Manchas de sangre

¿Manchas de sangre?: seguridad en
pruebas de orientación.
Bloodstains?: reliability of the presumptive test.

M.C. Negre Muñoz1, A. Castelló Ponce2, P. Gil Pitarch3 y
F.A. Verdú Pascual4

RESUMEN ABSTRACT
El espectacular avance en la tecnología de inves- The dramatic improvement in the DNA
tigación de ADN, ha supuesto un cambio radical en el technology research, has meant a radical change in the
estudio de indicios criminalísticos. Sin embargo, el study of criminal evidence. Nonetheless, the success of
éxito de la investigación depende, en gran medida, de the research depends, to a great extent, on the
las técnicas que permiten la detección y el estudio techniques that allow the detection and the previous
previo de la muestra. En el trabajo que sigue, se estu- study of the sample. In the work that follows, the
dia la fiabilidad de estas pruebas sobre muestras con- reliability of these tests is studied on samples
taminadas en el laboratorio con distintos productos y contaminated with various products in the laboratory
utilizando diferentes reactivos de orientación. Como and by using several guidance reagents. As a
consecuencia de la contaminación, se obtienen falsos consequence of the contamination, false results are
resultados tanto positivos como negativos, compro- obtained, both positive and negative, and Luminol is
bándose que el reactivo más fiable es el Luminol. En established as the most reliable reagent. In a
una experiencia complementaria se comprueba la efi- complementary trial the efficiency of the reagent on
cacia del reactivo sobre muestras lavadas. washed sample was checked.

Palabras clave: Ciencia Forense, Pruebas de orienta- Key words: Forensic science, Presumptive Test,
ción, Manchas de sangre, Criminalística. Bloodstains, Criminalistics.

Fecha de recepción: 28.OCT.03 Fecha de aceptación: 27.FEB.02

Correspondencia: Fernando A. Verdú. U.D. Medicina Legal. Facultad de Medicina y Odontología. Universidad de Valencia
EG. Av. Blasco Ibáñez, 15. 46010 Valencia. Teléfono: 963 864 165 - 963 864 820. Fax: 963 864 165. Correo electrónico:
fevepa@uv.es.
1 Médico Forense. Profesora Colaboradora.
2 Doctora en Ciencias Químicas.
3 Profesor Colaborador.
4 Profesor Titular de Medicina Legal y Forense.

Cuadernos de Medicina Forense Nº 34 - Octubre 2003 29

¿Manchas de sangre?: seguridad en pruebas de orientación.

1.- INTRODUCCIÓN:
La investigación de manchas de sangre sigue ocupando un lugar preferente en
Criminalística. Tradicionalmente, se ha venido realizando un sistema de investigación que incluye la
realización de los siguientes diagnósticos [1]:
1.- Orientación.
2.- Certeza.
3.- Especie.
4.- Individual (grupos, ADN, sexo).
5.- Otros (antigüedad, lugar de procedencia, etc.).
La, en todos los aspectos enriquecedora, irrupción de la tecnología de investigación de
ADN ha hecho que, en el momento actual, el caudal investigador se haya centrado precisamente
en este campo. Sin embargo, es la propia progresión técnica en este campo, la que debe devolver
un papel fundamental a los estudios que traten de perfeccionar las técnicas de orientación en el estu-
dio de las manchas de sangre.
En efecto, desde que se introdujo la investigación del ADN en Criminalística hasta el
momento actual, la técnica ha ido precisando su sensibilidad. Cada vez se necesita una cantidad
menor de sangre para que, si otros factores son favorables, se pueda obtener el perfil genético del
donante de la mancha [2].
Pensemos en tres situaciones:
a.- En la primera, se remite a un laboratorio una prenda de ropa verdaderamente mancha-
da de sangre. El sentido científico del investigador, hará que centre su esfuerzo en la
obtención de la prueba de mayor peso.
b.- En la segunda, la pieza remitida parece que está manchada de sangre. En función de la
cantidad de sustrato que pueda obtenerse, con la intención de aportar algo de prueba,
el investigador podrá diversificar las técnicas. Orientación, certeza y ADN parecería una
buena elección.
c.- En la tercera situación, la ropa remitida al laboratorio, simplemente está manchada. La
orientación, en estos casos, debería ser la elección del investigador. Y si los resultados
son favorables, tratar de individualizar el espécimen.
En las situaciones b y c, por tanto, se precisa un conocimiento exquisito de estas técnicas
de orientación. Una elección inadecuada de la técnica a aplicar o una interpretación errónea del
resultado, puede hacer perder un elemento de prueba que, finalmente, puede ser trascendental [3].
Numerosos trabajos [4, 5] se han centrado en dos aspectos fundamentales: la sensibilidad
de las distintas técnicas de orientación y los efectos de la mezcla de sustancias con la sangre investi-
gada.
Los resultados presentan algunas coincidencias y discrepancias, lo que pone de manifiesto
la necesidad de que, en cada laboratorio, se conozca con certeza la fiabilidad y sensibilidad de las
técnicas de orientación que utilizan.
Con la intención de contribuir a este fin, se presenta este trabajo.

2.- OBJETIVOS:
Los objetivos perseguidos con el desarrollo de este estudio son:
1.- Comprobar si la mezcla de sangre con diversas sustancias, puede afectar a los resulta-
dos de las pruebas de orientación.
2.- Cotejar los resultados que se obtienen con dichas mezclas utilizando distintos reactivos.

30 Cuadernos de Medicina Forense Nº 34 - Octubre 2003


3.- MATERIAL Y MÉTODO:
- MATERIAL:
REACTIVOS: Bencidina (Panreac), O-Tolidina (Probus), Fenolftaleina (Panreac),
Perborato de Sodio (Prolabo), Etanol (Panreac), Hidróxido de Potasio (Panreac), Polvo
de Zinc (lab. d'Hemio), Peróxido de Hidrógeno (Prolabo), Acido Acético Glacial
(Probus), Luminol (Merk), Carbonato de Sodio (Panreac), Agua Destilada

MATERIAL: Material de vidrio para medida de volúmenes. Material para la preparación y
estudio de las muestras. Material para la extracción de sangre, soporte de la muestra (placas
de cerámica). Balanza analítica. Refrigerador. Cámara de observación. Rodillete de presión.

- METODO:
I.- Pruebas de orientación sobre muestras preparadas con sangre y sustancias contaminantes
(sin diluir):
a) Preparación de la muestra: se utiliza sangre humana recién extraida (conservante EDTA).
Se mezcla en tubo de ensayo 1 ml de sangre con 1 ml de sustancia contaminante. A
continuación de obtienen manchas sobre el soporte de porcelana. Cada mancha con-
tiene una gota de la muestra.

b) Preparación de muestras control: sobre los mismos soportes se forman manchas a par-
tir de una gota de sustancia contaminante.

c) Preparación de los reactivos: se preparan siguiendo los métodos descritos en la biblio-
grafía [6]. En su uso se debe tener en cuenta las normas de seguridad indicadas para pro-
ductos potencialmente peligrosos [7].

d) Pruebas de orientación con Bencidina, O-Tolidina y Fenolftaleina:
- Se realizan pruebas de control comprobando por una parte el buen estado de los
reactivos con manchas preparadas sobre papel, y de otra la reacción negativa del
soporte utilizado para las muestras.

- Se obtiene una huella de la muestra problema sobre papel de filtro humedecido con
agua destilada. La prueba se aplica sobre esta huella.

- Se repite el mismo proceso con las muestras control.

e) Pruebas con Luminol:
- También en este caso se realizan pruebas de control, que permiten comprobar el
buen estado del reactivo, así como la reacción negativa del soporte utilizado.

- La prueba de orientación se aplica directamente sobre la muestra problema. Las
características del reactivo obligan a trabajar en cámara oscura.

- Se realiza el mismo ensayo con las muestras control.



II.- Pruebas complementarias sobre muestras preparadas con sangre diluida y sustancias
contaminantes:
a) Preparación de la muestra: se utiliza sangre humana recién extraida que se diluye al 50%.
Se seleccionan los contaminantes que en las pruebas descritas en el apartado I del méto-
do, dieron negativo en el control y positivo en la prueba de orientación. Obviamente las
muestras en las que se obtuvo negativo o falso positivo, darán el mismo resultado con
sangre diluida.
Para obtener las manchas se sigue el mismo procedimiento descrito en el aparta-
do I (a) del método.

b) Se repite los puntos b, c,d y e del apartado I del método.

III.- Prueba del luminol sobre muestras sometidas a lavado:
Se lava con agua corriente las muestras que se prepararon y estudiaron en el apartado I,
a continuación se aplica la prueba del Luminol.

4.- RESULTADOS:
Los resultados obtenidos en la investigación, se recogen en las tablas 1 (pruebas I descritas
en el apartado método), 2 (pruebas II) y 3 (pruebas III).

TABLA 1: Pruebas de orientación sobre muestras preparadas con sangre y contaminantes.



TABLA 2: Pruebas de orientación sobre muestras preparadas con sangre diluida y contaminantes.

TABLA 3: Prueba del Luminol sobre muestras sometidas a lavado.

A partir de los resultados obtenidos se puede calcular que la Fenolftaleina no ha detectado
la presencia de sangre en la muestra en un 40% de los casos. Para la Bencidina y la O-Tolidina el
porcentaje de error es del 20%.
No se ha obtenido ningún caso de falso negativo con el Luminol.



5.- DISCUSIÓN:
En las condiciones experimentales de este estudio los resultados indican que es posible
que la presencia de un contaminante puede impedir detectar la sangre presente en una mues-
tra. Y esto puede ocurrir incluso en muestras con alta concentración en sangre. Todos los reac-
tivos de orientación con los que se ha trabajado, excepto el Luminol, han dado casos de falsos
negativos. Este reactivo ha dado resultados también positivos sobre muestras sometidas a lava-
do. Permite detectar y delimitar las zonas donde aún quedan restos de sangre que a simple vista,
no se observan.
Otro dato ya conocido sobre el Luminol es que su aplicación sobre la muestra no interfie-
re en las pruebas de ADN que posteriormente se realicen sobre ella [8,9]. Este reactivo es de uso
muy frecuente en los Estados Unidos [10], sin embargo, curiosamente en España su utilización es
muy restringida si no nula. Quizá a la vista de los resultados que se van obteniendo sobre su rendi-
miento su uso como reactivo de orientación debería replantearse.

BIBLIOGRAFIA:
1.- Los indicios en Medicina Legal. En: Gisbert Calabuig JA. 6.- Eckert, W. G., James, S. H. Interpretation of bloodstain evidence
Medicina Legal y Toxicología 5ª Ed. Barcelona: Salvat; 1998. p. at crime scenes. New York: Elsevier; 1989.
1103-27. 7.- Safety data sheet. Merck Schuchardt, 1998.
2.- Lorente JA, Lorente M. El ADN y la identificación en la investiga- 8.- Gross A M et al. The effect of Luminol on presumptive tests and
ción criminal y en la paternidad biológica. Granada: Editorial DNA analysis using the polymerase chain reaction. J Forensic Sci
Comares; 1995. 1999; 44(4): 837-40.
3.- Verdú, F, Castelló, A. Avances científicos frente a exigencias de la 9.- Castelló A, Alvarez M, Miquel M, Verdú F. Revelado de manchas
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4.- Cox M. A Study of the sensitivity and specificity of four presump- estudio del DNA. Cuadernos de Medicina Forense 2002; nº 28
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5.- Castelló A, Verdú F. A, "Critical review of presumptive tests for 10.- James S. H., Eckert W. G. Interpretation of bloodstains eviden-
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