ELISPOT(enzyme linked immunosorbent spot) буюу фермент холбоот шингээгч цэгийн арга
1 like1,845 views
ELISPOT(enzyme linked immunosorbent spot) буюу фермент холбоот шингээгч цэгийн арга PPT хэрэгтэй бол btk1092@gmail.com хаягаар холбогдоно уу
ELISPOT(enzyme linked immunosorbent spot) буюу фермент холбоот шингээгч цэгийн арга
- 1. ELISPOT(enzyme linked immunosorbent spot) буюу фермент холбоот шингээгч цэгийн арга
- 2. Энэхүү аргаар дархлааны түвшинг тогтоож болдог бөгөөд ELISA- ийн зарчим дээр тулгуурласан, харьцангуй шинэлэг арга юм. Энэхүү аргад тодорхойлох гэж буй антигений эсрэг өвөрмөц чанар сайтай моноклон эсвэл поликлон эсрэг биеийг поливинулидин флоридын бичил самбарт суулгана. Эсрэгбиеийн өвөрмөц бус чанарыг багасгахын тулд хэрэглэж буй эсрэгбиетэй харилцан үйлчлэлцэхгүй ийлдсээр хориг хийнэ. Хориг хийгдсэн бичил самбарт эсүүдийг янз бүрийн нягтшилтайгаар тавьж дээрээс нь антиген эсвэл митогенийг нэмж өгөөд чийгшилтэй 37 хэмд тодорхой хугацаагаар хадгалдаг. Идэвхижсэн эсээс ялгарсан цитокин эсвэл тодорхойлох гэж буй эсийн шүүрэл нь бичил самбар дээрх эсрэгбиетэй харилцан үйлчлэлцэнэ.
- 3. Үүний дараагаар Тодорхойлох гэж буй шүүрэлтэй харилцан үйлчлэх чадвартай ферменттэй зүйсэн хоёрдогч эсрэгбиеийг нэмдэг. Дараа нь биотиний субстратыг нэмэхэд сонирхож буй цитокин, шүүрэл ялгаруулж буй эсийн байгаа газарт хар-цэнхэр толбо гарсан байх бөгөөд үүнийг хариу урвал эерэг гэж үзнэ. Өөрөөр хэлбэл гарсан цэг болгон нь тухайн цитокин ялгаруулагч нэг ширхэг эсийг харуулдаг.
- 4. Хэрэв цэг илрээгүй сийбол урвалын хариу сөрөг эсвэл тухайн идэвхижүүлсэн эсээс сонирхож буй цитокин ялгараагүй гэсэн үг юм. Илэрсэн толбоны тоо болон ширхэг болгоны хэмжээг гараар эсвэл машинаар тоолдог. Үүний дүнд чанарын болон тоон үр дүнг гаргаж авна. Өөрөөр хэлбэл хэдэн ширхэг эс ямар хэмжээний цитокин ялгаруулж буйг тодорхойлдог. Энэхүү арга нь урьд өмнө нь тодорхойлох боломжгүй байсан цөөн тооны маш өвөрмөц эсүүдийн шүүрлийг нэг эсийн хэмжээнд тоолох боломж олгосноороо давуу талтай. Энэ аргын мэдрэг чанар маш өндөр, маш бага хэмжээтэй ялгарсан шүүрлийг ч илрүүлэх боломжтой бөгөөд энэхүү чадвар нь эсээс дөнгөж ялгарсан шүүрэл ойролцоох эсийн хүлээн авагчтай холбогдох эсвэл задрахаасаа өмнө бичил самбар дээрх эсрэгбиетэй харилцан үйлчлэлцсэний үр дүн юм.
- 6. Флюроспот урвалын арга Энэхүү арга нь ЭЛИСПОТ аргын зарчим дээр тулгуурласан боловч туяарагчтай зүйсэн монокдон эсвэл полуклон эсрэгбиеүүдийг ашигладагаараа ялгаатай. Үүний дүнд нэ урвалд 2 цитокин эсвэл 2 төрлийн эсийн шүүрлийг тодорхойлох боломжтой болдог.
- 7. Саармагжуулах урвал Эсрэгбиеийг ашиглан хорын үйлчлэл болон вирүсийн халдварлалтыг зогсоодог. Энэхүү урвалыг эсийн өсгөвөр эсвэл амьтад дээр хэрэглэж болдог.
- 8. Триатед тимидин 3Н холбох урвалын арга 3Н (TdR Assay) Лимфоцитын өсгөвөрлөх чадварыг хэдий хэмжээний 3Н радио холбоот ДНХ нуклеозидыг эс өөртөө холбон авч байгаагаар тодорхойлдог. Үүний тулд эсийг 4-24 цагийн туршид радио холбоот нукпеозидтой пульс инкубац хийж дараагаар нь антиген эсвэл митогентэй мононуклеар эсийн өсгөвөрт 3-4 эсвэл 5-10 өдөр байлгана. Антигентай өсгөвөрлөсөн Т эсүүдийн маш цөөн нь хариу урвал үзүүлэх бөгөөд үүний мэдрэг чанарыг сайжруулахын тулд эсийг дахин 5-10 өдөр өсгөвөрлөх шаардлагатай. Харин митоген нь эсүүдийг маш сайн идэвхижүүлдэг учир урвал тавьсанаас 3-4 хоногийн дараа хариу гарна. Митогенүүд нь аллоантиген юмуу антигенийг бодвол хамгийн хүчирхэг өдөөгч бөгөөд ихэнх лимфоцитийг идэвхижүүлэх чадвартай байдаг.