ANTIBIOGRAMA.pptx
- 2. • Otras tecnicas de identificacion bacteriana • 7.1. Antibiograma • 7.1.1. Macrodilucion • 7.1.1.1. Tecnica, aplicacion e interpretacion • 7.1.2. Microdilucion • 7.1.2.1. Tecnica, aplicacion e interpretacionL • -TECNICA EN AGAR
- 3. • Sólo sobremicroorganismosasociadosainfecciones cuandosusensibilidad nose puedapredecir. • Pertenezca aunaespecie capazdeexhibirresistencia a losantibióticos. • Microorganismosqueposeansensibilidadantibiótica predecibleserecomiendaaplicacióndeterapia empíricaadecuada. INDICACIONES
- 4. • Sedebepartirdeuncultivoprimariocolonias aisladasdecadatipodemicroorganismoexcepto paraemergenciassedebeinformarcomo resultadopreliminarysedeberepetirutilizando lametodologíaestandarizada. • No realizarenfloranormalo polimicrobianalos microorganismosaisladosprobablemente tenganpocarelaciónconelprocesoinfeccioso. GENERALIDADES Errores en tratamiento
- 5. ANTIBIOGRAMA
- 6. Tiras impregnadas de antibiótico en concentraciones decrecientes Halos con discos E-TEST DIFUSIÓN EN AGAR/DISCO (KIRBY BAUER) TÉCNICA DE DIFUSIÓN
- 7. Esempleadoparadeterminarlasensibilidaddeun agentemicrobianofrenteaunantibiótico.Mediante discosimpregnadosdeantibióticoenconcentracionesestablecidasycoloniasaisladas. DIFUSIÓN EN AGAR/DISCO (KIRBY BAUER)
- 8. MATERIALES
- 9. • Selección de colonias apropiadas se recomienda de 3–5 colonias en cultivo aislado y de menos de 24 hrs. • En ambos métodos, la turbidez de la suspensión debe ser estandarizada al 0,5 de McFarland (aproximadamente 1,5 X 10 8 CFU/ml) • Inóculo debe utilizarse dentro de los 15 minutos siguientes PREPARACIÓN DEL INÓCULO Suspensión directa de colonias Fase logarítmica de crecimiento
- 10. • Las colonias no deben sobrepasar las 18–24 horas de aislamiento • Suspenda las colonias en solución salina o caldo (eje. Mueller- Hinton o soya tríptica) • Ajuste el inóculo a una turbidez equivalente al estándar 0,5 de McFarland. • INDICACIÓNES : • • Todos los estafilococos • Bacterias fastidiosas que tienen crecimiento impredecible en caldo: eje., estreptococos METODO DE SUSPENSIÓN DIRECTA
- 11. • Organismosquecrecenrápidamenteexcepto estafilococos • Se inoculalascoloniasencaldo,incubea 35ºC paralograruncrecimientoenfase logarítmicaaocurredespuésde2–8horasde incubación. • Ajuste laturbidezparaqueseaigualal estándar 0,5deMcFarland MÉTODO DE FASE LOGARÍTMICA DE CRECIMIENTO
- 12. A¿Quéharíasilasuspensióndeorganismosesdemasiadoturbia? B ¿Quéharíasilasuspensiónesdemasiadoclaraparalasuspensióndirectadecolonias? C¿Quéharíasilasuspensiónesdemasiadoclaraparaelmétododefaselogarítmica? A.Añadamáscaldoosoluciónsalinaparaigualarla turbideza0,5delestándar deMcFarland. B. Tome máscoloniasysuspéndalasenel caldo. C. Reincube lasuspensión.
- 13. • Retire el contenedor de discos del congelador, atemperar (humedad alterar concentración) • Atemperar Agar MH y checar profundidad (adecuada 4mm) • Agite la suspensión del organismo ,sumerja un hisopo de algodón estéril. Remueva el exceso de líquido del hisopo presionándolo contra la pared del tubo. • Empezando en la parte superior de la placa MHA inocule la superficie con el hisopo. Cubra toda la placa frotando de ida y vuelta de un borde al otro. Rote la placa aproximadamente 60º y repita 3 veces , distribuyendo homogéneamente. INOCULACIÓN DE LA PLACA 60°-40°
- 14. • Incube la placa dentro de los 15 minutos siguientes después de haber estandarizado el inóculo. • Coloque los discos con dispensador de multicanal , hasta 10 en placa de 150mm o 5 en una de 100mm • Presione cada disco firmemente para asegurar el contacto completo con la superficie de agar COLOCACIÓN DE ANTIMICROBIANOS
- 15. • Nousediscosdespués desufechade caducidad. • UseproductosaprobadosporlaFDA. • Usediscosconel contenidoespecificadoenlos estándares deNCCLS. • Noreubiqueundiscounavezqueéste ha tocadolasuperficiedelagar. Puntos que hay que recordar sobre los discos de antimicrobianos
- 16. • Invierta las placas e incúbelas . • Para las bacterias no fastidiosas, incube (en aire ambiente) a 35°C por 16–18 horas. • Para la prueba de difusión por disco de bacterias fastidiosas, use las condiciones de incubación recomendadas por el NCCLS, como se muestra en el siguiente cuadro Cómo Incubar la Placa
- 17. • Verificar que el crecimiento sea uniforme y confluente de tal modo que pueda identificar zonas sin crecimiento bacteriano. INTERPRETACIÓN
- 18. • Medir las zonas de inhibición desde la parte posterior de la placa usando luz reflejada • Sostenga la placa unos pocos centímetros sobre una superficie de color negro que no refleje la luz. • Mida redondeando al milímetro más cercano con una regla o un calibrador. • La luz reflejada es usada para enterobacterias, otros bacilos gram negativos, estafilococos y enterococos (excepto para oxacilina y vancomicina). • Para Agar sangre retire la tapa y mida las zonas desde la parte superior de la placa. • Use luz transmitida en: •Estafilococos con oxacilina •Enterococos con vancomicina
- 19. • Doble zona: Mida la zona más interna. • Colonias dentro de la zona: Esto puede deberse ya sea a un cultivo mixto o una subpoblación resistente de la bacteria analizada Zonas inusuales. Mida el punto en el cual se puede ver una demarcación obvia entre crecimiento y ausencia de crecimiento. Evite esforzarse para ver las colonias más diminutas.
- 21. • Mida la zona que es obvia. Ignore el brote aún si este cubre la zona de inhibición. Proteus mirabilis
- 22. • Tambiénsulfonamidas/trimetoprimasolo • Podríanserdifíciles deleerporqueesteagentepodríano inhibirelcrecimientodelasbacteriashastaquelasbacterias hayanpasadoporvariasgeneraciones decrecimiento.Se podríaobservarunligerocrecimientoopacodentrodelazona. • Midalazonaenelpunto enquehayaunareducción del80%enelcrecimiento. Trimetoprima-Sulfamethoxazole (SXT)
- 23. • Aproximadamente de 24-48hrs Reporte
- 24. PRUEBAS DE SENSIBILIDAD MICROBIANA POR DILUCIÓN • MACRODILUCION • MICRODILUCION
- 25. TÉCNICAS DE DILUCIÓN DILUCION EN CALDO MEDIO LIQUIDO DILUCIÓN EN AGAR MEDIO SOLIDO MEDIO MUELLER HINTON CMI; Concentración mínima inhibitoria , es la mínima cantidad de antibiótico capaz de inhibir el crecimiento bacteriano en condiciones estandarizadas
- 26. Dilución en caldo MACRODILUCIONES Volumen final 2ml MIC (CONCENTRACION MINIMA MICRODILUCIONES Volumen final 100µcl Dilución en caldo
- 27. • GOLD STANDART para microorganismos no caprichosos • Mide cuantitativamente la actividad "in vitro" de un antimicrobiano frente a un cultivo bacteriano, a los cuales se les agrega el antibiótico en distintas concentraciones • se inoculan cada uno de los tubos o placas con una suspensión estandarizada del microorganismo en estudio. después de incubar “overnight” a 35 ± 2ºC y se determina la concentración inhibitoria mínima • Diseñadas para bacterias aeróbicas o facultativas de fácil desarrollo después de incubación overnight en medio M. Hinton sin suplementos GENERALIDADES
- 28. • Sólo sobremicroorganismosasociadosainfeccionescuando su sensibilidadnosepuedapredecirapartirdesuidentificación • OrientaalclínicosobrequeCONCENTRACIÓNDEANTIBIÓTICOnecesita alcanzarenelsitiodeinfecciónparainhibirelmicroorganismo infectante. • LaCIM,sinembargo,norepresentaunvalorabsoluto. • Laspruebasdesensibilidadtambiénsonimportantesenestudiosde epidemiogíadelaresistenciaynuevosagentesantimicrobianos INDICACIONES
- 31. Grupo Características A Seconsideranapropiados para ensayareinformarenlaspruebasderutina B Deimportancia para infeccioneshospitalarias, sedeberánincluirenelpanelprimario, enresistenciasalgrupo A, cuandoelfocode infecciónlojustifique, eninfeccionespolimicrobianas.Omúltiplessitios delorganismo ,alergia, intolerancia. C Agentesantimicrobianos alternativos osuplementarios, eninstitucionesdondeseaíslencepas endémicas/epidémicasresistentesavarias delasdrogasprimarias, inusuales. U Suuso selimitaalasinfeccionesdeltracto urinario O Antibióticos queposeenindicaciónclínicapara ungrupo deorganismos determinado,peroengeneralnoson candidatos para laspruebasderutina Inv Agentesqueestánbajo investigación yaúnnohansido aprobados porlaFDA. ESPECIAL Cadalaboratorio deberíaelegirlosagenteslistados Elección de antibiótico: CLASIFICACIÓN
- 32. • Seleccióndelosagentesantimicrobianosapropiadospara lapruebadedifusión,esunadecisióndecadalaboratorio clínico • EndocumentoM100, enumeranlosagentesdeeficacia clínicaprobadaparaeltratamientodeinfecciones producidaspordistintostiposdemicroorganismos. (resultadosaceptablesenlaspruebasinvitro) ELECCIÓN DEL ANTIBIOTICO
- 35. • Recomendaciones de los antibióticos a ensayar e informar frente a cada grupo de microorganismos considerados apropiados en la actualidad • Se podrán incluir o retirar antibióticos de esta lista de drogas a ensayar e informar de acuerdo a necesidades particulares. • Todos los antibióticos deberán ser referidos por su nombre genérico
- 37. • Metodología más común utiliza diluciones seriadas al medio • Existen otras metodologías aunque pueden ser igualmente útiles en la clínica. a veces son más difíciles de controlar • Redondear el valor a la próxima superior dilución al medio del esquema normal (por Ej. Una CIM de 6 µg/ml se debe redondear a 8 µg/ml y luego interpretar). METODOLOGIA
- 38. Demostró ser el mejor ; • Muestra buena reproducibilidad de los resultados de sensibilidad entre distintos lotes. • Tiene baja cantidad de inhibidores para sulfonamidas, trimetoprima y tetraciclinas. • Permite buen crecimiento de la mayoría de los patógenos. • Se tiene gran cantidad de datos y experiencia sobre pruebas de sensibilidad realizadas con este medio. Agar Mueller Hinton Los suplementos requeridos por estos microorganismos se describen mas adelante en este documento : • Agar MH con 5 % de sangre de carnero fresca. • Agar MH con 5 % de sangre de carnero no fresca (> 2 semanas) para H. pylori • HTM: Haemophilus Test Medium. • Agar GC + 1 % de suplemento de crecimiento
- 39. • Ejemplo Meropenem trihidratado • Pureza 99% • Contenido de agua 12.1% • Fracción activa 100% • Potencia calculada de acuerdo a los datos obtenidos • Potencia =(Pureza)(Fracción activa) (1-conenido de agua) • Potencia (998)(1.0)(1-0.121) • Potencia 877 Preparación del Stock
- 40. REPLICADORES
- 41. • Macrodilucion1ml • 2tubos extra1control(solocaldo)yotro controldeesterilidad • Inoculoseajustaraa0.5delaescaladeMcFarlandenunnefelómetro oespectrofotómetro,aisladono microbianonomayora24hrs contiene,paralamayoríadelasespecies,aproximadamente1-2108 UFC/ml. • Diluido1:50concargade1x10ala6UFC/mL • 1mililitrodeesteacadatubo conlasdilucionescorrespondientes yelcontrol sininoculo MACRODILUCION
- 43. • Estemétodosedenominamicrodiluciónporqueinvolucrapequeños volúmenesdecaldo • SEREALIZAAJUSTEDEINOCULO • DILUCION1:20 • CARGABACTERIANA5X10ALA6UFC/ML+10MICROLITROSDEINOCULO DILUIDOdebehacersedentrodelos15minutosdepreparadalamisma • Lapruebaserealizaenpolicubetasdeplásticoestériles defondocónicoo redondo,cadapocillodebecontener0,1mldecaldo MICRODILUCIÓN
- 44. • Las concentraciones a ensayar para un determinado antibiótico, en general, deberían determinarse de acuerdo a los puntos de corte que se enumeran en la Tabla M-100 • pero el número de concentraciones deberá ser elegido por quien realiza la prueba Concentraciones de antibiótico En algunos casos especiales puede ser necesario ensayar concentraciones inusuales (por Ej. para evaluar el efecto sinérgico entre aminoglucósidos y penicilinas o glicopéptidos frente a enterococo puede ser necesario ensayar altas concentraciones de gentamicina y estreptomicina
- 45. Cantidad de polvo antimicrobiano
- 46. • Mayoríadelosmicroorganismosesde16a20hs,tantoparalatécnicade macrocomodemicrodiluciónylatemperaturaes35±2°C • FASIDIOSASVERCONSIDERACIONDESDECLSI • Eltiempodeincubaciónpuedediferir paramicroorganismosfastidiosos ,sedebeseguirlasinstruccionesespecíficas • CERRARPLACASCONFILMPARAEVITARSECADO INCUBACION Y LECTURA
- 47. • Valor de CIM o el halo de inhibición utilizados para indicar sensible, intermedio y resistente • La CIM real puede estar entre la menor concentración de antibiótico que inhibe al microorganismo y la siguiente donde se observa desarrollo del mismo. Si por ejemplo, fueran probadas diluciones al medio y se determina una CIM de 16 µg/ml, el verdadero valor podría estar entre 16 y 8 µg/ml INTERPRETACIÓN
- 48. • A pesar de realizar las pruebas de dilución bajo condiciones cuidadosamente controladas, no siempre se obtienen los mismos resultados • Reproducibilidad; +/- 1 • Redondear el valor a la dilución superior PROXIMA (por Ej. Una CIM de 6 µg/ml se debe redondear a 8 µg/ml y luego interpretar). • El valor debe ser acompañado por su correspondiente interpretación (por Ej. SENSIBLE, INTERMEDIO o RESISTENTE
- 49. • LECTURAVISUAL ENDONDENOSE OBSERVETURBIDEZ SETOMARA COMOMINIMAINHIBITORIA • Sepuedeutilizarundispositivolectorquepuedadiscernirentredesarrolloyausenciadelmismo • Debecompararsecadatuboconcontroldecrecimientooturbidezneta. • CuandoenunapruebademicrodiluciónseobtieneunPOCILLOSALTEADO, sedebeleerlaCIMMÁS ALTA.Siaparecieramásdeunpocillosalteadoconalgunadroga,estaNOSE DEBERÍAINFORMAR • Parabacilosgram(-) lasCIMsobtenidasporelmicrométodotiendenaserlasmismasóunadilución menoralasobtenidasporelmacrométodo. LECTURA
- 50. Interpretación Control de crecimiento Control de esterilidad
- 51. PARA DETERMINAR SI ES UN AISLADO SENSIBLE O RESISTENTE DEPENDE DE : • La guía internacional empleada (CLSI o EUCAST) • El grupo microbiano que se pruebe • El antibiótico usado Por ejemplo , si se analiza resistencia a ciprofloxacino en Salmonella ; según CLSI se observa: Se considera : SENSIBLE; si mi CIM fue menor a 0.6 INTERMEDIO; CIM 0.12-0.5 RESISTENTE; CIM Mayor a 1
- 53. • .Losresultadosobtenidosconunadrogaenparticularpertenecienteaunafamiliade antibióticossiguelaREGLAJERÁRQUICADEACTIVIDAD(Ej.:unacefalosporinadetercera generaciónesmásactivaqueunadeprimeradesegunda frenteaenterobacterias). • Frentearesultadosinusualessedebeverificar: a) Resultados previosdelpaciente(Ej.:tuvoelpacienteunaislamientoanteriorconelmismo perfilinusualderesistencia? b) Resultados previosdelcontroldecalidad(Hayunatendenciasimilarconelcontrolde calidadreciente?). c) Problemasconlosinsumos,procesosoequipos PUNTOS A CONSIDERAR
- 54. • H. influenzae yH.parainfluenzae, usandoHTM(solo diluciónencaldo); • N. gonorrhoeae, usandoGCagarbase medo; • Streptococci, usandoCAMHB suplementado consangrelisadade caballo(LHB); • N. meningitidis,usandoCAMHB suplementado consangrelisadade caballo (LHB)oMHAconsangreovina. MICROORGANISMOS CON EXIGENCIAS NUTRICIONALES ESPECIALES
- 55. EN AGAR VIABILIDAD (AGARSINANTIBIÓTICO)Y ALASDISTINTASCONCENTRACIONES DELANTIBIÓTICOCOMENZANDOPOR LADEMENORCONCENTRACIÓN.EL AGENTEANTIMICROBIANOES INCORPORADOENELMEDIOAGAR MUELLER-HINTON CONTROLDELOSINÓCULOSPUEDEN SERAPLICADOSRÁPIDAY SIMULTÁNEAMENTEALASSUPERFI CIESDEAGARUTILIZANDOUN APARATODEREPLICACIÓNDEL INÓCULO(REPLICADORES TRANSFIERENDE32A36INÓCULOSA CADAPLACA). LUEGOSEDEBENINCUBAR INVERTIDASA35±2ºCPOR ELTÉRMINO16-20HS. REGISTRARÁCOMOELVALORDELA MENORDILUCIÓNQUEINHIBE COMPLETAMENTEELDESARROLLO BACTERIANO. LACIMSE SUSDESVENTAJASINCLUYENELTRABAJOREQUERIDO PARAPREPARARLASPLACASDEDILUCIÓNENAGARYSU RELATIVAMENTECORTOTIEMPODEALMACENAMIENTO. GENERALMENTELASPRUEBASDEDILUCIÓNENAGARNOSE REALIZANENLABORATORIOSCLÍNICOSDERUTINAPEROPUEDEN SERIDEALESPARALABORATORIOSREGIONALESDEREFERENCIAO LABORATORIOSDEINVESTIGACIÓNQUEDEBENANALIZARUN GRAN NÚMERODECEPAS.
- 56. GRACIAS
Notas del editor
- #11: Densitmetro
- #29: PAG 956 Streptococcus pyogenes que ha mantenido invariable su sensibilidad a penicilina
- #35: la lista básica de drogas a ensayar en un laboratorio clínico se indican las drogas según el orden de prioridad Cada casilla de la tabla contiene drogas con actividad comparable Sólo es necesario incluir una de ellas en el antibiograma porque, en general, las interpretaciones son las mismas y sus eficacias clínicas comparables Para designar la letra “o”, se probaron al menos 100 cepas resistentes a los antibióticos en consideración y se obtuvo un resultado de “resistencia” por lo menos para el 95 %