Primer proyecto original

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1. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA.
1.1. Descripción de la realidad problemática.
Ante la necesidad de mejorar la calidad de salud de los seres humanos; se ha
tomado como materia de investigación a los pescados Jurel (Trachurus
picturatus murphyi) y Trucha (Salmo tutta),expendidos en el mercado Nueva
Esperanza, siendo este el principal centro de abastos de la ciudad, en vista
que estos pueden presentar proliferación de microorganismos y los mismos
pueden producir daños patológicos e irremediables a los seres humanos.
Se comprobará a través de la Identificación de microorganismos en el Jurel
(Trachurus picturatus murphyi) y Trucha (Salmo tutta), expendidos en el
mercado Nueva Esperanza, (Andrés Avelino Cáceres), utilizando las tinciones
simples, específicas y diferenciales, se realizará en los laboratorios de la
Universidad Alas Peruanas -Arequipa 2015
1.2. Antecedentes teóricos.
1.3. Horizontes de la investigación.
1.3.1. Delimitación espacial:
Laboratorios de la Universidad Alas Peruanas de la Filial de Arequipa -
Perú.
1.3.2. Delimitación temporal:
El proyecto se realizará entre los meses Marzo del 2015 a Junio del 2015

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1.3.3. Delimitación social:
Los resultados que se espera obtener benefician a la población Arequipeña
puesto que se va a conocer que microorganismos patógenos están
presentes en el Jurel (Trachurus picturatus murphyi) y Trucha (Salmo tutta),
1.3.4. Delimitación conceptual:
A. Área : Ciencias de la salud
B. Campo : Farmacia y Bioquímica.
C. Línea : Microbiología
D. Tema general : Identificar microorganismos en el Jurel
(Trachurus picturatus murphyi) y Trucha (Salmo tutta),
expendidos en el mercado Nueva Esperanza, (Andrés Avelino
Cáceres)
E. Tema específico: Identificar microorganismos en el Jurel
(Trachurus picturatus murphyi) y Trucha (Salmo tutta), expendidos
en el mercado Nueva Esperanza, (Andrés Avelino Cáceres),
utilizando las tinciones simples, específicas y diferenciales. En el
laboratorio de la universidad Alas Peruanas - Arequipa 2015.
1.4 Definición del problema
En nuestro país, se consume el pescado ya que es un alimento rico en omegas
pero no existen datos referentes de microorganismos que pueden presentar
debido a la contaminación en el mar como en su expendición por lo que se
desconoce de algunas enfermedades microbiológicas de gran daño para la salud.
1.5 Formulación del problema a investigar.
Es probable que exista proliferación de microorganismos en los pescados Jurel
(Trachurus picturatus murphyi) y Trucha (Salmo tutta), expendidos en el Mercado
Nueva Esperanza, (Andrés Avelino Cáceres) por el aguas donde habitan (mar y
rio) debido a la contaminación ambiental y también por la falta de salubridad del
personal que trabaja en dicho mercado.

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1.6 Justificación e importancia de la investigación.
Los pescados son un recurso muy consumido por los seres humanos debido a la
presencia de omegas, sus propiedades nutritivas entre otras. Debido a este motivo
La presente investigación dará a conocer la existencia de diferentes tipos de
microorganismos, que puedan contener los pescados expendidos en el mercado
Nueva Esperanza, que puedan ser dañinos o patológicos para el ser humano,
estos resultados servirán para tomar las medidas necesarias de sanidad para el
mejoramiento de la salud, para implementar nuevas medidas de higiene.

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2. Antecedentes
2.1. Antecedentes investigativos.
2.1.1. TITULO. [ESTUDIO BACTERIOLÓGICO DE LA CALIDAD DEL
PESCADO FRESCO, BAGRE (Pseudoplatystoma Sp.) Y MOJARRA
ROJA (Oreochromis Sp.) COMERCIALIZADO EN EL MUNICIPIO DE EL
COLEGIO, CUNDINAMARCA -COLOMBIA] (7)
AUTOR: Constanza Lucía, Alvarado María, Castillo Lady y Camacho Yury
LUGAR: Cundinamarca -Colombia
FECHA: 19-12-2011
RESUMEN:
En el presente trabajo de investigación se hizo un estudio bacteriológico de
la calidad del pescado bagre (Pseudoplatystoma sp.) y mojarra roja
(Oreochromis sp.) comercializado en el municipio del colegio,
Cundinamarca (Colombia), este análisis bacteriológico permitió confirmar
ausencia de los patógenos (Salmonella s.p), (Staphylococcus aureus),
(Escherichia coli) y (Vibrio cholerae), en contraste con la presencia en un
alto índice de otro tipo de enterobacterias relacionadas en su mayoría con
el agua de donde proviene el pescado, como (Citrobacter amalonaticus) y
(Citrobacter freundii) en un 30% de las muestras; (Klebsiella oxytoca), (E.
cloacae), y (E. tarda) en un 10% respectivamente. Para Mojarra Roja se
aisló (Klebsiella oxytoca), (Klebsiella ozaenae), (E. tarda), (Proteus
mirabilis) en un 20% respectivamente y (V. metschnikovii) en un 10%;
microorganismos que en elevadas cantidades pueden representar un alto
riesgo para la salud pública.
2.1.2. TITULO. [VALORACIÓN DE LA CALIDAD DE CARNE DE
PEJERREY (Odontesthes Bonariensis)] (8)
AUTOR: Agüeria Daniela, Grosman Fabián, Tabera Anahí, Sanzano Pablo
y Porta Rodrigo
LUGAR: Argentina
FECHA: Año 2004

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RESUMEN:
En el presente trabajo de investigación se hizo una valoración de la calidad
de carne de pejerrey (Odontesthes bonariensis), almacenado a temperatura
ambiente, refrigerado y congelado, previamente eviscerado y sin eviscerar.
La evaluación de la frescura se realizó a través de análisis sensoriales,
microbiológicos y mediciones de pH. Los resultados indicaron que la mejor
calidad se obtuvo al eviscerar y refrigerar los ejemplares, manteniendo las
cualidades hasta las 72 horas de almacenamiento. El pescado entero
almacenado a temperatura ambiente conservó la aptitud para consumo
hasta la hora 6. El color de la carne en los ejemplares eviscerados y
congelados podría ser discriminatorio en la percepción de aptitud del
consumidor.
2.1.3. TITULO. [ESTUDIO MICROBIOLÓGICO DE TEJIDO SUPERFICIAL
DE TRUCHAARCO IRIS (Oncorhynchus Mykiss) Y DEL AGUA
CIRCUNDANTE] (9)
AUTOR: García José, Núñez Francisco, Chacón Omar , Alfaro
Rosa y Espinosa Martín
LUGAR: Panamá
FECHA: Año 2003
RESUMEN:
| En el presente trabajo de investigación se hizo un estudio microbiológico de
tejido superficial de trucha arco iris (Oncorhynchus mykiss) en 200 peces y
del agua de producción 260 muestras de la misma, se muestrearon en la
región noroeste del Estado de Chihuahua, 9 granjas con sistema de
producción de corriente rápida, 13 con sistema de concreto y 6 con sistema
rústico, en dos épocas del año de invierno a verano. Se determinó de la
superficie de los pescados y del agua: Mesófilos aerobios, Salmonella spp.,
coliformes totales y fecales, además de la temperatura y el oxígeno.

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2.1.4. TITULO: [EVALUACIÓN MICROBIOLÓGICA DE
PRODUCTOS ADQUIRIDOS EN EL MERCADO MAYORISTA
PESQUERO DE VENTANILLA – PERÚ] (10)
AUTOR: Carbajal María, Salva Percy, Gonzales César y Ayala María
LUGAR: Lima- Perú
FECHA: Año 2011
RESUMEN: En el presente trabajo de investigación se hizo la
evaluación microbiológica de pescados y mariscos frescos
expendidos en el Mercado Mayorista Pesquero de Ventanilla, el
segundo más grande de la capital (Lima). Se analizaron 35
muestras adquiridas en ese mercado, durante 5 semanas
consecutivas entre los meses de febrero, marzo y abril del año
2011 (verano en Perú). Se identificó Salmonella spp en dos
muestras correspondientes a cangrejo (Cancer spp) y jurel
(Trachurus picturatus murphyi

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2.2. Marco teórico.
2.2.1. PESCADO Jurel (Trachurus picturatus murphyi)
Jurel
A. CLASIFICACION TAXONOMICA
REINO animalia
FILO chordata
CLASE actinopterygii
ORDEN perciformes
FAMILIA carangidae
GENERO trachurus
B. DESCRIPCIÓN
Tiene el cuerpo alargado, y la cabeza grande, con la mandíbula
superior llegando casi a la órbita ocular. Alcanza 70 cm, siendo el
promedio 60 cm.1
El dorso es azul oscuro, mientras que el vientre es
de color plateado; muestra una mancha negra junto a la parte
posterior del opérculo. La aleta pectoral es característicamente larga
y en forma de hoz.
Es una especie abundante en el litoral peruano y es muy
económico, es por eso la gran demanda en los mercados.
Es un pescado nutritivo que tiene proteínas y vitaminas entre ellas
quien mas destaca es el calcio y el flúor.
Es un pescado energético e ideal para niños y también ancianos.
C. PROPIEDADES DEL JUREL
En cuanto al aspecto nutricional, el jurel es un alimento con un
importante aporte de vitamina D, yodo, selenio, vitamina B12,
vitamina B6, vitamina B3, vitamina E, proteínas, fósforo, colesterol,
agua y potasio.

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Vitamina D. Estimula la absorción de calcio y fósforo por el
organismo contribuyendo al adecuado desarrollo de huesos y
dientes, a la vez que favorece el crecimiento celular y fortalece al
sistema inmune ayudando a prevenir infecciones. Al depender los
niveles de calcio de la concentración de vitamina D, ésta juega
además un importante papel en transmisión del impulso nervioso y
la contracción muscular.
Yodo. Favorece el funcionamiento de los tejidos nerviosos y
musculares, así como el sistema circulatorio. Además, el yodo,
colabora en el metabolismo de otros nutrientes, y juega un papel
esencial en el adecuado desarrollo de la glándula tiroidea.
Selenio. Refuerza la protección contra enfermedades
cardiovasculares a la vez que estimula el sistema inmunológico. El
carácter antioxidante del selenio, retarda el proceso de
envejecimiento celular, a la vez que le confieren propiedades
preventivas contra el cáncer. La acción de este nutriente guarda
relación con la actividad de la vitamina E.
Vitamina B12 (o cobalamina). Es beneficiosa para las funciones del
sistema nervioso, corazón y cerebro. Favorece el mantenimiento de
la envoltura de mielina de las células nerviosas y participa en la
síntesis de neurotransmisores. Además, es necesaria para la
conversión de ácidos grasos en energía, y ayuda a mantener la
reserva energética de los músculos a la vez que colabora para un
buen funcionamiento del sistema inmunitario. La presencia de esta
vitamina en nuestro organismo está íntimamente relacionada a la de
la vitamina B9, siendo necesaria para el metabolismo del ácido
fólico. Al igual que éste, la cobalamina interviene en la formación de
glóbulos rojos y la síntesis de ADN, ARN y proteínas.

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Vitamina B6 (o piridoxina). Favorece la formación de glóbulos rojos,
células sanguíneas y hormonas, interviene en la síntesis de
carbohidratos, proteínas y grasas, y colabora en el mantenimiento
de los sistemas nervioso e inmune en perfecto estado, participando
indirectamente en la producción de anticuerpos. La vitamina B6
reduce además los niveles de estrógeno, aliviando así los síntomas
previos a la menstruación además de estabilizar los niveles de
azúcar en sangre durante el embarazo. También evita la formación
de piedras o cálculos de oxalato de calcio en el riñón.
Vitamina B3 (o niacina). Interviene en el proceso de transformación
de energía a partir de hidratos de carbono, proteínas y grasas, y
contribuye a relajar los vasos sanguíneos dotándoles de elasticidad,
a estabilizar los niveles de glucosa y ácidos grasos en la sangre, y a
reducir el colesterol secretado por el hígado. Junto con otras
vitaminas del complejo B, la niacina ayuda a mantener sanas piel y
mucosas digestivas, además de colaborar en el buen estado del
sistema nervioso.
Vitamina E. Presenta propiedades antioxidantes que ayudan a
mantener la integridad de la membrana celular, protegiendo las
células y aumentando la respuesta defensiva de éstas ante la
presencia de sustancias tóxicas derivadas del metabolismo del
organismo o del ingreso de compuestos por vías respiratorias o
bucales. Las propiedades antioxidantes de la vitamina E protegen,
además de al sistema inmune, al sistema nervioso con el
mantenimiento de la mebrana neuronal y al sistema cardiovascular
evitando la destrucción de glóbulos rojos y la formación de trombos.
Asimismo, esta vitamina protege al organismo frente a la
destrucción de ácidos grasos, vitamina A, vitamina C y selenio, y
frente al envejecimiento causado por la degeneración de tejidos que
trae consecuencias como la falta de memoria, siendo importante en
la formación y renovación de fibras elásticas y colágenas del tejido
conjuntivo.

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Proteínas. Colaboran en el adecuado crecimiento y desarrollo del
organismo, favoreciendo las funciones estructural, inmunológica,
enzimática (acelerando las reacciones químicas), homeostática
(colaborando al mantenimiento del pH) y protectora-defensiva.
Fósforo. Contribuye a la mejora de determinadas funciones de
nuestro organsimo como la formación y desarrollo de huesos y
dientes, la secreción de leche materna, la división y metabolismo
celular o la formación de tejidos musculares. La presencia de fósforo
(en forma de fosfolípidos) en las membranas celulares del cerebro
es fundamental, favoreciendo la comunicación entre sus células,
mejorando de esta manera el rendimiento intelectual y la memoria.
Colesterol. Requerido tanto en tejidos corporales -hígado, médula
espinal, páncreas y cerebro- como en el plasma sanguíneo, siendo
esencial para crear la membrana plasmática que regula la entrada y
salida de sustancias a través de las células. Una dieta con una
elevada proporción de grasas saturadas, elevará los niveles de
colesterol en la sangre y conllevará un mayor riesgo de padecer
aterosclerosis -estrechamiento de las arterias por la acumulación de
lípidos en sus paredes- y otras enfermedades cardiovasculares.
Agua (75,60%). Favorece la hidratación de nuestro organismo, al
que debemos abastecer, incluyendo el consumo a través de los
alimentos, con una cantidad de agua que oscila entre los 2,7 y los
3,7 litros, dependiendo de cada constitución, de la actividad física
desarrollada, o de estados como el embarazo, la lactancia,
enfermedad o exposición a fuentes de calor, circunstancias estas
últimas donde las necesidades de consumo aumentan.
Potasio. Junto con el sodio, se encarga de regular el balance ácido-
base y la concentración de agua en sangre y tejidos. Las
concentraciones de estos dos elementos en el interior y exterior de

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las células de nuestro organismo, generan un potencial eléctrico que
propicia las contracciones musculares y el impulso nervioso, con
especial relevancia en la actividad cardíaca.
El resto de nutrientes presentes en menor medida en este alimento,
ordenados por relevancia de su presencia, son: vitamina B,
magnesio, calcio, calorías, vitamina B2, grasa, hierro, ácidos grasos
poliinsaturados, sodio, ácidos grasos saturados, ácidos grasos
monoinsaturados, cinc, hidratos de carbono, retinol, vitamina A y
vitamina B9.
2.2.2TRUCHA
A- DESCRIPCION TAXONOMICA
REINO animal
PHYLUM chordata
SUPERCLASE pisces
CLASE osteichthyes
SUBCLASE actinopterygii
ORDEN salmoniformes
FAMILIA salmonidae
B. DESCRIPCIÓN
Las truchas se encuentran normalmente en aguas frías y limpias de
ríos y lagos distribuidos a lo largo de Norteamérica, el norte de Asia
y Europa.
Las aletas de las truchas carecen de espinas, y todas las especies
tienen una pequeña aleta adiposa en el lomo, cerca de la cola. Las
poblaciones aisladas presentan diferencias morfológicas. Sin
embargo, muchos de estos grupos no muestran divergencias
genéticas significativas, por lo que los ictiólogos los consideran
como simples variedades de un número de especies mucho menor.

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C.HÁBITAT
La trucha en su ambiente natural, es un pez que habita espacios
acuáticos con aguas puras y cristalinas, con cauces que presentan
marcados desniveles topográficos que originan rápidos, saltos y
cascadas que son muy comunes en los ríos de alta montaña, son
estos rápidos con una pronunciada velocidad de corriente y suelo
pedregoso los más frecuentados por las truchas. De manera que las
truchas son peces nativos de regiones elevadas y montañosas
donde existen aguas frías y claras, siendo en general la Sierra Norte
una región apropiada para el cultivo de este pez, puesto que cuenta
con aguas cristalinas y bien oxigenadas.
D. PROPIEDADES NUTRITIVAS
La trucha es un pescado semigraso, dado que aporta en torno a 3
gramos de grasa por 100 gramos de carne. Contiene proteínas de
alto valor biológico, pero en cantidades inferiores a otros pescados,
así como de vitaminas y minerales.
Se considera un alimento muy nutritivo, y si se cocina de manera
sencilla puede formar parte habitual de las dietas hipocalóricas y
bajas en grasas. Su carne supone un aporte interesante de potasio
y fósforo; y moderado de sodio, magnesio, hierro y cinc, comparado
con el resto de pescados frescos. El potasio es un mineral necesario
para el sistema nervioso y la actividad muscular e interviene junto
con el sodio en el equilibrio de agua dentro y fuera de la célula. Por
otro lado, el fósforo está presente en los huesos y dientes. También
interviene en el sistema nervioso y en la actividad muscular, y
participa en procesos de obtención de energía. El magnesio se
relaciona con el funcionamiento del intestino, los nervios y los
músculos, además de formar parte de huesos y dientes. Mejora la
inmunidad y posee un suave efecto laxante.
Entre las vitaminas del grupo B, destacan la B3, la B1 y la B2. No
obstante, el contenido en estas vitaminas no es tan relevante si se

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compara con otros alimentos ricos en estos nutrientes (cereales
integrales, legumbres, verduras de hoja verde, carnes). En general,
estas vitaminas permiten el aprovechamiento de los nutrientes
energéticos (hidratos de carbono, grasas y proteínas) e intervienen
en numerosos procesos como la formación de hormonas sexuales,
la síntesis de material genético y el funcionamiento del sistema
nervioso. Respecto a vitaminas liposolubles, la trucha contiene en
cantidades significativas vitamina A, que acumula en su hígado y su
músculo. Dicha vitamina contribuye al mantenimiento, crecimiento y
reparación de las mucosas, piel y otros tejidos del cuerpo. Favorece
la resistencia frente a las infecciones, es necesaria para el
desarrollo del sistema nervioso y para la visión nocturna. Interviene
en el crecimiento óseo y participa en la producción de enzimas en el
hígado y de hormonas sexuales y suprarrenales.
2.2.3. CLASIFICACIÓN CIENTIFICA
A.CARACTERÍSTICAS DE LA ESPECIE
El jurel es una especie pelágica, de forma hidrodinámica: pedúnculo
caudal muy fino y la cola bifurcada con una quilla lateral formada por
las escamas engrosadas que constituyen el término de la línea
lateral, la que está cubierta de escamas transformadas en escudos y
tiene una curva característica. Presenta una coloración azul
grisácea en el dorso, los lados y el vientre son plateados. Viven en
ambientes relativamente cálidos, con rangos de temperatura del
agua que oscilan entre 14° y 23°C. La salinidad puede variar entre
34,80 y 35,25 UPS. El jurel tiene hábitos gregarios formando
cardúmenes.
B.ASPECTOS BIOLÓGICOS
Reproducción El jurel es una especie heterosexual sin dimorfismo
sexual visible. Su fertilización es externa y su desove parcial. La
fecundidad parcial se ha calculado en 78 798 ovocitos hidratados,
variando de 10 000 a 160 000. La fecundidad relativa expresada en
número de ovocitos hidratados por gramo de hembra se calcula en

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235, variando de 83 a 461. La longitud media de madurez sexual se
ha determinado en 31 cm de longitud total. El período de desove del
jurel ocurre desde fines del invierno hasta la primavera, con mayor
intensidad entre los meses de octubre y noviembre. Su principal
zona de desove se bica entre los 14º00’ y los 18º30’ S de nuestro
litoral, en el frente oceánico limitado por las ACF de intenso
afloramiento y las ASS generalmente entre las 100 y 150 millas de
la costa.

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3. OBJETIVOS DE LAINVESTIGACION.
3.1. Objetivo general
3.1.1. Identificar microorganismos en el Jurel (Trachurus picturatus
murphyi) y Trucha (Salmo tutta), expendidos en el mercado Nueva
Esperanza, (Andrés Avelino Cáceres), utilizando las tinciones simples,
específicas y diferenciales.- Arequipa 2015.
3.2. Objetivos específicos
3.2.1. Identificar mediante la tinción simple, Estreptococos, Bacilos, y
Estafilococos que puedan estar presentes en el Jurel (Trachurus picturatus
murphyi) y Trucha (Salmo tutta), expendidos en mercado Nueva Esperanza.
3.2.2. Identificar mediante el método de Gram, las bacterias Gram (+) y
Gram (-) que puedan estar presentes en el Jurel (Trachurus picturatus
murphyi) y Trucha (Salmo tutta), expendidos en mercado Nueva Esperanza.
3.2.3. Identificar mediante la tinciones especificas flagelos y capsulas que
puedan estar presentes en el Jurel (Trachurus picturatus murphyi) y Trucha
(Salmo tutta), expendidos en mercado Nueva Esperanza
3.2.3. Realizar una comparación entre las tinciones utilizadas en la
identificación de microorganismos en el Jurel (Trachurus picturatus murphyi)
y Trucha (Salmo tutta), expendidos en el mercado Nueva Esperanza,
(Andrés Avelino Cáceres).

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4. FORMULACION DE HIPOTESIS
Es probable que exista proliferación de microorganismos en los pescados Jurel
(Trachurus picturatus murphyi) y Trucha (Salmo tutta), expendidos en el mercado Nueva
Esperanza, (Andrés Avelino Cáceres) debido a la contaminación ambiental y también por
la falta de salubridad del personal que trabaja en dicho mercado

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5. VARIABLES.
A consideración el presente trabajo de investigación estaría constituido por una variable lo
que metodológicamente es denominada cualitativa. (6)
CUADRO N° 4: OPERACIONALIZACION DE LAS VARIABLES
Variable Dimensión Sub
dimensión
Indicador Sub
Indicador
Items Escala Categorización
identificación de
microorganismos
Medio donde
habitan
Tinción
simple
microorganismo
Presencia
(+)
2 Nominal Cualitativa
Ausencia (-)
Tinción
diferencial
microorganismo
Presencia
(+)
Ausencia (-)
Tinción
especial
microorganismo Presencia
(+)
Lugar donde
se expenden
Tinción
simple
microorganismo
Ausencia (-) 2 Nominal Cualitativa
Presencia
(+)
Tinción
diferencial
microorganismo Ausencia (-) 2 Nominal Cualitativa
Presencia
(+)
Tinción
especial
microorganismo Ausencia (-) 2 Nominal Cualitativa

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6. DISEÑO OPERACIONAL.
6.1. Determinación del grado de frescura del pescado.
La siguiente tabla presenta información de gran utilidad para identificar un
pescado fresco de uno alterado, según, parámetros de Senasa Costa Rica
FUENTE: SENASA COSTA RICA

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6.1 2. Identificación Microbiológica
A. Tinciones simples.
Fundamento.
La mayoría de los colorantes utilizados en las tinciones positivas son
colorantes derivados de las anilinas, sales orgánicas intensamente
pigmentadas que proceden del alquitrán. (2)
Colorantes
 Cristal violeta
 Azul de metileno
 Safranina,
 Verde malaquita.
El uso de colorantes permite cambiar el color de las células de los
microorganismos y poder realizar la observación en microscopio
óptico. Dado que las bacterias son casi incoloras, no presentan
contraste con el medio en el cual se encuentran suspendidas y no
pueden observarse claramente sin algún tratamiento previo.
Procedimiento
 Poner sobre un portaobjetos una gota de agua y una
pequeña alícuota de un cultivo bacteriano con el asa de
siembra estéril.
 Hacer el frotis, formando una película homogénea sobre el
portaobjetos con el asa de siembra. Dejar secar.
 Fijar la preparación, pasando a través de la llama del
mechero el portaobjetos.
 Cubrir con una película de colorante (cristal violeta o
safranina) durante 1 minuto.
 Lavar el exceso de colorante con agua.
 Dejar secar al aire.
 Añadir una gota de aceite de inmersión.
 Observar con objetivo de inmersión (100 x)

23
B. Tinciones diferenciales.
1. Tinción de Gram:
Fundamento.
Se basa en las diferencias de la pared celular de las
bacterias Gram-positivas y Gram-negativas (2)
Es aplicada a muestras clínicas permite, además, visualizar
otras estructuras (leucocitos, fibrina, células epiteliales)
Procedimiento
 Cubrir el frotis con la muestra problema con 2 gotas
de cristal violeta durante 60 segundos.
 Lavar cuidadosamente el frotis con agua destilada
para eliminar el exceso de colorante.
 Eliminar el exceso de agua y cubrir el frotis con 2
gotas de lugol por 30 segundos.
 Lavar con precaución el frotis con agua.
 Inclinar el portaobjetos y aplicar gota a gota el
decolorante hasta que no fluya más colorante.
 Lavar de inmediato con agua.
 Aplicar 2 gotas de safranina durante 30 segundos.
Lavar de nuevo con agua, quitar el exceso de agua y
dejar secar al aire.
2. Tinción de ziehl-neelsen
Fundamento
La tinción de Ziehl-Neelsen demuestra la capacidad que
tienen algunas bacterias teñidas de resistir a la decoloración
por ácidos y alcoholes. Esta propiedad de algunos
actinomicetos se correlaciona con el alto contenido en lípidos
de su pared celular, que confiere un ambiente muy hidrófobo.
Además pueden poseer unos lípidos característicos llamados
ácidos micolicos que aumentan este carácter hidrófobo. La
tinción ZIEHL-NEELSEN requiere tres colorantes (3)

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 Mezcla en fucsina fenol capaz de teñir las células en
caliente.
 Decolorante orgánico: mezcla de ácido y alcohol
 Colorante de contraste: azul de metileno
Las bacterias acido alcohol resistentes, tras la unión de la
fucsina, resisten el tratamiento orgánico y se verán teñidas
de rosa, el resto de las bacterias se decoloraran y se
contrastaran con azul de metileno.
Procedimiento
 Preparar el frotis con la muestra y cubrir con
carbofucsina.
 Calentar la preparación cuidadosamente en el
mechero sin que hierva la muestra.
 Lavar con abundante agua el exceso de colorante.
 Decolorar con la solución acido alcohol hasta que la
muestra adopte un color rosa claro (30 segundos).
 Lavar con agua para detener la decoloración.
 Teñir con azul de metileno (1 min).
 Lavar con agua el exceso de colorante.
 Secar la preparación.
 Examinar al microscopio.
C. Tinciones especiales
1. Tinción de esporas (wirtz-conklin)
Fundamento
Las endosporas poseen unas cubiertas exclusivas que las
hacen resistentes a los factores ambientales adversos.
Además, estas cubiertas hacen que las esporas aparezcan
en el microscopio óptico como estructuras refringentes y de
difícil tinción. (4)
La tinción específica de esporas requiere dos colorantes:

25
 Verde malaquita: capaz de teñir las esporas en
caliente.
 Safranina: colorante de contraste que tiñe las formas
vegetativas.
Las endosporas, tras la primera tinción, no perderán el
colorante en el lavado con agua, y sí lo harán las formas
vegetativas, que quedarán teñidas con el segundo colorante.
Procedimiento
 Preparar los frotis bacterianos indicados.
 Teñir con verde malaquita. Con unas pinzas de
madera colocar la muestra encima de la llama del
mechero de forma que el colorante humee durante 5
min.
 Teñir con safranina 1 min.
 Secar la preparación.
 Observar la preparación al microscopio.
2. Tinción selectiva de endosporas .
 Colocar un pequeño trozo de papel filtro sobre un
frotis de Bacillus sp
 Agregar verde de malaquita sobre el papel filtro de tal
manera que cubra toda la preparación.
 Colocar el portaobjetos sobre un vaso de precipitados
con agua en ebullición.
 Dejar durante 5 minutos evitando que se seque el
colorante (agregar un poco más, si es necesario).
 Eliminar el colorante con agua destilada y cubrir con
safranina durante 30 segundos. 6. Lavar
nuevamente, quitar el exceso de agua y dejar secar
al aire.

26
3. Tinción con Tinta China
Fundamento
Las capsulas por sus características químicas, no tiñen
normalmente con colorantes básicos como azul de metileno
o la safranina. sin embargo se pueden observar directamente
mediante tinción negativa con tinta china. Este colorante está
compuesto por partículas finas de carbón suspendidas en
agua formando un auténtico coloide .Las partículas son
demasiado grandes para penetrar a través de la matriz de la
capsula, por lo que solo se teñirá el medio circundante. L a
capsula se verá como un halo transparente alrededor de la
célula de color grisáceo con el medio circundante de color
negro. (2)
Procedimiento
 Lavar y separar los portaobjetos a usar que estén
perfectamente limpios
 Tomar una gota de la muestra en el portaobjetos.
 Añadir una gota de la tinta china y mezclarla bien con
la muestra.
 Colocar suavemente un cubreobjetos evitando que se
formen burbujas.
6.1.3 Observación al microscopio.
 Limpiar con precaución los objetivos y el ocular del microscopio con
papel seda.
 Ajustar el haz de luz en el centro del campo de observación
(iluminación Köhler), siguiendo las indicaciones del profesor.
 Colocar los portaobjetos en la platina y localizar la preparación con
el objetivo de 10X, después pasar al de 40X. Para la observación

27
con el objetivo de 100X colocar previamente una pequeña gota de
aceite de inmersión sobre la preparación.
 Al finalizar las observaciones, limpiar el objetivo con papel seda
para eliminar el exceso de aceite y evitar incrustaciones que dañan
estos sistemas.

28
8. CRONOGRAMAY PRESUUESTO DE HONORARIOS Y LUGARES DE TRABAJO
8.1. CALENDARIO DE ACTIVIDADES
El presente cronograma es elaborado de acuerdo a la temporalidad del presente
anteproyecto, proyecto e informe final de investigación. Abarca desde Marzo
2015 a Junio del 2015.
CALENDARIO DE ACTIVIDADES
Actividades Marzo 2015 Abril 2015 Mayo 2015
1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4
Presentación
de
anteproyecto
Presentación del titulo X
Presentación del avance x
Modificación
del
anteproyecto
Presentación de la 1º
modificación
X
modificación
X
modificación
X
Presentación
del proyecto
Presentación del título
del proyecto
X
Recopilación
de información
en biblioteca
Presentación del primer
avance
X
Presentación de la 1ª
modificación
X
Recopilación
de información
vía internet
Presentación del
segundo avance
X
Aprobación del proyecto
Anillado
X
Experimento
Búsqueda de materiales x X X x X
Se procede con el
experimento
X x x x x X X
Evaluación del
resultado
obtenido
Analizar resultados
obtenidos
x
Conclusiones X
Culminación
de la
investigación
X
Sustentación. X

29
8.2 LISTADO DE EQUIPOS, MATERIALES, INSUMOS Y REACTIVOS A
UTILIZAR EN LA INVESTIGACIÓN
8.2.1. MATERIAL BIOLOGICO
NOMBRE CIENTÍFICO NOMBRE COMÚN
(Salmo tutta), Trucha
Jurel (Trachurus picturatus murphyi) Jurel
8.2.2. MATERIALES DE LABORATORIO.
Material de vidrio: Unidades
Vaso de precipitados 4
Tubos de centrifuga 8
Lupa 1
Pipeta 2
Placa Petri 6
Laminas portaobjetos 20
Laminas cubreobjetos 20
Mortero y pistilo 2
Equipo de laboratorio Unidades
Balanza 1
Microscopio 1
Autoclave 1

30
Reactivos. Cantidad
Cloruro de sodio 1 litro
Lugol 20ml
Azul de metileno 20ml
safranina 20ml
Cristal violeta 20ml
Otros. cantidad
Papel filtro. 1 pliego
Gasa. 3 paquetes
Guantes 1 caja
Fundas de plástico 5
Termo refrigerante 1
Cámara de fotos 1
8.3. PRESUPUESTO
8.3.1. Pre investigación.
Denominación Cantidad Costo total
 Internet ---- S/ 20.00
 Papel Bond ---- S/ 10.00
 Folders A-4 crema ---- S/ 3.00
 Uso de movilidad ---- S/ 30.00
Totales S/. 63.00

31
8.3.2. Investigación.
 Internet --- S/. 100.00
 Impresora. 01 S/. 100.00
 Papel Bond 500 S/. 13.00
 Anillado 03 S/. 5.00
 Fotocopias. --- S/. 100.00
 Material animal. --- S/. 300.00
 Materiales de
laboratorio.
--- S/. 400.00
 Uso de movilidad --- S/. 50.00
Totales S/. 1068.00
8.3.3. Post investigación.
 Internet --- S/. 30.00
 Impresora. 01 S/. 100.00
 Papel Bond 500 S/. 13.00
 Empastado 05 S/. 50.00
 Uso de movilidad --- S/. 50.00
Totales S/. 243.00

32
8.3.4. Costo Total del Proyecto y Ejecución de Investigación.
Denominación Costo Total
Pre investigación S/. 63.00
Investigación S/ 1068.00
Pos investigación S/ 243.00
Costo Total S/ 1 374.00

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