prea.pdf
- 1. Etapa Pre-analítica Carrera de especialistas en Bioquímica Clínica Área Hematología Hemostasia 2020 Bioq. Lourdes Herrera Laboratorio de Hemostasia Dpto Bioquímica Clínica. FFyB. UBA
- 2. CALIDAD PRE –ANALITICA ANALITICA POST-ANALITICA PRE –ANALITICA ANALITICA POST-ANALITICA
- 3. Errores en resultados de hemostasia generados por la etapa pre analítica 75 %
- 4. Fase Pre-analítica Objetivos Correcta identificación del paciente, del solicitante y de la prueba solicitada. Reducir la variabilidad intraindividual de los parámetros a medir. Evitar el deterioro de la muestra mediante los procesos de obtención ,manipulación, transporte y conservación.
- 5. Factores que afectan la etapa preanalítica • Factores fisiológicos: » Edad » Sexo » Embarazo » Ciclos biológicos • Factores que influyen en la toma de muestra: » Ayuno » Tiempo de aplicación del torniquete » Pacientes con catéteres » Ejercicio intenso » Anticoagulantes
- 6. Historia Clínica del paciente: Epistaxis Trombosis Hematomas Abortos Sangrado Perdidas fetales Medicación Antecedentes familiares 1. Obtención de la muestra
- 7. Ayuno : evitar la ingesta de alimentos grasos 4 h antes de la extracción. Estudio del Sistema Fibrinolítico Carbohidratos Aumenta el PAI-1 Fumar Aumenta t-PA ag Cafeína 1. Obtención de la muestra
- 8. Extracción en las primera horas de la mañana Evitar el stress físico o mental FVIII acortamiento del APTT. FvW Reposo antes de la extracción : 10 min. 1. Obtención de la muestra
- 9. APTT (Seg) FVIIIc (%) FvW.Ag (%) Antes de correr 40 90 95 Pre-calentamiento 35,5 110 160 Luego de correr 10 Km 30,0 150 280 1. Obtención de la muestra
- 10. 1. Obtención de la muestra Extracción Utilizar aguja calibre 21G para adultos y en niños 23G. Punción venosa limpia, sin estasis, evitar entrada de aire y formación de espuma. La velocidad debe ser semejante a la del flujo sanguíneo.
- 11. 1. Obtención de la muestra Uso del Torniquete o Lazo Se usa para ubicar la vena Se debe aplicar por un período no mayor a 1min. Producen resultados alterados en TP APTT, Fibrinógeno, D-D y factores. Lippi y col: 3 min vs 1 min: disminución del TP, aumento de Fibrinógeno, D-D, FVII y FVIII Marcadores de generación de trombina: TAT y F1+2: no debería usarse lazo
- 12. Orden de llenado de los tubos según la NCCLS 1. Hemocultivos 2. Tubos de citrato (coagulación) 3. Tubos de suero con o sin activador de la coagulación o separador 4. Tubos de heparina 5. Tubos de EDTA (hemograma) 6. Tubos de fluoruro
- 13. 1. Obtención de la muestra Recomendado ISTH y CLSI: citrato trisódico (Na3C6H5O7 . 2H2O) 105 a 109 mmol/L (3.13% a 3.2%) . Elección del anticoagulante 9 partes de sangre con 1 parte de anticoagulante. Plasmas patrones liofilizados con los cuales se calcula el ISI de las tromboplastinas se obtienen con citrato de sodio 3,13%.
- 14. CITRATO PTTA Diagnostica Stago Actin Dade Behring Actin FSL Dade Behring PTTLA Diagnostica Stago 109 mM 3,2% 32 ± 4 32 ± 5 36 ± 4* 36 ± 5* 129 mM 3,8% 31 ± 4 33 ± 4 39 ± 4* 38 ± 4* 109 mM 3,2% 45 ± 9 43 ± 11 45 ± 9* 46 ± 11* 129 mM 3,8% 46 ± 10 45 ± 9 48 ± 11 47 ± 9* 109 mM 3,2% 55 ± 8 54 ± 9 66 ± 16 74 ± 15* 129 mM 3,8% 56 ± 10 56 ± 11 69 ± 14* 82 ± 16* * (p<0,001) entre lo valores de APTT realizados con citrato de sodio 109 y 129 mM. A: Normales B:Anticoagulados C:Heparinizados Acta Bioquím Clín Latinoam 2005; 39 (1): 87-92 C A B Efecto de la concentración del anticoagulante sobre el APTT
- 15. Otros anticoagulantes usados en hemostasia Citrato ácido de sodio PH 5,8 Relación partes iguales citrato de sodio 0,11 M y ácido cítrico Evita formación de complejos t-PA/PAI No utilizar para ensayos de coagulación. EDTA Estudios de biología molecular
- 16. • Cantidad mínima a recolectar:10ml para obtener 4ml de plasma. • Inspeccionar visualmente la muestra, descartar ante la presencia de hemolisis o presencia de coágulos. 1. Obtención de la muestra
- 17. 1. Obtención de la muestra Corrección por hematocrito Mantener la relación anticoagulante /sangre. Hematocritos superiores a 55% ajustar la cantidad de anticoagulante.
- 18. 1. Obtención de la muestra Corrección por hematocrito . HTO % Volumen de citrato Volumen de sangre 25-55 0.5 4,5 60 0.40 4,6 70 0.25 4,75 80 0.20 4,8 plasma 60 100-Hto x 4,5 Volumen de sangre a adicionar a 0,5 ml de citrato
- 19. 1. Obtención de la muestra Corrección por hematocrito .Compararon tubos (3.2%) sin corregir contra Hto corregidos Diferencias clínicamente significativas para el TP y APTT Efecto menor para Fibrinógeno, FVIII, PC. Proponen corregir el citrato en pacientes con Hto > 55% Marlar y col .Am j Clin Pathol 2006, 126: 400-405
- 20. Corrección por hematocrito Hto % RIN sin ajuste RIN con ajuste 65 6,2 2,8 65 4,4 2,9 66 1,3 1,2 69 8,9 3,4 69 1,5 1,2
- 21. Criterios de rechazo de muestra Muestras por debajo del enrase (< al 90%)
- 22. Criterios de rechazo de muestra % de llenado APTT seg Efecto del % de llenado sobre la prueba de APTT
- 23. Criterios de rechazo de muestra • Tubo inadecuado • Volumen de muestra incorrecto • Hemólisis • Hiperlipemicas • Muestra mal identificada • Muestra deteriorada en el laboratorio • Temperatura de transporte inadecuada • Recorrido preanalítico inadecuado (CLSI H21-A5)
- 24. Preparación de muestras Preparación del PPP 3 •Contenido de plaquetas ≤ 10.000 por mm Doble centrifugación,2500 g por 15 min Filtración (Millipore 0,22µ) :no recomendado No recomendada la ultracentrifugación.
- 25. Técnica de la doble centrifugación Para estudios especiales de Coagulación: Anticoagulante Lúpico, Proteína C, Proteína S, Antitrombina.
- 26. Conservación • Conservar a T°ambiente. • Idealmente ,procesar antes de las 4h • Si no se procesa en el momento ,se debe freezar previa doble centrifugación. Recomendaciones de CAP: • Para TP :hasta 24 h • Para APTT : hasta 4 h
- 27. Estabilidad de las Muestras de Hemostasia
- 28. Estabilidad de las Muestras de Hemostasia
- 29. ºT ambiente ,siguiendo las recomendaciones de bioseguridad de cada institución No transportar sobre hielo. La refrigeración de la sangre entera citratada antes del procesamiento (baño de hielo o en heladera a 2-8ºC produce: • Activación plaquetaria • Activación del FVII • Pérdida significativa de FVIII y FVW en una manera tiempo dependiente. CLSI H21 A5 Transporte de muestras
- 30. Se acepta el transporte por tubos neumáticos No para muestras para estudios de función plaquetaria Se deben evitar las ºT extremas para mantener la integridad de la muestra CLSI H21 A5 Transporte de muestras
- 31. Manejo de muestras Descongelar las muestra a 37C° no mas de 5 min Evita la precipitación de crioglobulinas o criofibrinógeno
- 32. Centrifugación a 900 rpm por 5 min. Trasvasar el plasma a otro tubo de plástico con pipeta plástica. Conservación a temperatura ambiente hasta 4 horas. Preparación de plasma rico en plaquetas (PRP)
- 33. SITUACIONES CLÍNICAS ESPECIALES Mujeres: • Para el estudio de enfermedad de VW se debe realizar la toma de muestra entre 1-4 días del ciclo. • Los anticonceptivos y la THR debe suspenderse por 2 meses previos al estudio. • Estudios de VWD, FVIIIc y PS deben realizarse luego de 2 meses pos parto. Estudio de factores de riesgo trombótico: • Nunca estudiar en el episodio agudo. • Si esta en tratamiento con dicumarínicos ,se deberá suspender para el dosaje de PS y PC
- 34. Recordar... “Una tecnología de laboratorio altamente controlada y sofisticada no es efectiva , si no se controlan las variables en la etapa pre-analítica”