![Actividad enzimática
Consumo de alimento (g) = alimento ofrecido – alimento recuperado
Eficiencia de Asimilación (EA) = [(ingesta - egesta) / ingesta] x 100 (Arrontes 1989)
(García – Carreño et al. 2003)](https://image.slidesharecdn.com/alternativodetesis-221230013952-1821f547/85/Alternativo-de-tesis-ppt-15-320.jpg)
![750 mL de 0,1 mM de BAPNA
+
50mM de TRIS-HCl a pH 7,5
y 20mM de buffer CaCl2
Unidad de actividad = [(Abs410 min-1) x mL de mezcla de la reacción] / 8800 x mg
Donde 8800: Coeficiente de extinción molar de para-nitroanilida del sustrato BAPNA.
Reacción
Mantenida por 10 min
a 30º C
Leída en
espectrofotómetro
a 410 nm
Tejido epitelial:
Involucrado en la
absorción de productos
de la digestión
Los valores obtenidos serán presentados en UI mg-1, donde UI: es la cantidad de enzima capaz
de convertir un 1µmol de sustrato en producto.
Análisis de la Tripsina
(García – Carreño et al. 2003)](https://image.slidesharecdn.com/alternativodetesis-221230013952-1821f547/85/Alternativo-de-tesis-ppt-16-320.jpg)
Alternativo de tesis.ppt
- 1. EVALUACIÓN DE LA OMNIVORÍA EN Chiton granosus Y SUS IMPLICANCIAS SOBRE LA ESTRUCTURA TRÓFICA DE LA COMUNIDAD INTERMAREAL. Por YURI Y. CID DÍAZ Profesor guía: Dr. Patricio A. Camus, Coprofesores Guías: Dr. Cristian W. Cáceres & Dr. Pablo Sabat Concepción, 2009
- 2. Introducción Trama trófica: Relación depredador – presa. Flujo de energía: Transporte de energía (William y Martínez 2004). Invertebrados Funcionamiento Intermareal. Vista dorsal de Chiton granosus (Frembly 1827). Vista ventral y rádula de C. granosus. Distribución y Abundancia (Santelices et al. 1985, Otaíza 1986). Clase Polyplacophora: 8 placas imbricadas Rádula docoglosa (Steneck et al. 1982, Raffaelli 1985). Cavidad bucal: órgano subradular.
- 3. Descripción : Herbívoro (Santelices 1986). Consumo de invertebrados: Fenómeno descrito como casual (Santelices et al. 1985, Wootton 1994).
- 4. Potencial de omnivoría para Puede ser definida como: Omnivoría trófica Omnivoría fisiológica Omnivoría fisiológica Forma de alimentación Estudios Fisiológicos (Ejemplo: actividad enzimática Asimilación de alimento Chiton carnívoro y omnívoros (Latyshev et al. 2003). Consumidor de presas de más de un nivel trófico (Pimm y Lawton 1978). Organismo que come plantas y animales (Odum 2006). Placiphorella borealijaponica Lepidozona albrechti Mopalia retifera
- 5. Evaluación de actividad enzimática en el digestivo de C. granosus (Camus et al. 2009). Flexibilidad digestiva Principal obtención de energía (Sabat et al. 2005) Modulación adaptativa Actividad enzimática y transporte de nutrientes (Sabat et al. 1998)
- 6. Hepatopáncreas Lobo-da-Cunha 1997 Intestino Aminoácidos Péptidos Aminoácidos Asimilación Eficiencia de Asimilación (%) Digestión Absorción Tripsina N-aminopeptidasa (García – Carreño et al. 2003)
- 7. Omnívoro fisiológico C. granosus Alimento Animal J. cirratus (Darwin 1954) P. purpuratus (Lamarck 1819) Alimento algal G. lingulatum (Kützing 1868) Evaluación Actividad de Tripsina y N-aminopeptidasa Asimilación
- 8. Hipótesis Hipótesis general Chiton granosus (Frembly, 1827) es un omnívoro fisiológico. Predicciones 1. C. granosus asimila alimento animal (J. cirratus y P. purpuratus). 2. C. granosus tiene actividad de Tripsina y N-aminopeptidasa al consumir alimento animal. 3. C. granosus presentará mayor actividad de Tripsina y N-aminopeptidasa con J. cirratus que P. purpuratus de acuerdo a sus patrones naturales de consumo.
- 9. Objetivos Evaluar omnivoría fisiológica en C. granosus a través de la actividad de Tripsina, N-aminopeptidasa y mediante la eficiencia de asimilación. Evaluar implicancias de la omnivoría de C. granosus para la estructura y organización de la trama trófica.
- 10. Recolección: Invierno – Primavera del 2008. Identificación: Aldea y Valdovinos (2005). Área de muestreo Métodos Playa de Cocholgüe de la región del Bío Bío, área de muestreo para los individuos de la especie C. granosus
- 11. Experimentos preliminares Identificación de ítemes consumidos en el tracto digestivo de C. granosus Evaluación de cantidad de alimento apropiada para experimento de eficiencia de asimilación Comparación con estudio anterior (Camus et al. 2008) Selección de tipo de alimento Rango donde mejor se detecta lo que es ingerido con lo que es defecado Promedio ± error estándar
- 12. Evaluación de durabilidad del alimento Tiempo de evacuación del tracto digestivo de C. granosus Descartar pérdida de alimento por descomposición Permite establecer tiempos de alimentación. (Franz 1990) N=24, Promedio ± error estándar
- 14. 24 individuos (8 por cada alimento) Masa inicial y final Concha: Largo y longitud 1 individuo por acuario (18,5 x 12,5 cm) 4 días de aclimatación - Temperatura ambiente - Luz - Aireación constante. Agar agar J. cirratus P. purpuratus G. limgulatum 3 g de cada alimento por día Eficiencia Asimilación de alimento Periodo de Evaluación: 6 días Retiro de alimento: 12 h Tasa de consumo de alimento (g d-1) Elaboración de alimento
- 15. Actividad enzimática Consumo de alimento (g) = alimento ofrecido – alimento recuperado Eficiencia de Asimilación (EA) = [(ingesta - egesta) / ingesta] x 100 (Arrontes 1989) (García – Carreño et al. 2003)
- 16. 750 mL de 0,1 mM de BAPNA + 50mM de TRIS-HCl a pH 7,5 y 20mM de buffer CaCl2 Unidad de actividad = [(Abs410 min-1) x mL de mezcla de la reacción] / 8800 x mg Donde 8800: Coeficiente de extinción molar de para-nitroanilida del sustrato BAPNA. Reacción Mantenida por 10 min a 30º C Leída en espectrofotómetro a 410 nm Tejido epitelial: Involucrado en la absorción de productos de la digestión Los valores obtenidos serán presentados en UI mg-1, donde UI: es la cantidad de enzima capaz de convertir un 1µmol de sustrato en producto. Análisis de la Tripsina (García – Carreño et al. 2003)
- 17. Análisis de la N-aminopeptidasa 100 µL de homgenizado de tejido Solución NaCl 0,9% 2,04 mmol L-1 L-alanina-p-nitroanilide en 0,1 mol L-1 NaH2PO4 / Na2HPO4, pH 7 Reacción Mantenida por 10 min a 30º C 3 mL de ácido acético frío 2 N Leída en espectrofotómetro a 410 nm Los valores obtenidos serán presentados en UI mg-1 de tejido del intestino, donde UI: es la cantidad de enzima capaz de convertir un 1µmol de sustrato en producto. (Gacía – Carreño et al. 2003)
- 18. Análisis estadísticos Las pruebas estadísticas fueron desarrolladas en el programa Statistica 7.0. Eficiencia de asimilación Para evaluar la eficiencia de asimilación de tres tipos de alimento (J. cirratus, G. lingulatum y P. purpuratus) (factor fijo) en C. granosus se utilizó la prueba paramétrica ANDEVA de medidas repetidas. Verificación de pérdida de Biomasa Para evaluar las diferencias de la masa inicial y final de C. granosus se empleó un ANDEVA de dos vías para los factores tipo de alimento (factor fijo) y tiempo (factor aleatorio). Evaluación de actividad de Tripsina En todos los casos que existieron diferencias significativas se empleó la prueba a posteriori de Tukey. Para evaluar la actividad de la Tripsina como de la N-aminopeptidasa en tres alimentos se emplearon ANDEVAS de una vía.
- 19. Verificación de pérdida de biomasa. Resultados
- 20. Tasa de consumo de alimento
- 21. Asimilación
- 22. Comparación entre ingesta y eficiencia de asimilación.
- 25. Discusión La importancia de este trabajo es el uso del tejido epitelial del digestivo de C. granosus, lo que difiere del estudio realizado por Camus et al. (2009) Fue mayor la ingesta y asimilación de G. lingulatum, asemejándose a lo obtenido en el estudio realizado por Camus et al. (2009). (Gacía – Carreño et al. 2003)
- 26. Para C. granosus, J. cirratus es más palatable y mejor en términos nutricionales que P. purpuratus. J. cirratus presentó mayor porcentaje de asimilación y actividad enzimática que P. purpuratus. J. cirratus Requerimientos nutricionales para desarrollo de funciones fisiológicas. Semejante a resultado de otros estudios Tetrapygus niger (Navarrete et al. 2008). (Aguilera 2005) (Sanhueza et al. 2008)
- 27. Según Sabat et al. (2008) la influencia ambiental genera tendencias en los organismos. Flexibilidad digestiva Asemejándose a las características dietarias presentes de otros organismos, por ejemplo aves y roedores (Piersma et al. 1997, Ciminari et al. 2005, Sabat et al. 2008 ). La existencia de actividad enzimática en el digestivo de C. granosus podría ser el resultado de su flexibilidad adaptativa. (Piersma et al. 1997)
- 28. C. granosus presenta estrategia trófica como omnívoro, formando cadenas tróficas más largas aumentando el número de interacciones que ocurren en las comunidades (Link 2002). Abundancia (Otaíza et al. 1985) Flexibilidad digestiva (Camus et al. 2009) C. granosus Presión de pastoreo en la estructura comunitaria. Asentamiento de otras especies sésiles (mitílidos y cirripedios).
- 29. Conclusiones C. granosus consume, digiere y asimila (EA) alimento animal y algal. Se obtuvo mayor actividad de Tripsina y asimilación de J. cirratus que P. purpuratus. Para C. granosus: J. cirratus es más palatable y mejor en términos nutricionales que P. purpuratus. Presencia de Flexibilidad digestiva. C. granosus es omnívoro fisiológico. C. granosus al ser omnívoro presenta un cambio de posición trófica generando un aumento en el largo de las cadenas tróficas en cada comunidad donde esté presente.
- 30. Agradecimientos A todas aquellas personas que me ayudaron durante toda mi formación de estudiante. A todos aquellos que me dijeron que no lograría terminar la carrera ni lograr llevar acabo mi tesis, ya que con ello generaron un reto y me motivaron a dar lo mejor de mi. Profesor Patricio A. Camus por darme la oportunidad de trabajar y aprender de él, profesor Pablo Sabat por su apoyo y asesoría a la distancia, Profesor Cristian W. Cáceres por poner a mi disposición su laboratorio. A mi madre y mis hermanas por su constante apoyo, mi hermano Héctor ya que sin él tomar las muestras hubiese sido muy difícil, a mi amiga Daniela Contreras por darme siempre su apoyo y amistad. Al profesor Carlos Herrera, Isabel Navarrete, Leonardo Vidal, Sergio Contreras, Arturo Navarrete y Marcelo Lagos por compartir conocimientos conmigo y guiarme no tan solo en esta investigación sino como profesional