FR-Etude De Nutrition Clinique_Jus de Grenade _ Institut de Recherche_RAMBAM
- 1. La Consommation de Jus de Grenade durant 3 Ans par des Patients ayant une Sténose de l’Artère Carotide réduit l’épaisseur de la paroi interne de la Carotide,la Tension et l’oxydation du LDL Michael AVIRAM,Mira ROSENBLAT,Diana GAITINI,Samy NITECKY, Aaron HOFFMAN,Leslie DORNFELD,Nina VOLKOVA,Dita PRESSER,Judith ATTIAS,Harley LIKER,Tony HAYEK Institut de Recherche en Sciences Médicales du Centre Médical de RAMBAM,ISRAËL Il a été démontré que la supplémentation en antioxydants polyphénoliques chez les animaux était associée à une inhibition de l’oxydation du LDL ,à la formation de cellules spumeuses macrophages et à une atténuation du développement de l’athérosclérose. Nous avons fait des recherches au sujet des effets de la consommation de jus de grenade - qui contient des tannins et des anthocyanins trés puissants - sur des patients atteints d’athérosclérose avec sténose aortique de la carotide et sur la progression des lésions et les changements dans le stress oxydatif et la tension sanguine. Dix patients ont été supplémentés en jus de grenade durant un an et cinq d’entre eux ont continué pendant trois ans.Des échantillons de sang ont été prélevés avant le traitement et pendant la consommation de jus de grenade . Chez le groupe de contrôle ne consommant pas de jus de grenade, l’épaisseur de la paroi interne de la carotide a augmenté de 9% en un an,alors que la consommation de jus de grenade a abouti à une réduction de l’épaisseur de la paroi interne de la carotide de 30%,au bout d’un an. L’activité paroxynase du sérum des patients a augmenté de 83%,alors que l’état basal oxydatif du LDL du sérum et la susceptibilité du sérum à l’oxydation par le cuivre et les ions ont été toutes deux trés sensiblement réduites,de 90% et de 59% respectivement,au bout de douze mois de consommation de jus de grenade,en comparaison avec les valeurs obtenues avant la consommation de J.G.(Jus de Grenade.) De plus,les taux d’anticorps dans le sérum présents pour combattre l’oxydation du LDL ont été réduits de 19% et parallèlement,le statut total antioxydant (TAS) du sérum a augmenté de 130% au bout d’un an de consommation de jus de grenade.La pression sanguine systolique a été réduite de 21% au bout d’un an de consommation de J.G.et n’a pas été réduite plus au bout de trois années de consommation. Pour tous les paramètres étudiés,les effets maximum ont été observés au bout d’un an de consommation de J.G.Une consommation de J.G.de trois années supplémentaires n’a pas eu de bénéfices additionnels sur l’épaisseur de la paroi interne de la carotide ni sur l’activité paroxynase du sérum,alors que la péroxydation lipidique du sérum a été encore réduite de 16% au bout de trois années de consommation de J.G.Le résultat de la présente étude suggère donc que la consommation de J.G.par des patients atteints de S.A.C. (Sténose Aortique de la Carotide)réduit l’épaisseur de la paroi interne de la carotide et la tension systolique et que ces effets pourraient être liés aux caractéristiques antioxydantes des polyphénols du J.G Copyright 2003 Elsevier Ltd,Tous Droits Réservés.
- 2. Introduction: Le stress oxydatif,un contributeur majeur aux maladies cardio-vasculaires, est associé à la péroxidation lipidique dans les macrophages artèriels et dans les lipo-protéines. Il a été démontré que la lipo-protéine de basse densité oxydée (Ox-LDL) est athérogénique et que l’inhibition de l’oxydation du LDL par des antioxydants et flavonoïdes puissants de source alimentaire atténuaient le développement de l’athéroschlérose chez les animaux. Récemment,il a été démontré que la supplémentation en vitamine E des patients avec une sténose aortique de la carotide a inhibé l’accumulation de LDL dans les macrophages artèriels. La protection des lipides contre l’oxydation peut également être obtenue par la paraoxonase 1 (PON1), une estérase associée au HDL qui peut hydrolyser et réduire des lipides péroxidés spécifiques dans les cellules artèrielles et dans les lipo-protéines des lésions coronaires et carotidiennes . Les propriétés médicinales du jus de grenade sont décrites par toutes les principales religions et par la médecine populaire. Il a en effet été récemment démontré que le Jus de Grenade possède des propriétés antioxydantes impressionnantes à cause de ses polyphénols, tannins et antocyanines.Nous avons récemment montré les caractéristiques antioxydantes et anti-athérogéniques de la consommation de J.G. chez des souris athérosclerotiques déficientes en Apolipoprotéine E. Il a été également démontré que chez des humains en bonne santé, la consommation de J.G.possédait de puissantes capacités antioxydantes contre l’oxydation des lipoprotéines,et augmentait l’activité PON1 du sérum et du statut antioxydant total. Dans la présente étude,donc,nous avons analysé pour la première fois les effets de la consommation du J.G. par les patients avec une sténose aortique de la carotide sur le stress oxydatif de leur sérum associé à la progression des lésions athérosclérotiques de la carotide. Sujets et Méthodes Les patients. Dix-neuf patients de la Clinique de Chirurgie Vasculaire,5 femmes et 14 hommes,agés de 65-75 ans,non fumeurs,avec de sévères sténoses aortiques asymptomatiques ,(Sténose Caroditienne,définie comme 70% à 90% de sténose dans les artères carotides interens) ont participé à l’ étude. Ces patients avaient un résultat anormal à l’ échographie Doppler carotides,qui a été effectuée après avoir décelé un bruit anormal lors de l’examen médical physique,ou après que les personnes se soient plaintes de maux de tête ou de vertiges.Ces patients randomisés pour prendre soit du jus de grenade soit du placébo,et ont signé un formulaire de consentement éclairé avant le démarrage de l’étude. Dix patients ont été inclus dans le le groupe traité au jus de grenade. Neuf patients qui ne consommaient pas de jus de grenade ont servi de groupe de contrôle.Les deux groupes présentaient des concentrations similaires de glucose et de lipides dans le sérum,et des pressions sanguines similaires.(les données ne sont pas fournies) Les deux groupes étaient traités avec les mêmes médicaments hypocholestérolémiants et anti-hypertention.Dans chaque groupe,60% des
- 3. patients étaient traités aux statines,60% étaient traités aux inhibiteurs de l’Enzyme de Conversion de l’Angiotensine (ECA),20% étaient traités au béta-bloquants,et 20% étaient traités aux inhibiteurs calciques. Les patients ont continué leur thérapie tout au long de l’étude,et leurs habitudes alimentaires et style de vie n’ont pas été modifiées durant la totalité de l’étude.Dix patients ont consommé 50 ml de J.G. par jour (ce qui contient 1.5 nmoles de polyphénols total),durant une période de un an,et cinq d’entre eux ont accepté de continuer pour trois ans. Cette concentration de jus de grenade a été choisie en fonction de notre étude précédente sur les propriétés bénéfiques du jus de grenade sur des volontaires en bonne santé. Des prélèvements de sang ont été effectués après 12 heures de jeûne. Des analyses de sang et des échographies Dopplers des artères carotides ont été effectués au début de l’étude,et au bout de 3,6,9,12,22,28 et 36 mois de consommation de jus de grenade. Dans le groupe de contrôle,l’échographie Doppler des artères carotides a été effectuée au démarrage de l’étude et au bout d’un an. L’étude a été approuvée par le comité d’HELSINKI du Centre Médical de RAMBAM,Ministère de la Santé Israélien. Traitement des grenades Les grenades ont été ramassées à la main,lavées,conservées dans des cuves.Les fruits ont été écrasés,et pressés.Le jus a été filtré,pasteurisé, concentré et conservé à -18°, Chaque jour durant la période de l’étude,le jus de grenade concentré a été dilué à 1 pour 5 d’eau,de sorte à obtenir un jus de grenade non concentré. La composition antioxydante du jus inclut : 1979 mg/litre de tannins, 1561 mg/l de punicalgines et 417 mg/l de tannins hydrolysables,384 mg/l d’antocyanines,(delphinidol 3,5-digucocloside,cyanidol 3,5-diglucoside, Delfinidol-3-glucoside,cyanidol-3 glucoside,pélargonidol 3-glucoside), et 121 mg/l d’acides éllagiques dérivés. Le jus contenait aussi 3 mg de vitamine C par 100 ml de jus de grenade. Analyse de la Lésion Athérosclérotique par Ultrasonographie Bidimentionnelle. La mesure de l’EIM (épaisseur de l’intima-média carotidienne ) de l’artère carotide par échographie bidimentionnelle a été une largement pratiquée dans les premiers temps de l’athérosclérose. Après un scanner axial , des images longitudinales en mode B étaient obtenues avec un Doppler à ultrasons à haute résolution en couleur en couleur (ATL 5000 ou 2600 des laboratoires techniques de pointe BOTHELL,WA)avec un transducteur 5-12 Mhz à multifréquences. L’EIM était mesurée électroniquement sur la paroi la plus éloignée des artères carotides distales communes,à environ 1 cm de la bifurcation carotidienne,en évaluant les limites de l’intima et du média avec des pieds à coulisse électroniques.Des plaques d’athérosclétiques ont été radiographiées sur les artères carotides communes et sur le bulbe carotidien,ainsi que sur les artères carotides internes distale et proximale ont et la longueur et la largeur de la plaque a été évaluée.Lors d’un examen duplex des carotides internes,les vitesses de flux ont été calculées sur les sites sténosés, et formulés en pic de vitesse systolique (PSV) et vitesse diastolique (VD). Les résultats d’analyses ultrasons ont été le changement de l’EIM avec
- 4. le temps,qui a été mesurée toujours sur les mêmes segments présélectionnés des artères carotides ,les changements de dimension de la plaque et les changements de vitesse du flux sanguin. Un protocole a été adapté pour assurer que les artères étaient examinées toujours du même angle (60°) lors de tous les examens suivants. Les patients avaient jusqu’à huit examens duplex des artères carotides communes et internes de chaque côté:il y eu un examen Doppler au départ, puis sept examens de plus durant la consommation de jus de grenade. Toutes les études aux ultrasons ont été réalisées par le même mèdecin (DG),assurant la reproductibilité du site de l’EIM et de la mesure de la plaque lors des examens suivants. Afin d’éviter l’introduction potentielle de variables dépendants des scanners utilisés,le même système à ultrasons a été utilisé pour chaque patient lors des examens suivants. Méthodes Analytiques Toutes les analyses biochimiques ont été effectuées sur le sérum. Le glucose sanguin a été mesuré en utilisant le kit enzymatique (Roche). Le cholestérol total,la lipoprotéine de haute densité(HDL) et les concentrations de triglycérides dans le sérum ont été mesurés avec les kits diagnostiques (Raichem).Les concentrations d’apolipoprotéines A-1 et B-100 dans le sérum ont été déterminées en utilisant un test d’immunoturbidimétrie. spécifique d’anticorps . L’activité paraoxynase 1 et arylestérase du Sérum. L’activité arylestérase du sérum a été mesurée en utilisant du phénylacétate comme substrat.Les taux initiaux d’hydrolyse ont été déterminés spectrophométriquement à 270 nm.Le mélange du test comprenait 5µl de sérum,1.0 nmol/l de phénylacétate,et 0.9 nmol/l CaCl2 dans 20 nmol/l de Tris HCI , à un pH de 8.0. L’Hydrolyse non enzymatique du phénylacétate était soustraite du taux total de l’hydrolise. Le E270 total pour cette réaction est 1310 M-1cm-1. Une unité d’activité arylestérase est égale à 1µmol de phénylacétate hydrolysé/min/ml. Statut Total Antioxydant Le statut total antioxydant a été mesuré dans le sérum avec un kit commercialisé ( Laboratoires Randox,Antrim,GB.,Catalogue N°NX 2332) Le Sérum et les Anticorps Ox-LDL La concentration des anticorps Ox-LDL dans le sérum a été mesurée sur des échantillons prélevés sur les patients avant le traitement et au bout de trois ou six mois de consommation de J.G.,en utilisant le test immunoelisa anti-Ox-LDL ( Immco Diagnostics,Inc .Buffalo,NY,USA).Les résultats sont exprimés en unités enzymatiques par millilitre (EU/ml).
- 5. La péroxydation des Lipides du Sérum. La péroxydation des lipides du sérum a été mesurée avant et après 12,22,28 et 36 mois de consommation de jus de grenade. Les échantillons de plasma ont été incubés sans ou avec 100 mM de 2.2’-azobis, hydrochloride 2-amidinoprane (AAPH,Wako,Japon) pendant deux heures à 37°.A la fin de la période d’incubation,la quantité de péroxydes lipidiques a été mesurée en employant la méthode de El-Saadani et Al. La péroxydation des lipides du plasma a été calculée en soustrayant les valeurs obtenues en l’absence de AAPH. Isolation du LDL Des échantillons de sérum ont été prélevés sur des patients avant et après un,trois,six,neuf et douze mois de consommation de jus de grenade et réfrigérés à -70°jusqu’à ce que tous les échantillons aient été prélevés. Du Sang a été prélevé également sur des volontaires en bonne santé durant les mêmes périodes,pour la standardisation des tests. Le LDL a été isolé des échantillons de plasma par ultracentrifugation discontinue à différents paliers de densité comme décrit précédemment. Le LDL a été lavé à d=1.063 g/ml,dialysé contre 150 nmol/l NaCI,1 nmol/l Na² EDTA (ph 7.4) à 4°.Les fractions de LDL ont alors été stérilisées par filtration(0.45 µm),conservées sous nitrogène dans l’obscurité et utilisées en une semaine.La concentration de protéine lipoprotéine a été déterminée par le test Lowry.Avant son oxydation,le LDL a été dialysé contre une solution saline (PBS) au pH 7.4 ,à 4°,sans EDTA, et tamponnée de phosphate. Oxydation du LDL Le LDL (100 µg de protéine/ml) a été incubé avec 5 µmol/l de CuSO4 durant 2 heures à 37¨.La formation de diènes conjuguées a été contrôlée de façon continue en mesurant l’augmentation de l’absorption à 234 nm. Le laps de temps nécessaire pour l’initiation de l’oxydation de la lipoprotéine a été calculé à partir de la courbe d’oxydation.La quantité de péroxydes lipidiques associés au LDL a été mesurée avec la méthode El-Saadani et Al. Les LDLs isolés de volontaires en bonne santé durant les mêmes périodes ont été utilisés pour la standardisation des études sur l’oxydation. Analyse des Lésions de la Carotide. Des plaques athérosclérotiques complètes(y compris les parties carotides commune,interne et externe de la lésion) ont été recueillies sur deux groupes de patients après une endartériectomie carotidienne.Un groupe comprenait sept patients avec sténose aortique de la carotide qui ne consommaient pas de J.G.Le second groupe comprenait deux patients qui consommaient du jus de grenade (pendant 3 à 12 mois).Les deux groupes étaient d’âge égal et avaient des lipides et une concentration de glucose similaires dans le sérum.Le traitement par le jus de grenade était la seule différence importante entre ces deux groupes.Les lésions ont été lavées dans une solution saline,séchées,et pesées.
- 6. Les lésions ont été coupées en petits morceaux et rincées dans du PBS, puis nous avons procédé à leur sonication dans un sonificateur (3X20 s à 80 W).Le contenu des lésions de cholestérol a été mesuré sur des échantillons homogènat,en utilisant un test colorimétrique du kit commercialisé de Sigma Co.Ltd.Le contenu de péroxydation lipidique dans la lésion a été également mesuré. Le contenu de glutathion réduit(GSH) a été mesuré par le test de recyclage de la réductase DTNB-GSSG. Les Statistiques Le Test ANOVA a été effectué pour toutes les analyses statistiques utilisées pour comparer les mesures répétées.Les résultats sont exprimés en + SEM moyen. Les tests pour cet échantillon ont été réalisés à triple exemplaire.Nous vous montrons toutes les comparaisons entre les données après consommation de jus de grenade et les résultats obtenus avant le traitement .(Temps zéro). Les Résultats. L’épaisseur Intima Media carotidienne (EIM) des carotides communes droite et gauche de patients ayant de sévères sténoses aortiques et ne consommant aucun jus de grenade (J.G.) a augmenté sensiblement (P<0.01),de 9% ,sur une période de un an, de 1.52+ 0.03 à 1.65 + 0.04 mm. Par contraste,l’EIM moyen ( des carotides communes droite et gauche) des patients consommant du jus de grenade durant un an a été réduite après 3,6,9 et 12 mois de consommation de J.G., de 13% ,22% ,26% et 35% respectivement,en comparaison avec les valeurs de départ (Temps Zéro,Graphique 1A) L’effet inhibant de la consommation de J.G. sur le PSV de la carotide a été significatif seulement après 1 an,avec une réduction du PSV moyen de 21% sur les deux carotides droite et gauche (Graphique 1B) Cependant,La VD moyenne des carotides de droite et de gauche a réduit graduellement de 16% , 20% , 31% et 44% après 3,6,9 et 12 mois de consommation de jus de J.G. respectivement (Graphique 1C). La consommation de J.G.par les patients n’a pas affecté sensiblement les taux des autres principaux marqueurs biochimiques étudiés,y compris:le glucose et le cholestérol dans le HDL et le LDL (Tableau N°1) . Cependant ,la concentration de triglycérides dans le sérum,cependant,a augmenté de 16%,comme le reflète une augmentation similaire de la concentration du cholestérol VLDL au bout de 12 mois de consommation de jus de J.G.(tableau N°1),mais ces niveaux augmentés restaient dans des niveaux normaux.Les marqueurs du sérum pour le coeur,les reins et la fonction hépatique,ainsi que pour l’ homocysteine,Lp(a) et les concentrations totales de protéines sont restées inchangées durant toute l’étude .De même,la coagulation et le nombre de cellules sanguines n’ont pas été sensiblement affectées par la consommation de J.G.(Données non fournies). La pression systolique a été significativement réduite de 7% , 11% , 10% et 12%,après 1,3,6,9 et 12 mois de consommation de J.G.,respectivement... (suite page 8)
- 7. Graphique N°1: Temps après Consommation de Jus de Grenade (en Mois) Les effets sur l’EIM,la PSV et la DV de la consommation de J.G. par des patients ayant une sténose carotidienne (SC). Dix patients avec sévères sténoses carotidiennes ont été supplémentés en J.G. pendant un an .l’EIM,la PSV et la DV ont été mesurées pour les carotides droites et gauches des patients avant le traitement (données de base) et pendant la consommation de J.G. Les valeurs moyennes des deux artères sont représentées. A: l’EIM moyen de l’artère carotide B- La PSV moyen de l’artère carotide interne. C-La VD moyenne de l’artère carotide interne. Les résultats représentent le + SEM moyen. P<0.01 (après la consommation de J.G. au lieu des données de départ,Temps zéro)
- 8. En comparaison aux valeurs obtenues avant le traitement. Par contre,la consommation de J.G. n’a pas eu d’effet significatif sur la pression diastolique du patient (Tableau N°1) Dans le groupe de contrôle,les valeurs de la pression sanguine systolique et diastolique n’ont pas changé sensiblement en une année de suivi, (160+ 7/88+ 4 contre 163+9/85+6 mmHg au départ et au bout d’un an respectivement).Afin d’analyser l’effet de la consommation de jus de grenade sur l’état d’oxydatif du sérum des patients,nous avons mesuré la concentration des anticorps dans le sérum par rapport au LDL oxydé (Ox-LDL).Une réduction importante(P<0.01) de la concentration des anticorps par rapport au Ox-LDL de 24% et de 19% a été observée après 1 mois et 3 mois de consommation de jus de grenade,respectivement(de 2070+61 EU/ml avant le traitement à1563+69 et et 1670+52 EU/ml après 1 et 3 mois de consommation de J.G.;respectivement,(n=10).De même,le statut antioxydant total (TAS) dans le sérum a été substantiellement augmenté,de 130%,de 0.95 + 0.12 nmol/l au départ à 2.20+0.25 nmol/l après douze mois de consommation de J.G.(n=10). Ces résultats indiquent que l’administration de J.G. aux patients a réduit substantiellement le statut d’oxydation de leur sérum et pourrait donc inhiber la péroxydation lipidique du sérum. En effet,la péroxydation lipidique du sérum provoquée par le générateur de radicaux libres AAPH a été considérablement réduite, de 59%,au bout d’ un an de consommation de J.G.(de 1670+66 à 691+43 nmol de lipides péroxydés/ml, n=10).La résistance accrue des patients à l’oxydation du sérum après l’administration du J.G. pourrait aussi avoir résultée de l’augmentation de l’activité paraoxonase1 du sérum (PON 1). Le graphique 2A démontre une augmentation significative (P<0.01) de la paraoxonase dans le sérum,mesurée en tant qu’activité arylestérase,de jusqu’à 83% au bout d’ une année de consommation de J.G. (n=10). Nous avons ensuite isolé le LDL de dix patients qui avaient consommé du J.G. pendant un an et avons analysé l’état basal oxydatif,ainsi que la susceptibilité du LDL aux ions de cuivre. (graphique 2B et C).La consommation de J.G. a résulté en une réduction importante des taux de péroxydes lipidiques associés au LDL ,jusqu’à 90% déjà au bout de six mois de consommation de jus de grenade (Graphique 2B).La susceptibilité du LDL à l’oxydation provoquée par les ions de cuivre a graduellement réduit,comme observé en prolongeant le laps de temps requis pour l’initialisation de l’oxydation du LDL (de 30 + 4 min avant le traitement à 55 + 5 , 60 + 2, 64 + 1 et 65 + 2 min après 3,6,9 et 12 mois de consommation de jus de grenade,respectivement.) Tableau N°1: L’effet de la consommation de J.G.pendant 1 an par des patients ayant une sténose carotidienne (SC) sur leurs marqueurs biochimiques de sérum,sur leurs taux de lipides,et sur leur pression sanguine.
- 9. Le contenu de péroxydes lipidiques formé durant l’oxydation provoquée par les ions de cuivre a été aussi réduit de jusqu’à 59% après 12 mois de consommation de J.G.(graphique 3C).Une supplémentation continue en J.G. a été requise afin de maintenir la réduction du stress oxydatif,du fait que au bout d’un mois après avoir arrêté la consommation de J.G.,leTAS et l’activité paraoxonase 1 ont toutes les deux été réduites de: 2.2 + 01.nmol/l et 107 + 10 U:ml à: 1.4 + 0.1 nmol/l et 88 + 18 U/ml,respectivement (n=5). Au bout d’un an, cinq des dix patients ont accepté de continuer la consommation de jus de grenade pour jusqu’à deux ou trois ans. Des échantillons de sang ont été prélevés après 18,22,28 et 36 mois. L’index de masse corporelle (IMC) n’a pas changé (tableau N°2) et la pression systolique est restée réduite(mais pas la pression diastolique) en comparaison avec les valeurs de départ (Temps Zéro) , tout au long des trois années de consommation de jus de grenade. (tableau N°2) Le glucose du sérum et la concentration de lipides n’ont pas été significativement affectés par la consommation de jus de grenade. L’activité PON1 du sérum a augmenté de 73% au bout d’un an de consommation de J.G. , et 10% de plus d’augmentation ont été obtenus au bout de trois années de consommation de J.G.(Tableau N°2) De même,la péroxydation des lipides du sérum provoquée par l’AAPH qui avait réduit de 60% au bout d’un an de consommation de J.G. a été réduite de 16% supplémentaires au bout de 3 ans,en comparaison avec les taux obtenus après un an de consommation de jus de grenade. La réduction de l’EIM,la PSV et VD moyens ( des deux artères carotides droites et gauches ), de 26%,20% et 22% respectivement,a été constatée déjà au bout d’un an de consommation de jus de grenade et plus de consommation jusqu’à 3 ans n’a pas eu d’effet inhibant additionel sur ces paramètres de la lésion.(tableau N°2). Pour deux sur dix patients sous jus de grenade,(après 3 et 12 mois),suite à une détérioration clinique,une endartériectomie carotidienne a été effectuée,et leurs lésions de carotides ont été analysées et comparées à celles obtenues de sept patients qui ne consommaient pas de J.G. .(pas les patients du groupe sous placebo). Le contenu en cholestérol des deux patients qui consommaient du J.G.était plus bas de 58% et de 20% respectivement,en comparaison aux lésions obtenues des patients SC qui ne consommaient pas de J.G. (graphique 3 A). De même,le contenu en péroxydes lipidiques des lésions obtenues sur les patients après consommation de J.G.durant 3 ou 12 mois était réduit significativement...de 61% ou de 44%,respectivement,en comparaison aux lésions de patients qui ne consommaient pas de jus de grenade.(graphique 3B).Comme l’équilibre entre les niveaux pro-oxydants et antioxydants des lésions détermine l’étendue des lipides oxydés,qui s’accumulent dans la lésion,nous avons ensuite déterminé les taux de glutathion réduit(GSH,un anti-oxydant cellulaire majeur).Une augmentation substantielle du contenu de la lésion en GSH , de 2.5 fois plus,a été observée après la consommation de J.G. Pendant 3 et 12 mois.(graphique 3C).A l’appui de ces résultats, l’oxydation du LDL par des lésions provenant de patients ayant consommé du J.G. pendant 3 et 12 mois,a été significativement réduite (P<0.01) de 43% ou 32%,respectivement,par rapport aux taux d’oxydation obtenus de patients SC qui ne consommaient pas de J.G. (Graphique 3D).
- 10. Graphique N°2 Effet de la consommation de J.G. par des patients SC sur l’activité paraoxonase 1 (PON 1) du sérum (A),sur l’état oxydatif de base du LDL (B),et sur l’oxydation du LDL provoquée par des ions de cuivre.(C).Dix patients avec sténose carotidienne ont été supplémenté en jus de grenade pendant un an. Des échantillons de sang ont été prélevés aux patients avant et après 3,6,9,et 12 mois de consommation de J.G. A chaque stade,le sérum des patients a été recueilli,leur LDL isolé,et le statut oxydatif analysé. L’état oxydatif basal a été déterminé par le test de péroxydation lipidique. Le LDL(100 mg de protéine/l) a aussi été incubé avec 5 µmol/l de CuSO4 pendant deux heures à 37°et la quantité de péroxydes lipidiques formée a été mesurée à la fin de la période d’incubation (n=10). Les résultats représentent le SEM moyen . P<0.01 (Après le traitement au jus de grenade par rapport à avant le traitement. La quantité de cholestérol(Q),de lipides péroxydés(B) et de GSH(C) a été mesurée sur des légions homogénisées .Les lésions(0.3 g) ont aussi été incubées avec le HDL(100 mg de protéine/l) dans une solution PBS durant 20 heures à 37°.L’étendue de la péroxydation du LDL a été mesurée par le test de péroxydation lipidique.L’oxydation du LDL liée aux lésions a été calculée en soustrayant les valeurs obtenues au contrôle du LDL(incubation sans lésion) aux valeurs obtenues après incubation de LDL avec lésions.Les résultats représentent le + SEM moyen. .
- 11. Chiffre 3 L’Effet de la consommation de J.G. par des patients ayant une sténose carotidienne , sur le cholestérol de leurs lésions, le contenu en lipides oxydés et en glutathion réduit(GSH) et sur l’oxydation du LDL dans les lésions.Des lésions ont été recueillies sur sept patients avec sténose aortique après une endartériectomie durant l’étude suite à une détérioration clinique. La quantité de cholestérol(A),de péroxydes lipidiques(B) et de GSH(C) a été mesurée sur des homogénats de légions .Les lésions(0.3 g) ont aussi été incubées avec le LDL(100 mg de protéine/l) dans du PBS pendant 20 heures à 37°.L’étendue de l’oxydation du LDL a été mesurée par le test de péroxydation lipidique.L’oxydation du LDL dans les lésions a été calculée en soustrayant les valeurs obtenues sur le LDL de contrôle(incubation sans lésion) aux valeurs obtenues après incubation du LDL avec lésions.Les résultats représentent le + SEM moyen.*P<0.01 (lésions carotides après consommation de J.G. Par rapport au groupe de contrôle,sans J.G.) P<0.01 (contrôle des lésions des carotides après la consommation de jus de grenade par rapport aux lésions des carotides sans aucune consommation de J.G.)
- 12. Tableau N°2 : L’Effet de la consommation de jus de grenade pendant ans par des patients avec sténose carotidienne sur leur pression sanguine,les lipides du sérum,le stress oxidatif et la lésion EIM. Discussion La présente étude démontre clairement pour la première fois que la consommation de jus de grenade (J.G.) par des patients ayant une sténose carotidienne (SC) possède des propriétés anti-athérosclétiques puisqu’elle a considérablement réduit l’EIM de la carotide commune ,en association avec une réduction de la pression sanguine systolique,et une inhibition substantielle de la péroxydation des lipides dans le sérum et dans le LDL. Le jus de grenade a été utilisé dans notre étude comme l’antioxydant de choix,du fait qu’il est trés riche en polyphénols et démontre une haute capacité à massacrer les radicaux libres et à inhiber l’oxydation du LDL in vitrro et in vivo. La consommation de J.G. par des patients SC pendant jusqu’à 3 ans n’était pas toxique puisque les analyses des fonctions du foie,du coeur et des reinsétaient normale comme il a été démontré de même chez les rats. L’effet de la consommation de jus de grenade sur la progression de la lésion aux carotides chez les patients SC a été évalué en mesurant l’EIM,la PSV et la VD sur les carotides gauche et droite au départ et durant la consommation de J.G.,pendant jusqu’à trois années.Une réduction marquée de l’EIM et dans les vitesses du flux sanguin ont été démontrées déjà après douze mois de consommation de jus de J.G.,par rapport aux valeurs obtenues au départ. L’EIM moyen varie chez les hommes mûrs entre 0.7 et 1.2 mm,et il a été démontré que la pente ascendante de l’EIM carotidien moyen chez les patients non traités est d’environ 0.02 mm/an.Nous avons étudié des patients avec de sévères athéroscléroses comme l’indiquait leurs valeurs d’EIM trés élevées. Dans la présente étude,la consommation de J.G.pendant un an
- 13. a résulté en une réduction importante de l’EIM, alors que dans le groupe de contrôle de patients SC (qui ne consommaient pas de J.G.),l’EIM a augmenté de 9% durant l’année de suivi. Une réduction du stress oxydatif a été démontrée déjà après un mois de consommation de jus de grenade (bien que cette réduction soit plus prononcée en continuant la consommation de J.G.),mais les effets inhibants substantiels de la consommation de J.G. sur l’athérosclérose des carotides ont été démontré seulement après 9-12 mois. Ceci peut indiquer que si les propriétés anti-oxydantes du jus de grenade sont responsables de la régression de la taille de la lésion, alors une longue période de stress oxydatif réduit est nécessaire.Il est possible aussi qu’une inhibition plus profonde du stress oxydatif soit nécessaire pour affecter la taille de la lésion athérosclérotique.De même,il a été démontré récemment que la supplémentation en anti-oxydants vitamine E et vitamine C retardait la progression de l’athérosclérose des artères carotides communes chez les hommes. La consommation d’acide linolénique -3 a été également associée à une moindre prévalence des probabilités de plaques sur les carotides et une épaisseur moindre de l’EIM de segments spécifiques des carotides. Dans une autre étude cependant,la supplémentation en vitamine E a réduit le taux de LDL oxidé circulant,mais n’a pas influencé la progression de l’EIM sur une période de trois ans.Il a été démontré que des niveaux bas dans le plasma de l’antioxydant caroténoide lycophène étaient associés à un EIM en augmentation, et une association positive a été observée entre les anticorps , à l’oxydation du LDL et l’EIM d’ hommes d’âge mûr en bonne santé. De plus,chez les membres de famille avec hyperlipidémie combinée asymptomatique,une corrélation positive a été démontrée entre l’EIM et la susceptibilité à oxydation du LDL. L’hypothèse de la péroxydation lipidique de l’athérosclérose est soutenue par la présence de lipides oxydés dans les lésions d’athérosclérose , par une augmentation de l’état l’oxydatif du LDL provenant des patients atteints d’athérosclérose et par l’anti-athérogénicité d’anti-oxydants puissants contre l’oxydation du LDL.La capacité du J.G. à inhiber l’oxydation du LDL(à la fois l’oxydation basale et celle provoquée par des ions de cuivre) pourrait être liée à la forte puissance des polyphénols majeurs du J.G. (les tanins et les anthocyanines) pour neutraliser les radicaux libres.Il a été démontré que les prodelphinidines présents dans la peau des grenades possédaient également des propriétés antioxydantes.Il a été récemment démontré qu’à cause de la réduction du pH,les antocyanines sont largement transformés et/ou dégradés durant la digestion gastrointestinale.Il a été démontré que l’activité de paraoxonase 1(PON1) a été réduite chez les sujets avec hypercholestérolémie,diabètes,et maladies cardio-vasculaires. Nous avons précédemment démontré une augmentation de l’activité PON 1 dans le sérum chez des volontaires en bonne santé après la consommation de J.G..De même,dans la présente étude,nous avons avons montré que la consommation de J.G. par des patients S.C. a aussi abouti une augmentation de l’activité PON1 (jusqu’à 91% au bout de trois ans.La paraoxonase est désactivée par les lipides oxidés. Des antioxydants puissants comme les flavonoïdes du vin rouge,ou comme le
- 14. L’isoflavone glabridine dérivé de la réglisse,peuvent préserver l’activité paraoxonase durant l’oxydation lipidique. L’augmentation de l’activité paraoxonase du sérum après la consommation de J.G. peut être un effet direct du J.G. ou il peut aussi être le résultat de la réduction des péroxydes lipidiques par les antioxydants du J.G.. Le J.G contient des antioxydants trés puissants,et différemment d’autres nutriments,il n’a pas seulement préservé le PON 1 du sérum du sérum,mais il a aussi augmenté l’activité enzymatique.La présente étude,ainsi que les études précédentes,a démontré clairement que l’augmentation de l’activité PON1 dans le sérum était associée à une réduction de la péroxydation des lipides et du sérum. Dans une autre étude,cependant,aucune association n’a été trouvée entre les activités PON1 du sérum et une augmentation des niveaux de LDL oxydé chez des patients diabétiques.Le PON1 dans le sérum n’est pas l’unique facteur de protection contre la péroxydation des lipides,du fait que le sérum contient d’autres antioxydants( la vitamine E,les caroténoides,la bilirubine, l’acide urique...etc.),et l’absorption des antioxydants du J.G. contribue aussi à la protection contre le stress oxydatif dans sérum et des tissus. Un autre effet anti-athérogénique de la consommation de J.G.qui peut mener à la réduction de l’EIM est son effet de réduction de la pression sanguine,comme montré par la réduction de la pression sanguine systolique au bout de trois années de consommation de J.G.,la plupart de ces effets étant apparus au bout d’un an.Des résultats hypotensifs similaires ont été obtenu récemment en administrant du J.G. à des patients hypertendus. De même que ce sont des dérivés réactifs de l’oxygène et du nitrogène qui contribuent à la contraction dépendante de l’endothelium,les antioxydants peuvent possiblement restaurer la fonction endothéliale,et donc réduire la pression sanguine.La réduction de la pression sanguine systolique par la consommation de J.G. peut alors être associée à la réduction de l’EIM,comme celà a aussi été observé durant la présente étude. Finalement,les découvertes de la réduction du stress oxydatif dans les lésions aux carotides recueillies sur des patients SC qui consommaient du J.G.,par rapport aux lésions recueillies sur des patients SC du groupe de contrôle ayant (qui ne consommaient pas de jus de grenade) pourraient possiblement être liées à l’effet de l’augmentation de l’activité de paraoxonase 1 hydrolitique provoqué par le jus de grenade sur les lésions de lipides oxydés. Ce phénomène montre qu’en plus de la régression de la taille de la lésion à la carotide, la lésion elle-même peut être considérée comme moins athérogénique après la consommation de J.G., puisque que son contenu en cholestérol et en lipides oxydés a diminué et du fait que sa capacité à oxyder le LDL a été sensiblement réduite. Nous concluons donc que,comme montré précédemment sur les souris athérosclérotiques ,pour les humains aussi,la consommation de J.G.(par des patients ayant une sténose aortique) possède des propriétés anti-athérosclétiques,puisqu’ il réduit substantiellement le stress oxydatif du sérum et,en parallèle,réduit l’épaisseur de l’Intima-Média des carotides communes. Bien que l’utilisation d’un petit nombre de patients puisse causer une erreur statistique,l’étude a été effectuée sur une période de trois ans en utilisant les
- 15. tests ANOVA pour les calculs de puissance. Nous avons également comparé chaque patient à lui-même durant tout au long de la période de traitement au J.G.. Des tests cliniques sont maintenant nécessaires pour prouver plus l’effet bénéfique des antioxydants alimentaires en général,et des antioxydants riches en flavonoïdes,en particulier chez des patients avec des maladies cardio-vasculaires. Ces derniers ,comme le jus de grenade et le vin rouge,incluent de puissants destructeurs de radicaux libres. **************************************************************************************** Traduit de l’Anglais par Mademoiselle Sabine FAURE Translated from English by Miss Sabine FAURE Sabine FAURE S.A.(Mlle) 46,Chemin des Falaises 30 400 - VILLENEUVE LES AVIGNON Business ID 384 681 433 000 49 +33(0)6 33 94 10 36 +33 4 88 61 23 78 Info@SabineFaure.com W: www.sabinefaure.com Retrouvez le Document original : “Pomegranate Juice Consumption for 3 years by patients with carotid artery stenosis reduces common carotid intima-thickness,blood pressure and LDL oxidation.” aux Adresses Page Web Suivantes: Version.pdf http://download.journals.elsevierhealth.com/pdfs/journals/0261-5614/PIIS0261 561403002139.pdf Version .html http://www.clinicalnutritionjournal.com/article/S0261-5614%2803%2900213-9/ fulltext ****************************************************************************************