Caracteristicas Genero Brucella
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Este documento resume la historia y características básicas del género Brucella. Hipócrates describió algo similar a la brucelosis en el 400 a.C. Bruce identificó la primera especie, Micrococcus melitensis, en 1884. Existen varias especies que afectan diferentes animales y el ser humano. Las técnicas de diagnóstico incluyen aislamiento, pruebas bioquímicas, serología y métodos moleculares como PCR.
Caracteristicas Genero Brucella
- 3. ASPECTOS BASICOS DEL GENERO Brucella M.V. MSc. Datty Rosales-Zambrano Octubre 2014 J-40013861-2
- 4. • Hipócrates describe en su tratado Epidemias algo similar a la Brucelosis (400 A.C). • El apóstol San Pablo se infecto n su naufragio en la Isla de Malta : “Aguijón en la carne”
- 5. BRUCELOSIS EN EL MUNDO • Marston, 1859. • Bruce, 1884. Micrococcus melitensis. • Dr. Bernard Bang. Bacillus abortus,1895. • Comisión de Fiebre Mediterránea, 1905. • B. suis .Traum. 1914. • B. ovis .1953. Buddles y Boyes. • B. canis. Carmichael (Nicoletti,2002). DATTY R-Z.
- 7. Brucelosis en Venezuela • José María Vargas. 1838. Fiebres Malignas. • Mosquera y Risquez. Fiebre ondulante.1898 y 1903. • Kubes. 1939. Observaciones sobre la Brucelosis de los animales domésticos en Venezuela. Brucella abortus. Encontrados Edo. Zulia. Cepa 19 y Reacción de Huddleson. • Gallo y Vogelsang. 1939. Relaciones entre la infección brucelar de los animales y de la Fiebre Ondulante en el hombre. Campaña contra la Brucelosis. • Landaeta y Ortiz,1940. Primer caso identificado de Brucelosis Humana en el País. • 1941. Inicia producción cepa 19 en • Risquez, Vogelsang y Gallo. 1943-1946. Estado actual de la Brucelosis en Venezuela. ALTO PORCENTAJE DE GANADO BOVINO AGLUTINANTE A BANG. • Briceño Iragorry. 1949. Breve nota sobre Brucella suis. • De Lima, Santader,Pons y col. 1956. Consideraciones sobre Brucelosis Bovina y Humana en el estado Zulia. M.V.MSc.Datty Rosales- Zambrano. Vet.Adv.Technologies
- 8. Brucelosis en Venezuela • B. abortus es la especie mas importante (Vargas, 2002). • B. suis bv.1 ha sido descrita en capibara (Hidrochaeris hidorchaeris ) y pecari (Tayassus tajacu).(Lord et al.,1983 and 1991). • Recientemente B. suis en vacuno B.taurus x B. indicus (Rosales-Zambrano et al., 2014) • B. melitensis, no aislada en el país.
- 9. Taxonomía y relaciones filogenéticas de Brucella sp. • Phylum: Proteobacteria (16S r) – Clase: Alphaproteobacteria* • Orden: Rhizobiales – Familia: Brucellaceae » Género: Brucella Ochrobactrum sp » * Rickettsias, Bartonella (Parásitos IC) » *Agrobacterium,Rhizobium (Fitopatógenos) DATTY R-Z.
- 10. DATTY R-Z.
- 11. DATTY R-Z. B. papionis nov. sp 2014 B. inopinata nov. sp 2010 Brucelas atípicas DRZ
- 12. DATTY R-Z. Guzman-Berri at al., 2012 Filogenia del Genero Brucella
- 13. Corbel,2006
- 14. Especies Zoonóticas • Especies terrestres: • B. melitensis • B. abortus • B. suis • B. canis • Especies marinas: • B. delphini • B. pinnipedialis • B. ceti
- 15. DATTY R-Z.
- 16. Características Microbiológicas del Genero Brucella • Cocobacilos, GRAM negativas, inmóviles, no esporulados, aeróbicos y carboxifílicos, en cadenas o pares (Contreras,1992; López y col,1991 y García,1999). • Intracelular facultativa (Schuring,1999). • Colonias pequeñas, húmedas y brillantes, pueden se L,R ,o M. • Requerimientos complejos: CO2, medios ricos, temp. 37 C°, mínimo 5 días incubación. • Afecta animales y hombre (López y col,1991). DATTY R-Z.
- 17. DATTY R-Z.
- 18. Características estructurales y antigénicas de B. abortus. • Membrana externa rica en: FL, LPS,y proteínas, FDC y lípidos de ornitina con AG largos (Joklik y col,1994). • Algo permeable a agentes hidrófobos. • Similar a las enterobacterias (López y col,1991). DATTY R-Z. Tomado de Castro.2005.
- 19. Tomado de Castro.2005. Estructura de la envoltura celular celular de Brucella DATTY R-Z.
- 21. Factores de Virulencia • Una vez ingerida, o internalizada las bacterias, el sistema de defensa • insta la fusión del fagosoma con los lisosomas para formar fagolisosomas, los orgánulos donde se localizan la mayoría de los agentes tóxicos bactericidas. • Las Brucellas pueden permanecer en el fagosoma intacto y bloquear la fusión posterior con el lisosoma. Ello le protege de la acción de los péptidos catiónicos y enzimas líticas presentes en los gránulos lisosómicos. DATTY R-Z.
- 22. DATTY R-Z
- 23. Factores de Virulencia • Se cree que la cadena O (un polisacárido) y quizá lípidos de ornitina interactuarían directamente con la membrana del fagosoma impidiendo la fusión. • Se sabe que la superóxido dismutasa y la catalasa, enzimas presentes en Brucella, se integran en el mecanismo de defensa frente a la toxicidad oxidativa. DATTY R-Z.
- 24. Ingreso de Brucella al macrófago. DATTY R-Z
- 25. • Las Brucellas no poseen los siguientes factores de virulencia clásicos: o EXOTOXINAS o VARIACION ANTIGENICA o ACTIVIDAD ENDOTOXICA DE LA LPS ES DE MENOR ACTIVIDAD QUE LA DE ENTEROBACTERIAS o PLASMIDOS O FAGOS QUE PUEDAN TRANSFERIR GENES DE VIRULENCIA o PILIS O FIMBRIAS PARA ADHERIR SUSTRATOS DATTY R-Z.
- 26. DATTY R-Z.
- 27. TECNICAS DIAGNOSTICAS APLICADAS A BRUCELOSIS ANIMAL. DATTY R-Z.
- 28. TECNICAS DIAGNOSTICAS APLICADAS A BRUCELOSIS ANIMAL. • DIAGNOSTICO DIRECTO: – Aislamiento y cultivo – Diagnóstico molecular DATTY R-Z.
- 29. Aislamiento en TSA (colonias pequeñas y translúcidas) Urea: producción de ureasa TSI: triple azúcar hierro, Neg. CIT:citrato de Simmons, Neg. SIM: medio de SIM ( indol y movilidad), Neg. todas H2S: producción de H2S en tiras de papel filtro con acetato de plomo, Variable DATTY R-Z.
- 30. FASE DE LA CEPA La fase en la que se encuentran las Colonias se determina por: •Aglutinacion con suero anti-brucela y acriflavina antes de proceder a identificarla DATTY R-Z.
- 31. Pruebas bioquímicas de Brucella UREA TSI CIT SIM H2S DATTY R-Z.
- 32. Producción de H2S DATTY R-Z.
- 33. Prueba de la ureasa DATTY R-Z.
- 34. Tabla diferenciación Brucella (López, 1989) DATTY R-Z. Especie s Uso CO2 Prod H2S Catalasa Oxidasa Tionina Fucsina Aglutinación A M R Ac B. abortus 1 2 3 4 5 6 7 8 9 +/- + +/- +/- - - - + +/- + + + + - +/- +/- - + + + + + + + + + + + + + + + + + + + - - + - + + + + + + - + + + + + + + + + + - - + + - - - - - + + - + + + - - - - - - - - - - - - - - - - - - B. suis 1 2 3 4 - - - - + +/- - - + + + + + + + + + + + + - - - - + + + + - - - + - - - - - - - - B. melitensis 1 2 3 - - - - - - + + + + + + + + + + + + - + + + - + - - - - - - B. ovis + + + + + + - - + + B.canis - - + + + - - - + + B. neotomae - - + + - - - - - -
- 35. DATTY R-Z. Audic et al.,2011
- 36. TABLA DE FAGOTIPIFICACION EN Brucella DATTY R-Z. Corbel, 1989
- 37. Bacteriofagos de Brucella Placas líticas Cultivo de Brucella sembrada con hisopo DATTY R-Z.
- 38. Crecimiento en tionina 1:50,000 DATTY R-Z.
- 39. Crecimiento en fucsina 1:50,000 DATTY R-Z.
- 40. • http://www.dnalc.org/view/15924-Making- many-copies-of-DNA.html TECNICAS MOLECULARES EN DX.BRUCELOSIS Kary Mullis. Cetus Co. Calfornia. USA.1986.
- 41. USOS • Taxonomía – Aislados presuntivos – Variabilidad fisiológica (Cambios) – Hospederos • Identificación y Diagnostico Confirmatorio – Alimentos – Muestras clínicas – Confirmación definitiva DATTY R-Z.
- 42. OMIC`S DATTY R-Z. Genómica Transcriptómica Proteómica Hospedador Especifico Filogenia y Evolución Virulencia y Patogenicidad
- 43. • Octubre 2011: 39 genomas de Brucella • Mayo 2014: 431 genomas de Brucella (Completos o en emsamblaje) • B. melitensis 16M (2002) • B.suis 1330 (2002) • B. abortus (2005) • B. ovis y microti (2009) • B. pinnepedialis (2011) DATTY R-Z.
- 44. DATTY R-Z. Audic et al.,2011
- 45. TECNICAS MOLECULARES EN DX.BRUCELOSIS DATTY R-Z. • Alta sensibilidad, especificidad, rápido y económico. • Secuencias usadas: – IS711 (Bricker y Halling,1994) – 16sRNA (Romero y col,1995) – OMP31(Baily y col,1992; Streevatsan y col,2000). – BCSP-31 (Guarino y col,2000) • Se pueden usar muestras clínicas: sangre completa,suero, leche, semen, tejidos.
- 46. Electroforesis en agarosa al 15.% de amplificados para BCSP- 31 obtenidos a partir de sangre completa de búfalos seropositivos a Brucella sp. PM C- 1 2 3 4 5 6 7 8 9
- 47. TECNICAS MOLECULARES EN DX.BRUCELOSIS DATTY R-Z. • Técnicas para caracterización de cepas y biovares: – AMOS-PCR (Bricker y Halling,1994). – Multiplex (García-Yoldi y col,2006) – RFLP-PCR con IS711 (Halling y col,1993) – Genotipificación: SNP’s (Scott y col,2008), MLVA, MLST.
- 50. PCR-Multiplex o Brucella ladder. DATTY R-Z. 1. Brucelas marinas 2. B. melitensis 3. B. melitensis Rev1 4. B. ovis 5. B. abortus 6. B. abortus RB51 7. B. abortus S19 8. B. suis 9. B. canis 10. B. neotomae Garcia-Yoldi et al, 2006
- 52. 272bp → 587bp→ 1682bp→ 1071bp → 794bp→ 152bp→ 1. Marcador de talla molecula 1 kb plus de invitrogen 2. Cepa Venezuela 3. B. suis 1330 4. B. abortus 2308 450bp→ 1 2 3 4