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- 1. Red de Revistas Científicas de América Latina, el Caribe, España y Portugal Sistema de Información Científica QUINTERO-CERÓN, Juan P.; AYALA S., Leidy C.; VALENZUELA R., Claudia P.; BOHORQUEZ P., Yanneth; RIVERA, Carlos A. SISTEMAS DE EXTRACCIÓN (SE) Y SU INCIDENCIA EN LA CUANTIFICACIÓN DE COMPUESTOS BIOACTIVOS MAYORITARIOS EN FRUTOS DE Rubus glaucus Benth Vitae, vol. 19, núm. 1, enero-abril, 2012, pp. S291-S293 Universidad de Antioquia Medellín, Colombia Disponible en: http://www.redalyc.org/articulo.oa?id=169823914089 Vitae, ISSN (Versión impresa): 0121-4004 vitae@udea.edu.co Universidad de Antioquia Colombia ¿Cómo citar? Número completo Más información del artículo Página de la revista www.redalyc.org Proyecto académico sin fines de lucro, desarrollado bajo la iniciativa de acceso abierto
- 2. Vitae 19 (Supl. 1); 2012 S291 SISTEMAS DE EXTRACCIÓN (SE) Y SU INCIDENCIA EN LA CUANTIFICACIÓN DE COMPUESTOS BIOACTIVOS MAYORITARIOS EN FRUTOS DE Rubus glaucus Benth EXTRACTION SYSTEMS (ES) AND THEIR INCIDENCE IN THE QUANTITATION OF MAJOR BIOACTIVE COMPOUNDS IN Rubus glaucus Benth FRUITS Juan P. QUINTERO-CERÓN1,2*, Leidy C. AYALA S.2, Claudia P. VALENZUELA R.2, Yanneth BOHORQUEZ P.2, Carlos A. RIVERA2 RESUMEN Diferentes proporciones de etanol, agua y ácido clorhídrico fueron utilizados con el objetivo de valorar sus efectos en la extracción, cuantificación de fenoles, antocianinas monoméricas totales y capacidad antioxidante total en frutos de mora de castilla mediante espectrofotometría UV-visible. El solvente de extracción y el pH incidieron en la estabilidad y recuperación de los compuestos de interés siendo los más apropiados etanol acidificado al 1,0 y 2,0% v/v. Palabras clave: mora de castilla, antocianinas, agroindustria, solvente. ABSTRACT The aim of this study was to assess the effects of different ratios of ethanol, water and hydrochloric acid in the extraction and quantitation of total phenolic compounds, total monomeric anthocyanins and total antioxidant capacity in Castilla blackberry fruit by UV-visible spectroscopy. The pH and the type of extraction solvent showed an important role in the stability and recovery of biocompounds, where acidified ethanol at 1.0 and 2.0 % v/v were the most suitable. Key words: Castilla blackberry, anthocyanins, bioactive compound, agribusiness, solvent. INTRODUCCIÓN A las antocianinas presentes en los frutos rojos (1) se les atribuye un efecto protector ante enfer-medades degenerativas y, se presume que podrían disminuir la incidencia de procesos inflamatorios así como cáncer, enfermedad cardiaca y cerebro-vascular (2). Actualmente, en Colombia la mora de castilla (Rubus glaucus Benth.) es la polidrupa más cultivada, comercializada y agroindustriali-zada. El campo investigativo, mercado en fresco e industrias relacionadas con su transformación y conservación evidencian la necesidad de estable-cer metodologías para la extracción y valoración de metabolitos secundarios de forma sencilla, confiable y de bajo costo (3). Teniendo en cuenta lo expuesto, la presente investigación se interesó en determinar el efecto de solventes polares en la extracción y posterior cuantificación de compues-tos fenólicos totales, antocianinas monoméricas totales y capacidad antioxidante total (ABTS) en frutos de R. glaucus. 1 Red de Universidades Públicas del Eje Cafetero –Red Alma Mater. 2 Grupo de Investigación CEDAGRITOL. Facultad de Ingeniería Agronómica. Programa de Ingeniería Agroindustrial. Universidad del Tolima. * Autor a quien se debe dirigir la correspondencia: jupaquince@hotmail.com
- 3. S292 Vitae 19 (Supl. 1); 2012 MATERIALES Y MÉTODOS Matriz Alimentaria Los frutos de mora en estado de madurez 5 (4), en adecuadas condiciones morfológicas y fitosa-nitarias fueron cosechados en la vereda El Retiro (1800 msnm) del Municipio de Ibagué, Colombia. El material vegetal se transportó al laboratorio, se lavó con agua potable y secó con una corriente de aire por 10 min (T°: 21 ± 2°C); 100 frutos fueron triturados y homogenizados. Posteriormente, 20 g fueron macerados con 20 ml de etanol (96 %v/v) acidificados con HCl (SE1:0,1%, SE2:1,0%, SE3: 2,0%), agua destilada acidificada SE4 (1,0% HCL) o una mezcla etanol + agua destilada (1:1, 0,1%HCl) esta operación se realizó dos veces (T° = 25°C, t = 60 min), el volumen recuperado se centrifugó (5000 rpm x 10 min), filtró al vacío y aforo a 50 ml (5). El zumo también fue establecido como solución stock (SE6). Se preparó diluciones de trabajo (1:10), siendo aforadas en todos los casos con su respectivo solvente. Parámetros evaluados Mediante pruebas espectrofotométricas (Ther-mo Electron Scientific, Genesys 6, USA) se valoró los SE; las lecturas se llevaron a cabo en celdas de cuarzo (10 mm de paso óptico). Se utilizó barridos espectrales de las soluciones (360 – 780 nm) y pH (SCHOTT-CG 820) para relacionar las absorban-cias con el contenido de antocianinas monoméricas totales (AMT), calculadas a partir de la metodología de diferencial de pH y expresadas como mgEQVCy- 3-glu/100 g de fruto fresco (6), contenido fenólico total (CFT) con Folin-ciocalteu usando ácido gálico como estándar (mgEQV-AG/100 g FF) (7) y, capaci-dad antioxidante total (CAT) expresada en mgEQV, ácido ascórbico/ 100 g FF mediante estabilización del radical ABTS a los 6 y 7 min de reacción (8). Los datos obtenidos en triplicado fueron evaluados mediante ANOVA, MANOVA y LSD (95% nivel de confianza) en paquete estadístico Statgraphics Centurion® Versión XV.II. RESULTADOS Y DISCUSIÓN Los barridos espectrales (figura 1) mostraron diferentes picos de máxima absorbancia, variaciones que pueden ser atribuidas a las diversas formas quí- micas de las antocianinas, las cuales dependen del pH de los SE. A pH 1,0 el catión flavilo es la forma predominante (color rojo), y entre 2 - 4 la forma quinoidal. La polaridad de los solventes (etanol, agua destilada), concentración de fitocompuestos extraídos de la matriz sólida y presumiblemente copigmentación contribuyen a explicar el fenómeno observado. SE2 y SE3 a una l = 540 nm mostraron un posible efecto hipercromico y batocrómico (8). El contenido de AMT y FT en R. glaucus (tabla 1) es marcadamente inferior al reportado en la literatura (9); y evidenciaron diferencias significativas (p < 0,05), posiblemente relacionadas con el grado de madurez seleccionado, solvente y volumen reque-rido en la recuperación de los analitos, siendo los más apropiados SE2 y SE3. El tiempo de incubación de la muestra no tuvo un efecto significativo sobre CAT, contrariamente los SE mostraron incidir sobre dicha variable (p < 0,05). Tabla 1. Efecto del SE en la valoración de los extractos de R. glaucus. SE AMT CFT CAT 6´ CAT 7´ SE1 28,11 ± 0,36c 104,39 ± 4,97b 67,73 ± 1,71b 68,68 ± 1,45b SE2 31,54 ± 0,73e 138,51 ± 0,26d 71,66 ± 4,02b 72,63 ± 3,60b SE3 29,94 ± 1,39d 139,24 ± 1,69d 71,52 ± 3,48b 72,48 ± 3,01b SE4 23,09 ± 0,32b 101,80 ± 2,48b 43,98 ± 1,68a 44,91 ± 1,40a SE5 28,56 ± 0,75c 121,48 ± 1,29c 68,17 ± 3,92b 68,95 ± 3,69b SE6 5,92 ± 0,07a 17,22 ± 0,47a 9,04 ± 0,30c 9,17 ± 0.28c Los valores representan el promedio de 3 re-peticiones ± desviación estándar. Letras en el superíndice de cada columna indican diferencias significativas (p < 0,05).
- 4. Vitae 19 (Supl. 1); 2012 S293 Figura 1. Barrido espectral (UV-Visible) de extractos (360 – 780 nm). CONCLUSIONES Etanol acidificado al 1,0%v/v (SE2) es el siste-ma de extracción con solvente más adecuado. A pesar que acidificarlo al 2,0%v/v permite obtener resultados similares a SE2 para AMT, FT y CAT, la primera opción ralentiza el consumo de HCl. Las determinaciones analíticas realizadas sobre el zumo y expresadas en masa de fruto fresco adi-cionan un amplio margen de error al desestimarse en aproximadamente el 81 y 87% de AMT y FT, respectivamente. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 1. Tiwari B, O´Donnell C, Cullen P. Effect of non thermal pro-cessing technologies on the anthocyanin content of fruit juices. Trends Food Sci Tech. 2009 Feb 6; 20 (3-4): 137-145. 2. Lee J, Dosset M, Finn C. Rubus fruit phenolic research: The good, the bad, and the confusing. Food Chem. 2012 Feb 15; 130 (4): 785-796. 3. Wrolstad R, Durst R, Lee J. Tracking color and pigment changes in anthocyanin products. Trends Food Sci Tech. 2005 Sep 1;16 (9): 423-428. 4. Instituto Colombiano de Normas Técnicas y Certif icación. Norma Técnica Colombiana. NTC 4106. Frutas Frescas. Mora de Castilla. Especificaciones. Bogotá, ICONTEC; 1997. 5. Benvenuti S, Pellati F, Melegari M, Bertelli D. Polyphenols, anthocyanins, ascorbic acid, and radical scavenging activity of rubus, ribes, and aronia. J Food Sci. 2004 Oct 3; 69 (3): 164-169. 6. Lee J. Determination of total monomeric anthocyanin pigment content of fruit juices, beverages, natural colorants, and wines by the pH differential method: Collaborative Study. J AOAC Int. 2005 May; 88 (5): 1269-1278. 7. Shaghaghi M, Manzoori J, Jouyban A. Determination of total phenols in tea infusions, tomato and apple juice by terbium sensitized fluorescence method as an alternative approach to the Folin–Ciocalteu spectrophotometric method. Food Chem. 2008 Nov 8; 108 (2): 695-701. 8. Castañeda-Obando A, Pacheco-Hernández M, Páez-Hernández M, Rodríguez J, Galán-Vidal C. Chemical studies of anthocya-nins: A review. Food Chem. 2009 Apr 15; 113 (4): 859-871. 9. Garzón G, Riedl K, Schwartz S. Determination of anthocyanins, total phenolic content, and antioxidant activity in Andes berry (Rubus glaucus Benth). J Food Sci. 2009 Mar 18; 74 (3): 227-232.