Práctica 5. 2017 1
- 1. Competencia: Conocer el fundamento inmunológico de los sistemas ABO y Rh Academia de Inmunología Médica/Laboratorio de Inmunología Médica 2017-1 26 PRÁCTICA 5. GRUPOS SANGUÍNEOS: SISTEMAS ABO Y Rh I. INTRODUCCIÓN Los eritrocitos, poseen moléculas en su superficie que además de su función biológica pueden ser antígenos. Estos antígenos eritrocitarios se agrupan en sistemas que permiten tipificar el grupo sanguíneo de los individuos. Los sistemas sanguíneos más importantes por su prevalencia e inmunogenicidad son el ABO y el Rh. En la actualidad se conocen más de 250 antígenos eritrocitarios agrupados en más de 26 sistemas. Es importante estudiar los antígenos de los eritrocitos y sus implicaciones inmunológicas en la práctica médica, en áreas como: medicina transfusional y trasplantes; y en alteraciones como la enfermedad hemolítica del recién nacido y las enfermedades hemolíticas autoinmunitarias. El sistema ABO fue el primer sistema de grupos sanguíneos descubierto y descrito al inicio del siglo XX por Karl Landsteiner, quién observó que eritrocitos de algunos individuos aglutinaban cuando se mezclaban con suero de otros, pero no con su propio suero. Mediante esto Landsteiner concluyó, que la aglutinación se debía a que en la superficie de los eritrocitos de algunos individuos existía un tipo de antígeno que era reconocido por los anticuerpos del suero de los individuos que no tenían ese antígeno. Landsteiner clasificó a los individuos que estudió en tres grupos: A, B y O. En la actualidad se sabe que el sistema ABO está determinado por los genes: ABO, H y Se. El gene H codifica para una glicosiltransferasa que une un monosacárido, la L- fucosa, a una ceramida en la membrana del eritrocito, este determinante antigénico se llama H. El gene A codifica para una glicosiltransferasa diferente que une a la N- acetilgalactosamina al Ag H. El gene B codifica para una glicosiltransferasa diferente que une la galactosa al Ag H. Estos genes son de expresión dominante. La expresión del gene A determina el fenotipo A, la expresión del gene B el fenotipo B, la expresión de ambos el fenotipo AB y la ausencia de los genes A y B el fenotipo O, en presencia del gene H. El gene secretor “Se” determina la capacidad de los individuos para secretar de manera soluble los Ag A, B y H en los fluidos corporales y secreciones. Los mismos determinantes antigénicos A y B, son expresados por células de varios tejidos y es importante en la selección del donante en un procedimiento de trasplante de órgano sólido.
- 2. Competencia: Conocer el fundamento inmunológico de los sistemas ABO y Rh Academia de Inmunología Médica/Laboratorio de Inmunología Médica 2017-1 27 De manera natural los individuos producen Ab contra el Ag del sistema ABO que no poseen, estos Ab se llaman isohemaglutininas que son de clase IgM. Así los individuos del grupo A producen Ab anti-B, los del grupo B producen Ab anti-A, los del grupo AB no producen Ab ni anti-A ni anti-B y los individuos del grupo O producen ambos Ab. Los antígenos del sistema ABO se detectan al reaccionar éstos con su antisuero conocido. La frecuencia de cada grupo sanguíneo varía en las diferentes poblaciones. El sistema Rh: es el segundo en importancia por su inmunogenicidad y frecuencia. Está constituido por unos 45 antígenos de naturaleza proteica, los principales son D, C, E, c y e, de los cuales el de mayor importancia en medicina es el Ag “D”. La presencia del gene RhD codifica para el antígeno D, y es de expresión codominante, mientras que la ausencia de este gene no codifica para este Ag. A diferencia del sistema ABO, este grupo sanguíneo no produce Ab naturales. Los individuos Rh negativo, sólo producirán Ab anti-Rh posterior a la sensibilización con el Ag Rh, debido a transfusiones mal indicadas o intercambio sanguíneo en el evento obstétrico. Los anticuerpos del sistema Rh son generalmente de clase IgG. Los Ab anti-Rh tienen importancia médica, ya que son los responsables de la enfermedad hemolítica del recién nacido (EHRN) y de reacciones hemolíticas postransfusionales, provocando hemólisis intra o extravasculares que pueden poner en riesgo la vida del individuo. II. OBJETIVOS 1. Realizar la técnica de aglutinación en placa y tubo. 2. Tipificar los antígenos y anticuerpos naturales del sistema ABO/Rh. 3. Determinar la frecuencia de los diferentes fenotipos del sistema ABO/Rh en una población determinada. III. MATERIAL, REACTIVOS Y EQUIPO Material Reactivos Equipo - Lancetas - Torundas con alcohol al 70% - Pipetas Pasteur - Placa de aglutinación - 10 tubos de 10x75mm - 1 Gradilla - Aplicadores de madera - Muestra sanguínea - Suero anti-A - Suero anti-B suero anti-AB - Suero anti-D (Rh) - Eritrocitos tipificados “O” - Eritrocitos tipificados “A” - Eritrocitos tipificados “B” - Eritrocitos tipificados “AB” - Centrífuga clínica
- 3. Competencia: Conocer el fundamento inmunológico de los sistemas ABO y Rh Academia de Inmunología Médica/Laboratorio de Inmunología Médica 2017-1 28 IV. PROCEDIMIENTO a) Prueba en placa 1. Marcar la placa de aglutinación de la siguiente forma: A, B, AB y Rh. 2. Con una torunda desinfectar el pulpejo de un dedo, secar al aire y puncionar con una lanceta estéril. 3. Presionar el dedo de arriba hacia abajo, colocar 1 gota de sangre directamente sobre la placa, en cada uno de los cuatro pozos de aglutinación en su fila correspondiente. 4. Adicionar a cada muestra de sangre, 1 gota de suero: anti-A, anti-B, anti- AB y anti- D según la columna correspondiente (Figura 1). 5. Mezclar con un aplicador de madera, usar uno diferente en cada pozo. 6. Observar la presencia o ausencia de aglutinación en cada muestra. 7. En base a la información de la tabla 1, interpretar los resultados. 8. Anotar resultados por equipo en la tabla 2 y por grupo en la tabla 3. Figura 1. Determinación de grupo sanguíneo en placa.
- 4. Competencia: Conocer el fundamento inmunológico de los sistemas ABO y Rh Academia de Inmunología Médica/Laboratorio de Inmunología Médica 2017-1 29 V. RESULTADOS Tabla 1. Guía para la interpretación de la aglutinación Grupo sanguíneo Reacción con anti-A Reacción con anti-B Reacción con anti-AB Reacción con anti-D (Rh) Grupo ABO/Rh A + - + + A Positivo - A Negativo B - + + + B Positivo - B Negativo AB + + + + AB Positivo - AB Negativo O - - - + O Positivo - O Negativo Aglutinación: + No Aglutinación: - Tabla 2. Resultados por equipo Nombre del Estudiante SUEROS Grupo SanguíneoAnti-A Anti-B Anti-AB Anti-D (Rh) Tabla 3. Resultados por grupo. Grupo Sanguíneo Factor Rh Equipo 1 2 3 4 5 Total Frecuencia A Positivo Negativo B Positivo Negativo AB Positivo Negativo O Positivo Negativo Total
- 5. Competencia: Conocer el fundamento inmunológico de los sistemas ABO y Rh Academia de Inmunología Médica/Laboratorio de Inmunología Médica 2017-1 30 b) Prueba en tubo 1. Homogenizar la suspensión de eritrocitos de su muestra problema. 2. Prueba directa: Adicionar 1 gota de la suspensión de eritrocitos a los tubos con los sueros anti-A, anti-B, anti-AB y anti-Rh (Figura 2). 3. Prueba inversa: Agregar 1 gota de suero problema a los tubos con los eritrocitos tipificados A, B, AB y O (Figura 3). 4. En el tubo marcado como autotestigo (AT) agregar 1 gota de eritrocitos y 1 gota del suero problema. 5. Homogenizar los tubos y centrifugar a 1,500 rpm durante 1 minuto. 6. RESUSPENDER la muestra e interpretar los resultados. 7. Anota resultados en las tablas 4 y 5 según corresponda. Figura 2. Determinación de grupo sanguíneo en tubo. Prueba directa. Tabla 4. Prueba Directa Suero Anti- A Suero Anti- B Suero Anti- AB Suero Anti- Rh Grupo sanguíneo Aglutinación
- 6. Competencia: Conocer el fundamento inmunológico de los sistemas ABO y Rh Academia de Inmunología Médica/Laboratorio de Inmunología Médica 2017-1 31 Figura 3. Determinación de grupo sanguíneo en tubo. Prueba inversa. Eritrocitos previamente tipificados. Tabla 5. Prueba Inversa Eritrocitos A Eritrocitos B Eritrocitos AB Eritrocitos O Grupo sanguíneo Aglutinación
- 7. Competencia: Conocer el fundamento inmunológico de los sistemas ABO y Rh Academia de Inmunología Médica/Laboratorio de Inmunología Médica 2017-1 32 VI. CUESTIONARIO ADICIONAL 1. Investigue que son los aloanticuerpos y los autoanticuerpos. 2. En las anemias hemolíticas postransfusionales, el receptor recibe eritrocitos compatibles del sistema ABO. Mencione tres sistemas responsables de la inducción de anticuerpos por incompatibilidad. 3. En el plasma para transfusión se recomienda titulación de Ab´s ¿Si? ¿No? ¿Por qué? 4. Explique brevemente la hemólisis intravascular y extravascular en una reacción inmunológica. 5. ¿Qué problema puede existir en un segundo embarazo si la madre es Rh negativo? VII. BIBLIOGRAFÍA 1. Rodríguez-Moyado H. El Banco de Sangre y la Medicina Transfusional. 2ª ed. México: Panamericana. 2014. 580 p. ISBN: 9786077743989. 2. Norma Oficial Mexicana NOM-017-SSA-1993. De los reactivos hemoclasificadores para determinar grupos del sistema ABO. 3. Norma Oficial Mexicana NOM-003-SSA2-1993 Para la disposición de sangre humana y sus componentes con fines terapéuticos. 4. Norma Oficial Mexicana NOM-018-SSA-1993. Del reactivo anti-Rh para identificar el antígeno D. 5. García-Arbeláez CA. Fundamentos de banco de sangre y medicina transfusional. Medicina & Laboratorio 2009; 15:37-68. 6. Parham P. El sistema inmune. 4ª ed. México: Manual Moderno., 2016. 600 p. ISBN: 9786074485646.