Brandan tutorial
- 1. Enrique Brandan Departmento de Biología Celular y Molecular Facultad de Ciencias Biológicas P. Universidad Católica de Chile Solución a las Distrofias Musculares: ¿Fantasía o Realidad?
- 2. más de 650 músculos Frontal Mastoide Platina Deltoides Pectoral Biceps Serratus Recto abdominal Abdominal Pelvis Abductor Cuadriceps Vasto lateral Sartorio Vasto medial Tibial anterior Gastronemio Soleo Extensor Sistema Muscular
- 4. Hueso Perimisio Vaso sanguíneo Fibra Muscular Fascia Endomisio Epimisio Tendón
- 6. Complejo Distroglicán Extracelular Citoplasma Membrana Plasmática Distrofina Laminina Matriz Extracelular actina
- 7. Paciente original de Duchenne LA MÁS COMÚN DENTRO DE LAS DISTROFIAS MUSCULARES, SIENDO UNA MIOPATÍA, DE ORIGEN GENÉTICO, HEREDITARIA Y AFECTANDO A TODAS LAS RAZAS. INCIDENCIA 1 EN 3500 NIÑOS. FATAL EN LA SEGUNDA A TERCERA DECADA DE EDAD. CICLOS REPETIDOS DE NECROSIS Y REGENERACION, PROGRESIVA DEBILADAD MUSCULAR Y FIBROSIS. DISTROFIA MUSCULAR DE DUCHENNE CONTROL 2años 5 años 10 años DMD
- 11. Vientre hacia afuera; musculatura abdominal débil Hombros y brazos hacia atrás al caminar Lomo hundido Músculos traseros débiles Rodillas doblan hacia atrás Musculatura inferior gruesa (grasa y débil) Contractura talón Musculatura débil frente piernas contractura punta de pies Caminar torpe Mal equilibrio caídas a menudo Muslos delgados y débiles
- 15. Laminina-2 Matriz Extracelular sarcolema distrofina actina -distroglican a-distroglican distrofina
- 16. distrofina núcleos distroglicán fibronectina laminina
- 17. FORMACION Y REGENERACION DEL MUSCULO ESQUELETICO músculo esquelético fibrosis Regeneración muscular diferenciación (miogenina) Activación precursores Músculo esquelético (células satélite) daño degeneración de la fibra liberación de señales intracelulares inflamación
- 18. C2C12 myoblats (satellite cells derived) Miogenina Mioblastos Miotubos Miosina Fibra muscular aislada
- 19. Modelo Experimental de Regeneración Muscular Daño Tóxico Inyección de BaCl 2 Tibialis Anterior (TA), C57BL/6 wild-type control 3 días 5 días 10 días
- 20. Control
- 21. 3 días
- 22. 5 días
- 23. 10 días
- 24. Distrofia muscular de cintura Distrofia muscular de nacimiento Miopatía congénita Miopatía de Miyoshi Mutaciones o Ausencia de Proteínas Específicas del Músculo Esquelético Producen Diferentes Distrofias Distrofia Muscular Duchenne/Becker
- 25. Modelo Animal de Distrofia Muscular de Duchenne ( mdx ) ECM Ratón mdx Laminina sarcolema distrofina actina -distroglican -distroglican Normal mdx distrofina mdx 2 s 8 s normal 16 s
- 26. diafragma 12 s
- 27. diafragma mdx 12 s
- 28. TERAPIAS MOLECULARES, CELULARES Y FARMACOLOGICAS PARA LA DISTROFIAS MUSCULARES Terapia reemplazo de genes células madres células satélites células derivadas de médula ósea (SP) entrega de mini-genes contenidos en AV Lentivirus células genéticamente modificadas, permeables a la circulación Manipulación ADN/ARN oligos anti-sense salto de exones Reactivos farmacológicos drogas que inducen den de utrofina entrega viral de factores de crecimiento IGF-1 miostatina reactivos anti-inflamatorios inhibidores de proteasas Terapia reemplazo de genes células madres células satélites (SP células derivadas de médula ósea (SP) entrega de mini-genes contenidos en AV Lentivirus células genéticamente modificadas permeables a la circulación Manipulación ADN/ARN oligos anti-sense salto de exones Reactivos farmacológicos drogas que inducen den de utrofina entrega viral de factores de crecimiento IGF-1 miostatina reactivos anti-inflamatorios inhibidores de proteasas
- 29. Células aisladas de médula ósea de un ratón transgénico LacZ ( células azul ) bajo el control de un promotor músculo específico Músculos inducidos a regenerar y evaluados por células azules a 1, 2 y 3 semanas
- 31. Células aisladas de médula ósea de un ratón transgénico LacZ ( células azul ) bajo el control de un promotor músculo específico Músculos inducidos a regenerar y evaluados por células azules a 1, 2 y 3 semanas
- 33. Mioblastos LacZ transplantados a primordios de las alas de un pollo, van a territorio muscular mioblastos miosina mioblastos + miosina
- 34. Distrofia muscular de cintura Distrofia muscular de nacimiento Miopatía congénita Miopatía de Miyoshi Distrofia Muscular Duchenne/Becker Mutaciones o Ausencia de Proteínas Específicas del Músculo Esquelético Producen Diferentes Distrofias
- 35. Ratón transgénico que expresa una agrina modificada que reemplaza a laminina para la cura de la distrofia muscular congénita Laminina normal une -distroglican y tiene sitio de unión Por la proteína agrina En la distrofia muscular de nacimiento (congénita) se expresa una laminina con poca afinidad por -distroglican pero si por agrina Agrina se modifico para que una además a -distroglican Complejo Distroglicán Extracelular Citoplasma Membrana Plasmática Distrofina Laminina Matriz Extracelular actina
- 36. Agrina se modifico para que una además a -distroglican Ratón transgénico que expresa una agrina modificada que reemplaza a laminina para la cura de la distrofia muscular congénita Sitio de unión por -distroglicán Sitio de unión a laminina Agrina
- 39. Distrofia muscular de cintura Distrofia muscular de nacimiento Miopatía congénita Miopatía de Miyoshi Distrofia Muscular Duchenne/Becker Mutaciones o Ausencia de Proteínas Específicas del Músculo Esquelético Producen Diferentes Distrofias
- 40. WT mdx
- 41. Distrofina; 427.000 daltons (3685 aa) Difícil poner en un virus Becker distrofia mas suave que Duchenne Contrucción de microdistrofina similar a Becker Introducirla en un virus mdx wt mdx mdx
- 42. Mutaciones o Ausencia de Proteínas Específicas del Músculo Esquelético Producen Diferentes Distrofias Distrofia muscular de cintura Distrofia muscular de nacimiento Miopatía congénita Miopatía de Miyoshi Distrofia Muscular Duchenne/Becker
- 43. Terapia utilizando mensiaglobastos genéticamente modificados 1 3 5 Se evalúa el músculo y la capacidad de generar fuerza 2 4 6 Virus que contiene micro-distrofina infecta mensiangoblastos del perro distrófico para su amplificación gen micro-distrofina Mensangioblastos se cultivan Vaso sanguíneo (intrasistémico) micro-distrofina se introduce a un virus atenuado
- 47. … .el futuro……… Problemas: Fibrosis Inmunocompatibilidad Demasiados territorios Inflamación Solución: Continuar la investigación básica que genere el conocimiento necesario para realizar aproximaciones experimentales que impliquen estrategias combinadas, evaluando el potencial impacto beneficioso de éstas en ensayos preclínicos … .el futuro……… Problemas: Fibrosis Inmunocompatibilidad Demasiados territorios Inflamación