Métodos de recuento microbiano
- 1. Andrés Felipe Sabogal Osorio METODOS DE RECUENTO
- 2. La expresión de resultados para cada método se debe clasificar dependiendo si es un recuento en medio solido o medio liquido. • En el medio solido se deberá considerar el numero de colonias en total y en el medio liquido se calculara empleando el NMP.
- 3. RECUENTO EN PLACA Es la técnica directa mas utilizada en el mundo, debido a su confiabilidad y facilidad, siendo una herramienta importante en la cuantificación de microorganismos presentes en una muestra.
- 4. • Para considerar un recuento se debe contar mínimo con 15 colonias y máximo 300. • En caso de tener varias diluciones dentro del rango, estas deben ser consecutivas. • Para un resultado mas confiable se deberán hacer las siembras mínimo por duplicado
- 5. • Para el conteo debe evitarse hacer estimaciones de las poblaciones empleando el método de división de caja. • En caso de tener cajas contaminadas se deben descartar. • El resultado obtenido al contar por segunda vez las colonias de una caja determinada debe presentar:
- 6. 1. Una diferencia máxima del 5% en caso de haber realizado el recuento la misma persona. 2. Una diferencia máxima del 10 % en caso de que el recuento lo haya realizado otra persona.
- 7. • Los resultados obtenidos mediante formulas se deben redondear a dos cifras significativas. • El resultado de los microorganismos se expresa por gramo en caso de que el análisis se practico a una muestra solida y mililitro para una muestra liquida
- 8. • La expresión de incontable, solo se debe limitar a cajas que debido a su concentración de colonias impide su recuento, si en todas las diluciones sembradas sucede esto implica que no se realizaron las diluciones correctas
- 9. • N=_____∑C__________ V (n1+0,1*n2)*d N: Número de microorganismos por gramo o mililitro C = es la suma de las colonias contadas en todas las cajas de Petri que contienen 2 diluciones sucesivas, donde por lo menos una de ellas contiene 15 colonias como mínimo. V= es el volumen del inóculo aplicado en cada caja en mililitros n1 = el número de cajas retenidas en la primera dilución n2 = el número de cajas retenidas en la segunda dilución d = es el factor de dilución correspondiente a la primera dilución retenida.
- 10. • Ejemplo 10-1: Caja 1: incontable Caja 2: Incontable. 10 -2: Caja 1: 168 Caja 2: 215 10 -3 : Caja 1: 14 Caja 2: 25 N=168+215+14+25 = 422 = 19182 (2+(0.1*2))*10-2 0.022 Rta :19x 103 UFC/g o ml de la muestra analizada.
- 11. • Recuento a colonias inferiores a 15 N= ___∑C ___ V*n * d 10-1: Caja 1: 318 Caja 2: 302 10 -2: Caja 1: 12 Caja 2: 13 N= 12+13 = 25 = 1250 1*2*10-2 0.02 Rta: 12 x 102 UFC/g o ml de la muestra analizada.
- 12. CALCULO DEL RECUENTO ESTÁNDAR EN PLACA ESTIMADO • En caso en el que ninguna de las cajas tenga el rango, el valor se da como el recuento estándar en placa estimado. La caja con mayor dilución se le realizaran divisiones radiales ( máximo 8) y se contaran las colonias en la sección radial seleccionada.
- 14. • En caso de que hacer un conteo estimado en 1/8 de la caja y este supere las 200 colonias se informara como >1600 de la dilución empleada.
- 15. • Ejemplo 10-1: Caja 1: >1600 Caja 2: >1600(descartada) 10 -2: Caja 1: >1600 Caja 2: >1600(descartada) 10 -3 : Caja 1: >1600 Caja 2: >1600 • Resultado >1600x103 = >16x105 UFC/g o ml de la muestra analizada, Conteo estimado.
- 16. METODO TRADICIONAL • Para este método la cantidad de colonias deben estar en el rango establecido por el ensayo, se promedia y se informa teniendo en cuenta el inverso de la disolución empleada.
- 17. • Si una sola dilución esta dentro del rango se deberá promediar y multiplicar por el inverso de la dilución. Se deberá multiplicar por 10 en el caso de utilizar la técnica de recuento en superficie debido a que el volumen sembrado es de 0,1 ml.
- 18. 10-1: Caja 1: 310 Caja 2: 324.(incontable) 10 -2: Caja 1: 156 Caja 2: 152 10 -3 : Caja 1: 15 Caja 2: 26 (incontable) Resultado:156 +152 /2 : 154 PROFUNDIDAD: 154x 103: 15 x 103 UFC/g o ml de la muestra analizada SUPERFICIE: 15 x 104 UFC/g o ml de la muestra analizada
- 19. • Si dos diluciones se encuentran dentro del rango se promedian y se les adicionan los ceros de la dilución respectiva. Luego se debe hacer una división entre la mas diluida sobre la mas concentrada.
- 20. Si el valor de esta división da mayor a 2 se tomara la dilución mas concentrada, por el contrario si da menor de 2 se hará un promedio de los resultados de las dos diluciones dentro del rango y se informara
- 21. 10-1: Caja 1: 280 Caja 2: 280 10 -2: Caja 1: 31 Caja 2: 33 10 -3 : Caja 1: 3 Caja 2: 2 (incontable) PROMEDIOS 10-1 :280X 101: 2800 10-2:32X102::3200 DIVISIÓN 3200/2800: 1.14 < 2: PROMEDIO 2800+3200/2: Resultado 30x 102 UFC/g o ml
- 22. GOTAS EN SUPERFICIE • Es empleado con fines experimentales ya que este método, disminuye la cantidad de medio y cajas de Petri. No solo es mas usado por motivos económicos, también tiene algunas ventajas comparadas con el método estándar.
- 23. • Se puede emplear con medios opacos • Se puede emplear para microorganismos que se inactivan con el calor debido al agar fundido • Se deben emplear volúmenes de 0,02 a 0,1 ml • El rango de conteo debe estar entre 20 y 80 colonias
- 24. • Ejemplo • (Inoculo de 0,02ml) se debe tomar la caja entre el rango, en caso de tener replica se deberá hacer promedio, el resultado se multiplica por el inverso de la dilución empleada. Posteriormente se ajustara a un volumen de 1ml y se multiplicara por el factor de corrección
- 25. • 10-1: Caja 1: incontable Caja 2: Incontable. • 10 -2: Caja 1: 168 Caja 2: 215 • 10 -3 : Caja 1: 33 Caja 2: 35 • • 33+35=34x 103 UFC/0,02 • Factor de corrección • 34x 50 x 103=17x105 UFC/g o ml de la muestra analizada Factor de corrección
Notas del editor
- #6: Para el conteo debe evitarse hacer estimaciones de las poblaciones empleando el método de división de la caja ya que este es un método con un margen de error más alto. En caso de tenerse cajas contaminadas se deben descartar, para disminuir márgenes de error por visualización o estimación El resultado obtenido al contar por segunda vez las colonias de una caja determinada debe presentar
- #8: Los resultados obtenidos mediante formulas se deben redondear a dos cifras significativas, en caso de tener que hacer aproximaciones están se harán de la siguiente manera: si a última cifra es inferior a 5, la cifra procedente no se modifica, si la última cifra es superior 5 la cifra procedente será aumentada una unidad. Y en caso de que la cifra sea 5 se revisara el número inmediatamente anterior, si es un número par se dejara el número anterior igual, pero si la cifra que antecede al 5 es impar se realizara la aproximación al número superior. Por ultimo los dígitos restantes serán sustituidos por ceros.
- #10: N: Número de microorganismos por gramo o mililitro C = es la suma de las colonias contadas en todas las cajas de petri que contienen 2 diluciones sucesivas, donde por lo menos una de ellas contiene 15 colonias como mínimo. V= es el volumen del inóculo aplicado en cada caja en mililitros n1 = el número de cajas retenidas en la primera dilución n2 = el número de cajas retenidas en la segunda dilución d = es el factor de dilución correspondiente a la primera dilución retenida.
- #11: Superficie 0,1 ml Profundidad 1 ml N: Número de microorganismos por gramo o mililitro. C = es la suma de las colonias contadas en todas las cajas de petri que contienen 2 diluciones sucesivas, donde por lo menos una de ellas contiene 15 colonias como mínimo. d= es el factor de dilución correspondiente a la dilución retenida. V= es el volumen del inóculo aplicado en cada caja en mililitros. n= el número de cajas retenidas en la dilución empleada.
- #12: N: Número de microorganismos por gramo o mililitro. C = es la suma de las colonias contadas en todas las cajas de petri que contienen 2 diluciones sucesivas, donde por lo menos una de ellas contiene 15 colonias como mínimo. d= es el factor de dilución correspondiente a la dilución retenida. V= es el volumen del inóculo aplicado en cada caja en mililitros. n= el número de cajas retenidas en la dilución empleada.
- #13: luego se procederá a hallar la media de las repeticiones y multiplicar por el inverso de la dilución. En la expresión del resultado, siempre se deberá señalar que la técnica empleada fue un Conteo estimado.
- #15: Esta técnica no es recomendable para análisis rigurosos como los de alimentos ya que esta estimación tiene un alto margen de error que no evidencia un resultado exacto y confiable.
- #16: en este caso se toma la dilución más diluida
- #17: 30-300
- #18: Superficie 0,1 ml Profundidad 1 ml
- #19: Superficie 0,1 ml Profundidad 1 ml
- #24: Dependiendo del tamaño de la colonia 80 puede ser un número muy alto y no se logran diferenciar
- #26: Nota si se siembra 10 µl el factor de corrección será de 100