DNA İzolayonu Yöntemleri
Download as PPTX, PDF10 likes27,004 views
DNA İsolation
DNA İzolayonu Yöntemleri
- 1. Resul ÖZBİLGİÇ İstanbul Üniversitesi Moleküler Biyoloji ve Genetik Bölümü
- 2. • Moleküler Biyolojinin en temel tekniklerinden biridir. • Hücre membranını ve duvarını yıkarak DNA’yı ayırma işlemidir. DNA İZOLASYONU
- 3. Neden DNA İzolasyonu? • DNA parmak izi (fingerprint) analizi
- 4. • PCR Neden DNA İzolasyonu?
- 5. • Dizi Analizi, Fragment Analizi Neden DNA İzolasyonu?
- 6. • Klonlama , Genomik DNA Kütüphanesi, RFLP Neden DNA İzolasyonu?
- 7. DNA NEREDE? • DNA hücre içerisinde, -Çekirdek -Mitokondri -Kloroplastlarda bulunur.
- 8. • Bakteri ve Virüslerde DNA DNA NEREDE?
- 9. DNA TİPLERİ • Genomik (Kromozomal) • Organel • Plazmit (Ekstrakromozomal)
- 10. DNA’NIN TEMEL ÖZELLİKLERİ • Adenin, Guanin, Sitozin ve Timin bazlarını içerir. • Dayanıklı bir yapısı vardır. • Negatif yüklüdür. • Suda çözünebilir ama alkolde çözünmez.
- 11. İZOLASYON YÖNTEMİNİN BELİRLENMESİ • DNA’sı izole edilecek hücre tipi • İstenilen DNA miktarı • İstenilen Saflık Derecesi • İzolasyon Sonrası Kullanılacak Yöntemler • Zaman • Ekonomik Durum
- 12. DNA EKSTRAKSİYONU • 1-Lysis • 2-Purifikasyon • 3-Presipitasyon
- 13. 1-Lysis • Tris • EDTA • Sodyum Dodesil Fosfat • Proteinaz K
- 14. PÜRİFİKASYON • Pürifikasyon yöntemleri, 1-Organik Ekstraksiyon 2-Tuzla Çöktürme 3-Sezyum Klorid Yoğunluk Gradiyenti 4-DNA’nın Katı Yüzeye Bağlanması *Anyon Değişim Kromotografisi *Silika Bazlı Kolonlar *Manyetik Ekstraksiyon
- 15. ORGANİK EKSTRAKSİYON Fenolle karıştırılır Üst faz: DNA veya RNA Orta faz: Proteinler Alt faz:Fenol Santrüfüjleme sonunda Fenol;Kloroform;İzoamil Alkol Ekstraksiyonu
- 16. PRESİPİTASYON • Absolut soğuk etanol ile presipitasyon yapılır. • Ve DNA soğuk %70 lik etanol ile yıkanır. • DNA Tris-Edta ile çözdürülür ve saklanır.
- 17. Sezyum Klorid Yoğunluk Gradienti
- 18. DNA’nın Katı Yüzeye Bağlanması 1-Manyetik Ekstraksiyon
- 19. Silika Yöntemi
- 20. Anyon Değişim Kromotografisi depo (tampon) sabit faz (katı porlu matriks) mobil faz (tampon) elüent Protein karışımı
- 21. Sıvı Kültürden DNA Ekstraksiyonu • KAYNATMA PATLATMA YÖNTEMİ
- 23. DNA’NIN MİKTARI VE SAFLIĞI DNA Miktarı=260nmODxSulandırma OranıxKatsayı Katsayı; Çift iplikçikli DNA=50 Tek iplikçikli DNA ve RNA için=40 OD; DNA=1,8 RNA=2
- 24. KAYNAKLAR 1-Dr. Zekiye BAKKALOĞLU DNA İZOLASYON YÖNTEMLERİ RSHMB, SHAM, Moleküler Mikrobiyoloji Araştırma ve Uygulama Laboratuvarı 2-Genetik Mühendisliğine Giriş ,Doç.Dr.Nurettin Yörek 3-DNA Pürifikasyon Yöntemleri,Dr.Ayla Avcıkurt 4-DNA Ekstraksiyonu ve Saflaştırması,Gıda Örneklerinde GDO.M.SOMMA 5- 7.Prof. Dr. Rıza DURMAZ,UYGULAMALI MOLEKÜLER MİKROBİYOLOJİ,İnönü Üniversitesi Tıp Fakültesi,Mikrobiyoloji ve Klinik Mikrobiyoloji Anabilim Dalı,MALATYA
- 25.