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- 1. SCUOLA EUROPEA DI VARESE INFORME SOBRE EL CURSO DE PRÁCTICA LABORAL EN EL CCR (CENTRO COMÚN DE RECERCA) Del 25 junio al 6 de julio Redactado por Arnau Segura Clase 6ª Secciòn italiana Profesor responsable: Sr. Miguel Castillo
- 2. ÍNDICE: 1.Introducciòn..........................................................................pàg.1 2.Desarrollo: 2.1. Justificaciòn de la elecciòn....................................................pàg.1 2.2. Descripciòn del puesto de trabajo: 2.2.1. Descripciòn de la empresa..............................................pàg.1 2.2.2. Descripciòn del laboratorio: 2.2.2.1. Màquinas presentes..................................................pàgs.1-2 2.2.2.2. Materiales usa y tira utilizados durante la pràctica....pàgs.2-3 2.2.2.3. Documentos importantes para el laboratorio.............pàg.3 2.2.3 Descripciòn del trabajo ejercido.......................................pàgs.3-4-5 3.Valoraciòny conclusiòn......................................................pàg.6 4.Bibliografìa............................................................................pàg.7
- 3. Introducciòn El curso de “Pràctica laboral” que he elegido dura unas dos semanas, desde el 25 de junio del 2012 hasta el 6 de julio. He elegido trabajar en el CCR. Los objetivos principales de esta experiencia son enseñar còmo es trabajar en un laboratorio bioquìmico y saber si nos gustarìa repetir la experiencia en futuro e indicarnos si el campo que hemos elegido es el que mejor se adapta a nosotros. Desarrollo Justificaciòn de la elecciòn: He elegido trabajar en el centro de investigacion comùn puesto que me interesa mucho el trabajo en laboratorio y cuando crecerè dedicare mi vida a las ciencias, sobre todo a la quìmica y a la fìsica junto a las matemàticas. El trabajo lo he conseguido gracias a mi padre que trabaja en recursos humanos y ha conseguido encontrarme un puesto enseguida y sin ningùn problema. No ha habido seleccion, solo he tenido que presentar una carta de admision en la que justificaba mi eleccion del trabajo. Descripciòn de la empresa: El centro es comparable a un pais pequeño puesto que en el vienen a trabajar cada dia màs o menos 2800 personas, consta de casi 160 edificios. Yo trabajo en el edificio nùmero 58 junto a otros dos compañeros, èste tiene dos plantas en las que hay varios laboratorios. El nombre de la division en la que trabajo es IHCP màs concretamente dentro esta divisiòn he trabajado en ECVAM. En ella se trata de experimentar los posibles efectos tòxicos de los compuestos de todos tipos en cèlulas humanas. En este lugar trabajan màs o menos 30 personas entre cientificos, informaticos, aseguradores, etc. Los horarios de estos trabajadores van desde las 9 de la mañana hasta que el laboratorio lo necesite, a veces pueden irse muy temprano, otra veces tienen que quedarse hasta tarde. Descripciòn del laboratorio: Màquinas presentes : Incubador: el incubador se ocupa de que las cèlulas se queden a una temperatura constante de 37 grados centìgrados hacièndolas sobrevivir.
- 4. Cabina a flujo laminar: esta cabina evita que los compuestos, los materiales, las cèlulas y en general los materiales se contaminen anulando el experimento por contaminaciòn. Termòstato: este aparato sirve a calentar los lìquidos que se usaran para el experimento, practicamente es una estufa que calienta el agua en la que pones al lìquido dentro un recipiente. Centrìfuga: sirve para mezclar a los compuestos rapidamente y eficientemente. Autoclave: esta màquina sirve para esterilizar todos los materiales de laboratorio antes de su uso. Espectrofotòmetro: esta sofisticada invenciòn sirve para tener una idea de cuàntas celulas se pueden tener en una soluciòn, tambièn nos indica la concetracin de un compuesto en un solvente o en un lìquido usado para testar. Microscopio: sirve a ver las cosas màs cerca, puede llegar a aumentar la imagen de 1600 veces. Pipetas: instrumento utilizado para tomar cantidades precisas de alguna sustancia (en forma lìquida). En el nuestro laboratorio hay varios tipos de pipetas desde las que toman cantidades muy pequenas, las que toman cantidades màs elevadas e incluso hay un tipo que tiene ocho puntas, estas te ayudan a minimizar el tiempo de trabajo cuando se quiere tratar a las cèlulas. Pistolita: como sugiere el nombre tiene forma de pistola y sirve a prelevar lìquidos (5mL, 10mL, 25mL) Vortex: màquina que sirve para mezclar varios compuestos juntos gracias a un movimiento circular. Materiales usar y tirar utilizados durante la pràctica: Guantes de protecciòn: nunca se puede trabajar sin estos guantes ya que protegen al cientìfico de los productos tòxicos o corrosivos y evitan que el resto de materiales se contaminen. Làmina con agujeros o “pozos”: es una làmina de plàstico que puede tener diferentes nùmeros de agujeros (6, 24, 96......) en las que se ponen los compuestos con las cèlulas y gracias a las màquinas se pueden analizar los efectos de todos èstos y asi acelerar mucho el trabajo. Punta estèril para pipeta: son las puntas que se ponen a las pipetas y despuès de su uso se tiran de inmediato para evitar la contaminaciòn.
- 5. Varios contenedores: sirven para poder poner a los lìquidos con los que se està experimentando y sus productos. Basuras especiales: son basuras para los desechos quìmicos y por esto lo que este dentro estos contenedores serà quemado puesto que no se pueden reciclar materiales utilizados que podrian contener substancias tòxicas o peligrosas. Documentos importantes para el laboratorio: La seguridad en los laboratorios tiene que ser la màxima posible, por esto se utilizan varios materiales para la protecciòn, pero màs vale prevenir que curar. Por esto se dan al cientìfico varios documentos con los que pueda prepararse al experimento. Tienen que estar obligatoriamente a portada de mano en caso de necesidad o urgencia. MSDS (Material Safety Data Sheet) : un par de pàginas para cada uno de los compuestos presentes en los laboratorios del edificio, por ley las empresas que distribuyen los productos tienen que enviar una msds para cada substancia, en estas pàginas se nos explican sus efectos sobre el ser humano, dònde encontrarlas, què precauciones tomar, etc. Es muy importante leer esto para la seguridad del cientìfico. En las msds aparecen pictogramas que ayuda ha hacerse una idea del peligro que un compuesto puede tener, por ejemplo si es inflamable, corrosivo, tòxico, etc. SOP ( Standard Operating Procedures) : Son las “Proceduras estàndares de operaciòn”, en estos documentos se explica paso a paso còmo manipular los compuestos. Normalmente la gente que trabaja allì es la que las hace y cada vez que repiten una manipulaciòn pueden modificar el documento para perfeccionarlo y asegurar a las personas que experimentaràn despuès. Descripciòn del trabajo ejercido: Mi proyecto de investigacion abarca la neurotoxicidad. Sabemos que muchos compuestos en el ambiente son peligrosos para el ser humano. En el campo de la neurotoxicidad se analiza a los compuestos para saber si son tòxicos o no para nuestro cerebro. Para la experimentaciòn hemos utilizado a un tipo de cèlulas denoinadas NT2. Estas son muy parecidas a las cèlulas estaminales y pueden diferenciarse en cèlulas neuronales incubandolas con un compuesto especiàl.
- 6. El potencial neurotòxico que hemos testado sobre estas cèlulas se llama TritonX- 100, un detergente utilizado en laboratorio y para observar los efectos que crea este compuesto hemos utilizado la resazurina, un colorante de color azul oscuro que a contacto con cèlulas vivas cambia de color volviendose de un color rosado ya que es metabolizado por ellas, si las cèlulas estàn muertas se queda con su color natural. Las proceduras que he cumplido para la realizaciòn del experimento son: Las cèlulas ya incubadas presentes en un capsula con su nutrimiento (denominado Medium) en el incubador a 37°C a 5% de CO2, imitando las condiciones en el cuerpo humano. He removido su nutrimiento y las he lavado con el PBS (Un producto especial con el que puedes remover a las celulas muertas desde el contenedor en el que estaban). Con un enzima que se llama tripsina he despegado a las cèlulas de la superficie del contenedor para poderlas coger y asì contarlas al microscopio. Para hacer esto he usado la càmara de burker. Ponièndolas alli y con la ayuda del microscopio hemos determinado que la concentraciòn de cèlulas por mililitro era 5 veces la que buscabamos, esto quiere decir que hemos tenido que diluir la soluciòn para obtener la concentraciòn ideal de 105 cèlulas/mL. Enseguida despuès las hemos puesto en cultura en una placa microtituradora con 96 pocillos y las hemos dejado en incubador por una semana.
- 7. Durante este perìodo las cèlulas han crecido, cuando las hemos cogido las hemos tratado con el tritonX-100 usando nueve diferentes concentraciones de este compuesto para saber desde que concentraciòn es peligroso. Este tratamiento con el compuesto ha durado 4 horas. Al final del tratamiento hemos puesto la resazurina en los pocillos con las cèlulas y las hemos vuelto a poner en el incubador por otras 2 horas. Finalmente las hemos analizado con el espectrofotòmetro Como podemos notar en el grafico, la concentraciòn màs baja en la que observamos una muerte celular es de 0.06% ya que el nivel de vitalidad es bajìsimo, en las barras del grafico son reflejados los colores vistos en la realidad lo màs aproximadamente posible. Desde 0.002% hasta 0.008% las cèlulas estàn en perfecto estado, desde 0.016% hasta 0.03% las cèlulas aùn estan bien pero no tanto cuanto la primeras y como he dicho antes desde 0.06% las cèlulas estàn muertas. La barra blanca representa al control, esto quiere decir que son cèlulas no tratadas para compararlas con las otras para tener un punto de referimiento.
- 8. Valoraciòn y conclusiòn: Estas dos semanas de trabajo me han dado una idea de còmo es trabajar en un laboratorio y lo minuciosamente y detalladamente que se tiene que trabajar para no comprometer al experimento. Los aspectos positivos que he encontrado son: la implementaciòn del inglès como lengua “universal” dentro del edificio para que todos se puedan entender, el trabajo en equipo de la unidad , por ejemplo cuando alguien no està seguro de lo que tiene que hacer los de la unidad acuden inmediatamente a ayudarlo. Otros aspectos positivos de la experiencia es que nos han tratado como si fuesemos trabajadores, es decir, nos han permitido participar a reuniones que trataban sobre temas como la sostenibilidad de las maquinas usadas en laboratorio por todas las unidades que hay por el mundo, si el equipamiento de los laboratorios no fuera siempre el mismo los experimentos nunca podrian ser confirmados al 100%. El ùnico aspecto negativo que he encontrado durante esta experiencia han sido un par de reuniones dificiles de entender que si se pierden solamente dos minutos ya no vuelves a entenderlas. Estas reuniones llegaban a durar tres horas pero no siempre los que haciamos la experiencia teniamos que quedarnos todo el tiempo. En mi opiniòn esta experiencia me ha ayudado a entender como funciona el mundo del trabajo y còmo funciona un laboratorio moderno de experimentaciòn. Academicamente creo que esta experiencia no me ha ayudado excesivamente puesto que no se tenìa que estudiar y recordar las cosas, tenìamos una mayor libertad, se nos trataba como a adultos sin que nuestros tutores tuvieran que ocuparse de nosotros. Siempre nos han ayudado cuando realmente lo necesitabamos. Todos los que hemos hecho esta experiecia nos hemos aplicado y hemos cumplido con los objetivos propuestos.
- 9. Bibliografìa: Wikipedia Google.es Diccionario RAE ( Real Academia Española ) The value of alternative testing for neurotoxicity in the context of regulatory needs auth: Sandra Coecke , Chantra Eskes, Joanne Gartlon, Agnieszka Kinsner, Anna Price, Erwin van Vliet, Pilar Prieto, Monica Boveri, Susanne Bremer, Sarah Adler, Cristian Pellizzer, Albrecht Wendel, Thomas Hartung Investigation of the Alamar Blue (resazurin) fluorescent dye for the assessment of mammalian cell cytotoxicity auth: John O'Brien, Ian Wilson, Terry Orton and FrancËois Pognan Rapid Differentiation of Human Embryonal Carcinoma Stem Cells (NT2) into Neurons for Neurite Outgrowth Analysis auth: Million Adane Tegenge, Frank Roloff, Gerd Bicker A quantitative resazurin assay to determinate the viability of Trichomonas vaginalis and the cytotoxicity of organic solvents and surfactant agents auth: Mariana Duarte.