Microscopía confocal.
- 1. Por Lucía Jiménez y Dayanne Huayhua Calicho, 4ºB.
- 2. DEFINICIÓN. La característica principal de la microscopía confocal es que recoge y detecta la luz emitida por moléculas flourescentes situadas en un mismo plano del espacio tridimensional. En la imagen se muestra la figuta de las células HeLa visto a través de dicho miscroscopio.
- 3. USO DE LA MICROSCOPÍA CONFOCAL. Para la ciencia supone un gran apoyo ya que posibilita un estudio tridimensional de las muestras, incluyendo su interior, y permitiendo, en determinados materiales, la obteción de imágenes de su superficie mediante la reflexión de la luz.
- 4. APLICACIÓN DEL MICROSCOPIO CONFOCAL. La principal aplicación de dicho elemento es para el estudio de muestras ‘’in vivo’’, como células, tejidos animales y vegetales, embriones de insectos, algas, etc, a lo largo de una secuencia temporal. De ésta forma se obtiene una película en la que se monitoriza el comportamiento de un sistema o estructura biológicos a los que se haya aplicado algún tratamiento a lo largo del tiempo. Empleando ésta técnica también se puede determinar si dos moléculas están en una localización subcelular concreta, mediante una técnica denominada FRET ( Transferencia resonante entre moléculas flourescentes) , o si difunden de un comportamiento subcelular a otro ( como la técinca denominada FRAP – Recuperación de la flourescencia después de photobleaching - ). Además, si el microscopio está equipado con un sistema de detección espectral, también se puede calcular en qué lugar del espectro de la luz emiten los fluorocromos y minimizar o incluso eliminar los problemas de cruce de señal entre distintos colorantes que presentan una distinta emisión muy cercana en el espectro.
- 5. ¿CÓMO FUNCIONA? El funcionamiento de tal es similar a uno de epiflouresciencia. La diferencia entre ambos radican en que el segundo carece del ‘’diafragma de detección confocal’’ y utiliza una lámpara de mercurio como fuente de iluminación. Dicha lámpara tiene una potencia muy irregular, con diferentes picos de intensidad, que se podría definir como una combinación de diversas radiaciones monocromáticas. Por ello, proporciona imágenes de peor calidad, que muestran la información de todos los planos de la muestra, enfocados o no.