Diagnóstico micológico

UNIVERSIDAD CENTRAL DE VENEZUELA
FACULTAD DE MEDICINA
ESCUELA DE BIOANÁLISIS
HOSPTIAL GENERAL “Dr. JOSÉ IGNACIO BALDÓ“
Diagnóstico Micológico
Profa. Yotsabeth Saúl G.
Caracas - 2016

Clasificación de las Micosis según la OMS
• Dermatofitosis
• Pitiriasis versicolor
• Pilonodosis
• Candidiasis cutáneas o mucosas.
Superficiales
• Esporotricosis
• Cromoblastomicosis
• Micetomas
Subcutáneas
• Histoplasmosis
• Paracoccidioidomicosis
• Coccidioidomicosis
Profundas
• Candidiasis sistémicas
• Criptococcosis
• Aspergilosis
• Mucormicosis
• Neumocistosis
Oportunistas

Diagnóstico Micológico: Micosis superficiales
1. Dermatofitosis o Tineas (Tiñas)
Tinea capitis no inflamatoria
Tinea faciei
Tinea corporis
M. canis, T. rubrum
T. cruris por:
T. rubrum, E. floccosum
Tinea pedis interdigital.
T. rubrum, T. mentagrophytes,
T. interdigitale

Subungueal, distal y lateral Blanca superficial
Distrófica total
Agentes T. rubrum, E. floccosum, T. mentagrophytes
1. Dermatofitosis o Tineas (Tiñas)
Onicomicosis

1. Dermatofitosis o tiñas
• Recolección de la muestra: piel, pelos o uñas.
Raspado, depilación, cepillo, onicotomía.
• Examen directo: KOH 10% - 40%.
Se observan hifas hialinas, de 3 a 15 µm de diámetro, septadas y
ramificadas, con o sin artroconidias.
*Diagnóstico de la enfermedad.
• Cultivo: Lactritmel, Sabouraud. Micosel/ T. Amb./ 7-15 días.
Visualización de las características macroscópicas en placa o en tubo.
Visualización de las características microscópicas: cultivo en lámina.
Identificación del agente causal.
Identificación de hongos dermatofitos. Guía Práctica de Identificación y Diagnóstico en Micología Clínica. 2da ed. Rev Iberoam Micol; 2007. pp 12-1 - 12-11.

Recolección de la
Muestra:
pelos, piel ,uñas.
Hifas hialinas septadas.
Identificación de especie
Cultivos:
(placas/tubos)
Microcultivos
1. Dermatofitosis o tiñas

2. Pitiriasis versicolor

• Recolección de la muestra: Escamas obtenidas por raspado con bisturí o la técnica
de la cinta adhesiva.
• Examen directo: Azul de metileno 0,05%
Se observan blastoconidias de Malassezia sp, de 3-8 µm de diámetro, de
paredes gruesas y refringentes, aisladas o dispuestas en acúmulos e hifas cortas
y gruesas, poco ramificadas de 2,5 a 4 µm de diámetro.
• Cultivo: Medios de cultivo enriquecidos con lípidos.
Ej: Sabouraud + aceite de oliva.
Micosis más frecuentes en nuestro medio. Guía Práctica de Identificación y Diagnóstico en Micología Clínica. 2da ed. Rev Iberoam Micol; 2007. pp 2-1 – 2-15.

Toma de muestra:
método de la cinta adhesiva
Examen directo con Azul de metileno 0,05%:
Levaduras e hifas cortas gruesas de Malassezia spp.

Candidosis en el área del pañal Onicomicosis por Candida
Candidosis de la cavidad oral: MuguetVaginitis por Cándida
3. Candidiasis cutánea y de mucosas

• Recolección de la muestra: Escamas, detrito subungueal, fragmentos de uñas,
exudado de mucosas, secreciones, flujo vaginal.
• Examen directo: KOH al 10%
Se observan blastoconidias ovaladas o redondeadas de diferentes formas y
tamaños (dependiendo de la especie).
• Aislamiento e identificación: Agar Sabouraud con o sin antibióticos sin
cicloheximida.
Características macroscópicas de crecimiento en agar cromogénico.
Bilis-agar: Clamidosporas (+) C. albicans/C.dubliniensis
Filamentización en suero: C. albicans (+)/ Candida no-albicans (-)
Pruebas de asimilación y fermentación de azúcares.
Identificación de levaduras. Guía Práctica de Identificación y Diagnóstico en Micología Clínica 2da ed. Rev Iberoam Micol; 2007. pp 11-1 – 11-20.

Identificación de levaduras. Guía Práctica de Identificación y Diagnóstico en Micología Clínica 2da ed. Rev Iberoam Micol; 2007. pp 11-1 – 11-20.

Diagnóstico Micológico: Micosis subcutáneas
1. Cromoblastomicosis

• Recolección de la Muestra: Escamocostras
• Examen directo: KOH 10% - 40%.
Se observan cuerpos escleróticos o células de Medlar en grupos de dos o
más, esféricos u ovalados, miden de 4 a 8 µm de diámetro, de color café
amarillento y en ocasiones se observan divisiones o filamentos.
• Cultivo: Agar Sabouraud, Lactritmel / Tº Amb / 15-21 días.
Visualización de las características macroscópicas en placa o en tubo.
Visualización de las características microscópicas: cultivo en lámina.
Identificación del agente causal.

Recolección de la
Muestra:
escamocostras.
Cuerpos escleróticos.
Identificación de especie
Cultivos:
(placas/tubos)
Microcultivos

Forma cutánea fija
Complejo cutáneo linfático
2. Esporotricosis
2.1 Esporotricosis cutánea
2.2. Esporotricosis extracutánea

• Recolección de la muestra: raspado, pus, biopsia, esputo.
• Examen directo KOH 10%
No es práctico, en general resulta negativo.
Se observan levaduras o cuerpos asteroides.
• Cultivo: Agar sabouraud, Micosel / 25 y 37ºC / 5-7 días.
Forma filamentosa y levaduriforme
• Inmunodiagnóstico:
Esporotriquina, pruebas serológicas.
2. Esporotricosis

Examen directo de la muestra clínica
Cultivo de la muestra clínica
Identificación del agente causal
Cultivo en tubo, T.Amb Cultivo en lámina
2. Esporotricosis

Triada del micetoma:
• Aumento de volumen y deformidad del miembro afectado.
• Presencia de fístulas.
• Emisión de granos “ Formación in vivo de colonias de los agentes
causales”.
3. Micetoma

Los granos son microcolonias compactas que constituyen una
adaptación parasitaria del hongo o bacteria.
MICETOMA
Granos: Negros, Claros, Rojos
3. Micetoma

3. Micetoma
• Recolección de la muestra: obtención de granos
• Examen directo: KOH 10%
Se observan las características de los granos: tamaño, color, forma,
presencia de clavas.
• Biopsia H&E: verificar presencia de granos.
• Cultivo: Temp. Amb. / días - semanas
Medios especiales para hongos (eumicetomas):
Agar Sabouraud o lactrimel + cloranfenicol
Medios especiales para bacterias (actinomicetomas):
AS, BHI, L-J.
• Examenes complementarios: radiología

Micosis Profundas o Sistémicas

HISTOPLASMOSIS DIAGNÓSTICO
Diagnóstico Micológico: Micosis Profundas o Sistémicas
1. Histoplasmosis:

• Recolección de la muestra: esputo, lavado broncoalveolar, médula ósea, sangre,
biopsias, exudados de lesiones mucosas y cutáneas, material de ganglios linfáticos,
LCR y otros líquidos corporales.
• Examen directo:
Extendidos coloreados con Giemsa o Wright.
Coloraciones histológicas (HE, PAS, plata-metnamina).
Calcofluor.
Se observan blastoconidias intracelulares, ovaladas de 2-3 µm, generalmente
con una sola gema.
• Cultivo: 25 y 37 °C / entre 1 y 5 semanas.
Agar sangre, Sabouraud o extracto de levadura
Intradermorreacción, Inmunodifusión doble.
HISTOPLASMOSIS DIAGNÓSTICO
1. Histoplasmosis

Examen directo Médula Ósea:
Levaduras intracelulares
Coloración,Giemsa
Cultivo 25ºC
Micelio y macroconidias
Coloración, azul de lactofenol
1. Histoplasmosis

2. Paracoccidioidomicosis

DIAGNÓSTICO
• Examen directo: En fresco, entre lamina y laminilla
KOH al 10% con o sin tinta, Negro de clorazol, Calcofluor.
Coloraciones histológicas (PAS, HE, plata-metenamina).
Se observan blastoconidias de diferentes tamaños, entre 3-40 µm de diámetro,
redondeadas, de pared gruesa y refringente. Característicamente se observan
células multigemantes, también es posible ver cadenas de blastoconidias o
células con gemación única o solitarias.
• Cultivo 25 y 37 °C / 15-21 días.
Agar Sabouraud adicionado o no de antibióticos y cicloheximida.

Cultivo:
Temp. Amb.
37 ºC
Examen directo:
Levaduras multigemantes
Estudio Histopatológico

3. Coccidioidomicosis

• Examen directo: En fresco entre lamina y laminilla.
KOH al 10-20%, con o sin tinta.
Coloraciones histológicas (PAS, HE, Plata-metenamina).
Calcofluor
Se observan esférulasy endosporas de 10 a 80 µm, con pared doble y refráctil
de 2 a 5 µm.
• Cultivo 25 °C / 15-21 días.
Agar Sabouraud adicionado o no de antibióticos y cicloheximida.
COCCIDIOIDOMICOSIS: DIAGNÓSTICO

Coccidiodes spp. Examen directo
Figura 39. Artroconidias de Coccidioides immitis de un
cultivo en forma micelial (preparación con azul de
Lactofenol). Fragmentación del micelio (M) en esporas
(artroconidias) rectangulares. Preparación con Azul de
Lactofenol, 1200 X. tomado de: Restrepo M., A. Rev. Acad.
Colomb. Cienc. 2006; 30 (116):367-386.

Diagnóstico Micológico: Micosis Oportunistas
1. Candidiasis invasoras

• Recolección de la muestra: sangre, orina, secreciones vaginales, secreción
respiratoria, LCR.
• Examen directo: KOH 10%, Si presenta pocas levaduras hay colonización,
grandes cantidades de levaduras y presencia de hifas indica
parasitismo-enfermedad.
• Aislamiento e identificación: Agar Sabouraud con o sin antibióticos sin
cicloheximida.
Características macroscópicas de crecimiento en agar cromogénico.
Bilis-agar: Clamidosporas (+) C. albicans/C.dubliniensis
Filamentización en suero: C. albicans (+)/ Candida no-albicans (-)
Pruebas de asimilación y fermentación de azúcares.
• Estudio inmunológico:
Detección de antígenos en candidosis invasora.
Candidina.
1. Candidiasis invasoras

2. Criptococosis

Criptococosis, Diagnóstico
• Recolección de la muestra: LCR, esputo, lavado broncoalveolar, orina, biopsias,
sangre, médula ósea, exudado de úlceras, material purulento, secreción prostática.
• Examen directo:Observación entre lámina y laminilla con KOH al 10-20%. .
Tinta china o nigrosina.
Coloraciones histológicas (HE, PAS, plata metenamina, mucicarmina de Meyer,
Azul de Alcián).
Se observan blastoconidias provistas de una pared bien definida y una cápsula
refringente, con o sin gemación, redondas u ovaladas de 4-6 µm de diámetro y hasta de
12-20 µm, dependiendo del tamaño de la cápsula
• Cultivo: 32 a 37° C/ 48 horas.
Se realiza en Agar Sabouraud u otros medios de cultivo sin cicloheximida.
• Inmunodiagnóstico: Detección de antígeno capsular, técnica aglutinación de partículas de
latex (LCR).
2. Criptococosis

Criptococosis, DiagnósticoDiagnóstico Micológico: Micosis Oportunistas
2. Criptococosis
Colonia cremosa y mucoide Blastoconidios encapsulados
(Tinta china, 100X.)

3. Aspergilosis

Aspergilosis, diagnóstico:
3. Aspergilosis
• Recolección de la muestra: escamas, detrito subungueal, esputos, lavado broncoalveolar,
material purulento o necrótico, biopsias, hemocultivos (raramente positivos).
• Examen directo:En fresco, entre lámina y laminilla con KOH al 10-20% con tinta,
Negro de clorazol E, Calcofluor, Coloraciones histológicas (HE, PAS, plata-metenamina)
Se observan hifas hialinas, septadas, con un diámetro de 3-6 µm, de pared lisa y gruesa, con
ramificaciones dicotómicas en ángulo de 45º.
Otitis y aspergiloma pulmonar y nasal, pueden encontrarse cabezas aspergilares.
Aspergiloma en las cavidades pulmonares y de senos (paranasal, etmoidal y maxilar), se
observan masas o bolas del hongo.
• Cultivo: 25° C/ 3-4 días.
Sabouraud con y sin antibióticos, lactrimel o Czapek.
• Inmunodiagnóstico: ELISA para detectar el antígeno galactomanano.

Histopatología Examen directo KOH 10/. Esputo
Cultivo en placa Cultivo en lámina.
A. fumigatus
3. Aspergilosis

4. Zigomicosis

Mucormicosis, diagnóstico
• Recolección de la muestra: biopsias (se debe obtener material abundante y de
buena calidad), tejidos necróticos, secreciones, aspirado de senos nasales y
paranasales, esputos, lavado broncoalveolar.
• Examen directo: En fresco, entre lámina y laminilla con KOH al 10-20% con tinta,
Negro de clorazol E, Calcofluor.
Coloraciones histológicas (HE, PAS, plata-metenamina).
Se observan hifas anchas, aceptadas de 7-15 µm de diámetro, que se ramifican
en ángulo de 90º.
• Cultivo: 37ºC / 12-48 horas.
Agar Sabouraud sin cicloheximida.
4. Zigomicosis

Histopatología Cultivo en placa
Cultivo en lámina
4. Zigomicosis

Aspergilosis
Diagnóstico: cultivo en placa y lámina
• Recolección de la muestra: lavado broncoalveolar, cepillado bronquial,
esputos inducidos, biopsias.
• Examen directo: Giemsa, Wright.
Diff-Quik.
Plata-metenamina, Azul de toluidina O, Calcofluor
Se observan trofozoítos (ascosporas) y quistes (ascas) de P. jiroveci.
• Cultivo: Aun no se ha podido recuperar en cultivo.
• Otros métodos diagnósticos: Amplificación del ADN por PCR.
5. Neumocistosis

Pneumocystis jirovecii
Quistes de Pneumocystis jiroveci en pulmón
(flechas). Coloración histological Plata-
metenamina. Disponible en:
student.ccbcmd.edu/.../lab9/u1fig32d.html

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