • Helmholtz Centre for Infection Research,
Braunschweig, Germany
CARL A.K. BORREBAECK • Department of Immunotechnology, Lund University,
Lund, Sweden; CREATE Health, Lund University, Lund, Sweden
HONGGU CHUN • Department of Biomedical Engineering, College of Medicine,
Seoul National University, Seoul, Korea
MARTIN DUFVA • Fluidic Arrays Systems And Technology (FAST), DTU Nanotech,
Department of Micro and Nanotechnology, Technical University of Denmark,
Kongens Lyngby, Denmark
RALF EHRICHT • CLONDIAG Chip Technologies, Jena, Germany
BARBARA ISABELLA FALL • München, Germany
CLAUDIA HAFERLACH • MLL Münchner Leukämielabor GmbH, München, Germany
TORSTEN HAFERLACH • MLL Münchner Leukämielabor GmbH, München, Germany
BIRGIT HUELSEWEH • German Armed Forces Scientific Institute for Protective
Technologies NBC Protection, Münster, Germany
HEE CHAN KIM • Department of Biomedical Engineering, College of Medicine,
ALEXANDER KOHLMANN • Roche Molecular Systems, Inc., Pleasanton, CA, USA
KARL KORNACKER • Columbus Children’s Research Institute, Columbus, OH, USA
LARRY J. KRICKA • Department of Pathology & Laboratory Medicine, University of
Pennsylvania Medical Center, Philadelphia, PA, USA
WAI S. LAW • Department of Chemistry, National University of Singapore, Singapore,
Republic of Singapore
DONG SOON LEE • Deptartment of Biomedical Engineering, College of Medicine,
SAM F.Y. LI • Department of Chemistry, National University of Singapore, Singapore,
Republic of Singapore
STEFAN MONECKE • Faculty of Medicine “Carl Gustav Carus”, Institute for Medical
Microbiology and Hygiene, Technical University of Dresden, Dresden, Germany
ix

x Contributors
DAVID L. NEWSOM • Columbus Children’s Research Institute, Columbus, OH, USA
REINHARD NIEßNER • Institute of Hydrochemistry, Chair for Analytical Chemistry,
München, Germany
LENA POULSEN • Microarray Group, Department of Micro and Nanotechnology,
Technical University of Denmark, Kongens Lyngby, Denmark
ELAINE T.T. TAY • Department of Chemistry, National University of Singapore,
Singapore, Republic of Singapore
CHRISTER WINGREN • Department of Immunotechnology, Lund University, Lund,
Sweden; CREATE Health, Lund University, Lund, Sweden

Chapter 1
DNA Microarrays: An Introduction to the Technology
Ursula Bilitewski
Summary
DNA microarrays allow the comprehensive genetic analysis of an organism or a sample. They are based
on probes, which are immobilized in an ordered two-dimensional pattern on substrates, such as nylon
membranes or glass slides. Probes are either spotted cDNAs or oligonucleotides and are designed to be
specific for an organism, a gene, a genetic variant (mutation or polymorphism), or intergenic regions.
Thus, they can be used for example for genotyping, expression analysis, or studies of protein–DNA inter-
actions, and in the biomedical field they allow the detection of pathogens, antibiotic resistances, gene
mutations and polymorphisms, and pathogenic states and can guide therapy. Microarrays, which cover
the whole genome of an organism, are as well available as those which are focussed on genes related to
a certain diagnostic application.
Key words: Specific probes, Immobilization, Hybridization, 2D pattern, Gene expression analysis,
ChIP-chip
DNA arrays are two-dimensional substrates on to which differ-
ent nucleic acids are immobilized as spots in an ordered pattern
(Fig.1). Each spot contains one type of nucleic acid and each
nucleic acid is a polymer of nucleotides of defined length, which
differs from the other nucleic acids in the array in the sequence
of the bases adenine (A), cytosin (C), guanine (G), and thym-
ine (T) (1,2). Depending on the diameter, density, and number
of spots the arrays are called macro- or microarrays (3). Typical
dimenisons of macroarrays are up to 22-cm length per side of
the substrate with up to approximately 1,200 spots per array
(www.clontech.com). They are made by spotting cDNAs with
1. Introduction
Ursula Bilitewski (ed.), Microchip Methods in Diagnostics, vol. 509
DOI: 10.1007/978-1-59745-372-1_1
1

2 Bilitewski
a length of 400–1,000 base pairs (bp) on positively charged
nylon membranes. Microarrays typically have the size of a micro-
scopic slide with up to approximately 100,000 spots/cm² and
are made of glass substrates onto which oligonucleotides are
spotted or synthesized. When similarities to electronic devices
such as the high degree of miniaturization and the application
of corresponding fabrication technologies are highlighted, DNA
microarrays are also called DNA chips.
DNA arrays are considered to be one of the major analytical
tools, with which the information from the various gene sequenc-
ing programmes can be explored. Nowadays sequences that are
characteristic for specific organisms or a particular feature of an
organism, or sequence variations [mutations or single nucleotide
polymorphisms (SNPs)] associated with disease are known. Thus,
it is possible to distinguish pathogenic from non-pathogenic
microorganisms and identify features such as antibiotic resistances
not only by microbiological methods but via the detection of the
corresponding genes without the need to cultivate the respective
organism (4). DNA samples can be analysed simultaneously for
several mutations in genes, which could increase the probability
for certain diseases (see Chap. 4) or influence the metabolism of
drugs (5). Most of these data were accessible in the past using
methods such as Southern blots, gel or capillary electrophoresis
in combination with PCR and restriction fragment length anal-
ysis, etc. With the introduction of DNA microarrays, however,
it became possible to simultaneously analyse several hundreds of
genes, even all genes in an organism, i.e. the whole genome. Applica-
tions range from genotyping of organisms, gene expression analysis for
example to classify patients according to the type of disease (see Chaps.
2 and 3) or to guide therapy, and gene–protein interaction analysis,
Fig. 1. Scheme of a DNA microarray. Each spot represents a specific probe, which is
characterised by sequence and length and can be a chemically synthesised oligonucle-
otide or a cDNA resulting from PCR. The scale of arrays can be adjusted to the applica-
tion, i.e. all ORFs identified in the genome of an organism can be represented in the
array by specific probes to allow comprehensive gene expression analysis, or a limited
number of genes is queried by probes in the array for a focussed application.
Spot
1a
Spot
1b .......
.......
.......
.......
Spot
1c
Spot
1d
Spot
1e
Spot
2a
Spot
3a
Spot
3b
Spot
2b
Spot
2c
Spot
2d

DNA Microarrays: An Introduction to the Technology 3
which is relevant for the identification of binding sites of proteins
that regulate gene expression (6). Among these application areas
gene expression analysis or “transcriptomics”, as it is called, when
it is performed on a genome-wide scale, is the best established,
whereas genome-wide analysis of interactions between proteins
and DNA is a more recent extension of chip applications (7, 8).
These investigations are called ChIP-chip experiments as they
are based on the combination of chromatin immunoprecipita-
tion (ChIP) and DNA chips. The following section is focussed
on the technological fundamentals of DNA chips as background
information for the application-oriented following chapters of
this book.
DNA arrays are based on the specific base pairing of comple-
mentary nucleotides (A-T and C-G) leading to double-stranded
sequences of nucleic acids. Unlike traditional analysis of blots the
strand being specific for the gene under investigation is immo-
bilized as capture probe and the corresponding counterpart, the
target, is isolated from the organism or cell culture and present in
solution. Thus, probes have to be designed that allow unambigu-
ous identification of genes, as no separation of nucleic acids with
respect to size occurs, and the target usually has to be labelled
prior to detection. In macroarrays, probes are cDNAs with a
length of 400–1,000 bp (e.g. www.eurogentec.com; www.clontech.
com), which leads to a high specificity for the targets. In micro-
arrays, probes are oligonucleotides with lengths <200 bp (e.g.
www.eppendorf.com; www.operon.com; www.ocimumbio.com;
www.agilent.com; www.affymetrix.com), which are chemically
synthesized either separately or directly on the chip (www.affyme-
trix.com). Synthesis on the chip is possible only for rather short
oligonucleotides of 25 bases. As the specificity of gene detection
is reduced, when short oligonucleotides are used, on those chips
the recognition of a single gene is based on the combination of
several probe oligonucleotides covering an extended sequence of
the target gene (see Chapts. 2.1 and 2.2) and control oligonu-
cleotides with a mismatch base in the centre of the sequence.
When longer probes are used (at least 50 bp), for each gene a
single specific probe is designed. All probes are immobilized on
the substrate in an ordered two-dimensional pattern (Fig. 1),
and on a single slide all open reading frames (ORFs) of a genome
or only a subset of genes can be represented (2).
2. Technology

4 Bilitewski
The design of probes and the choice of hybridization conditions
are crucial points for chip development and application and
still offer room for improvements (9). Here, only some general
aspects are mentioned:
The most important aspect is the specificity of the probe for
the gene of interest. In gene expression analysis RNAs are isolated
from the cells and labelled cDNAs are produced by reverse tran-
scription. The whole mixture is applied to the array and allowed
to hybridize (Fig. 2) (10). Thus, each probe should bind only the
transcript of the respective target gene among the presence of all
other transcripts. To acieve this degree of specificity with a single
probe per gene a minimal length of 50 nucleotides per probe was
reported (11). When shorter oligonucleotides are used, several
probes should be combined for each gene. Bioinformatic tools
and services are offered, which help to design probes of suit-
able sequences and lengths. The detection of mutations or SNPs
in genes does not allow the free choice of the probe sequence,
2.1. Probe Design
Fig. 2. Scheme of the experimental procedure.
Isolation of RNA
Labelling
Incubation with array
.......
.......
.......
.......
.......
.......
.......
.......
Control cell culture Sample cell culture
Fluorescence detection:
mRNA present only in control, mRNA present only in sample,
mRNA present in both cultures, mRNA present in none of the cultures

because this is given by the sequence neighbouring the variable
region in the target gene (6).
The hybridization reaction of nucleic acids is characterized
by the affinity constant and by the kinetic constants of the asso-
ciation and dissociation reaction. The affinity between two single
strands (i.e. probe and complementary sequence on the target)
is influenced by the sequences of the nucleic acids and by experi-
mental conditions. The guanine – cytosine (G – C) base pair con-
tains three hydrogen bonds, the adenine – thymine (A – T) base
pair only two, so that G – C-rich sequences are more stable than
A – T-rich sequences of the same length. Moreover, as each base
pair contributes to the strength of the overall binding, the affin-
ity increases with the length of the interacting sequences, i.e. the
number of matching nucleotides (12). If the sequence of matching
base pairs is interrupted by a mismatch, this does not totally pre-
vent hybridization of both strands but leads to a reduced stability
(13). The degree of destabilization is dependent on the lengths
of the remaining perfectly matching sequences and, thus, on the
position of the mismatch. Usually double strands are less stable,
when the mismatch is localized in an internal position compared
with mismatches at the end of the sequence (13, 14). Thus, signal
intensities increase with the length of the probe and decrease, if
mismatches are present in the centre of the sequence. If, how-
ever, variations in nucleotide sequences have to be detected, such
as in the analysis of SNPs, too long probes are not suitable, as it
is more difficult to find hybridization conditions, which allow
the distinction between completely matching sequences and sin-
gle mismatches. Thus, for SNP detection another assay format
was developed, called minisequencing, in which the specificity
of DNA polymerases for completely matched double strands as
substrates in the extension reaction of primers is utlized. The 3′-
ends of corresponding probes are the nucleotides of interest, so
that the primer is extended by a labelled nucleotide only in the
case of a perfect match. With different probes for each SNP to be
investigated, which query the different possibilities for the SNP,
identification of the respective sequence is possible (15). How-
ever, there is no free choice of probe sequences; only the length
of the probes is a variable, which can be used for the adjustment
to experimental conditions.
Even for given nucleic acid strands the affinity between the
two complementary strands can be influenced by additives to the
hybridization solution (16). It was found that formamide inhibits
the formation of hydrogen bonds, and thus it reduces the sta-
bility of the double-stranded helix. Moreover, nucleic acids are
negatively charged due to the phosphate groups of the nucleotide
backbone. Without compensation of this charge by counterions
even complementary single strands are electrostatically repelled
and monovalent cations (Na+
) are added to enable formation of

6 Bilitewski
double strands. Another important experimental parameter is the
hybridization temperature (14, 16), as double strands are sepa-
rated into single strands by increasing the temperature, a reaction
called “melting of DNA”. The temperature, at which 50% of the
double strands are dissociated, is called the melting temperature
Tm
of the sequence and is used for characterization of the stabil-
ity of the double strand. For oligonucleotides it can roughly be
calculated from the sequence by using the approximation
( ) ( )
= ° × − + ° × −
m 2 C A T 4 C G C ,
T (1.1)
with (A–T) being the number of A–T pairs and (G–C) the number
of G–C pairs in the sequence.
For longer hybrids the approximation
[ ] ( )
m 81.5 C 16.6log 0.41 %G C 500 /
Na
T c n
+
= ° + + − − (1.2)
is used with n being the length of the hybridising strand and cNa+
the concentration of Na+
ions.
If Tm
exceeds the hybridization temperature by 10–15°C,
efficient hybridization is observed. If the hybridization tempera-
ture is much lower than Tm
, hybridization of strands containing
mismatches or being only partly complementary will also occur.
However, the length of the probe is important not only for
the specificity of the hybridization and the stability of the double
strand, but also for the kinetics of the reaction. The hybridiza-
tion rate is mainly determined by the access of the targets to
the immobilized probes, which is influenced by the density of
the immobilized probes (17), the length and complexity of the
sequence, and by the diffusion rate, which depends on tempera-
ture, concentrations, and viscosity of the target solution. In longer
probes secondary structures may be formed and the complex-
ity of the sequence, i.e. the degree of non-repetitive sequences,
increases; both also lead to a reduction of the hybridization rate.
It was found that hybridization equilibrium is reached only after
at least 24h hybridization time, even if oligonucleotide probes
are used (14).
Probes, which are prepared by PCR or by chemical synthesis of
oligonucleotides, are applied to the substrate surfaces with spotters,
which allow the deposition of pL to nL volumes (10, 18). Contact
spotters dip pins into the probe solution and place the adher-
ing liquid to the substrate by touching the substrate surface.
Non-contact spotting relies on the generation of drops from a
capillary with piezoelectric pumps. The major disadvantage of
contact spotters is the need for precise adjustment of the height
of the pins so that contact forces and area are the same for all
spots. This is difficult to achieve in particular, when a number
of pins are combined for the simultaneous deposition of several
2.2. Immobilization

probes. Non-contact spotting requires a clean environment to
prevent blocking of capillaries by ambient dust. In any case the
low volumes rapidly evaporate, so that fast-binding reactions are
a prerequisite, though evaporation times can be prolonged by
additives, for example glycerol. Additionally, environmental con-
ditions, such as temperature and humidity, should be controlled
to increase the reproducibility of spot quality. Spots typically have
a diameter of 100–200 μm with spacings in the same order of
magnitude (200–300 μm), so that up to 244,000 features (spots)
are combined on a single slide (www.agilent.com).
Nucleic acids (oligonucleotides or PCR products) are immo-
bilized on glass slides or nylon membranes (3). However, systems
based on beads or tubes are also available (www.illumina.com;
www.clondiag.com).
As nucleotides are negatively charged, they interact by elec-
trostatic attraction with positively charged surfaces as delivered
by nylon membranes or glass slides pre-treated with poly-L-lysine
[e.g. (10); http://cmgm.Stanford.edu/pbrown/protocols] or
aminopropyltriethoxysilane (APTS or GAPS) [e.g. (19); www.
corning.com]. If PCR products are used, they are denatured
either prior (19) or after spotting. Usually, UV irradiation is re-
commended as an additional cross-linking step, but heating to 60
and 120°C is also possible (10). As each nucleotide contributes
with an additional charge, the electrostatic forces increase with
increasing length of the nucleic acids, which makes this immo-
bilization method applicable mainly for longer probes, such as
cDNAs. Zammatteo et al. (19) showed that for a 255bp capture
probe the efficiency of this electrostatic attraction exceeded the
efficiency of even covalent attachment.
The alternative to immobilization via physical interactions is
covalent binding. This requires the availability of suitable func-
tional groups on both the probe to be immobilized and the
immobilization substrate, usually glass. Amino-functionalized
nucleic acids can be coupled easily to epoxy- or aldehyde-modified
glass surfaces (10). Resulting Schiff bases can be reduced by
sodium borohydride. This method proved to be highly effective
and specific and suitable for the application of very small volumes
of liquid (19).
As solid-phase synthesis of oligonucleotides is well established,
oligonucleotide capture probes can also be synthesized directly on
the chip surface. This was described by Pease et al. already in 1994
(20), and later (1996) by Weiler and Hoheisel (21) and Blanchard
et al. (22). The basic reaction is the reaction of phosphoramidite-
activated deoxynucleosides with suitable functional groups, usu-
ally hydroxyl groups, on the glass or polypropylene surface. At
Affymetrix these hydroxyl groups are generated at selected sites
by illumination of the chip through an appropriate mask (1, 18
20). In a first step the solid support is derivatized with a covalent

8 Bilitewski
linker molecule terminated with a special, photolabile protect-
ing group. Illumination leads to deprotection and the formation
of hydroxyl groups. In the next step the nucleoside derivative
to be coupled is added, being the corresponding 3′-phosphor-
amidite and 5′-photoprotected. Illumination with another mask
generates a different pattern of hydroxyl groups allowing each
desirable sequence to be synthesized. As the number of probes
in one array is limited by the physical size of the array and the
achievable photolithographic resolution, approximately 750,000
oligonucleotides were synthesized on 1.28 × 1.28 cm² chips with
a spot diameter of only 5 μm (www.affymetrix.com). A sequence
of 200–300 bases of the gene of interest is chosen and a number
of non-overlapping 25-mer probes are designed and synthesized
on the chip together with mismatch control probes containing
a single base difference in the central position. This redundancy
should improve accuracy and improve the signal-to-noise ratio.
Hybridization of a target nucleic acid to the immobilized probe
is an affinity reaction between two complementary reaction part-
ners. Hence, this reaction was followed in real time by affinity
sensor systems, such as surface plasmon resonance (SPR) devices
[e.g. (13, 17, 18)], resonant mirrors (12), or grating coupler
systems (23). Real-time monitoring of the hybridization allowed
the analysis of the influence of probe and target length, probe and
target concentration, and the position of mismatches not only on
the resulting steady state signal but also on the association and
dissociation rates. It was shown that the affinity constants deter-
mined by SPR correlated well with melting temperatures and that
decreasing affinities due to decreasing lengths of the target influ-
enced mainly the dissociation rate (13).
Usually the detection of mRNAs utilises specific features of
nucleic acids, i.e. the possibility to synthesise a copy DNA strand
(cDNA) by a reverse transcriptase reaction, which allows the
integration of labelled nucleotides as components of the reac-
tion mixture. Suitable labels are radioactive isotopes, such as
³³P or ³²P (www.clontech.com), fluorescent dyes, biotin (www.
clondiag.com), amine groups, or micro- and nanoparticles (3, 10,
24). Labelling with biotin or with amine groups requires addi-
tional staining, e.g. with streptavidin conjugates or conjugates of
an anti-biotin antibody with horseradish peroxidase or with gold
(www.eppendorf.de) or with amino-reactive fluorescent dyes. The
advantage of gold labels is the light pink colour, which appears on
the arrays and which can be amplified by silver deposition from
the reduction of silver ions with hydroquinone, so that success-
ful hybridization is visible and can even be quantified by a simple
flatbed scanner (24). With fluorescence detection, however, it is
possible to use different dyes for the control and the sample, and
combine both labelled mixtures during hybridization so that a
2.3. Detection
Principles

direct comparison of signals on the same array is possible (Fig. 2).
As fluorescence intensities and labelling efficiencies usually are
different for different labels, a dye-switch has be performed, i.e.
the dye previously used to label the control has to be used to label
the sample and vice versa.
Consideration of the aforementioned labels usually integrated
in cDNAs (Cy3, Cy5, fluorescein, Alexa 647, phycoerythrin,
biotin) shows that the most often used detectors are fluorescence
detectors allowing the analysis of chip surfaces. Light sources are
preferably lasers with the appropriate wavelengths. Nowadays
systems are available with more than one light source, which
allow the excitation of different dyes. The emitted fluorescence is
captured by CCD cameras or by photomultipliers with the latter
showing the higher sensitivity.
A two-dimensional pattern of spots of different intensities results
from scanning the array (Fig. 2). Independent of the detection
principle signals are converted to electrical signals and, thus,
appear in a grey scaling. Typically signals from the control and
the sample are shown with different colours, which, however, are
not the true colours of the labels, but are artificially chosen.
Because of the highly regular arrangement of spots, grids
specifying the spot locations can be easily overlaid on the images.
To quantify the signal intensity of each spot the background has
to be quantified, which is usually done by measuring signals in a
circle surrounding the spot. These background values are used
for correction and filtering and only data that are significantly
above the background are considered for further evaluation. Sig-
nificant intensities are two standard deviations above the back-
ground level (10). These data are the basis for the comparison of
different samples, which requires further data treatment, such as
data transformation to a logarithmic scale, calculation of ratios,
and normalization to account for different amounts of nucleic
acids in each sample or for different labelling efficiencies. The
final outcome of data analysis should be a matrix, in which for
each gene (row in the matrix) a quantitative measure is given
for each sample (column in the matrix) (Fig. 3). There are sev-
eral challenges, which make a direct access to these data difficult,
some of which were already mentioned (different signal intensi-
ties resulting from different labels and varying amounts of nucleic
acids). In addition, a single gene may be represented by several
probes; each array may be present several times on the same slide,
and the experiments should be repeated to give biological replicates.
3. Data Analysis

10 Bilitewski
Fig. 3. Simplified scheme of data analysis. Signals are indicated just as qualitative data as “present” or “absent”,
whereas in practice quantitative information can be obtained from data acquisition. From each sample several values
exist for each gene, as experiments have to be repeated (replicates), a dye-switch may be necessary, or each gene is
represented by more than one probe on the chip. This information has to be extracted, so that finally in each sample or
experimental condition a single value can be assigned to each gene, which is represented on the chip. This results in a
matrix, in which the samples are the columns and the genes are the rows. Cluster algorithms are used to cluster genes
according to a similar behaviour in the different samples.
Samples
Sample 1
Genes
Sample 2 Sample 3
Replicates and dye-switch

All these data have to be combined to a single value for each
gene, and the procedures to achieve this goal are not standard-
ized. Thus, according to the guidelines of Minimum Informa-
tion About a Micoarray Experiment (MIAME) (www.mged.org/
Workgroups/MIAME/miame.html), which are proposed by the
Micoarray Gene Expression Database group (MGED), not only
the final data, from which conclusions were drawn, are to be
delivered, but also information about data processing routines
and the raw data (25).
Microarrays are used for genotyping, as they allow the detection
of specific genes or gene variants. Pathogenic bacteria (26) and
fungi [(27), www.clondiag.com] can be detected via species-
specific sequences within the ribosomal DNA, and for the analy-
sis of resistances against antibiotics sequences that are specific for
ß-lactamase genes can be used (4). For example 27 and 28 oligo-
nucleotides, respectively, with a length of up to 24 bp proved to
be sufficiently specific and were immobilized as probes on glass
slides to distinguish 12 Candida and Aspergillus species or sev-
eral bacterial groups (gram-negative and gram-positive) and spe-
cies (e.g. Mycobacterium tuberculosis, Listeria monocytogenes, and
Staphylococcus aureus). For pre-enrichment of organisms samples
were incubated overnight (26) or for up to 72 h (filamentous
fungi). After DNA isolation, PCR was performed to amplify the
target region of the DNA and introduce fluorescent labels. Hun-
dred and twelve out of 115 strains of bacteria isolated from food
(26), and in 16 out of 21 clinical isolates the fungal strains (27)
were correctly identified requiring just a single relatively short
cultivation step.
The detection of sequence variants, such as mutations or SNPs
that are causes of diseases, was described as early as 1989 (15, 28).
A frequently applied format for SNP analysis is minisequencing or
allele-specific primer extension, in which the 3′-end of the probe on
the microarray is the variable nucleotide. The primer can only be
extended with a fluorescently labelled nucleotide by a DNA polymer-
ase, if there is a perfect match. Thus, fluorescent spots indicate the
matching sequences. Alternatively, with high stringency conditions
hybridization to only allele-specific probes can be achieved, so that no
additional extension reaction is required. For reliable analysis sense
and anti-sense probes should be used, with different probes for all
four possible nucleotides at the target position within the sequence.
The length of the probe, the position of the target nucleotide
4. Examples for
Applications
4.1. DNA Analysis

12 Bilitewski
(close to the centre of the probe), and hybridization conditions
have to be carefully optimized, as for high-quality SNP results
only perfectly matching sequences should give a hybridization
signal (www.febit.eu).
Transcriptional profiling, i.e. the detection of mRNAs that are
present in the cell or tissue at the time of sampling, is one of the
major application areas of DNA microarrays (3). As these data
indicate, which genes are required in a given state of the cell or
organism, the profiles are used to distinguish pathogenic from
healthy states (e.g. cancer diagnosis) and guide therapeutic strat-
egies, to examine the functions of genes or elucidate the mode
of action of drugs (29) or toxic compounds (30, 31). Suitable
microarrays can comprise oligonucleotides but also cDNAs, and
may cover all ORFs identified within the genome or just a subset
of ORFs.
Repetition of experiments in different laboratories, with dif-
ferent array platforms and even in the same laboratory usually
shows more or less significant variations. These are partly due to
different experimental protocols starting from sample prepara-
tion to data analysis and can be minimized by standardization
of as many steps as possible (31). Other fluctuations, however,
are due to biological noise, which means that the expression of
some genes is inherently sensitive to already minor differences in
cell treatment. These genes can only be identified by repetitive
analysis and should be eliminated from the analysis of transcrip-
tional profiles. Thus, the reliability of an expression signature is
not necessarily improved when the number of genes in an array
is increased.
DNA-binding proteins perform a variety of important func-
tions in cells, such as the regulation of gene expression. Thus,
the analysis of interactions of transcription factor proteins with
their respective DNA-binding sites in response to environmental
stresses or associated with the progression of diseases has become
an important issue, and several new techniques were developed,
which allow this type of analysis on a genomic scale. Among
these, ChIP-chip analysis, also called ChIP-on-chip analysis, and
the DamID technologies are based on microarrays (7, 8).
ChIP-chip is the combination of chromatin immunoprecipi-
tation with microarray detection. The cellular sample is treated
with formaldehyde so that DNA-binding proteins are cova-
lently attached to their target DNA. Shearing of the chromatin,
immunoprecipitation of the protein–DNA adduct from nuclear
extracts with specific antibodies, and reversal of the formaldehyde
cross-links leads to an enrichment of the target DNA sequences.
They are amplified, labelled with a fluorescent dye, and finally
hybridized to the microarray. Comparison to a reference sample
4.2. mRNA Analysis
4.3. Analysis of
Protein–DNA
Interaction

without enrichment shows the binding regions of the protein of
interest. This analysis was first applied to transcription factors of
the yeast S. cerevisiae and showed that binding of regulatory pro-
teins occured even several kilobases away from the transcription
start of genes. The major drawbacks of this principle are the lim-
ited availabilities of suitable antibodies and microarrays and the
low expression of some transcription factors. The first ChIP-chip
experiments were performed with microarrays spotted with PCR
amplicons covering essentially all intergenic regions. With the
utilization of microarrays with oligonucleotides designed to tile a
portion of the genome, binding sites of proteins can be defined
with higher resolution. However, this type of microarrays is avail-
able only to a limited degree. Low expression of transcription
factors or antibodies with poor affinities results in only a poor
enrichment of the target sequences. This problem is overcome to
a certain extent by the DIP-chip assays and by the DamID tech-
nology. DIP-chip assays are based on purified proteins, which are
in vitro incubated with genomic DNA fragments so that binding
occurs. The concentration of the protein is defined and known,
and as it is expressed with a suitable tag, it can easily be separated
from the sample and the bound DNA sequences are analysed
as described earlier. However, as this is an in vitro assay, results
do not reflect a physiological state (8). DamID technologies are
based on overexpression of the protein of interest as a fusion to
Dam (DNA adenine methyltransferase). Dam methylates ade-
nine in the vicinity of the protein binding site. Digestion with a
methyl-specific restriction enzyme, amplification, labelling, and
hybridization then highlight the target regions. However, defini-
tion of binding sites with high resolution is not possible, because
methylation can extend over a few kilobases from the binding
site (7).
These analyses are recent extensions of the applications of
DNA microarrays, and are yet mainly used in research.
References
1. Lipshutz, R.J., Fodor, S.P.A., Gingeras, T.R.,
Lockhart, D.J. (1999) High density synthetic
oligonucleotide arrays, Nat. Genet. 21 Suppl.
1, 20–24
2. Brown, P.O., Botstein, D. (1999) Explor-
ing the new world of the genome with DNA
microarrays, Nat. Genet. 21 Suppl. 1, 33–37
3. Jordan, B.R. (2001) DNA Microarrays: Gene
expression applications, Springer, Berlin
4. Perreten, V., Vorlet-Fawer, L., Slickers, P.,
Ehricht, R., Kuhnert, P., Frey, F. (2005)
Microarray-based detection of 90 antibiotic
resistance genes of gram-positive bacteria, J.
Clin. Microbiol. 43, 2291–2302
5. Tempfer,C.B.,Riener,E.K.,Hefler,L.A.,Huber,
J.C., Muendlein, A. (2004) DNA microarray-
based single nucleotide polymorphisms may be
useful for assessing the risks and benefits of hor-
mone therapy, Fertil. Steril 82, 132–137
6. Hoheisel, J.D. (2006) Microarray technol-
ogy: Beyond transcript profiling and geno-
type analysis, Nat. Rev. Genet. 7, 200–210
7. Bulyck, M.L. (2006) DNA microarray tech-
nologies for measuring protein–DNA inter-
actions, Curr. Opin. Biotechnol. 17, 422–430
8. Hudson, M.E., Snyder, M. (2006) High-
throughput methods for regulatory element
discovery, BioTechniques 41, 673–681

14 Bilitewski
9. Lee, M., Trent, J.M., Bittner, M.L. (2007)
Optimization of oligonucleotide microarray
fabricated by spotting 65-mer, Anal. Bio-
chem. 368, 61–69
10. Ehrenreich, A. (2006) DNA microarray tech-
nology for the microbiologist: An overview,
Appl. Microbiol. Biotechnol. 73, 255–273
11. Kane, M.D., Jatkoe, T.A., Stumpf, C.R., Lu,
J., Thomas, J.D., Madore, S.J. (2000) Assess-
ment of the sensitivity and specificty of oli-
gonucleotide (50mer) microarrays, Nucleic
Acids Res. 28, 4552–4557
12. Watts, H.J., Yeung, D., Parkes, H. (1995)
Real-time detection and quantification of
DNA hybridization by an optical biosensor,
Anal. Chem. 67, 4283–4289
13. Persson, B., Stenhag, K., Nilsson, P., Larsson,
A., Uhlén, M., Nygren, P.A. (1997) Analysis
of nucleotide probe affinities using surface
plasmon resonance: A means for mutational
scanning, Anal. Biochem. 246, 34–44
14. Dorris, D.R., Nguyen, A., Gieser, L., Lockner,
R., Lublinsky, A., Patterson, M., Touma, E.,
Sendera, T.J., Elghanian, R., Mazumder, A.
(2003) Oligodeoxyribonucleotide probe
accessibility on a three-dimensional DNA
microarray surface and the effect of hybridi-
zation time on the accuracy of expression
ratios, BMC Biotechnol. 3, 6
15. ÓMeara,D.,Ahmadian,A.,Odeberg,J.,Lunde-
berg, J.(2002) SNP typing by apyrase-mediated
allele-specific primer extension on DNA micro-
arrays, Nucleic Acids Res. 30, e75
16. Relogio, A., Schwager, C., Richter, A.,
Ansorge, W., Valcarcel, J. (2002) Optimiza-
tion of oligonucleotide-based DNA microar-
rays, Nucleic Acids Res. 30, e51
17. Peterson, A.W., Heaton, R.J., Georgiadis,
R.M. (2001) The effect of surface probe
density on DNA hybridisation, Nucleic Acids
Res. 29, 5163–5168
18. Campas, M., Katakis, I. (2004) DNA biochip
arraying, detection and amplification strate-
gies, Trends Anal. Chem. 23, 49–62
19. Zammatteo, N., Jeanmart, L., Hamels, S.,
Courtois, S., Louette, P., Hevesi, L., Remacle,
J. (2000) Comparison between different
strategies of covalent attachment of DNA
to glass surfaces to build DNA microarrays,
Anal. Biochem. 280, 143–150
20. Pease, A.C., Solas, D., Sullivan, E.J., Cronin,
M.T., Holmes, C.P., Fodor, S.P.A. (1994)
Light-generated oligonucleotide arrays for
rapid DNA sequence analysis Proc. Natl.
Acad. Sci. 91, 5022–5026
21. Weiler, J., Hoheisel, J.D. (1996) Combining
the preparation of oligonucleotide arrays and
synthesis of high-quality primers, Anal. Bio-
chem. 243, 218–227
22. Blanchard, A.P., Kaiser, R.J., Hood, L.E.
(1996) High-density oligonucleotide arrays,
Biosens. Bioelectr. 11, 687–690
23. Bier, F.F., Kleinjung, F., Scheller, F.W.
(1997) Real-time measurment of nucleic-acid
hybridisation using evanescent-wave sensors:
Steps towards the genosensor, Sens Actuators
B 38/39, 78–82
24. Taton, T.A., Mirkin, C.A., Letsinger, R.L.
(2000) Scanometric DNA Array detec-
tion with nanoparticle probes, Science 289,
1757–1760
25. Brazma et al. (2001) Minimum information
about a microarray experiment (MIAME) –
Toward standards for microarray data, Nat.
Genet. 29, 365–371
26. Wang, X.W., Zhang, L., Jin, L.Q., Jin, M.,
Shen, Z.Q., An, S., Chao, F.H., Li, J.W.
(2007) Development and application of an
oligonucleotide microarray for the detec-
tion of food-borne bacterial pathogens, Appl.
Microbiol. Biotechnol. 76, 225–233
27. Leinberger, D.M., Schumacher, U., Auten-
rieth, I.B., Bachmann, T.T. (2005) Devel-
opment of a DNA microarray for detection
and identification of fungal pathogens in
invasive mycoses, J. Clin. Microbiol. 43,
4943–4952
28. Hacia, J.G. (1999) Resequencing and muta-
tional analysis using oligonucleotide microar-
rays, Nat. Genet. 21 Suppl. 1, 42–47
29. Hughes, T.R., et al. (2000) Functional dis-
covery via a compendium of expression pro-
files, Cell 102, 109–126
30. Hamadeh, H.K., Afshari, C.A. (2004) Toxi-
cogenomics Principles and Applications,
Wiley, New Jersey
31. Members of the toxicogenomics research con-
sortium (2005) Standardizing global gene
expression analysis between laboratories and
across platforms, Nat. Methods 2, 1–6

Chapter 2
Discussion of the Applicability of Microarrays: Profiling
of Leukemias
Torsten Haferlach, Ulrike Bacher, Alexander Kohlmann,
and Claudia Haferlach
Summary
Leukemias are classified according to clinical, morphologic, and immunologic phenotypes, caused by
specific genetic aberrations in association to distinct prognostic profiles. Usually the subtypes are defined
using complementary laboratory methods, such as multiparameter flow cytometry, cytogenetics in com-
bination with fluorescence in situ hybridization, and molecular methods such as the polymerase chain
reaction. The genetic variations of the different subtypes lead to distinct changes also in gene expression,
which is comprehensively analysed by DNA microarrays. Thus, first gene expression profiling studies
showed that analysis with whole-genome DNA microarrays leads to a prediction accuracy of 95.6%
with respect to the classical methods, and even allowed a further distinction of subtypes. It is expected
that diagnostic strategies can be optimized with this new technology and that the understanding of the
molecular pathogenesis of leukemias will be significantly improved. This could also lead to the identifica-
tion of new targets for future drugs.
Key words: Gene expression profiling, ALL, AML, CLL, Classification of subtypes
Acute myeloid leukemia (AML), acute lymphoblastic leukemia
(ALL), and chronic lymphatic leukemia (CLL) are very hetero-
geneous disorders composed by a variety of different subtypes.
These subtypes are defined by different clinical, morphologic, and
immunologic phenotypes caused by specific genetic aberrations
in association to distinct prognostic profiles. Chronic myeloid
leukemia (CML) is defined by the Philadelphia or BCR-ABL
1. Introduction
Ursula Bilitewski (ed.), Microchip Methods in Diagnostics, vol. 509
DOI: 10.1007/978-1-59745-372-1_2
15

16 Haferlach et al.
translocation, but the progress of stages is accompanied by
acquisition of additional chromosomal abnormalities (“clonal
evolution”).
In AML clonal karyotype abnormalities are detected in
~55% of all cases; in ALL in ~80%. These abnormalities cover
a broad spectrum of numerical changes and balanced and
unbalanced translocations. Karyotype is the strongest prog-
nostic parameter in AML and in ALL: In AML survival ranges
from ~75% in the patients with the favorable reciprocal rear-
rangements t(8;21), t(15;17), and inv(16)/t(16;16) to <10%
in complex aberrant karyotype, which is defined by the simul-
taneous occurrence of 3 clonal chromosomal changes. In
childhood ALL the reciprocal t(12;21) rearrangement shows
an excellent prognosis with >90% long-term survival following
standard chemotherapy, whereas Philadelphia positive ALL
with the t(9;22) shows survival of ~40% even when allogeneic
stem cell transplantation is performed.
Cases with normal karyotype can in the majority of cases be
further characterized and categorized by molecular investiga-
tions. The molecular mutations are likewise heterogeneous and
affect genes coding for transcription factors, tyrosine kinases,
protooncogenes, or tumor suppressor genes, which show specific
interactions.
In the majority of CLL cases it was as well possible to deter-
mine prognostically relevant genetic aberrations, such as dele-
tions of the 17p53 tumor suppressor gene, which are associated
to an inferior outcome. In CML clonal evolution is found in ~5%
of all patients at diagnosis only, but the acquisition of additional
karyotype abnormalities during follow-up predicts progress and
serves as a marker of progression.
This diversity of leukemia subtypes can only be mastered
by a combination of complementary laboratory methods: cyto-
morphology/chemistry, immunophenotyping by multiparam-
eter flow cytometry (MFC), cytogenetics in combination with
diverse fluorescence in situ hybridization (FISH) techniques,
and molecular methods such as the polymerase chain reaction
(PCR). This interactive approach only allows an optimized risk
stratification as basis for individualized therapeutic decisions.
Beyond that, the interplay of these methods paved the way
to targeted therapy in some leukemia subtypes, e.g., in acute
promyelocytic leukemia (APL) with t(15;17)/PML-RARA.
This AML subtype is characterized by a differentiation stop
in granulopoiesis and by aberrant promyelocytes with multiple
Auer rods (“faggot cells”). Therapy with all-trans retinoic acid
(ATRA) eliminates the differentiation stop in granulopoiesis
and can prevent the life-threatening complications that often
result from coagulopathy, which is pathognomonic for this
leukemia subtype.

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Title: Frühling
Author: Johannes Schlaf
Release date: September 11, 2012 [eBook #40733]
Most recently updated: October 23, 2024
Language: German
Credits: Produced by Norbert H. Langkau, Sandra Eder and the
Online
Distributed Proofreading Team at http://www.pgdp.net
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F r ü h l i n g
Von
Johannes Schlaf
I m I n s e l - V e r l a g z u L e i p z i g

Frühling
Draußen am Hinterdeich hab ich mein Duselplätzchen.
Ein kleines Stündchen gehts durch die blütendurchwölkten Gärten,
an Blumenbeeten, Gräben, Wiesen und Feldern vorbei, und ich bin
an Ort und Stelle.
Und dann lieg ich tief im Gras, in der hellen Sonne, die Hände
unterm Genick, und pfeife und simuliere in den blauen Himmel und
die milchweißen Frühlingswolken hinein. Blühender Weißdorn über
mir. Der frische Wind drin und Bienen, Hummeln, Fliegen und
Schmetterlinge. In die Länge und Breite dehnen sich vor mir die
Wiesen hell gegen dunkelgrüne Binsenstrecken hin zum Fluß
hinunter, wogen und gleißen mit smaragdenen Wellen. Und in weiten
Farben breitet sich roter Sauerampfer dazwischen und lilaweißes
Schaumkraut mit zierlichen Dolden, gelbe Ranunkeln und
Kuhblumen, und mit feinem rauchigen Silberflimmer die tausend und
tausend Lichterchen der Butterblumen.
Langsam, im Schritt weidend, tauchen Kühe drüben auf dem andern
Ufer aus dem frischgrünen, lichtflinkernden Erlengehölz. Braune,
schwarze und gefleckte. Sie rupfen und brüllen. Und gemächlich her
bis gegen die blitzende stillgleitende Fläche. Hoch aber aus dem
weitgewölbten weißlichen Blau die Lerchen, und Kibitze hinter mir
auf den Wiesenbreiten, Elstern und Raben. Kuckuck, Stare und
Finken im Gehölz, und aus den tiefen grünen Dämmerungen heraus
die Nachtigall.
Fern, weit vom Fluß herübergetragen, das Tuten eines Dampfers und
das Kreischen der Möwen.

Hergetragen und verweht, aufjubelnd und verebbend hundert und
hundert Laute und Lieder; und der herrliche, fröhliche Tumult der
weiten Farben: hell, verhauchend, nah und fern, gleißend und
sänftigend.
Und die warme, helle Sonne. Die stille, stille Sonne …
Meiner Einsamkeit entgegen.
So lustig bin ich, so stillfröhlich, so zutäppisch liebevoll wie ein Kind.
Mit jedem Pulsschlag, mit jedem Beben meines Körpers, mit jeder
Bewegung liebkose ich die weit und lustig gebreitete Welt. Und mich
liebkosen die Käfer, die Blumen und Bäume mit Summen und Blüten
und Laub, mit Farben und Düften und hundert sanften Berührungen.
Der leise Wind durch Blätter und Gezweig liebkost mich, kühle
Schatten und helle, warme Lichter, blaue Fernen und heitre Nähen,
ziehende Wolken und Wellen.
Zwischen einem Getreidefeld und dem Erlengebüsch eines Grabens
schlendr' ich hin.
Hoch ragt es über mich hinauf, hinein in endlos tiefe, klare Bläue.
Lichtglänzendes Laub und wogende, wellende Halme biegen sich zu
mir her, vor mir, hinter mir, zu beiden Seiten. Ganz, ganz versunken
bin ich in jungem, duftenden Grün; über und über ist mein Kleid voll
gelben Samenstaubes und feinen Blütengeriesels.
Kühles, wogendes, anschmiegendes Schmeicheln. Weite, weite
jubelnde Bläue. Mückenspiel vor mir her, und auf blinkendem
Gekräusel stille, weiße Blumen …
Hier lieg ich nun unter meinem Weißdorn, spiele und wandle mich
nach Herzenslust.

Ich bin der alte Braak-Klaas. Bin über achtzig Jahre alt. Weißhaarig,
mit rosigem Gesicht und hundert freundlichen Runzeln sitz ich vor
meiner Tür. Habe lange rote Strümpfe, schwarzbauschige Kniehosen
und eine hellblaue Weste an mit zwei Reihen dicker Silberknöpfe.
Starkknochig sind meine Handgelenke, und lässig liegen meine
braunrunzligen Hände auf den Knien, breit, behaart, mit dicken,
knotigen Fingern und Adern. Ich sitze vor meinem Haus und zwinkre
unter weißen Brauen in die sonnigen Apfelblüten hinein.
Hoch und langgestreckt mit goldiggrünen Moosflecken hebt sich
über mir das mächtige, braunverwitterte Strohdach über der
niedrigen Backsteinwand mit ihren weißen Kirschblüten und ihren
Fensterchen breit in die blaue Klarheit.
Die Vögel singen in meinem Garten, und oben im Nest um die
Giebeldrachenköpfe herum klappert der Storch bei der brütenden
Storchmutter. Durch die offene Halbtür, von der Diele, weht ein
feines, blaues Räuchlein vom Herd her in die warme,
sonnenzitternde Luft. Mächtige Eichenschränke stehn da drin im
kühlen Dunkel, zwei Jahrhunderte alt, und massives,
rauchverdunkeltes Gerät mit hellbraunen, eingelegten Blumen und
Vögeln, und rotbäckige Enkelkinder spielen auf dem glatten Estrich.
Drüben blinkert das Braak zwischen blühendem Gebüsch durch. Ein
Fischewer schwebt still vorüber mit rotbraunem, weitgebauschtem
Segel. Über blumenbunten Beeten flimmert die warme Luft, und der
Flieder duftet, und überall arbeiten sie in den Gärten.
Klug bin ich, schlau für zwölfe, mit meinen blinzelnden,
wasserblauen Äugelchen, und meine Gedanken sind geschwätzig
und plaudern von meinen achtzig Jahren, plaudern und nehmen
Anteil, stillen, spöttischen Anteil.
Mild bin ich, freundlich, zufrieden, klug und hindämmernd müde …
Und jetzt bin ich ein Kind.

In einem roten Leibchen sitze ich auf einem Schubkarren, ganz
eingewühlt in gelbe Blumen unter weißen, tiefhängenden Blüten,
kreische und patsche mit dicken Ärmchen. Und wieder still. Staune
und starre mit weiten klaren Augen in tausend sonnige Wunder
hinein. Erkenne wieder und lerne zu. Und wie Staunen, Lust, Furcht
und Begier wunderlich aus mir herausstammeln, wächst leise, leise
in mir eine goldigfrische Welt; knospet und treibt und will blühen.
Von tausendfarbigen Hoffnungen jauchzt, braust, leuchtet und
umduftet mich die weite Welt, und die blau verhauchenden Fernen
locken in unschuldiger, reiner, frühlingsfrischer Pracht, locken so
fern, so weit, so wunderbar …
Tiefer den Kopf ins Gras zurück.
Nun macht mich mein begehrender, ahnender Sinn kleiner und
immer kleiner, und nun bin ich winzig, ganz ganz winzig klein.
Ich habe ein goldgrünes Röckchen auf einem runden, festen,
geschmeidigen Körperchen, tripple mit sechs flinken Beinchen und
habe zwei Äugelchen wie rote Rubinen, zwei scharfe, feine
Äugelchen. Schlüpfe, schmiege, winde mich durch eine wunderliche,
üppig verschlungene Endlosigkeit, wandere und weile, und wandere
wieder, emsig, rastlos.
Von hier bis zum Fluß hinunter sind nun viele, viele Meilen, und da
unten ist ein Meer, ein unabsehbares, strahlendes Meer.
Ich wandre und wandre, raste mit atemlosem Staunen, und wandre
wieder, schaue und staune.
Jetzt bin ich tief, tief unten, in einem feuchten, braunen Dunkel. Da
ist ein millionenfältiges Gewirr von Formen, Farben und Körpern. Da
spreizt sich in dicken, dichten Ranken härenes Gekrissel, da filzt es
sich über- und durcheinander mit Milliarden von Spitzchen und
Hälmchen, von Blättchen, Knöspchen und Blüten. Millionen
mächtiger Stämme im dichten Beieinander streben draus empor.

Große, rote Würmer schlingen sich zwischen ihnen hin, und es
kribbelt, und schlüpft und kriecht und schmiegt sich, zirpt, singt,
pfeift und raschelt in einer Welt von Tönen, die noch nie mein
vordem ungefüges Menschenohr vernommen hat, von Formen und
Körpern, dunkel und bunt, wie sie nie mein Menschenauge sehen
konnte. Die seh ich alle mit meinen feinen, roten Äugelchen, und
höre sie mit einem scharfen, unendlich scharfen Gehör, und nehme
das alles wahr mit zarten Sinnen.
Da glimmt Feuchte in feinen Perlchen, und in ihnen lebt das
durchsichtige Getümmel neuer Welten in heimlicher Irispracht. Da
dehnt es zarte Körperwände und zieht sie zurück. Da rinnt es
zusammen, wächst und teilt sich. Da keimt es und bildet sichs,
verschlingt und wehrt sichs im unendlichen Wechsel, im ewigen Hin
und Wieder.
Und aus tiefstem braunen Dämmer streb ich hinauf am Schaft eines
Grases, das nun ein Baum ist, ein mächtiger Baum, und strebe
einem Schimmer nach, einem Glanz entgegen.
Ich fühle, wie es unter mir dadrinnen sich dehnt und mehrt, wie es
rauscht von Säften und gärt mit freudigem, sehnendem Wachstum.
Und nun teilt sich der Schaft in breite, langgespreizte Halme, und sie
wieder mischen sich in ein milliardenfältiges, lichtgrünes Gewirr im
ewigen Wechsel schwankender Biegungen. Millionen mächtiger
Diamanten aneinander hingereiht in gleißender Pracht an den
Rändern langgestreckter Stengelblätter. Flinkern und Leuchten
silbriger Härchen. Lustiges Getier dazwischen mit tausend Tönen
und Farben, mit Zirpen, Summen, Schrillen und Jauchzen, mit
schwirrender Flügelpracht.
Lichter wird es nun und lichter. In einem sanften Biegen und Wiegen
bin ich. Da seh ich die unerhörte Schönheit riesiger, leuchtender
Farbenwunder gegen ein unendliches, laut, laut jubelndes Blau.
Mächtige, silberweiße Sterne schaukeln da oben mit blitzenden
Schwingungen auf schlanken, rauchflaumigen Stielen. Ich sehe
runden Silberrauch, der sich um weißgrüne Kelchknöpfe ballt. Und
blendend goldene große und kleine Sterne. Sanftgewiegte, still

strahlende, fröhlich blitzende Wunder. Unzählige blaue, lilaweiße,
rote, violette, tausendfarbige Kelch- und Glockenpracht, gezackt,
beperlt, bewimpert, glatt, mit feinem Netzwerk bunter Äderchen, im
dicht und weit geregelten Beieinander an schlanken und dicken
runden Stengeln hinauf. Buntes, süß verwirrendes Gekrissel von
Grasdolden und die tiefglühende, breitentfaltete Pracht des roten
Mohns.
Und höher, immer höher!
Auf dem goldenen Kelchknopf eines riesigen, silberleuchtenden
Sternes sitz ich, oben, hoch oben auf dem höchsten Wipfel, und
schaukle mit selig dämmernden Sinnen, betäubt von Duft, Licht und
dem weiten, unendlichen Einklang holden Getöns. Bunte,
breitentfaltete Schwingenpracht gleißt über mir und an mir hin,
rastet, bebt, glänzt, leuchtet auf herrlichen Blütenwundern, surrt und
tönt in berauschenden, taumelnden Tänzen hinein in die warme,
lichte Unendlichkeit. Jauchzende, kreischende, glockenklar süße,
brüllende, wiehernde, zwitschernde, millionenstimmige Lust.
Und süße, warme Kraft in den Muskeln meiner Schwingen und
bebende, sehnende Lust in meinem Leib. Und auf, hoch hoch hinauf
in Wärme, Lichtflut, Glanz und Farbe. Und von mir geht ein Tönen
aus, ein feines, wunderliches Tönen …
Jetzt habe ich einen Schilfhalm herausgezogen und bin nun
Wißbegier, ganz Wißbegier und erkenne.
Hier ist ein langes, faltendes, blaugrünes Blatt. Und hier unter ihm
ein zarteres mit einem helleren Grün. Und Blatt schäl ich von Blatt
und Hülle von Hülle. So, und nun weiß ich eine große, stolze
Weisheit: Blatt schließt sich um Blatt und Hülle um Hülle in alle
Unendlichkeit hinein.
Ach, ich muß lachen, lachen!

Ich sehe einen schnurrigen alten Herrn mit einer mächtigen Brille
auf einer langen, spitzen Nase. Er sieht aus wie ein uralter
Chinesengreis. Sein Kopf ist wie ein Totenschädel, über den sich eine
vergilbte, unendlich faltige Haut spannt. Er hat einen breiten
mokanten Mund mit einer hochmütigen, ewig spöttisch-dummen
Unterlippe und wasserblaue, neunmalkluge Äugelchen. Der kann die
wunderschönsten Kunststücke aus lauter Normen, Regeln und
Regelchen, Gesetzen und Gesetzchen zusammenbauen. Ein so
kluges Wirrwarr, daß einem die Augen übergehen vor lauter lauter
Staunen. Und mit seinen alten Beinchen versteht er sich auf den
Eiertanz wie kein zweiter.
Ach – jetzt! hier! wie ungeheuer, ungeheuer spaßhaft der alte
Würdetaper ist!
O, da unten zwischen feuchter, bröckelnder Krume schlingt sich
durch das schwarze Dunkel ein blöder Wurm; und hier liegt ein
zweibeiniges Tier, das spintisiert und klebt mit seinem Wollen und
Entschließen an allerlei Gedankenleim fest. Weit, weit dahinten aber
blauen ferne Berge. Und dort, auf dem höchsten Gipfel, auf der
höchsten Wipfelspitze der höchsten Kiefer, da zwitschert und zirpt
eine kleine Meise, und wenn sie will, so fliegt sie weit, weit in die
blaue Himmelsfreiheit hinein …
Jetzt will ich. Und will ein Prophet sein, ein Seher.
Die Blumen blühen, die Bäume rauschen, die Wasser plätschern, die
Vögel singen, und der Himmel blaut mir durch die weite, reifende
Mittagsstille Offenbarungen, und das endlose Beieinander und
Ineinander aller Wesen leuchtet mir eine Offenbarung.
Ich stammle Verheißungen, die sich erfüllen: jetzt, morgen, in
hundert, in tausend oder in hunderttausend Jahren, hier, dort,
irgendwo; die Wirklichkeit sind und sich erfüllt haben, jetzt, gestern,
vor hundert, vor tausend oder hunderttausend Jahren, hier, dort,
irgendwo …

Alles, alles ist eine einzige, große, fröhliche Einheit und alles
Lebendige eine einzige große Familie.
Der andre? Die andre? Ist es nicht immer derselbe und ist es nicht
immer dieselbe? Jeder für jeden, alle für alle, alles für alle und alles?
Trug ist Leid und Haß, Trug ist Trennung und Selbstqual, und Lüge
ist die ewige Vernichtung, ein neckisches Spiel zuhöchst, ein bunter
Traum der einen unendlichen Ruhe, die alles ist und in der alles
beschlossen ist …
Dort drüben, im fernen, weißen Sonnendunst, breitet sich das Dorf.
Hinter breit gewipfelten, dunkelgrünen Linden hervor verschimmert
die Kirchturmhaube mit ihrem hellblauen Schiefer spitz und gleißend
in den gleißenden Himmel. Langgedehnt das rote Kirchdach, und die
braunen Dächer lugen mit Giebelputz und Storchnestern aus weißen
Blütenwolken.
Eng, gedrückt, so zieht es sich lang durch das weite Marschland hin.
Wärme, Summen und blendende Farben.
Schweigen. Lichtes, schwüles Schweigen.
Und der weite, weiße Dunst wogt und flirrt durch die heißen Höhen
bis tief über Wiesen, Felder und flinkernde Wasser gegen mich her.
Ein Tönen hör ich und ein heimliches, tiefes Summen.
Ferner, ferner Orgelton und Gesang der Gemeinde.
Wechselnd, wellend, auf und ab, hin und wieder, im Bann eines
feierlichen, getragenen Rhythmus.
Eine Sehnsucht hör ich in ihm, eine stille, niedergezwängte
Sehnsucht.
Das ist die Sehnsucht nach Gott, nach dir, nach dir …
Und ich bin traurig, traurig …

Eingezwängt bin ich in zehn »Du sollst!«; in hundert, in tausend »Du
sollst!« …
Traurig bin ich, traurig, traurig …
Und aus dem weiten, schwülen Brüten kommt ein Brüllen, ein
langgedehntes, schmerzliches Brüllen.
Eine Kuh drüben bei den Erlen.
Bis an ihren weißen Bauch steht sie in dem hohen, schimmernden
Gras. Sie hat den breiten Hals starr vorgereckt, und wie geängstigt
stieren ihre großen, dunklen Augen.
Ich bin zusammengefahren.
Wie ein Sehnsuchtsschrei, irgendwoher, aus einem niederen,
zwängenden, dumpfen Leid.
Und die weite Schwüle nimmt mich hin, umspinnt mich, umspinnt
mich dicht mit einem trüben, dumpfen Brüten, mit einem tiefen,
tiefen Grauen.
Unsinn!
Wie herrlich glüht hier die Nelke. Und die gelbe Königskerze hier:
wie aus Gold, aus lautrem glänzenden Gold.
Wandern! Wandern!
Neulich der Spaziergang. Da waren zwei Enten, schnatterten zwei
schneeweiße, prächtige Enten unten im Tal im hellen Bergbach. Und
ein Spitz mit fröhlichem Gebell gegen mich her. Und über Stakete
unzählige Rosen in entfalteter Pracht. Und wie schön das Dorf aus
den wogenden, reifenden Getreidebreiten hervor. Schwalben an mir
hin, dicht an mir hin, als ich rastete, daß ich das feine Wehen ihres
Flügelschlags spürte.
Ich weiß, ich sang und schwatzte vor mich hin, ich weiß nicht was.
Aber in mir war eine himmelweite Seligkeit und ein einziger, stiller

Friede …
Lachen, lachen, lachen kann ich wieder, jauchzen, brüllen vor
trotziger Lust am Leid, und mein heller Lebenswille geht von mir aus
mit einem tiefen, befreienden Atem, und durch Laub und Gräser
geht ein heimliches, fröhliches, neckendes Flüstern, weht kühl über
meine Stirn und weiter über die Breiten hin, und ich atme es ein, tief
in mich hinein wie einen süßen, geliebten Atemzug.
Lust am Leid, wilde, wild unbändige, fruchtbare Lust am Leid,
Aufatmen und helles, klares, sonnenhelles Gestalten aus wilder
Leidlust …
Nun bin ich wieder bei Laune.
So! – Jetzt lieg ich auf dem Bauch, die Deichböschung hinauf, lege
mein Skizzenbuch vor mich hin und zeichne, was mir gerade in den
Sinn kommt, allerlei Karikaturen.
Und nun beseh ich mir, was ich gezeichnet habe, und blättre und
sehe, was ich vor Tagen zeichnete.
Da ist ein altes, nacktes, schwammiges Weib, unsagbar häßlich,
neulich mal im Anfall einer bösen Laune hingekritzelt. Ich betrachte
es mit lustig gekniffenen Augen und summe allerlei Übermut.
Die Sonne liegt grell auf dem Papier und läßt, wenn ich etwas von
der Seite drauf niedersehe, die Konturen in leisen Irisfarben
schillern. Ein Käferchen knistert drüber weg, macht halt, biegt seine
Fühlerchen, putzt sich den Hinterleib und trippelt weiter. Weiße,
gekrümmte Blütenblättchen treibt ein Lufthauch von dem Weißdorn
über mir herab. Sie liegen blendend silberhell auf dem Papier wie auf
mattem Goldgrund.
Der alte, gute, regenbogenschillernde Fettwanst.
Sachte, sachte, mit viel Sorgfalt bringe ich ihm jetzt zwei zarte
Elfenflügelchen an den Schulterwampen an. Die Sonnenstrahlen

tuschen sie mit Farben meinem Stifte nach.
Auch sie gut! – Alles, alles gut!
Und ich blättre weiter.
Da ist ein Geck. Mit einem winzigen Hütchen, weitem Jackett und
Sackhosen.
Wie unbändig schön!
Auch er bekommt die beiden Flügelchen.
Und hier ein Betrunkener. Sein Taumeln ist ein Tanz, ein schöner
Rhythmus.
Hier ist ein Weib, das ich bei einer Haustür kauern sah. Zerlumpt,
vergrämt, stumpf, schmutzig.
Die Arme!
Ein mächtiges Mitleid überkommt mich.
Aber ich lache und weiß, irgendwie wirkt es in die Ferne und tröstet
sie und macht sie lachen. Ihr Abbild aber hier, das ist nun schön, so
schön wie die strahlendste Schönheit, die je gebildet wurde, die je in
Fleisch und Bein einhergewandelt ist.
Und hier ist eine Dirne gezeichnet, wie sie mit schwankendem,
hüftenschaukelndem Gang, in Nacht und Wetter, an flackernden
Laternen vorbei, sich an den dunklen Häusern entlang drückt. Sie
wird gescholten und mißachtet. Aber einmal, als ich bei ihr war oben
in ihrer armen Spelunke, als ich sie in hingegebener, mitleidiger
Liebe küssen konnte, da wurde ihr müdes stumpfes Herz lebendig
und blühte mir entgegen wie ein schöner Frühling. Und in dieser
Erinnerung nun ist sie mir so rein und adlig wie die reinste Jungfrau
und blüht in Schönheit und Würde …
O überall, überall seh ich heimlich eine schöne, verjüngte
Friedenswelt. Und ein Nahen spür ich, ein Nahen …
Gesang, Fröhlichkeit, unbändiges, unsterbliches Gelächter, Wein und
goldenes Bechertönen, und Liebe, Liebe, Liebe! …

Der Länge nach lieg ich auf dem Rücken und lächele mit
halbgeschlossenen Augen in das tiefe, blendende Blau hinein.
Nah und fern hör ich eine Musik.
Durch das Gesumme der Bienen und Hummeln, durch das Wispern
der Gräser und Binsen, durch das heimliche, verlorene Plätschern
blinkenden Gekräusels, aus den tausend Stimmen der Vögel,
zwischen den rauschenden Büschen.
Sie lebt in dem Gebrüll der Kühe, in den zierlichen Schwunglinien
glänzender Pferdeleiber, wie sie grasen; in dem Muskelspiel ihrer
prächtigen Formen, wie sie dort gemächlich schreiten, oder schnell,
mit mutwilligen Sprüngen hineilen durch das hohe, blumenüberragte
Gras. Sie flirrt und flimmert und wellt in zierlichen Schwingungen
durch die blauen Lüfte, wogt und schwirrt und schwingt wie feine
Metallsaiten in dem Spiel der Insekten.
In unendlichen Farben, Formen, Tönen ein einziges Lied, ein
einziger, einender, mächtiger Rhythmus, ein gewaltiger Einklang.
Jauchzt, jubelt, flötet, klagt, braust.
Kommt aus lichtdämmernden, gleißenden Weiten, wird offenbar, süß,
schaurig, freundlich in den Nähen, verklingt in den Fernen.
Und ich: hingenommen in ihn, sein Widerklang, ganz, ganz sein
Widerklang für eine Minute der Verlorenheit.
Suchen, haben und verlieren, und wieder suchen, halten und
verlieren. Immer wieder und wieder und immer von neuem.
Das ist das Leben. Das ist alles Schicksal, und aus diesem einen
werden alle Leiden und Lieder.
Eine Musik hör ich, nah und fern. Einen einzigen millionenstimmigen
Akkord: das ist das Lied der Kraft. Das ist die Kraft.

Wer versteht es? Wer kann es widertönen lassen aus einer reinen,
unverzagten Seele?
Ich will nichts als liegen und lauschen und immer lauschen, und
lauschen und stammeln wie ein Kind, hingegeben in Ehrfurcht, in
Lust und Jubel, in Schreck, in Furcht und Grauen und mit kindlichem
Vertrauen wiederkehren und immer, immer wiederkehren …
Ich sehe in den Kelch einer Winde, in den flachen, süß duftenden
Kelch einer Winde hinein. Und wie ich ihn betrachte, blicke ich mit
weiten, wild erschauernden Augen in einen Abgrund der Erkenntnis.
Es ist eine einzige, große, unendliche Ruhe und Einheit, die sich
durch die unermeßlichen Stufen des Lebendigen sucht und verliert,
ewig sucht und ewig verliert und doch sich ewig hat in der Liebe und
als Liebe.
Leben! Urbeginn!
Hinauf, hinauf mit sehnendem, allmächtigem Drange in Milliarden
von verschlungenen Lebenswellen, die ansteigen und verrinnen, und
mit immer neu verjüngter Inbrunst mächtiger und mächtiger dem
Licht entgegen, dem Licht …
Es faltete sich auseinander in die Unendlichkeit der Formen und
Farben, in immer mächtiger, sehnender kreisenden Schwingungen,
durch die Weltenalter und Zeitmillionen unbegreiflichen und
ungeahnten Klarheiten entgegen, im Auf und Nieder, im Hin und
Wieder, im Werden und Vergehen …
Es wurde zu gewaltigen, ungeheuren Körpern und brüllte und
jauchzte seine Inbrunst dem Unbekannten zu, suchend, suchend,
suchend, und streckte sich, sich selbst zum Untergang und Leid, mit
neuen, immer neuen, immer sehnenderen Sinnen dem
Unbegreiflichen entgegen. Und es bebte hinein in den dunklen
Kreislauf der Kraft mit dem Worte des Menschen, dem armen
zitternden, eben erwachenden …

Das Wort aber, das erwachende, erstarkende Wort zwang das
Verstreute zusammen, daß es geeint sich in die Mannigfaltigkeit
unzähliger neuer Triebe und Kräfte spalte.
Ich träume und träume, und tief, tief lausche ich in mich hinein. Wie
ein heimliches, staunendes Lauschen ist es in mir, wie ein stille
treibendes, keimendes, aufblühendes Werden hellerer Augen, als die
sich aus dem blöden Farbfleck jenes Urtiers entwickelten.
Nur noch eine dünne, dünne Scheide zwischen uns und einer neu
erweiterten Welt neuer Wunder. Entgegen, entgegen der Klarheit
hellerer Sinne …
Frühling! Frühling! Ewiger Frühling! Licht, das sich entflammt, hinein,
hinein in ewig weichendes Dunkel!
Hier, hier, in mir, dort, irgendwo krümmt es sich in süßer, banger
Werdequal in nun schlechter Hülle neuen Wundern neuer
Offenbarungen entgegen.
Sonne! Sonne! Sonne!
Meine Blicke haften in dem weiten Blau, mit Sehnsucht, mit
Sehnsucht …
Und nun – nun bin ich ein goldlichtes Wesen. Breites Silbergefieder
sprießt aus meinen schimmernden Schultern, und heißes, goldenes
Sonnenblut braust durch meine Adern, und ich rausche empor,
empor, empor …
Eine Musik fern und nah.
Und nun in mir ein Wort, geboren aus Licht und Getön; es bebt mir
im Ohr wie ein tiefer, voller Glockenton, irgendwoher. Aus einer
Nähe, aus einer mystischen Nähe.

Ich kann sie nicht sehen vor lauter Licht. Nur meine Sehnsucht,
meine Sehnsucht ist ihrer teilhaftig.
Ein Wort …
In mir ist ein Auge, und das sieht durch dieses Wort eine Welt.
Sie schwebt her zu mir mit webenden, gleitenden, leuchtenden
Formen, naht und vollendet sich, mehr und mehr und immer mehr.
Freiland! Freiland!
Lauter Jubel ist in mir; lauter, laut aufjauchzender unbändiger Jubel!
Freiland! Freiland!
Und nun wieder still, still, und ich lächle und sehe.
Durch einen grauen Dämmer muß ich und durch alle Fährlichkeiten
der sieben Berge, vorüber an Drachen und Gewürm, an Riesen und
Hunden mit feurigen Augen, groß wie Wagenräder, und über
gefährliches Zaubergelände mit Fiebermoor und großen, schwülen
Blumen, zwischen denen böse, schöne Fabelwesen hausen und irre
Lichter schweben, bis ich zu einem Walde komme; da wird es still.
Da rauscht und leuchtet buntes Gefieder zwischen dunklen, dichten
Wipfeln, da huschen Sonnenstrahlen in träumerischer, neckender
Verlorenheit, da sprießen heimlich wunderbare Blumen, und da
wogen kostbare Düfte seltener Kräuter über helle Wiesen zu mir her,
und wie im Traum geh ich durch milde, heimliche Märchenlichter.
Da klingen aus blauen, sonnenzitternden Dämmerungen
glockenreine Melodien, und zierliches Getier schlüpft durch Gras und
Laub und blickt mich an mit zutraulichen, klugen Augen.
Und wie ich so auf stillen Waldpfaden hinwandre durch streichelndes
Laub und schmeichelnde Lüfte, über blumige Wiesen, und mehr und
mehr der Lärm der Welt hinter mir erstirbt, da komme ich zu einer
hohen, hohen Mauer, die dehnt sich weithin durch die finstren
Schauer himmelanrauschender Edeltannen. So weit ich blicken kann,
klettert dunkler Efeu hinauf, und Teufelszwirn ballt sich hernieder in

graugrünen Dunstwolken, und dazwischen weit, weithin entfacht mit
freundlichen Lichtern unzählige Blüten von Dornrosen.
Aber da ich ein Sonntagskind und ein Berufener bin, weicht das
Dickicht willig vor meinen Schritten, und eine Pforte tut sich auf, und
sicher und mühelos schreite ich durch das dicke, trotzige Mauerwerk.
Dann bin ich in einer andren Welt.
Heller scheint hier die Sonne, und heimlicher sind die Schatten,
klarer die stillen Wasser und fröhlicher das Geriesel lebendiger
Bäche, grüner die Wiesen und Hügel. Mächtiger gipfeln sich hier die
Wälder in die Wolken; mit heißeren Farben und Düften glühen die
Blumen, üppiger und immer üppiger spreizen Pflanzen und Kräuter
seltsame Blätter, und in tieferen Farben brennen bei Auf- und
Niedergang die Himmelsbreiten. Große, schöne Menschen haben
sich hier zusammengefunden, geschwisterlich, ein König jeder in
Freiheit und in der Seligkeit weltfernen Glückes.
Kräftiger ist das Mark in ihren Knochen, und freier strahlt ihr Blick
der Welt entgegen, und wie der Blitz folgt dem Gedanken die Tat.
Geeint leben sie in Freiheit; nicht mit der zagen, feigen, schielenden
Neigung der anderen, die sich ärmlich und ängstlich und sich selbst
mißtrauend zwischen Gesetzen und Normen hinfristet.
In ewigen Sommertagen leben sie hin, in Festen,
himmelanjauchzenden, herrlichen Gleichnissen, wie das Leben treibt
und glüht, wie die Lebenssäfte mächtig durch die Adern der Welt
brausen und der blöde Staub sich mit der tausendfältigen Pracht
berückender Gebilde in die blaugebreiteten Unendlichkeiten faltet …
Weite, lichte Nacht. Warme, blühende, duftende Sommernacht mit
der endlos gebreiteten Pracht der Gestirne.
Tausend Lieder irren unter dem hellen Mond aus Blütenwolken und
Laubdämmerungen und …
Still! Still!
Eine Musik hör ich, nah und fern, in allen Nähen und Weiten, einen
einzigen millionenstimmigen Akkord. Das ist das Lied der Kraft. Das

ist die Kraft. Das bist du, das bin ich, das ist alles, alles, und die
Kraft, die einzige, einige, eine. Und aus ihrem Wandel und Wechsel
tönt es mit neuer, ungestümer Lebenslust, das alte, wildfreudige
Zornwort: Ça ira! Ça ira! …
Und andere Weisen hör ich nun. Alte, uralte Lieder. Und doch neu,
immer wieder neu und ewig neu.
Und alle das eine: Du, und das Lied von dir.
Und so ist sein Text:
Die Sonne und alle Gestirne: dein Blick. Strahlend, leuchtend,
sehnend, hellachend, freundlich, klar, mild, schelmisch verhüllt. Und
die Blumen: der Duft deines Körpers. Die ganze, weite Erde: das ist
dein Leib. Und das goldige Lebenslicht über den Breiten ist die
Wärme deines Leibes, und die milde Luft, weiches Moos und Gras
sind seine schmeichelnde, süße Weichheit. Graswogen und alle die
vielen, vielen, unendlichen Bewegungen: so gehst du, und so ist das
Wogen und Wiegen deiner Glieder. Und wie es singt und flötet und
zwitschert und jauchzt: das ist deine Stimme.
Überall, überall bist du und nur du, und nichts ist ohne dich und
nichts außer dir. Alles ist dein Bild und dein Gleichnis.
Du bist das liebe Mädel, das mich neulich erfreute. Du bist heute
blond, morgen schwarz, übermorgen braun, bist Mann und Weib,
Kind und Tier, alles, alles …
Wie könnt ich deiner jemals überdrüssig werden? Immer und immer
wechselst du und erfreust mit tausend wechselnden Gestalten mein
liebes, veränderliches Herz.
Und du, du bist in Lust und Pein das drängende, treibende,
nimmerrastende Leben hier hinter dieser dünnen Grenze meines
Körpers, die nur ein neckender, spielender Schein ist zwischen mir
und dir.

Das sind die Lieder, die alten, uralten, immer neuen Lieder, das eine,
einzige, das Lied von dir …
Mein Kopf liegt an deiner Brust.
Und du, goldig, licht, jung, beugst dich über mich.
Mit deiner linden Hand träufelst du mir Heliotrop auf die Stirn. Ich
atme den süßen Duft und deinen Atem, der süßer ist als er.
Mein Gesicht fühlt deinen Herzschlag, deinen ruhigen, ruhigen
Herzschlag.
Und Auge in Auge, tiefer immer, versinkender.
Leise, leise hernieder zu mir, und leise, leise ich hinauf zu dir. Du
lächelst, biegst den Kopf hintüber, und deine Hände drücken sich
schwach gegen meine Brust mit schelmischem Drängen.
Und nun: Lippe an Lippe. Lange … Zwischen halbgeschlossenen
Lidern dunkelt dein Blick. Und nichts ist als sein Glanz und eine süße
Wärme von dir zu mir.
Frieden. Und aus ihm Kraft, Gedanken, Entschlüsse, lichter, immer
lichter, kühner und kühner, und Erkenntnisse …
Ein Jubel ist in mir, ein ungeduldiger Jubel, der hinauf will, hinauf,
bis in den siebenten Himmel hinauf! …
Was ich hier träume und denke und dichte, das ist nicht mein
Verdienst und nicht meine Schuld. Das ist das goldige flammende
Rund da oben, das sind die Blumen, die mich umblühen, die Vögel,
die mich singend umschweben, Halme und Laub, die mich
umrauschen, die Menschen nah und fern, du.
Alles, alles ist dein Verdienst, und wie ich mit dir eins bin, so ist es
erst auch meins.

Sind wir denn getrennt: du und ich?
Nicht hier, nicht jetzt. Jetzt, hier sind wir geeint in einem einzigen,
weiten, stillen Frieden. Hier sind wir Blume und Baum und Gras,
heller Himmel und goldiges Kornwogen, Farben und Vogellied, hier
blühst und singst und leuchtest du in mir und ich in dir. Hier bin ich
frei …
Wir beide, wir kennen Augenblicke, Stunden: wunderliche
Augenblicke! Wunderliche Stunden!
Was peinigen wir uns mit harten, höhnenden Worten? Was quälst du
mich? Was quäl ich dich?
Lirum larum! Ich weiß jetzt eine große, tröstende Weisheit!
Lust ist Qual, und Qual ist Lust, und es gibt und kann in alle Ewigkeit
hinein nur eins geben: Liebe, Liebe, Liebe, dreimalheilige Liebe,
wechselnd in zwei Gegensätzen und doch einzig, einig und allein
Liebe, Liebe, Liebe …
Wie sich deine Brauen über deinen Augen wölben, ihr Schnitt, ihre
Schwingung, der feine, weiße Bogen unter dem dunklen Apfel,
dieser Glanz in diesem Rund und diese schimmernden Lichter in das
Weiß hinein, diese Nasenflügel und ihr feines Beben, die sanften,
runden Linien dieses Gesichtes mit dem milden Spiel von Rot und
Weiß, das Gleiten und Biegen dieser Körperformen: das alles, alles
spricht von einem bestimmten Schicksal, und dieses Schicksal ist
eine lebendige Seele und hat dieses Fleisch, diese Glieder und ihr
Verhältnis zueinander geschaffen. Dieses Schicksal aber, diese Seele
lieb ich, lieb ich in Mitleid, in Staunen, in versinkender, anbetender,
hingegebener Bewunderung …

Ich simuliere, wie ich dir den Hof mache.
Eine putzige Welt hat der liebe Gott um uns hergerichtet mit artigem
Getier und Menschenvolk, zu unsrer Verlustierung sonderbarlichen
Treibens beflissen.
Sie fischen und gärtnern, graben, pflügen und bauen Beete und
Felder, feilschen und beklatschen sich, bekalkulieren Witterung und
Ernte, essen, trinken und schlafen, rechnen sich über heute und
morgen hin, schustern und schneidern, zimmern und schmieden,
zeugen sich fort und sterben, sind gesund und krank, hassen und
lieben sich, und alles ist eine artige, lustige Komödie.
Und Wälder, Felder und Fluren, weitgedehntes Land mit lautem und
stillem, mit tausendbuntem Getier: kriechend, hüpfend, springend,
laufend, flatternd und schwirrend, mit Blumen und Gräsern, mit
tausend bunten Farben und Bewegungen, mit Leuchten, Glitzern und
Flinkern ist um uns hergerichtet, uns, uns zur Lust: von dieser Welt
bau ich dir träumerische, ausgelassene, viele, viele bunte Lieder in
freien Weisen, wie sie mir so durch den Kopf schießen.
Alles, alles, ganz sollst du mich haben; denn das alles war und ist
mein liebes, gepeinigtes, lauschendes und schaffendes Herz mit Lust
und Leid, Elend und Glück, Haß und Liebe: ein Spiel nun alles, ein
närrisches, lustiges Spiel, denn du, du bist in der Welt und in mir
beschlossen und eine einzige Wonne, ein einziges, unermeßliches
Glück. Und mit diesem ist für alles gesorgt, jetzt und immer und
ewig …
Heute morgen schlenderten wir beide durch die Felder, schaukelten
unsere zusammengefügten Hände, sahen uns in die Augen, lachten
und waren still, ganz still.
Da haben wir den Frühling gesehn.
Mitten auf dem staubigen Feldweg patschelte er uns entgegen in
einem hellrosa Wölkchen.

Er war ein Mosjöh Dreikäsehoch, hatte einen ratzekahl geschorenen,
schlohweiß schimmernden Flachskopf und zwischen zwei rotbraunen
Posaunenbacken eine höchst naive Stuppsnase, aus der ein Paar
perlenklare Talglichtlein sacht auf ein offen Schnäuzchen
herniederrannen. Ohne viel Gêne trug er ein blauverschlissen
Kittelchen auf seinem nudeldicken Wurstleibchen, vorn hoch, hinten
tief, aus dem ein höchst schnuddliges Bein- und Armwerk
hervorpendelte.
Seine Hoheit sahen uns mit ein paar großen, tiefblauen
Vergißmeinnichtaugen durch und durch und brömselten so viel
Unsinn vor sich hin, daß uns ganz wirblicht wurde.
Er ließ sich von dir die Nase putzen, geruhte von mir einen Nickel
anzunehmen, und gesegneten Herzens schlenderten wir weiter, weit,
weit in die sonnige Klarheit hinein, aus der er gekommen war …
Anders aber sah ich ihn ein andermal.
Das war vor mancher Woche.
Einsam saß ich in meinem einsamen Zimmer mitten in der großen,
großen Stadt.
Die Sterne flammen auf im tiefen Blau, hoch oben über den
Dächern, zwischen den milchweißen jagenden Windwolken, den
Frühlingswolken, und die roten Abendlichter verglühen still an den
langen, langen, dunkelnden Mauern.
Draußen aus der Stille lösen sich Stimmen, und der Wind fängt an
mit frischen Stößen das Fenster zu streifen und singt im Rauchfang
sein altes Lied.
Es wächst und wächst, und immer voller, immer stärker das frische,
fröhliche Brausen.
Wunderlich geht es vom Fenster zur Tür durch das Zimmer mit
einem feuchtwarmen Zug.

Und ich schnaufe den Frühling ein, seinen gesunden Odem. Und ich
wittre einen Duft wie von Rosenblättern, getragen von den
unsichtbaren Fluten. Frisches, taufeuchtes Wiesengras spür ich und
den Geruch frischgepflügter brauner Felder, die im sonnigen,
lerchenschmetternden Frühnebel dampfen. Und ich höre die freudige
Sprache der werdenden Welt, der erwachenden, jungen Kreaturen.
Meine Sinne fahren auf und hin, getragen von dem Brausen, eins,
ebbend und flutend mit seinem herrlichen Rhythmus: jetzt
aufhorchend, jetzt still in traumhafter Versonnenheit und in neuer,
immer neuer Gewißheit auf, in die Höhe; und es packt und
durchschüttelt mich in freudetollen Phantasien von der Zukunft.
Und nun bin ich draußen in der äußersten Vorstadt.
Weit dehnt sich das Land hinaus im nächtigen, witternden Zwielicht.
Hier ein Netz von baumbepflanzten Wegen, im flachen Land sich
verlierend. Bald werden sie Straßen sein, wie die da drin, und die
Häuser da und dort, vereinzelt und in Gruppen über das Freie hin
verstreut, werden zusammenwachsen zu Stadtvierteln bis hinaus zu
den fernen Vororten.
Weite Landstraßen ziehen sich hinaus, und von allen Seiten,
durcheinander, aneinanderhin, schnaubende, donnernde, rollende
Züge, herein und hinaus in das nächtige Land wie riesige feurige
Raupen.
Und nun zackt es sich weit hinter mir mit Dachzinnen und Türmen
und ragenden Schornsteinen und verrinnt breit, endlos in trüben
roten Dunst, und starrt müde mit seinen tausend und abertausend
Fenstern in das freie Land hinein.
Und der Sturm wächst und braust und knattert und pfeift mit den
hundert lustigen Stimmen seines wilden Akkordes heran über die
brachen schwarzen Schollen, durch Gestrüpp und Geäst, und hinein
in die langen, lichtflackernden Straßenzeilen, und all das Lebensblut
da drin wallt auf in frischen Gluten, und lebendiger regen sich
Millionen Kräfte gegen und durcheinander.

Aus weitem fernen Süden strömen die durchglühten Lüfte her,
seitwärts gebogen vom kreisenden Umlauf der Erde, und in ihrem
jubelnden Getöse ist es lebendig von Millionen Stimmen und
Wundern.
Über der unendlichen Öde der Wüste haben sie geglüht, von
reineren Sonnen und Monden durchbebt, über ragenden Palmen und
fernen, fremden Gebreiten, über mächtigen Meeren und Strömen
und Seen, über der wilden grünen Nacht der Urwälder, durchhallt
vom Gekreisch und Gebrüll fremdartiger Tiere, und durchglüht von
ungeahnter, leuchtender Pracht, und ein üppig wucherndes Leben
haben sie gezeugt.
Und nun tragen sie's herüber mit ihren wildfreudigen Strömen und
wirbeln es zu uns her über weite, bäumende Meere, über herrliche
Breiten wärmerer Sonnen, über ewig eisige Höhen, ihrer winterlichen
Starrheit trotzend, und wirbeln es her mit den fröhlichen Scharen der
Vögel und lebendigen Keimen.
Und der Tumult der ewig lebendigen Kräfte wogt herab aus den
Höhen in unbegreiflichen Schwingungen und bebt in uns hinein.
Sie zittern hinein in schwarze, ruhende Tiefen, und es beginnt ein
Hin und Wieder und Ineinander, und bebt und treibt dunkel unter
süßem Zwange, und aus Beben und Treiben und unerforschlichen
Mischungen der Elemente werden Keime, und die schwarze,
träumende Ruhe ringt sich dem Licht entgegen, dem Licht …
So spürt ich damals den Frühling.
Sturmlieder brauste er hinein in die langen, flackernden, öden
Vorstadtstraßen, wilde, rüttelnde Sturmlieder, und wenn ich recht
hörte, hatten sie einen sehr polizeiwidrigen Text …
Bah! – Hier lieg ich und strecke mich, ein Tunichtgut und Simulant
schlimmster Sorte.

Sämtlicher Laster und Tugenden bin ich teilhaftig. Ich habe mit
Christus, dem Herrn, die Leidensnacht in Gethsemane durchlitten,
und mit Buddha das innerste Wesen der Welt erkannt. Ich bin
geschlechtlos, bin Mann und Weib. Schuldlos bin ich und naiv wie
das reinste Kind und erfahren wie der blasierteste Roué! Ich bin
Kaiser und Held und der niedrigste Sklave. Der gewandteste,
gefährlichste und der blödeste, einfältigste Liebhaber, bin und habe,
was ich will.
Jetzt aber bin ich eine große, schöne Blume. Bin Fühlen, ganz, ganz
dämmerndes Fühlen. Ich wurzele in einer süßen, feuchten Kühle,
und dehne mich sacht in ein laues, fächelndes Schweigen hinein,
spreize mich, ringend und nachgebend, mit hundert Formen in
sanften, neckischen Widerstand hinein, etwas Heißem, Lichtem
sehnend entgegen. Zu oberst leuchte ich vor Jubel, und meine Lust
wird eine köstliche Süße. Es schwirrt zu mir her mit bunten,
durchsichtigen Flügeln, und ich erschaure in den Wonnen einer
leisen, leisen, sanften Berührung …
Traum bin ich, Traum, ganz Traum und süßes, süßes Verdämmern,
Schlummern, Entschlafen …
Staunendes, erschrecktes Erwachen.
Lange Schatten und müde Lichter. Treiben und wellen mit
verglühendem Gekräusel über die Wasser herüber und verblinken in
stumpfes Blaugrau.
Goldig versinkende Glut über breitgedehntem, schwarzem
Baumgekrissel.
Hoch, hoch drüber aus zartem, zartem Grün ein Sternchen.
Noch eins; noch eins. Viele.
Breite Schatten wogen vom Osten her über die Welt mit den
Geheimnissen heimlicher Laute und Gestalten.

Drüben sinken die müden Gluten, sinken und sinken …
Kühle Schauer vom Wasser her durch leises Geflüster, singendes
Plätschern und Murmeln.
Langsam, langsam schiebt sich die Silhouette eines Kahns durch
silberspiegelnde Glätte, langsam, langsam den Nebelfernen zu.
Tiefe, tiefe Einsamkeit, Friede, Grauen: meiner Seele zu süß, viel zu
süß …
Rote, warme Lichtlein glimmen fern in niedriger Enge zwischen breit
geballten, schwarzen Wipfeln.
Und unter weitentfachter, goldiger Pracht wandre ich mit eiligen
Füßen durch weiße Nebel den Lichterchen zu, den armen,
glimmenden, heimlichen Lichterchen.
Zu dir, ma Dame! Zu dir! …

Zwielicht
An den himmelhohen Mauern nieder, durch das Fenster, zwischen
den Gardinen das erste Morgenlicht.
Leise – grau – tot.
Nur hoch oben das arme bißchen Himmel und die drei Sterne.
Und ich liege und brüte und würge an meinem blöden Leid.
Dich will ich! Dich! …
Und mein Wille und meine große Pein schreit in mir: Dich will ich!
Dich! Dich!
Nichts ist in der müden Welt als das Grauen und der Zweifel.
Und du und ich. Du und ich und unsre Sehnsucht.
Und unsre Sehnsucht will neuen Anfang. Unsre Sehnsucht, die nie
sterben kann! Nie! –
Wo bist du?! Wie halt ich dich?!
Ich schreie nach dir durch eine einsame, einsame Nacht!
Meine Sehnsucht wird Angst, und meine Angst wird Grimm.
Gib dich mir!!
Du m u ß t dich mir geben!! M u ß t !!
Wo bist du?!
Überall, überall bist du, und überall flirrt meine Sehnsucht an dir hin.

Mit hundert dummen Masken hast du mich den Tag über geäfft.
Warum?
Du warst die Kinder, die am Brunnen Ringelreihen spielten. Und wie
sie sangen und jauchzten, ganz junger, seliger, helläugiger Wahn,
da, einen Augenblick, hielt ich dich!
Aber hinter hundert törichten Masken verlor ich dich wieder.
Alt, runzlig, gebückt, niedergezwängt von stummen Qualen wanktest
du an mir vorüber, verkrüppelt, häßlich, schmutzig. Du sahst mich an
mit schielendem, ausweichendem Blick, mit feigem Haß. Stumpf, im
Fron von tausend täglichen Hantierungen, in tausend Gestalten sah
ich dich keuchen und gegen deine Sehnsucht ringen. Du schaltest,
logst, stahlst, beschimpftest. Du verleumdetest, betrogst, weintest,
lachtest, sangst und warst guter Dinge: und immer wolltest du dich
um deine Sehnsucht betrügen. Deine Stimme war grell und roh,
deine Gebärden rauh und widerwärtig, rauh deine Sprache. Und
wieder sanft und mild und weich, und schwoll in köstlicher Fülle von
deiner sehnenden Angst.
Hinter tausend dummen, törichten Masken wolltest du dich vor mir
verbergen.
Warum?
Meinen Augen bleibst du nicht verborgen.
Tief und scharf sehen sie in dich hinein und sehen deine suchende
hastende Angst und deinen Willen, der doch weiß, der ja doch
weiß …
Ach, warum sind wir so feig, du und ich?
Warum bin ich so feig?
Nächtig ist es überall und überall nur tausend irrende, grausige
Fragen.

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