practica-de-microbiologia
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La práctica número 3 describe dos técnicas de tinción: 1) La tinción de Ziehl-Neelsen, que es importante para diagnosticar tuberculosis y observar bacilos ácido-alcohol resistentes en esputos. 2) La tinción de Vagó, que se usa para observar bacterias espirales y espiroquetas en sarro dental. Ambas técnicas implican fijar la muestra, teñirla con colorantes específicos y lavar para observar los resultados bajo el microscopio.
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- 1. PRACTICA Nº3 A) COLORACION DE ZIEHL NEELSEN (coloración acido resistente o baciloscopia). • FUNDAMENTO. Es el alto contenido de lípidos en la pared celular de ciertas bacterias permite que el colorante una vez fijado por el calor no se desprende por acción de los agentes colorantes (alcohol acido ). • OBJETIVOS. Diagnosticar TBC y observar BAAR en esputo. • MATERIALES: Lamina porta objetos Aplicador de madera Esputo de pacientes sospechoso de tuberculosis Colorantes: fucsina fenicada y azul de metileno Reactivos: alcohol acido Aceite de xilol , aceite de imersion Microscopio • PROCEDIMIENTOS. Extender y fijar la muestra de esputo empleando un aplicador de madera. La fijación se realiza después que seque el extendido Cubrir con fucsina fenicada y calentar la lamina en forma suave a la llama del mechero hasta el desprendimiento de vapores , repetir esto hasta por tres veces consecutivas sin llegar a la ebullición . Eliminar el exceso de colorante y lavar intensamente a chorro de agua Decolorar con alcohol acido hasta que no desprenda el colorante . Lavar con agua corriente y agregar gotas de azul de metileno .Dejar actuar por 1 a 2 minutos donde actúa como colorante de de contraste. Lavar, secar y observar. • RESULTADOS. Las observaciones se reportan como bacilos de alcohol acido resistentes (BAAR). Leucocitos polimorfos nucleares Fibras musculares.
- 2. De acuerdo con la OPS: BAAR CAMPOS RESULTADOS INTERPRETACION 1-9 En 100 + Recién empieza 1-9 En 100 ++ TBC con necrosis caseosa 1-9 E 1 +++ Cavernas pulmonares , hemoptisis 0 En >100 - negativo B) COLORACION DEL VAGO. • FUNDAMENTO. Las bacterias fusoespirales y espiroquetas comúnmente no se tiñen con las técnicas usuales el método se basa primeramente en la impregnación con mercurio cromo a nivel de la pared celular de dichos microorganismos y solo así se podrán teñir con violeta de genciana. • OBJETIVOS. Observar las bacterias que se encuentra en el sarro dentario: espiroqueta, fusoespiraladas y fusobacteria. • MATERIALES. Lamina porta objeto Palito mondadientes Mercurio cromo al 2% Colorante violeta genciana Muestra de sarro dentario Aceite de imersion Microscopio. • PROCEDIMIENTO. Prepara la extensión del sarro dentario, empleando el palito mondadientes sobre la lámina porta objetos, usando una gota de solución salina fisiológica y la fijación se realiza solo al ambiente. Impregnar con mercurio cromo al 2% por espacio de 3 minutos. Lavar con agua corriente. Cubrir con violeta genciana por espacio de 3 minutos. Lavar secar y observar. • RESULTADOS. Esquematizar las observaciones espiroqueta, fusoespiraladas y fusobacteria.
- 3. CUESTIONARIO 1. ¿Por qué la tinción de ZIEHL NIEHLSEN es importante para el diagnóstico clínico? Es muy útil para el diagnóstico de MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS Y M. LEPRAC. Debido a la gran resistencia de las Mycobacterias y actinomicetes a pesar de ser Gram positivas. Crean dificultades cuando se les intenta colorear por el método Gram, debido a que ello requiere otro tipo de técnicas de coloración y para ello es necesaria la coloración de ziehl neelsen o acido resistente. 2. ¿Qué fenómeno se presenta cuando se aplica el colorante durante la tinción de ZIEHL NIEHLSEN? Las bacterias acido alcohol resistente poseen una pared celular rica en lípidos y ácidos carboxílicos (ácido mico lico) que tiene la propiedad de unirse excepcionalmente fuerte al colorante 1 ero (fusila de Ziehl) cuando se usa el calor como mordiente. Una vez que se forma este complejo colorante - pared, ni siquiera la acción conjunta del ácido y del alcohol pueden deshacerlo, ya que las paredes retienen el colorante en forma “RESISTENTE”. De esta forma se identifica las bacterias acido - resistentes.
- 4. 3. Es posible reemplazar el azul de metileno por la safranina en la coloración de ZIEHL NIEHLSEN? Simples. Utilizan un solo colorante. Se basan en el hecho de que las células tienen una composición química diferente a la de su entorno, de modo que ambos se comportan de forma diferente frente a un colorante. El colorante tiñe las células (azul de metileno, safranina) o no (nigrosina). La safranina (también llamada Safranina o rojo básico 2), es un colorante biológico, de contraste que se utiliza en la Tinción de Gram para proporcionar un color violeta más intenso a las bacterias Gram+ y tiñe de rosa a las bacterias G- ; en histología y en citología. La safranina se usa como líquido de contraste en algunos protocolos de tinción, coloreando el núcleo celular de rojo. También para detectar cartílago, mucina y gránulos de mastocitos. ZAFRANINA Composición: Alcohol etílico de 50º-----100 ml Safranina (C.I. 50240)-------1 g La preparación se realiza en frío. En los manuales tando de histología animal como vegetal, figuran preparados con fórmulas distintas, tanto en las concentraciones de colorante como en la de disolvente (Martoja, 1970; Purvis-Collier-Walls 1966), Johansen 1968; Gabe, 1968; etc.). Nuestra experiencia es que, a concentraciones mayores de colorante, éste precipita fácilmente, siendo poco limpias las tinciones; y el exceso de colorant conlleva un exceso de coloración. El azul de metileno se prepara en frío a distintas concentraciones dependiendo del uso que se quiera dar. Las dos más frecuentes son: Composición: Existen diferentes formulaciones dependiendo del libro al que se consulte, las más usadas son las siguientes 1)Azul de metileno (C.I. 52015)--1 g Agua destilada --------------1000 ml 2)Azul de metileno (C.I. 52015)--1 g Boraz-----------------------------1g Agua destilada ---------------100 ml
- 5. 4. Señale la importancia de la coloración de ZIEHL NIEHLSEN Esta tinción es útil en la detección de bacterias del género Micobacterium en muestras de esputo. La presencia de bacilos rojos sobre fondo azul constituye un diagnóstico casi definitivo de tuberculosis.