Revista Asebir junio 2010

ASOCIACIÓN PARA EL ESTUDIO DE LA BIOLOGÍA DE LA REPRODUCCIÓN
Junio 2010 Vol.15 · Nº1

REVISTA

Complejo huso meiótico-placa metafásica

ACTUALIDAD DEBATE
Proteómica del espermatozoide humano. Es necesario considerar los intentos previos.
Metabolómica y reproducción humana. Auditorías para el 100% de los Centros.
Transparencia no siempre es sinónimo de
ARTÍCULOS honestidad.
Efecto del proceso de vitrificación sobre la
La nueva vía del Registro de Actividad
estructura del huso meiótico y organización
de la SEF: El aumento de la calidad.
cromosómica en ovocitos humanos en
metafase II.
FORMACIÓN CONTINUADA
Las variantes cromosómicas afectan la Impronta genómica y reproducción asistida.
calidad embrionaria.
AGENDA
AULA JOVEN NOTICIAS
Relación entre los patrones pronucleares y la NORMAS DE PUBLICACIÓN
calidad embrionaria según criterios asebir.

Í N D I C E

Junio 2010 Vol. 15 · Nº1

EDITA
Asociación para el Estudio de la Biología de la Reproducción
(ASEBIR).

EDITORES Y DIRECTORES CIENTÍFICOS
Marga Esbert - Barcelona
Jorge Cuadros - Madrid

COMITÉ EDITORIAL
Presidente:
Dr. Manuel Ardoy Vilches

SUMARIO
HOSPITAL UNIVERSITARIO GREGORIO MARAÑÓN - Madrid
Vicepresidenta y RRPP:
Dra. Carmen Ochoa Marieta
CER. CLINICA COTERO - Santander
SUMARIO Pág. Secretaría y RRPP:
Dra. Montserrat Boada Palá
INSTITUT UNIVERSITARI DEXEUS - Barcelona
EDITORIAL 3
Tesorería y Relaciones con la Industria:
Reconocimiento de la Embriología Clínica Dr. Fernando Marina Rugero
Carmen Ochoa, Antonio González, Josep Santaló y Manuel Ardoy INSTITUTO DE REPRODUCCION CEFER - Barcelona
Comisión para la Especialidad de Embriología Clínica
Vocalía de Grupos de Interés e Investigación:
Dr. Josep Santaló Pedro
ACTUALIDAD 5 UNIVERSIDAD AUTONOMA DE BARCELONA - Bellaterra
Proteómica del espermatozoide humano
Rafael Oliva Virgili, Josep Maria Estanyol, Sara de Mateo López, Vocalía de congresos:
Judit Castillo Corullón, José Luis Ballescà Lagarda. Dra. María José Torelló Ybañez
HOSPITAL QUIRÓN BARCELONA - Barcelona
Metabolómica y reproducción humana Dra. Yolanda Mínguez Royo
Imma Sánchez Ribas, Francisco Domínguez, Carlos Simon IVI MADRID - Madrid
Vocalía de Docencia y formación continuada:
ARTÍCULOS 14 Dr. Ignacio Santiago Álvarez Miguel
Efecto del proceso de vitrificación sobre la estructura del huso INST. EXTREMEÑO REPRODUCCIÓN ASISTIDA –IERA -Badajoz
meiótico y organización cromosómica en ovocitos humanos
Dr. Josu Franco Iriarte
en metafase II CENTRO SANITARIO VIRGEN DEL PILAR - San Sebastian
Cristina Costana Duque, Javier Alfonso, Rita Cervera, Ana Monzó,
Vicente Montañana, Miodrag Stojkovic, Alberto Romeu Dr. Juan Manuel Moreno García
CLINICA VISTAHERMOSA - Alicante
Las variantes cromosómicas afectan la calidad embrionaria Vocalía Página Web:
Mireia Poveda, Teresa Rubio, Isabel Ochando, Laura Gil, Manuel Dr. Juan Manuel Moreno García
Lloret, José Jesús López-Gálvez, Antonio Urbano, Juan Manuel CLINICA VISTAHERMOSA - Alicante
Moreno, Joaquín Rueda Vocalía de publicaciones:
Dr. Jorge Martín Cuadros Fernández
AULA JOVEN 25 CLÍNICA FIV-MADRID - Madrid
Relación entre los patrones pronucleares y la calidad embrionaria
Dra. Marga Esbert Algam
según criterios asebir IVI BARCELONA - Barcelona
Marta Brossa, Xènia Blanch, Marta Antich
La Revista de ASEBIR (Asociación para el Estudio de la Biología
DEBATE 30 de la Reproducción) está indexada en la base de datos Latindex
Es necesario considerar los intentos previos y en la base de datos ICYT, de ciencia y tecnología, del Consejo
Auditorías para el 100% de los Centros Superior de Investigaciones Científicas (CSIC) de España y ha
sido aceptada para su inclusión en Índice Médico Español
Transparencia no siempre es sinónimo de honestidad
(IME), la base de datos de Biomedicina del CSIC.
La nueva vía del Registro de Actividad de la SEF: El aumento de la calidad.
PUBLICIDAD Y COLABORACIONES
FORMACIÓN CONTINUADA 36 Secretaría ASEBIR
Impronta genómica y reproducción asistida C/ Cronos 20, Edificio 4, 1º, 6ª
28037 Madrid - Tfno: 91 367 89 94
Cristina Camprubí
www.asebir.com · asebir@asebir.com
AGENDA 42 DISEÑO, MAQUETACIÓN E IMPRESIÓN
NOTICIAS 43 GÓBALO: Gráfica · Web · Multimedia · Consultoría
INFORMACIÓN PARA LOS AUTORES - NORMAS DE PUBLICACIÓN 44 C/ Castillo de Fuensaldaña 4, Oficina 213
28232 · Las Rozas · Madrid
Tfno - Fax.: 91 626 39 74
Imágenes de la portada: Configuración normal del complejo huso meiótico-placa www.gobalo.es · info@gobalo.es
metafásica en oocitos humanos (Imagen superior) y configuración anormal (Imagen Depósito legal: M-18873-1996
izquierda). Cortesía de Duque et al. pp:14-17. ISSN: 1136-4424
Soporte válido: 78-R-CM

E D I T O R I A L
Rev Asoc Est Biol Rep Junio 2010 Vol. 15 Nº 1
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RECONOCIMIENTO DE LA EMBRIOLOGÍA CLÍNICA

Han pasado ya más de 30 años desde el nacimiento de Louise Brown. Desde aquellos días hasta hoy, la Reproducción Humana
Asistida, sobre todo la Embriología Clínica, ha experimentado enormes cambios. Han surgido nuevas alternativas, y otras se han
visto muy modificadas; y lo mejor de todo es que el cambio, la evolución, continúa.

La reproducción humana asistida y, sobre todo, aquello que nos ocupa: la Embriología, ha terminado ocupando un campo de
características propias y bien definidas dentro del panorama sanitario. Resulta difícil pensar que algún gestor de sanidad de las
diferentes autonomías pueda dudar de que esta atención sanitaria deba estar incluida en su cartera de servicios.

Muchos son los cambios que han consolidado un campo propio y específico para la Embriología Clínica. Tan sólo por enumerar
algunos:

-Aparición constante de alternativas terapéuticas específicas.

-Desarrollo de diferentes técnicas de diagnóstico. Tanto propias como traídas de otros tipos de laboratorios.

-Consolidación de la gestión del laboratorio de reproducción humana asistida, con características diferenciales del resto de
laboratorios.

-Implantación de la reproducción humana asistida en la cartera de servicios habitual del sistema sanitario Español

-Posibilidades docentes propias y de formación práctica, cada vez más asequibles.

-Desarrollo de investigación propia, junto con una gran cantidad de alternativas de intercomunicación científica.

-Existencia de diversas asociaciones científicas exclusivas de este campo.

-Desarrollo legislativo específico de forma habitual, no sólo a nivel nacional

-Un impacto incuestionable en la sociedad: natalidad, partos múltiples, preservación de la fertilidad, parejas homosexuales... La
reproducción humana asistida ha pasado al espectro de lo habitual.

A pesar de todo esto, hay una parcela esencial que se continúa dejando de lado: el reconocimiento específico, propio y oficial de
un ejercicio profesional, el de la Embriología Clínica. Consecuencia de este paso sería la definición de responsabilidades y funciones,
y por tanto la planificación de esquemas formativos. No cabe duda alguna, el principal beneficiario de tal reconocimiento sería el
propio paciente, tanto por la seguridad como por la calidad asistencial que recibiría.

A muchos nos cuesta pensar qué razones llevan a los responsables del Estado a mantener en una situación de casi parada un
reconocimiento que parece tan lógico a los profesionales cercanos a la reproducción humana asistida. Sin embargo, por nuestra
parte sí que ha habido un esfuerzo continuado. Podemos hacer un breve resumen.

Uno de los primeros pasos fue la Cualificación de Especialista en Reproducción Asistida Humana, emitida durante un breve periodo
de tiempo por el COB. Tras el escaso éxito de ésta, y pasado algún tiempo, surgió la posibilidad de que al profesional del Laboratorio
de Reproducción Humana Asistida se le reconociera una de las especialidades reguladas en el RD 1163/2002, que afectaba a biólogos,
químicos y bioquímicos. La solicitada mayoritariamente fue la de Análisis Clínicos. La respuesta oficial la conocemos todos, un
rotundo NO. De esta respuesta hubo dos consecuencias claras:

-Nosotros aprendimos que NO éramos asimilables como parte de una especialidad previa. Por tanto, sin lugar a dudas, el
reconocimiento pasaba por algo más exclusivo y específico.

-El ministerio no podía seguir mirando hacia otro lado durante más tiempo. Era demasiado obvio, tenía una enorme cantidad de
expedientes denegados encima de la mesa y todos tenían algo en común, trabajaban en reproducción humana asistida.

Tras esto, empezamos diferentes reuniones con el ministerio. Una de las primeras cosas que quedaron bien claras era la
imposibilidad, por el momento, de una especialidad propia. Máxime cuando la intención es disminuir el número de las que hay. Una
opción ofrecida fue la posibilidad de valorar el formar parte de las ramas, troncalidades, que pasarán a formar parte de un tronco
común, el del Laboratorio Clínico. Tal y como pasará con las hasta ahora existentes de forma individual: Análisis Clínico, Bioquímica
Clínica... Esta opción fue trabajada, y se presentó a la correspondiente Dirección General del Ministerio de Sanidad una propuesta
de programa formativo de troncalidad en Embriología Clínica. Ésta la podéis obtener en la Web de ASEBIR.

E D I T O R I A L

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Si bien actualmente las troncalidades no se han ultimado, parece complejo que se vayan a incluir más campos del conocimiento que
los ya aceptados como especialidad, aunque seguimos trabajando en ello con el ministerio y con las comunidades autónomas,
intentando hacer llegar el asunto al Consejo Interterritorial. Pero el ministerio nos propone una vía alternativa que ayudaría a
fundamentar pasos ulteriores, un Certificado en Embriología Clínica que fuera valorado y emitido por ASEBIR; máxime cuando es
conocedor del proceso de certificación de la ESHRE.

Sin olvidar el resto de los caminos abiertos, la vía principal de evolución por la que se ha optado, y prácticamente la única que el
ministerio deja como viable a corto-medio plazo, es este certificado. Sabemos que su relevancia dependerá de qué apoyos o
reconocimientos oficiales pueda llegar a tener, así como de la consideración personal que se le otorgue. Por el momento, la Dirección
General de Ordenación profesional, Cohesión del SNS y Alta Inspección del Ministerio de Sanidad y Política Social ha dado un visto
bueno a un esquema de Certificación en Embriología Clínica de ASEBIR. Éste tiene varias fases, y en la actualidad se está procediendo
a su desarrollo y puesta en marcha, tal y como se está informando a los socios.

La apuesta es arriesgada, sobre todo cuando la incertidumbre de saber a qué puerto nos hará llegar es grande. Pero el mensaje es
claro, si algo podemos decir en el presente, es que la Embriología Clínica ha madurado lo suficiente como para reclamar un lugar
propio.

Carmen Ochoa, Antonio González, Josep Santaló y Manuel Ardoy
Comisión para la Especialidad de Embriología Clínica.

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PROTEÓMICA DEL ESPERMATOZOIDE HUMANO

Rafael Oliva Virgili1, Josep Maria Estanyol2, Sara de Mateo López1, Judit Castillo Corullón1, José Luis Ballescà Lagarda3
1
Servicio de Bioquímica y Genética Molecular, Centre de Diagnòstic Biomèdic, Hospital Clínic de Barcelona, y Laboratorio de Genética
Humana, Facultad de Medicina, Universidad de Barcelona.
2
Unitat de Proteòmica, Serveis de Suport a la Recerca, Facultad de Medicina, Universidad de Barcelona
3
Institut Clínic de Ginecología Obstetricia i Ginecologia, Hospital Universitari Clínic de Barcelona
e-mail: roliva@ub.edu
Fecha recepción: 16 abril 2010
Fecha aceptación: 18 abril 2010

LA TRANSICIÓN NUCLEOHISTONA- Mientras que la mayor parte del genoma organizados por protamina y en las
NUCLEOPROTAMINA Y ORGANIZACIÓN DEL de espermatozoide (alrededor de 85- regiones genómicas organizadas por las
DNA EN EL NÚCLEO DEL ESPERMATOZOIDE 95%) está fuertemente empaquetado en histonas no es al azar. Estudios recientes
forma de estructuras toroidales, basados en el análisis del genoma
La espermatogénesis es uno de los también es importante tener en cuenta paterno asociado a cada uno de estos
procesos que conlleva cambios más que alrededor del 5-15% del DNA de los dominios mediante microarrays, han
radicales en la estructura de la espermatozoides está organizado por permitido llegar a la conclusión básica
cromatina hasta dar lugar al proteínas histonas, muchas de las cuales de que las regiones asociadas a
espermatozoide maduro (Mezquita, son variantes específicas del nucleohistona se hallan asociadas con
1985; Oliva and Dixon, 1991). De forma espermatozoide (Fig. 1) (Gatewood et las regiones reguladoras de genes, lo
progresiva primero se desensambla la al., 1987; Oliva, 2006; Balhorn, 2007). que implica la existencia de marcas
estructura nucleosómica presente en las Se ha propuesto que las estructuras epigenéticas con una función potencial
espermatogonias, espermatocitos y toroidales de la nucleoprotamina, cada en el desarrollo embrionario (Arpanahi
espermátidas redondas, y es una con aproximadamente 50 kb de ADN, et al., 2009). En otro estudio reciente,
reemplazada transitoriamente por las podrían estar ancladas a la matriz basado en secuenciación genómica
proteínas de transición y por último por nuclear a través del DNA entre toroide y masiva, se ha detectado que las regiones
las protaminas (Mezquita, 1985; Oliva toroide (Shaman et al., 2007). asociadas a nucleosomas están
and Dixon, 1991; Oliva, 2006; Balhorn, Actualmente se sabe que la distribución significativamente enriquecidas en los
2007) (Fig. 1). de los genes en las regiones genómicas genes importantes para el desarrollo,
incluidos los genes imprintados, los
microRNAs, los genes Hox, y los
promotores de la transcripción de genes
del desarrollo y de factores de
señalización (Hammoud et al., 2009).
Además, se ha demostrado que las
modificaciones de histonas (H3K4me2,
H3K27me3) se localizan en
determinados loci correspondientes con
genes del desarrollo, y que los
promotores asociados a genes del
desarrollo se hallan hipometilados en el
espermatozoide, pero son metilados
durante la maduración (Hammoud et al.,
2009).

Además de estas marcas epigenéticas
determinadas por la distribución
diferencial de los genes en los dominios
asociados a la nucleohistona y a la
nucleoprotamina, hay otros tipos de
Figura 1. Representación esquemática de los cambios de la cromatina que ocurren durante la
información epigenética potencialmente
espermatogénesis. El lado izquierdo de la figura representa los cambios celulares durante la transmitida por el núcleo del
espermatogénesis y primeras fases del desarrollo embrionario. El lado derecho de esta figura representa espermatozoide. Una de las más
los cambios de la cromatina que tienen lugar durante la transición nucleohistona a nucleoprotamina en la conocidas y contrastadas es la
espermiogénesis y en las fases iniciales del desarrollo embrionario. Los cambios celulares en el lado
izquierdo de esta figura corresponden aproximadamente a las estructuras de la cromatina y actividades
metilación del DNA (Reik et al., 2001).
indicadas en el lado derecho. Las histonas están representadas en color rojo y el DNA se marca como líneas Más recientemente, la identificación de
azules. Basado en Oliva et al. (2009) con modificaciones. los RNAs presentes en el espermatozoide

A C T U A L I D A D
Rafael Oliva Virgili et al. Proteómica del espermatozoide humano.
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y la demostración de su transferencia al al., 2008; 2009). Una cuestión crucial es los precursores de protamina en un
oocito abren la posibilidad de un papel si estos factores de transcripción y las subconjunto de los pacientes (de Yebra
de éstos en la fecundación (Ostenmeyer proteínas recientemente identificados et al., 1998; Bench et al., 1998). Además
et al., 2004). Otra fuente de información en los núcleos representan vestigios del de estos estudios en pacientes
epigenética potencial podría ser la proceso de la espermatogénesis o bien subfértiles, la expresión de protaminas
presencia de otras proteínas en el núcleo están marcando algunas regiones del también se ha estudiado en respuesta al
del espermatozoide, además de las genoma paterno y poseen una función estrés térmico y se ha descrito que
histonas y de las protaminas (Oliva et epigenética (Oliva et al., 2008; 2009; episodios de fiebre alta se correlacionan
al., 2009). Rousseaux et al., 2008). con la aparición de precursores de
protamina P2 y con un aumento en la
La primera evidencia de la presencia de Anomalías en el contenido de protamina proporción de las histonas entre los 33 y
proteínas en el espermatozoide que en pacientes subfértiles fueron ya 39 días después de la hipertermia
podían resultar cruciales para el descritas hace más de 20 años (Balhorn (Evenson et al., 2000).
desarrollo del embrión fue el hallazgo de et al., 1988). Posteriormente, otros
que en los seres humanos y en la mayoría estudios confirmaron la relación entre Los resultados del contenido de
de los mamíferos (con la excepción del un contenido anormal de protaminas y protaminas y de histonas se han
ratón), el centrosoma se hereda de alteraciones en los parámetros correlacionado con alteraciones en la
forma paterna (Chatzimeletiou et al., seminales en estos pacientes infértiles integridad del DNA y con los resultados
2008). También se ha demostrado que (de Yebra et al., 1993; Mengual et al., de reproducción asistida (Bizarro et al.,
variantes de histonas presentes en el 2003; Aoki et al., 2005). Una de las 1998; Nasr-Esfahani et al., 2005; Aoki et
espermatozoide contribuyen a la causas potenciales de alteraciones en la al., 2006; Torregrosa et al., 2006;
formación de la cromatina cigótica en relación de protaminas (P1/P2) puede Domínguez-Fandos et al., 2007; de
humanos y que los procesos encontrarse en un procesamiento Mateo et al., 2008; Aitken and de Yuliis
epigenéticos, implementados durante la anormal de protamina 2 e incremento de et al., 2010).
espermatogénesis, permiten distinguir
el pronúcleo paterno en el embrión (van
der Heijden et al., 2008; de Mateo et al.,
2010). Diversas proteínas adicionales
presentes en los espermatozoides
podrían estar también relacionadas con
el desarrollo embrionario (Martínez-
Heredia et al., 2006; de Mateo et al.,
2007).

Más recientemente, el análisis
proteómico de las proteínas
identificadas en los espermatozoides
maduros ha proporcionado algunos
resultados inesperados. Por ejemplo,
hay factores de transcripción, proteínas
de unión al DNA y proteínas implicadas
en el metabolismo de la cromatina en
células que son transcripcionalmente
inactivas (Oliva et al., 2008; 2009). Los
catálogos correspondientes a los
proteomas de espermatozoide humano
ya están disponibles (Martínez-Heredia
et al., 2006; Baker et al., 2007; Oliva et
al., 2009). Es notable la presencia Figura 2. Estrategias disponibles para el estudio del proteoma del espermatozoide.
de proteínas como la histona
La extracción típica de protaminas a partir de espermatozoides consistente en la reducción de los puentes
acetiltransferasa y deacetilasa, histona disulfuro de las protaminas con ditiotritol (DTT) / hidrocloruro de guanidina, seguido de la extracción con
metiltransferasa, metiltransferasa del 0,5 M HCl, precipitación y purificación de las proteínas y su separación mediante electroforesis en gel de
ADN, la topoisomerasa, helicasa, factores poliacrilamida ácido (izquierda). Con esta estrategia es posible visualizar las proteínas nucleares
mayoritarias: una banda proteica prominente correspondiente a la protamina 1 (P1) y un conjunto de
de transcripción, zinc fingers, proteínas
bandas correspondiente a la familia de la protamina 2 (P2). Para analizar el proteoma total es posible
homeobox, proteínas cromodominio, recurrir a la electroforesis bidimensional de las proteínas del espermatozoide. Para ello se suele recurrir a
proteínas centrosómicas, y la telomerasa una primera dimensión a través de isoelectroenfoque, separando las proteínas atendiendo a su punto
en las células que son isoeléctrico (pI), seguido de una segunda dimensión a través de electroforesis en gel de poliacrilamida –
SDS, que separa a las proteínas por su peso molecular aparente. La identificación de las proteínas se realiza
transcripcionalmente inertes y que
entonces a través de espectrometría de masas. Una última estrategia mucho más robusta consiste en la
tienen al menos el 85% de su DNA generación inicial de péptidos, seguida de su separación mediante cromatografía líquida e identificación
empaquetado por protaminas (Oliva et mediante espectrometría de masas (derecha). Basado en Oliva et al. (2009) con modificaciones.

A C T U A L I D A D
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Identificación de proteínas del muestras distintas. Un método es el 2D- implicados, como resultar de utilidad en
espermatozoide y de sus alteraciones a DIGE que se basa en el marcado el diagnóstico, pronóstico, y desarrollo
través de técnicas proteómicas. diferencial utilizando fluorocromos de de nuevas estrategias terapéuticas.
las proteínas extraídas del control (por
Esencialmente se han utilizado dos ejemplo con verde) y de las células AGRADECIMIENTOS
alternativas diferentes para el estudio experimentales (por ejemplo con rojo).
proteómico de los espermatozoides a Esto es seguido de su mezcla y Subvencionado en parte gracias al
través de espectrometría de masas (MS): separación en la misma 2D, lo que proyecto del Ministerio de Ciencia y
1) electroforesis bidimensional (2D) permite detectar las proteínas Tecnología (BFU2009-07118), Fondos
seguida de la identificación por MALDI- aumentadas o disminuidas observando FEDER a R.O.
MS o cromatografía líquida LC-MS/MS, y la desviación de la fluorescencia hacia
2) la digestión inicial de proteínas para uno de los fluorocromos (Baker et al., REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
generar péptidos, seguido por su 2005; Oliva et al. ,2008). Otra
separación y análisis LC-MS/MS (Oliva et alternativa es la cuantificación y Aitken RJ, De Iuliis GN. On the possible
al., 2009; Baker and Aitken et al., 2009). comparación de la abundancia relativa origins of DNA damage in human
La primera alternativa implica de las distintas proteínas en geles spermatozoa. Mol Hum Reprod. 2010;16:3-13.
generalmente la separación de las independientes. Estrategias más
proteínas utilizando isoelectroenfoque y recientes desarrolladas se basan en el Aoki VW, Emery BR, Liu L, Carrell DT.
es seguida por una electroforesis en gel marcado isotópico no radioactivo de las Protamine levels vary between individual
de poliacrilamida en presencia de SDS muestras problema y control (Baker et sperm cells of infertile human males and
(SDS-PAGE) para separar las proteínas al., 2009; Oliva et al., 2009). correlate with viability and DNA integrity. J
en una segunda dimensión en función de Androl. 2006;27:890-898.
su peso molecular (Fig. 2). La primera descripción del potencial de
análisis proteómico 2D en el estudio de Aoki VW, Liu L, Carrell DT. Identification and
Esta alternativa ha sido ampliamente defectos en espermatozoides se realizó evaluation of a novel sperm protamine
utilizada en el pasado, permitiendo en un paciente con un fallo reiterado de abnormality in a population of infertile
identificar muchas proteínas presentes fecundación en técnicas de fecundación males. Hum Reprod. 2005;20:1298-1306.
en el espermatozoide (Com et al., 2003; in vitro (Pixton et al., 2004). El
Pixton et al., 2004; Martínez-Heredia et proteoma de este paciente mostró 20 Arpanahi A, Brinkworth M, Iles D, et al.
al., 2006; 2009). Pero de las dos diferencias en comparación con los Endonuclease-sensitive regions of human
alternativas, la capacidad de análisis de controles y se consiguió identificar spermatozoal chromatin are highly enriched
la generación inicial de péptidos y su varias proteínas diferenciales. in promoter and CTCF binding sequences.
análisis mediante LC-MS/MS es muy Posteriormente se ha conseguido Genome Res. 2009;19:1338-1349.
superior. Por ejemplo, a través de 2D y identificar proteínas diferenciales en
MALDI-TOF o LC-MS/MS es posible pacientes astenozoospérmicos, Baker MA, Aitken, RJ. Proteomic insights
identificar hasta unos pocos cientos de oligozoospérmicos y en pacientes con into spermatozoa: critiques, comments and
proteínas (de Mateo et al., 2007; alteraciones en el contenido de concerns. Expert Rev Proteom. 2009; 6:691-
Martínez-Heredia et al., 2008), mientras protaminas o en la integridad del DNA 705.
que con la generación inicial de péptidos (Baker et al., 2005; de Mateo et al.,
seguido de LC-MS/MS es posible llegar a 2007; Oliva, 2007; Martínez-Heredia et Baker MA, Reeves G, Hetherington L, Muller
identificar hasta alrededor de 1000 al., 2009; Botta et al., 2009; Siva et al., J, Baur I, Aitken RJ. Identification of gene
proteínas diferentes (Baker et al., 2007; 2010). La proteómica se ha aplicado products present in Triton X-100 soluble and
Oliva et al., 2009). también al estudio de los antígenos insoluble fractions of human spermatozoa
inmunogénicos presentes en los lysates using LC-MS/MS analysis. Proteomics
Actualmente el catálogo más amplio de espermatozoides, tanto con el fin de Clin Appl. 2007; 1:524-532.
las proteínas presentes en el comprender la esterilidad inmunológica
espermatozoide humano se ha como para identificar posibles Baker MA, Witherdin R, Hetherington L,
conseguido a través de LC-MS/MS con candidatos inmuno-anticonceptivos Cunningham-Smith K, Aitken RJ.
1056 productos génicos identificados y (Oliva et al. ,2009). Identification of post-translational
es complementario al obtenido modifications that occur during sperm
mediante 2D e identificación de las La aplicación de las técnicas de maturation using difference in two-
proteínas (de Mateo et al., 2007; Baker proteómica en andrología y en biología dimensional gel electrophoresis. Proteomics.
et al., 2007; Oliva et al., 2009). Además reproductiva se halla en sus inicios, pero 2005; 5:1003-1012.
de la generación de catálogos de las los datos disponibles hasta la fecha ya
proteínas, la proteómica se ha aplicado indican su enorme potencial. Es Balhorn R, Reed S, Tanphaichitr N. Aberrant
también a la identificación de la previsible que en un futuro permitan una protamine 1/protamine 2 ratios in sperm of
presencia de anomalías en pacientes disección molecular de las distintas infertile human males. Experientia. 1988;
estériles. Existen diversas estrategias causas de esterilidad masculina, 44:52-55.
para analizar el contenido diferencial de permitiendo tanto la identificación de
proteínas presentes en dos o más los mecanismos fisiopatogénicos Balhorn R. The protamine family of sperm

A C T U A L I D A D
Rafael Oliva Virgili et al. Proteómica del espermatozoide humano.
8

nuclear proteins. Genome Biol. 2007; 8:227. Evenson DP, Jost LK, Corzett M, Balhorn R. Oliva R, Martinez-Heredia J, Estanyol JM.
Characteristics of human sperm chromatin Proteomics in the study of the sperm cell
Bench G, Corzett MH, De Yebra L, Oliva R, structure following an episode of influenza composition, differentiation and function.
Balhorn R. Protein and DNA contents in and high fever: a case study. J Androl. 2000; Syst Biol Reprod Med. 2008; 54:23-36.
sperm from an infertile human male 21:739-746.
possessing protamine defects that vary over Oliva R, de Mateo S, Estanyol JM. Sperm cell
time. Mol Reprod Dev. 1998; 50:345-353. Gatewood JM, Cook GR, Balhorn R, Bradbury proteomics. Proteomics. 2009; 9:1004-1017.
EM, Schmid CW. Sequence-specific
Bizarro D, Manicardi GC, Bianchi PG, Bianchi packaging of DNA in human sperm Oliva R, de Mateo S, Ballescà JL (2009)
U, Mariethoz E, Sakkas D. In-situ chromatin. Science. 1987; 236:962-964. Proteomics in Andrology. In: Papers
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Reprod 1998; 4:127-132. Carrell DT, Cairns BR. Distinctive chromatin Eds.), Medimond International Proceedings.
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Botta T, Blescia S, Martínez J, Lafuente R, embryo development. Nature. 2009;
Brassesco M, Ballescà JL y Oliva R. 460(7254):473-478. Ostermeier GC, Miller D, Huntriss JD,
Identificación de diferencias proteómicas Diamond MP, Krawetz SA. Reproductive
en muestras oligozoospérmicas. Rev Int Martinez-Heredia J, de Mateo S, Vidal- biology: delivering spermatozoan RNA to
Androl. 2009; 7:14-9. Taboada JM, Ballesca JL, Oliva R. the oocyte. Nature. 2004; 429:154.
Identification of proteomic differences in
Chatzimeletiou K, Morrison EE, Prapas N, asthenozoospermic sperm samples. Hum Pixton KL, Deeks ED, Flesch FM, Moseley FL,
Prapas Y, Handyside AH. The centrosome and Reprod. 2009; 23:783-791. Bjorndahl L, Ashton PR, Barratt CL, Brewis
early embryogenesis: clinical insights. IA. Sperm proteome mapping of a patient
Reprod Biomed Online. 2008; 16:485-491. Martinez-Heredia J, Estanyol JM, Ballesca who experienced failed fertilization at IVF
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Com E, Evrard B, Roepstorff P, Aubry F, human sperm proteins. Proteomics. 2006; proteins compared with fertile donors: case
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A C T U A L I D A D
9

METABOLÓMICA Y REPRODUCCIÓN HUMANA
Imma Sánchez Ribas12, Francisco Domínguez2, Carlos Simon3.
1
IVI Barcelona, Fundación IVI, Embryomics, 2Embryomics, 3 IVI Valencia, Fundación IVI

INTRODUCCIÓN análisis cualitativo y cuantitativo de Sin embargo, con las -Ómicas tenemos
proteínas y metabolitos, respectivamente, una situación de acercamiento
Uno de los mayores retos en el campo de en una célula, un organismo o una inductivo, donde no hay una hipótesis
la reproducción humana es la selección muestra bajo distintas condiciones, con la real, y la estrategia es generar esta
de los embriones más apropiados a finalidad de obtener un perfil hipótesis desde los datos obtenidos,
transferir. Hasta la fecha, en los ciclos comprensible de todas las proteínas y provocando un descubrimiento del
de Fecundación In Vitro, la evaluación metabolitos de esa célula, organismo o conocimiento y pudiendo a posteriori
morfológica sigue siendo el método de muestra. Los metabolitos de bajo peso testar estas nuevas hipótesis de la forma
asesoramiento utilizado para escoger el molecular representan el producto final tradicional. El diseño experimental es
mejor embrión o blastocisto, pero este de procesos de regulación celular, y por lo muy importante en el acercamiento
método de selección es altamente tanto revela la respuesta de los sistemas inductivo, porque determinará qué
subjetivo y su modesto poder predictivo biológicos a una variedad de influencias experimentos nos van a dar la
y la variabilidad inter- e intra- genéticas, nutricionales y ambientales información que estamos buscando. La
observador limita su valor. (Singh and Sinclair, 2007) estrategia en la que un algoritmo elige
qué experimentos hacer es conocida
Además, seleccionar el mejor embrión a Aunque la metabolómica es obviamente como “aprendizaje activo” y es la
transferir no sólo significa escoger el complementaria a la genómica y estrategia de elección. Para ello
embrión que nos va a dar más proteómica, tiene ventajas especiales. debemos contar con sistemas
posibilidades de embarazo, sino que La tabla número 1 recoge las ventajas informáticos de alta complejidad
también es crucial escoger aquel del estudio del metaboloma en (Waidyanathan, 2003; Goodacre, 2004)
embrión que nos va a aumentar la tasa comparación con el del transcriptoma y
de recién nacido vivo en casa. el proteoma (Dunn and Ellis, 2003). ¿QUÉ ES LA METABOLÓMICA?

Actualmente, lo más novedoso en el CAMBIO EN LAS ESTRATEGIAS DE Existe un debate activo en la comunidad
estudio de la embriogénesis son las GENERACION DE HIPÓTESIS científica sobre la definición exacta de
técnicas -Ómicas. Son disciplinas que metaboloma. Fue definido por primera vez
estudian los eventos e interacciones de las Las -Ómicas están transformando el por Oliver y cols. (1988) como el
estructuras celulares y sus procesos, desde método de investigación. El obtener tal complemento cuantitativo de todas las
el DNA hasta la función biológica; es decir, grado de información ha implicado un moléculas de bajo peso molecular que se
desde los genes hasta los metabolitos. cambio en el ciclo del conocimiento. En el encuentran en las células en un estado
Todos los procesos que contribuyen en el ciclo del conocimiento tradicional, el fisiológico particular o de desarrollo. Otra
definición sustenta que el metaboloma
consiste en sólo aquellas moléculas
pequeñas y nativas que están participando
en reacciones metabólicas generales y que
son requeridas para el mantenimiento,
crecimiento y funcionamiento de la célula
(Beecher et al., 2003).

En términos generales, por
metabolómica (Nicholson et al., 1999;
Fiehn et al., 2002) se entiende la
obtención, de una manera simultánea y
global, de perfiles correspondientes a
múltiples concentraciones de
metabolitos y de sus fluctuaciones
fenotipo pasan a través de este complejo conocimiento previo se utilizaba para sistémicas y celulares en respuesta a
sistema, y la Genómica, Transcriptómica, construir una hipótesis para ser testada fármacos, dieta, genética, estilo de vida,
Proteómica y Metabolómica intentan experimentalmente. El experimento entorno y estímulos, de forma que sea
comprender cómo un embrión crece y producía datos que daban consistencia o posible caracterizar los efectos adversos
cuáles son sus indicadores de éxito. no a la hipótesis inicial. Es decir, la y beneficiosos de esas interacciones.
hipótesis era el punto de partida. El
Las tecnologías proteómica y acercamiento, por tanto, era hipotético- La metabolómica busca una descripción
metabolómica han desarrollado el deductivo. analítica de muestras biológicas

A C T U A L I D A D
Imma Sánchez Ribas et al. Metabolómica y reproducción humana.
10

complejas, e intenta caracterizar y De todas ellas, las tecnologías más biológico o clínico y explicar los
cuantificar todas las moléculas empleadas para el análisis mecanismos bioquímicos relacionados
pequeñas de ese tipo de muestras. Sin metabolómico son la espectrometría de con los cambios observados, y así
embargo, medir el metaboloma es un masas, que generalmente incluye un ampliar el conocimiento existente.
reto analítico considerable. Esto es paso de separación cromatográfica, y la
debido a la naturaleza lábil de los espectroscopia de RMN, dado que ambas ESPECTROMETRÍA DE MASAS (EM O MS) Y
metabolitos, el rango ampliamente plataformas proporcionan una amplia RESONANCIA MAGNÉTICA NUCLEAR (RMN)
dinámico y diverso de muchos de ellos, información estructural y
la complejidad química y heterogénea de conformacional sobre múltiples clases Tanto la EM como la RMN se emplean de
los mismos, la falta de técnicas químicas en un procedimiento analítico forma rutinaria en los estudios
analíticas automatizadas que puedan único. Las dos técnicas poseen metabolómicos.
medir cuantitativamente un gran diferentes ventajas y desventajas desde
número de metabolitos de estructura el punto de vista técnico, y suelen La EM es una herramienta de análisis
desconocida, el rendimiento de las ofrecer información complementaria metabólomico muy poderosa, ya que
mediciones y la naturaleza elaborada de (Lenz et al., 2007). Ambos métodos provee una única mezcla de sensibilidad,
los protocolos de extracción (Whitfield proporcionan información sobre un rapidez, calidad y análisis potencialmente
et al., 2004). amplio conjunto de metabolitos, sin tener cuantitativo de una gran cantidad de
que preseleccionar qué analitos deben ser metabolitos. Puede ser usada sola o en
PLATAFORMAS DE ANÁLISIS detectados. Esto nos permite diseñar combinación con otras técnicas de
experimentos basados en el cromatografía. Los análisis de EM
Todos estos desafíos deben ser razonamiento inductivo para generar requieren una preparación exhaustiva de
abordados por la plataforma de análisis nuevas hipótesis, siendo una vía la muestra y una extracción de la misma
empleados. Las plataformas para las potencial de descubrimiento de utilizando solventes orgánicos que
medidas del metaboloma deben ser conocimiento a través del holismo. pueden provocar la pérdida de algunos
imparciales, sensibles y con una gran Además, los dos métodos pueden compuestos.
capacidad de análisis de alto emplearse para identificar las estructuras
rendimiento para discriminar un gran de los metabolitos, y para medir las La RMN es una técnica no destructiva, no
número de metabolitos. A pesar del gran concentraciones relativas y absolutas. invasiva, y que no modifica el equilibrio
éxito en el desarrollo de la tecnología biológico, y proporciona una
información detallada sobre las
Fig 1.
estructuras moleculares en solución.
Además la espectroscopia de RMN es una
técnica muy fiable para las aplicaciones
metabolómicas que requieren un alto
grado de reproducibilidad.

Ambas técnicas permiten la detección
simultánea de un amplio rango de
metabolitos estructuralmente diversos y
la detección en bajas concentraciones de
los mismos.

metabolómica, aún no es posible OBJETIVOS DE LA METABOLÓMICA Es importante tener en cuenta que, sea
analizar con una única plataforma cual sea el origen de las muestras,
analítica la diversidad de metabolitos Todos los estudios metabolómicos dan deben evitarse fuentes potenciales de
complejos. La Fig. 1 indica las distintas lugar a un conjunto de resultados artefactos durante el proceso de
tecnologías para el análisis complejo, que requiere un software recogida de las muestras biológicas, con
metabolómico de muestras, así como las específico para su visualización y el fin de obtener resultados que posean
características más relevantes de las métodos quimiométricos y una buena calidad y fiabilidad.
mismas. El tipo de muestras que se bioinformáticos para su interpretación.
analiza mediante estas técnicas son El objetivo de estos experimentos es Análisis estadístico multivariable
biofluidos como orina, plasma o suero generalmente el de obtener huellas
previa precipitación de proteínas; bioquímicas que puedan ser útiles desde Los métodos de análisis estadístico
metabolitos intracelulares de plantas, un punto de vista diagnóstico o de multivariable proporcionan un medio de
microbios y animales, previa extracción clasificación, y, en un segundo lugar, el optimizar la extracción de la información
mediante solventes polares y no polares; de identificar las sustancias que contenida en los espectros de EM y RMN
tejidos sin previa o mínima preparación contribuyen a dicho diagnóstico o de mezclas complejas. Una vez realizados
y huellas metabólicas en secreciones clasificación, ya que éstas conforman un todos los pasos anteriores, lo que se tiene
naturales de metabolitos intracelulares conjunto complejo de biomarcadores es una serie (uno por muestra) de perfiles
hacia el volumen extracelular. que puede ayudar a definir el contexto multivariable que representan un punto

A C T U A L I D A D
11

en un espacio K-dimensional, y cuya emplea para revelar la estructura interna contienen módulos (B-Bioref-Code,
posición (coordinadas) depende de los de un conjunto de datos sin que medie Bruker BioSpin) que permiten la
valores de cada uno de los descriptores (o ningún tipo de conocimiento previo del identificación y asignación de metabolitos
metabolitos) que describen el sistema (la sistema. PLS, sin embargo, es un método presentes en mezclas complejas. Hay que
muestra). Cuando se trata de analizar una supervisado para regresión. En este tener en cuenta que las bibliotecas
serie de perfiles, resulta muy útil la caso, el objetivo es predecir las metabolómicas no son completas, y que
aplicación de lo que se denominan respuestas en un conjunto de datos. no todos los metabolitos hallados tienen
métodos basados en la proyección. Los Empleando una barrera de corte, PLS posibilidad de identificación.
métodos de proyección convierten tablas puede emplearse también para análisis
de datos multidimensionales en modelos basados en la clasificación y ASESORAMIENTO METABOLÓMICO DE
de dimensionalidad. Esto permite discriminación (PLS-DA, “Partial Least CALIDAD EMBRIONARIA
detectar además agrupaciones y Squares-Discriminant Analysis”).
tendencias, ya que puntos que se El metabolismo es intrínseco a la salud
encuentran cercanos corresponden a Identificación de metabolitos del embrión, por lo que muchas
perfiles multivariables relativamente investigaciones se han concentrado en
similares. De forma opuesta, puntos que Dependiendo del tipo de análisis que se desarrollar marcadores metabólicos no
se encuentran alejados unos de otros esté desarrollando, los estudios invasivos de capacidad de desarrollo,
presentan descriptores muy diferentes. metabolómicos pueden requerir la como el consumo de oxígeno, reacciones
identificación de los metabolitos REDOX, el consumo energético a través
Un ejemplo de lo explicado podemos verlo presentes en las muestras biológicas de Na+, K+ y ATPasa o el turnover de
en la Figura 2, donde puede apreciarse la analizadas. Este objetivo puede aminoácidos (Houghton et al., 2004).
Fig 2.
Las últimas investigaciones en las
técnicas moleculares están definiendo
perfiles génicos, proteicos y
metabolómicos para intentar detectar
cuál es el ovocito o embrión más hábil,
entendiendo esta habilidad como su
capacidad para implantar (Katz-Jaffe et
al., 2006; Patricio et al., 2007; Brison et
al., 2007; Seli et al., 2007)

Actualmente se están desarrollando
utilidad de esta herramienta para alcanzarse mediante la comparación entre técnicas cuantitativas para el
comprender los patrones que subyacen los desplazamientos químicos obtenidos asesoramiento no invasivo del
bajo la gran cantidad de información en los espectros de EM o RMN y aquellos metabolismo embrionario, y es el objetivo
generada en los estudios metabolómicos. disponibles en bases de datos como la de investigaciones actuales el determinar
Quedan patentes las relaciones entre las MMCD (Madison Metabolomics su valor como predictores de viabilidad
distintas muestras, pudiendo describir Consortium Database) (Cui et al., 2008)) embrionaria y embarazo (Seli et al., 2007).
agrupamientos, tendencias e influencias. o la HMDB (Human Metabolome
DataBase) (Wishart et al., 2007). Seli y col. publicaron en 2007 el primer
Aunque los métodos de proyección Alternativamente, existen programas estudio con un enfoque metabolómico
descritos forman la base de los estudios (p.ej., “Analysis of MIXtures”, AMIX, para estudiar la viabilidad del embrión
metabolómicos, los análisis estadísticos Bruker BioSpin) que permiten realizar humano. Ellos utilizaron como
dependen del tipo de estudio que se esté todas las etapas descritas anteriormente plataforma metabolómica de análisis el
desarrollando. Existe una gran variedad (selección de regiones de interés, Near-infrared and Raman spectroscopy,
de métodos que pueden emplearse en el segmentación del espectro, para analizar y comparar el perfil
análisis de datos metabolómicos. La normalización, análisis estadístico) y que metabolómico utilizando medios
principal diferencia entre todos ellos es condicionados provenientes de
si se dispone o no de información previa embriones que implantaron frente a los
Fig 3.
sobre la clasificación de muestras en que no implantaron. Aunque no
clases distintas, o si se sospecha la encontraron marcadores específicos, si
existencia de nuevas clases. Sin duda obtuvieron distintos espectros entre
alguna, los métodos más empleados de ambos grupos, siendo posible diferenciar
análisis multivariable son los fácilmente ambas poblaciones La Fig 3
denominados PCA (análisis de muestra los distintos espectros que
componentes principales (Holmes, obtuvieron de los medios de cultivo
1998)) y PLS (mínimos cuadrados embrionario analizados de cada una de las
parciales (Wold et al., 1984)). El PCA es muestras utilizadas en el estudio (Seli et
un método no supervisado que se al., 2007).

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Imma Sánchez Ribas et al. Metabolómica y reproducción humana.
12

El mismo grupo, en 2008, publica la Fig 4.
identificación de marcadores de
viabilidad utilizando análisis
metabolómico mediante NMR, en un
estudio retrospectivo realizado en 34
pacientes. Explican encontrar
diferencias significativas en
concentraciones de glutamato entre
embriones procedentes de embarazos
y/o partos y embriones procedentes de
fallo de implantación (Seli et al., 2008).

Otra aplicación de la metabolómica en el
campo de la Reproducción Humana es el
que estamos llevando en el Instituto
Valenciano de Infertilidad, con el apoyo
de la Fundación IVI. Nuestro objetivo muestras procedentes de embriones con R. Predicting human embryo viability: the road
es desarrollar un diagnóstico diagnóstico de aneuploidías se concentran to non-invasive análisis of the secretome using
preimplantacional no invasivo con la en un área distinta. metabolomic footprinting. Reproductive
ayuda de estas nuevas tecnologías. BioMedicine Online 2007; 15. 296-302.
Pretendemos encontrar un perfil DISCUSIÓN
metabolómico embrionario que nos Cui Q et al. Metabolite identification via the
permita discriminar los embriones El método de evaluación tradicional Madison Metabolomics Consortium Database.
normales de los embriones aneuploides, embrionario tiene una capacidad limitada Nat Biotechnol 2008; 26: 162-164.
utilizando el medio de cultivo donde para seleccionar embriones con desarrollo
éstos se desarrollan. potencial. Hay una clara necesidad de Dunn W, Ellis D. Metabolomics : current
mejora en nuestro trabajo diario; analytical platforms and methodologies.
La instrumentación de análisis deberíamos ser capaces de aumentar las Trends in analytical chemistry 2005; 24: 285-
metabolómico que estamos utilizando es tasas de gestación y disminuir el riesgo de 294.
la Espectrometría de Masas asociada a gestación múltiple. Actualmente existen
UPLC. El sistema de UPLC ha sido nuevas tecnologías en desarrollo para Fiehn O. Metabolomics – the link between
diseñado para detectar partículas conseguir este objetivo, pudiendo ser genotypes and phenotypes. Plant Mol Biol
pequeñas (1,7 mm) y encontrar así tecnologías que utilicemos en un futuro 2002; 48: 155-71.
perfiles de alta resolución. Por lo tanto, como herramientas útiles de selección
este sistema es óptimo para el análisis embrionaria, así como tecnologías que Goodacre R, Vaidyanathan S, Dunn W, Harrigan
de muestras de alta complejidad, como nos permitan expandir el conocimiento de G and Kell D. Metabolomics by numbers:
nuestros medios de cultivo, debido al la fisiología embrionaria con el objetivo acquiring and understanding global
alto poder de separación metabólica y de aumentar la eficacia de las Técnicas de metabolite data. Trends in Biotechnology
resolución de picos. Reproducción Asistida. 2004; 22: 245-252.

En los análisis llevados a cabo hasta la La capacidad de evaluar la producción y Holmes E, Nicholson J, Nicholls A, Lindon J,
fecha, hemos observado que el perfil consumo metabolómico de un embrión Connor S, Polley S, Connelly J. The
metabólico de los medios de cultivo individual nos llevaría a una mejor identification of novel biomarkers of renal
de los embriones humanos parece comprensión de la función celular y toxicity using automatic data reduction
discriminar entre embriones fisiología en etapas específicas de la techniques and PCA of proton NMR spectra of
cromosómicamente normales y embriogénesis. Por otra parte, este urine Chemometrics and Intelligent
anormales, aunque existen limitaciones enfoque nos ayudaría a mejorar los Laboratory Systems. 1998; 44: 245-255.
debidas a la baja cantidad de medios de cultivo de embriones y
metabolitos presentes en las muestras. podríamos identificar las interacciones Houghton F, Leese H. Metabolism and
entre los embriones y el epitelio uterino developmental competence of the
La Fig 4 es un score-plot donde cada punto materno antes de la implantación. preimplantational embryo. Europ Jour of Obst
representa un medio de cultivo Gyn Reprod Bio 2004.115S. S92-S96.
embrionario, lo que nos permite apreciar REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
la relación que hay entre las muestras. La Johnson HE, Broadhurst D, Goodacre R, Smith
tendencia observada es que muestras Beecher,CWW. The human metabolome. In AR. Metabolic fingerprinting of salt-stressed
procedentes de embriones diagnosticados metabolic profiling: its role in biomarker tomatoes. Phytochemistry 2003; 62: 919-28.
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preimplantacional para screening de pp. 311-319. Katz-Jaffe M, Gardner D, Schoolcraft W.
aneuploidías (PGD-AS) se concentran en Proteomic analysis of individual human
un área del diagrama de coordenadas, y Brison DR, Hollywood K, Arnesen R, Goodacre embryos to identify novel biomarkers of

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13

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A R T Í C U L O I

14

EFECTO DEL PROCESO DE VITRIFICACIÓN SOBRE LA ESTRUCTURA
DEL HUSO MEIÓTICO Y ORGANIZACIÓN CROMOSÓMICA EN
OVOCITOS HUMANOS EN METAFASE II
EFFECT OF VITRIFICATION PROCEDURE ON SPINDLE AND CHROMOSOME
CONFIGURATION IN METAPHASE II HUMAN OOCYTES

Cristina Costana Duque*1, Javier Alfonso2, Rita Cervera3, Ana Monzó1,2, Vicente Montañana 1,2, Miodrag Stojkovic3, Alberto Romeu 1,2
1
Unidad de Reproducción Humana (Servicio de Ginecología). Hospital Universitario la Fe, Valencia. 2Instituto de Medicina Reproductiva (IMER),
Valencia. 3Laboratorio de Reprogramación Celular, Centro de Investigación Príncipe Felipe (CIPF), Valencia.
*Unidad de Reproducción Humana (Servicio de Ginecología). Hospital Universitario la Fe, Valencia. Av/ Campanar 21, 46009, Valencia.
e-mail: cristinacostana@hotmail.com
Fecha recepción: 30 abril 2010 · Fecha aceptación: 3 mayo 2010

RESUMEN
El objetivo de este trabajo fue evaluar el efecto de la técnica de vitrificación utilizando el método del Cryotip™ sobre la
integridad del huso meiótico y la organización cromosómica en ovocitos humanos en metafase II. La configuración del huso
meiótico y de la placa metafásica de los ovocitos frescos (control) y vitrificados se evaluó mediante microscopía confocal. La
tasa de supervivencia para los ovocitos desvitrificados fue del 91,6%. La proporción de ovocitos que mostró una configuración
normal del huso meiótico y de la placa metafásica fue similar en ovocitos frescos y vitrificados, sugiriendo que la técnica de
vitrificación con el Cryotip™ permite mantener el potencial de los ovocitos una vez desvitrificados. Rev Asoc Est Biol Rep 2010;
15(1):14-17.
Palabras clave: ovocitos metafase II, vitrificación, huso meiótico, organización cromosómica.

ABSTRACT
The aim of this study was to evaluate the effect of vitrification procedure using the Cryotip™ method on spindle and
chromosome configurations in metaphase II human oocytes. The meiotic spindle and chromosome configurations in fresh
(control) and vitrified oocytes were studied by confocal microscopy. Survival rate for vitrified oocytes was 91.6%. The
proportion of oocytes showing normal spindle and chromosome configuration was similar for fresh and vitrified oocytes
showing that vitrification with the Cryotip™ method supports oocyte potential after warming. Rev Asoc Est Biol Rep 2010;
15(1):14-17.
Keywords: metaphase II oocytes, vitrification, meiotic spindle, chromosome configuration

INTRODUCCIÓN la sincronización donante-receptora en Los microtúbulos, que conforman el
ciclos de donación de ovocitos o, huso meiótico, y los microfilamentos,
La criopreservación de ovocitos permite simplemente, en mujeres fértiles que localizados en el córtex ovocitario, son
preservar la fertilidad en pacientes que deseen posponer la maternidad. muy susceptibles a la temperatura de
por diversas etiologías pueden enfriamiento (chilling) y a la exposición
desarrollar un Fallo Ovárico Prematuro La criopreservación ovocitaria utilizando a los crioprotectores (Boiso et al.,
(FOP). Es el caso de exposición a agentes la técnica de congelación convencional se 2002). Una alteración en estas
quimio/radioterápicos, enfermedades considera un procedimiento estructuras podría conducir a una
autoinmunes o hematológicas, o experimental, debido a las bajas tasas de alineación cromosómica incorrecta
procesos quirúrgicos potencialmente supervivencia y gestación y al limitado previa a la extrusión del corpúsculo
esterilizantes. La criopreservación número de recién nacidos logrado (ASRM, polar, a una segregación cromosómica
ovocitaria puede emplearse también 2006). Los protocolos de alterada, fecundación anómala y/o a una
para evitar la criopreservación de congelación/descongelación elevada incidencia de aneuploidías.
embriones, para rescatar ciclos convencionales conllevan una reducción
complicados con un síndrome de lenta de la temperatura en el tiempo, La vitrificación combina tasas de
hiperestimulación ovárica o con resultando en el daño de estructuras enfriamiento del orden de -15.000º C a -
ausencia de muestra seminal el día de la vitales de los ovocitos. 30.000º C por minuto (Liebermann et al.,
punción-aspiración folicular, para evitar 2003) y concentraciones elevadas de

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15

crioprotectores, aumentando de tal hiperestimulación ovárica controlada compuestas por medio 199 con
manera su viscosidad que no cristaliza que incluyó, como frenado hipofisario, concentraciones decrecientes de
sino que forma un estado amorfo similar agonistas de la GnRH en protocolo largo sacarosa (1.0M y 0.5M).
al vidrio. y como estimulación FSH recombinante.
Los ovocitos se recuperaron por punción La supervivencia ovocitaria se evaluó
La técnica de vitrificación permite burlar transvaginal ecoguiada, 36-38 horas inmediatamente tras la desvitrificación
dos de los factores que limitan el éxito tras la administración de la hCG. Los y tras 4 horas de cultivo in vitro,
de la criopreservación: por un lado, el complejos cúmulo-ovocito fueron valorándose la integridad de la zona
proceso conocido como chilling injury cultivados en medio IVF (Universal IVF pelúcida, la apariencia del citoplasma y
(Vatja and Kuwayama, 2006) y, por otro, Medium, Medicult, Jyllinge, Denmark) la ausencia de lisis celular.
la formación de cristales de hielo en el bajo condiciones de cultivo estándar
interior de las células (Mazur, 1984). El (37º C y 5% de CO2). Tras al menos 2 Fijación y tinción inmunocitoquímica:
primero se define como el daño horas de cultivo in vitro, los ovocitos
irreversible tras la exposición de las fueron incubados con 80 IU/mL La fijación de los ovocitos y tinción
células a bajas temperaturas (de + 15º C hialuronidasa (Hyadase, Medicult, inmunocitoquímica del huso meiótico se
a -5º C) antes de que se produzca la Jyllinge, Denmark) y las células del realizó siguiendo el protocolo descrito
enucleación del hielo. En consecuencia, cúmulo fueron eliminadas mediante el por Lin et al. (2008).
estructuras celulares como el pipeteado mecánico de los ovocitos. Los
citoesqueleto o las membranas celulares ovocitos fueron entonces observados Brevemente, los ovocitos MII
se ven claramente afectadas. El utilizando un microscopio invertido desvitrificados y frescos (grupo control)
fenómeno del chilling puede minimizarse (x200) y los ovocitos MII se identificaron fueron fijados a 37ºC durante 1 hora en
durante el proceso de vitrificación por la presencia del primer corpúsculo una solución de formaldehído al 2% y
mediante el empleo de tasas de polar. permeabilizados en una solución de
enfriamiento elevadas (Liebermann et Tritón X-100 al 0.5% durante 30
al., 2003). La velocidad de enfriamiento Se vitrificaron un total de 12 ovocitos en minutos a temperatura ambiente. Para
de la muestra va a depender del volumen estadio de MII recuperados de pacientes la tinción de la tubulina, los ovocitos se
de la solución de vitrificación, así, a incluidas en el Programa de Fecundación incubaron durante 90 minutos a 37ºC en
menor volumen, mayor velocidad de in vitro del Instituto de Medicina una solución de anticuerpos primarios
enfriamiento, aumentando ésta Reproductiva (IMER) de Valencia que anti-α y anti-β tubulina (1/400), seguido
mediante la inmersión directa en firmaron el correspondiente de 3 lavados y se incubaron durante 120
nitrógeno líquido. Para evitar la consentimiento informado. Como grupo minutos a 37ºC en una solución de
formación de cristales de hielo, en la control (ovocitos MII no vitrificados), se anticuerpo secundario Alexa 488
técnica de vitrificación se emplean incluyeron 6 ovocitos procedentes de (1/200). Para la tinción de
elevadas concentraciones de pacientes pertenecientes al Programa de microfilamentos, los ovocitos se
crioprotectores (Liebermann et al., Fecundación in vitro de la Unidad de incubaron en una solución de rodamina-
2003), sin olvidar su efecto tóxico para Reproducción del Hospital Universitario faloidina durante 60 minutos a
las células. Sin embargo, una la Fe de Valencia, previa firma del temperatura ambiente. Finalmente, los
composición adecuada de consentimiento de participación en un ovocitos fueron montados utilizando
crioprotectores puede solventar los Proyecto de Investigación desarrollado en medio de montaje con DAPI y
efectos tóxicos y osmóticos debidos a la el Centro de Investigación Príncipe Felipe mantenidos a 4ºC hasta su evaluación.
alta concentración de crioprotectores en (CIPF) de Valencia y con licencia por parte
la solución de vitrificación. La mezcla de del Instituto de Salud Carlos III. Evaluación del huso meiótico:
crioprotectores más utilizada es la
formada por etilenglicol (EG), Protocolo de vitrificación: Para la valoración de los microtúbulos,
dimetilsulfóxido (DMSO) y sacarosa. microfilamentos y cromosomas, se
Para la vitrificación ovocitaria se utilizó utilizó un microscopio confocal con
El objetivo de este estudio fue evaluar el el kit comercial de Irvine Scientific con lasser-scanning (Leica DM IRE 2)
efecto de la criopreservación ovocitaria el Cryotip™ como contenedor. Los equipado con un láser de argón,
mediante la técnica de vitrificación con ovocitos fueron equilibrados en una perteneciente al Servicio de Microscopía
un sistema cerrado (Cryotip™) sobre la solución compuesta por 7.5 % (v/v) de Confocal del CIPF de Valencia.
integridad del huso meiótico y la DMSO + 7.5% (v/v) de EG + 20%
organización cromosómica en ovocitos suplemento sustitutivo de suero en RESULTADOS
humanos Metafase II (MII). medio 199. Posteriormente, fueron
expuestos a la solución de vitrificación Se vitrificaron y desvitrificaron 12
MATERIAL Y MÉTODOS compuesta por 15 % (v/v) de DMSO + ovocitos MII. La tasa de supervivencia
15% (v/v) de EG + 0.5M de sacarosa + fue del 91,6% (11/12). Todos los
Ovocitos MII: 20% suplemento sustitutivo de suero en ovocitos que sobrevivieron a la
medio 199 y cargados en el Cryotip™. desvitrificación mostraron una
A todas las pacientes que formaron parte Para la desvitrificación, los ovocitos apariencia morfológica normal tras 4
del estudio se les aplicó un protocolo de fueron expuestos a soluciones horas de cultivo in vitro.

A R T Í C U L O I
Cristina Duque et al. Efecto del proceso de vitrificación sobre la estructura del huso meiótico.
16

Se fijaron para tinción correcta segregación cromosómica y AGRADECIMIENTOS
inmunocitoquímica 10 ovocitos MII evitar así la posible aparición de
desvitrificados y 6 ovocitos MII frescos. aneuploidías en el embrión. Aunque sólo Este estudio ha sido parcialmente
La tasa de ovocitos informativos fue del se observaron anomalías en el huso financiado por el Programa de Medicina
100% para el grupo control y del 70% meiótico/cromosomas en el grupo Regenerativa del Instituto de Salud
para los ovocitos desvitrificados. Esta de ovocitos desvitrificados, las Carlos III.
menor tasa de informatividad para diferencias no fueron estadísticamente
ovocitos desvitrificados fue debida a significativas respecto al grupo control REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
problemas acontecidos durante la (frescos). Estos resultados son similares
tinción, con independencia de la técnica a los descritos en la bibliografía (Li et Boiso I, Martí M, Santaló J. A confocal
de vitrificación. al., 2006; Cobo et al., 2008). microscopy analysis of the spindle and
chromosome configurations of human
En función de la orientación del La vitrificación utilizando el Cryotip™ oocytes cryopreserved at the germinal
complejo huso/cromosomas respecto al como contenedor permite la vitrificación vesicle and metaphase II stage. Human
plano focal, se consideró una de ovocitos en microvolúmenes (alrededor Reprod 2002; 17: 1885-1891.
configuración normal si: a) cuando al de 1 μL), incrementando la tasa de
estar orientado de forma paralela al enfriamiento y minimizando el efecto Cobo A, Pérez S, De los Santos MJ, Zulategui
plano focal el huso presenta una tóxico de los crioprotectores al disminuir J, Domingo J, Remohí J. Effect of different
estructura típica en forma de barril con su concentración. El mantenimiento de la cryopreservation protocols on the
los polos ligeramente señalados y los integridad del huso meiótico y de la placa metaphase II spindle in human oocytes.
cromosomas dispuestos en el ecuador, metafásica tras la desvitrificación sugiere Reprod Biomed Online 2008; 3: 350-359.
b) cuando al estar orientado de forma que dicha técnica de vitrificación permite
perpendicular al plano focal el huso preservar la calidad inicial del ovocito y el Li Y, Feng HL, Cao HL, Zheng GJ, Yang Y,
presenta una estructura circular con los potencial necesario para soportar el Mullen S, Critser JK, Chen ZJ. Confocal
cromosomas orientados en forma de posterior desarrollo embrionario. microscopic analysis of the spindle and
círculo y c) cuando al estar orientado de
forma oblicua al plano focal el huso
presenta una estructura en forma oval
(barril acortado) con los cromosomas
alineados en el ecuador. Por otro lado,
una configuración anómala del complejo
huso/cromosomas quedó representada
por una desorganización parcial o
completa de los microtúbulos o por una
dispersión cromosómica o apariencia
cromosómica aberrante o poco
condensada. En las Figuras 1 y 2 se
muestran una configuración normal y
una anómala del complejo
huso/cromosomas, respectivamente.

La proporción de ovocitos con una Figura 1: Configuración normal del complejo huso meiótico-placa metafásica.
configuración normal del huso meiótico
y una alineación correcta de los
cromosomas fue del 100% para los
ovocitos del grupo control y de 85,7%
para los ovocitos desvitrificados, sin que
se observaran diferencias significativas
entre ambos grupos.

DISCUSIÓN

En este trabajo se evalúa el efecto de la
técnica de vitrificación con un sistema
cerrado (Cryotip™) sobre la
configuración del huso meiótico y la
organización cromosómica en ovocitos
humanos en estadio de MII. La
integridad de este complejo es
imprescindible para que se produzca una Figura 2: Configuración anómala del complejo huso meiótico-placa metafásica.

A R T Í C U L O I
17

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A R T I C U L O I I
19

LAS VARIANTES CROMOSÓMICAS AFECTAN LA CALIDAD
EMBRIONARIA
CHROMOSOMAL VARIANTS AFFECT EMBRYO QUALITY

Mireia Poveda1, Teresa Rubio2, Isabel Ochando3, Laura Gil1, Manuel Lloret1, José Jesús López-Gálvez1, Antonio Urbano3, Juan Manuel Moreno1,
Joaquín Rueda3,4.
1
Unidad de Reproducción, Hospital Clínica Vistahermosa de Alicante
2
Unidad de Reproducción, Clínica Virgen de la Vega, Murcia
3
Unidad de Genética, Hospital Clínica Vistahermosa de Alicante
4
Área de Biología Celular, Universidad Miguel Hernández, Alicante
e-mail: lab@urvistahermosa.com · Fecha recepción: 30 abril 2010 · Fecha aceptación: 10 mayo 2010

RESUMEN
El objetivo de este estudio es evaluar si la presencia de alguna variante cromosómica en el cariotipo puede afectar a los
resultados de los ciclos de ICSI.
Se ha realizado un estudio prospectivo de 81 ciclos de ICSI realizados en nuestro centro en los que algún miembro de la pareja
presenta variantes cromosómicas y 169 ciclos de pacientes sometidos a la misma técnica pero con cariotipos normales. En
estos ciclos, se ha obtenido la media de ovocitos recuperados, media de ovocitos maduros, tasa de fecundación, porcentaje de
fallos de fecundación, porcentaje de embriones de grado A-B transferidos y tasa de gestación y aborto. Los resultados muestran
que las variantes más frecuentes son las que afectan al cromosoma 9. Se observa que existen diferencias significativas en la
calidad de los embriones que se transfieren, empeorando en los ciclos con variantes cromosómicas. Los resultados nos sugieren
que las variantes cromosómicas pueden tener un efecto sobre la gametogénesis, por lo que los embriones generados en estos
ciclos de ICSI en los que algún miembro de la pareja presenta variantes cromosómicas son de peor calidad, pero este hecho no
afecta a la viabilidad embrionaria. Rev Asoc Est Biol Rep 2010; 15(1):19-23.
Palabras clave: infertilidad, variante cromosómica, gametogénesis, calidad embrionaria.

ABSTRACT
The aim of this study is to assess whether the presence of some variant chromosome in the karyotype may affect the outcome
of ICSI cycles.
We performed a prospective study of 81 ICSI cycles performed in our center in which one partner has chromosomal variants and
169 cycles of patients undergoing the same technique but with normal karyotypes. In these cycles, we have obtained the
average of oocytes retrieved, mean mature oocytes, fertilization rate, fertilization failure rate, percentage of A-B grade
embryos transferred and pregnancy rate and abortion.
The results show that the most frequent variants are affecting chromosome 9. It is noted that there are significant differences
in the quality of embryos transferred in cycles with worsening chromosome variants. We suggest that chromosome variants
may have an effect on gametogenesis, so that the embryos produced in these cycles of ICSI in which a partner has chromosome
variants are worst but this not affect embryonic viability. Rev Asoc Est Biol Rep 2010; 15(1):19-23.
Keywords: infertility, chromosomal variation, gametogenesis, embryo quality.

INTRODUCCIÓN que no se expresan o que se expresan en solamente al tamaño, sino también a la
algún momento (como el corpúsculo de localización de la heterocromatina;
El genoma se divide en dos partes Barr) y la heterocromatina constitutiva, aparentemente no tienen traducción
funcionalmente diferentes y que se formada por secuencias altamente fenotípica (Mattei et al., 2003) y se
pueden visualizar en los cromosomas en repetidas y comprimidas como secuencia conocen como variantes cromosómicas.
forma de eucromatina y satélite, generalmente pobres en genes. Las variantes se deben al aumento de
heterocromatina. La eucromatina es la Esta heterocromatina es polimórfica, heterocromatina constitutiva y suelen
parte más activa del genoma y más rica probablemente debido a la intensidad ser más frecuentes en los cromosomas 1,
en genes. La heterocromatina se divide del ADN satélite. 9, 16 y en los acrocéntricos. Estas
en heterocromatina facultativa, que variantes cromosómicas se identifican a
contiene información de algunos genes Estos polimorfismos pueden afectar no nivel microscópico y pueden tener

A R T Í C U L O I I
Mireia Poveda et al. Las variantes cromosómicas afectan la calidad embrionaria.
20

diferente tamaño, morfología y En todos estos ciclos se han obtenido los confirmar el embarazo. Se consideró
propiedades tintoriales, pudiéndose siguientes datos: media de ovocitos gestación clínica cuando se visualizó
trasmitir a la descendencia o aparecer de recuperados, media de ovocitos latido cardiaco fetal.
novo, estimándose su incidencia de un maduros, tasa de fecundación,
3,12% en la población general (Bhasin, porcentaje de fallos de fecundación, Estudio citogenético
2005). Se sabe que muchos de los genes porcentaje de embriones de buena
necesarios para la viabilidad calidad (grado A-B) transferidos y tasas El estudio del cariotipo se llevó a cabo en
embrionaria y la fertilidad residen en la de gestación clínica y aborto. linfocitos de sangre periférica,
heterocromatina; es por ello que la cultivados a 37º C durante 72 horas en
presencia de estas variantes se ha Se ha comparado también la presencia dos cultivos paralelos con Chromosome
relacionado con diferentes procesos de variantes por sexos, con el fin de (Genycell Biotech) y RPMI suplementado
patológicos entre los que está la observar si la presencia de las variantes con suero fetal y fitohemaglutinina.
infertilidad (Madon et al., 2005; cromosómicas tiene el mismo efecto
Minocherhomji et al., 2009). sobre los ciclos de ICSI, si se presenta en Se analizaron un mínimo de 20
el cariotipo del hombre o en el de la metafases y se cariotiparon al menos 3
Algunos estudios señalan que en casos mujer. metafases por caso, teñidas con bandas
de abortos espontáneos y en la G (Seabright, 1971), según las
infertilidad idiopática, la presencia de Procedimiento FIV-ICSI directrices de la ECA (European
variantes cromósomicas en uno o ambos Cytogeneticists Association) (Hastings
miembros de la pareja es más frecuente A todas las mujeres se les aplicó un et al., 2007).
(Dubey et al., 2005). Además, estudios protocolo de hiperestimulación ovárica
recientes han demostrado que existe controlada (HOC), siguiendo los Análisis estadístico
una mayor prevalencia de las anomalías protocolos de estimulación largo con
cromosómicas numéricas y variantes agonistas, con antagonistas o corto, Se utilizó el test de la Chi-cuadrado de
polimórficas en pacientes sometidos a dependiendo de la indicación Pearson para calcular la significación
procesos de reproducción asistida, tales ginecológica. En todos ellos se utilizó estadística de los datos y analizar la
como la fecundación in vitro e inyección para la estimulación ovárica medicación correlación, si la hay, entre las variables
intracitoplasmática de espermatozoides recombinante. La ovulación fue inducida de los grupos con variante y sin variante
(Minocherhomji et al., 2009), teniendo con 10.000 UI de hCG, que se administró cromosómica. Para ello, se utilizó el
en estos ciclos menores tasas de cuando los folículos alcanzaron un programa SPSS. Se ha considerado que
embarazo e implantación (Scholtes et diámetro igual o mayor de 18 mm. La existen diferencias significativamente
al., 1998). El objetivo de nuestro estudio punción folicular se efectuó por vía estadísticas cuando p<0,05.
es evaluar si la existencia en el cariotipo transvaginal ecoguiada a las 36 horas de
de alguna variante cromosómica puede la inyección de hCG. La fase lútea fue RESULTADOS
afectar a los resultados de los ciclos de apoyada con progesterona vía vaginal u
ICSI. oral, comenzando el mismo día de la De los 250 ciclos de ICSI estudiados a los
punción. que se les realizó un estudio
MATERIAL Y MÉTODOS citogenético, se encontró alguna
Los ovocitos recuperados fueron variante polimórfica del cariotipo en 81
Se ha realizado un estudio prospectivo fecundados siguiendo el protocolo ciclos; en tres de estos ciclos ambos
de 250 ciclos de ICSI, de los cuales en 81 estándar, utilizando los medios de miembros de la pareja presentaban
de ellos al menos un miembro de la cultivo comerciales Vitrolife®. La algún tipo de variante. En éstos se
pareja presentaba una variante fecundación de los ovocitos se confirmó observó que las variantes cromosómicas
cromosómica en el cariotipo. Los con la presencia de dos pronúcleos y dos más frecuentes fueron las que afectan al
resultados de estos 81 ciclos se han cuerpos polares entre las 16-19 horas cromosoma 9, presente en un 73% de los
comparado con 169 ciclos realizados tras la inseminación. A los embriones casos (el 37% de los ciclos en mujeres y
desde Junio a Septiembre de 2008 de procedentes de estos ciclos, se les el 36% en hombres), siendo la variante
pacientes no seleccionados, sometidos a realizó un seguimiento de su evolución y 9qh+ la que se presentó con más
la misma técnica pero con cariotipos aspecto morfológico desde el día de la frecuencia, en un 65% de los casos. La
normales. punción hasta el día de su transferencia variante 21ps+ se presenta en un 14,3%
(67-71 horas post-ICSI). Dependiendo de los ciclos en mujeres y en un 7,14% de
De los ciclos estudiados, se excluyeron de su morfología y desarrollo, estos los ciclos en hombres. El resto de
los ciclos en los que se ha utilizado embriones fueron catalogados en cuatro variantes está en un porcentaje inferior
semen procedente de biopsia testicular categorías siguiendo los criterios de al 10%. La distribución de los pacientes
y ciclos en los que el número de ovocitos valoración morfológica de ASEBIR portadores de algún tipo de variante
recuperados es menor a 3, eliminando (Ardoy et al., 2007). cromosómica se muestra en la Tabla I, y
así tanto el factor masculino severo en la Figura 1 se identifica algunos
como las bajas respondedoras, en los La transferencia se realizó mediante cromosomas con variantes cromatínicas.
que los fallos de fecundación son más control ecográfico y dos semanas
frecuentes. después se solicitó una ß-hCG para Los resultados de los ciclos de ICSI en

21

fecundación es muy similar en ambos
grupos, el porcentaje de fallos de
fecundación es mayor, pero no
significativo, en los ciclos en los que
alguno de los miembros de la pareja
tiene alguna variante de la normalidad
que en los ciclos con cariotipos
normales. Se observan diferencias
estadísticamente significativas en la
cantidad de embriones de buena calidad
transferidos en día 3 de cultivo, de forma
que los embriones obtenidos en los ciclos
donde algún miembro de la pareja tiene
un cariotipo con variante cromosómica
son significativamente de peor calidad
que los embriones obtenidos en los ciclos
donde los progenitores tienen cariotipos
Figura 1. Diferentes tipos de variantes que implican a distintos cromosomas. normales.

Las tasas de embarazo y aborto fueron
muy similares en ambos grupos, sin
presentar diferencias estadísticamente
significativas.

En cuanto a los resultados obtenidos si
comparamos el efecto de las variantes
por sexos, no observamos diferencias
significativas en ningún parámetro
(Tabla III).
Tabla I. Distribución de los pacientes portadores de variantes cromosómicas.
DISCUSIÓN

El resultado más importante del
presente trabajo es que las variantes
cromosómicas tienen relación directa
con la calidad embrionaria, si bien este
hecho parece no afectar a la viabilidad
del embrión.

Se sabe que los factores genéticos tienen
un papel muy importante en la
esterilidad (Matzuk et al., 2008). Las
razones genéticas de la infertilidad son
complejas y tienen distintas
consecuencias. Estas causas pueden ser
cromosómicas, monogénicas o
multifactoriales, y pueden afectar a
cualquier etapa del desarrollo
embrionario (Shah et al., 2003).

Está bien establecido el papel que las
Tabla II. Resultado de los ciclos de ICSI. En ambos grupos se han eliminado bajas respondedoras (menos de alteraciones cromosómicas juegan en la
3 ovocitos recuperados) y ciclos con sémenes de biopsias.*P<0.05 infertilidad, y su diagnóstico (Duzcan et
al., 2003); sin embargo, el efecto de las
ambos grupos, en los que hemos promedio en la edad de la mujer. La variantes cromosómicas está lejos de
excluido las bajas respondedoras y los media de ovocitos maduros recuperados aclararse, habiéndose convertido en un
ciclos con biopsias testiculares, se tras la punción no es significativamente campo de controversia en citogenética
observan en la Tabla II. Estos resultados mayor en los ciclos con variantes clínica reproductiva (Madon et al.,
muestran que no existen diferencias cromosómicas que en los ciclos sin 2005). Existen autores que concluyen
entre los dos grupos en cuanto a variantes. A pesar de que la tasa de que las variantes cromosómicas no

Mireia Poveda et al. Las variantes cromosómicas afectan la calidad embrionaria.
22

con variantes, si hay una tendencia a
que ésta sea mayor cuando los cariotipos
están alterados. El empeoramiento de la
calidad embrionaria cuando algún
miembro de la pareja presenta variantes
polimórficas en el cariotipo nos lleva a
pensar en la presencia de alguna
alteración en los gametos y, de hecho,
un número significativo de los varones
con variantes cromosómicas tienen unas
cifras de aneuploidias por encima de lo
normal (Rueda et al., 2007), lo que
sugiere que las variantes cromosómicas
podrían tener un efecto sobre la meiosis.
Varios estudios han demostrado que la
presencia de variantes cromosómicas
está relacionada con la alteración de la
espermatogénesis (Kayhan et al., 2005),
observándose que estas variantes son
más frecuentes en pacientes con
oligozoospermia severa o azoospermia
Tabla III.Resultados de los ciclos de ICSI. Distribución por sexos. que en pacientes con oligozoospermia
leve o normozoospermia (Riccaboni et
tienen efectos fenotípicos y, por otro también en el presente estudio. al., 2008).
lado, también hay un número
considerable de publicaciones que Se sabe que la región pericéntrica del A pesar de la alta incidencia de variantes
aportan datos en sentido contrario cromosoma 9 situada entre las regiones cromosómicas en pacientes infértiles,
(Madon et al., 2005; Gardner et al., 9p11-12 y 9q11-12/13 es rica en está lejos de dilucidarse su mecanismo
2004; Wyandt et al., 2004). heterocromatina en la que abundan de acción. Es más, el presente estudio
repeticiones de DNA satélite. La pone de manifiesto que cuando los
En los últimos años, varios estudios han secuenciación del DNA y la cartografía gametos de los portadores de variantes
analizado la relación de las alteraciones del cromosoma 9 ha permitido se emplean para ICSI, a pesar de la peor
cromosómicas y la infertilidad demostrar, recientemente, que este calidad embrionaria, no hay efectos
(Nakamura et al., 2001). En alguno de cromosoma es estructuralmente muy sobre la viabilidad del embrión.
estos estudios se ha visto que las polimórfico y contiene la región más
variantes cromosómicas se encuentran larga de heterocromatina que hay en los Recientemente, se ha demostrado que
en una frecuencia más elevada en seres humanos (Humphray et al., 2004). las variantes cromosómicas no tienen
pacientes infértiles que en la población Es necesario analizar estudios relación con los abortos de repetición,
general (Yakin et al., 2005; Madon et al., moleculares genéticos y análisis pero sí con la infertilidad primaria
2005; Rueda et al., 2007). De hecho, en epigenéticos de las regiones (Minocherhomji et al., 2009). Datos de
nuestro medio hemos observado que heterocromáticas para ver si pueden nuestro grupo indican que las parejas
sobre un 12% de los pacientes que afectar a genes vecinos implicados en con algún miembro con cariotipo
acuden a consulta de reproducción por infertilidad. portador de variante del cromosoma 9
fallo reproductivo presentan algún tipo tienen peores tasas de fecundación que
de variante cromosómica (Rueda et al., Al comparar los ciclos de ICSI en los que los pacientes con cariotipos normales
2007). Se ha observado que las al menos un miembro de la pareja cuando se hace IA (Ochando et al.,
variantes polimórficas en los presentaba alguna variante 2007), hecho que no ocurre cuando es la
cromosomas 1, 9, 16, y en el cromosoma cromosómica en el cariotipo con los ICSI la técnica empleada.
Y son más frecuentes en la personas ciclos en los que los cariotipos de ambos
infértiles que en la población general progenitores son normales, observamos Parece pues, que los pacientes
(Madon et al., 2005), habiéndose que no existen diferencias significativas portadores de variantes cromosómicas
sugerido que la presencia de estas entre los dos grupos en cuanto a la tasa originan una mayor tasa de gametos con
variantes en uno o ambos miembros de de fecundación y los fallos de anomalías posiblemente implicadas en
la pareja podría incrementar la fecundación. Tampoco hay diferencias en el reconocimiento celular pero que, una
frecuencia de abortos de repetición e la tasa de embarazo, pero, sin embargo, vez producida la fecundación, la
infertilidad idiopática (Dubey et al., la calidad de los embriones que se afectación sobre la viabilidad del
2005). La mayor parte de datos indican transfieren empeora en los ciclos con embrión sería mínima. La conclusión
que la variante cromosómica más variantes cromosómicas, y, a pesar de principal de nuestro trabajo es que los
frecuente, con gran diferencia, afecta al que la tasa de aborto no es portadores de variantes cromosómicas,
cromosoma 9, como así observamos significativamente mayor en los ciclos se beneficiarían de la técnica ICSI; por

23

ello, es fundamental destacar la chromosome to protein. Atlas of Genetics
importancia del estudio citogenético and Cytogenetics in Oncology and
como parte del diagnóstico de la pareja Haematology. January 2003. URL:
con fallo reproductivo, y de los donantes http://AtlasGeneticsOncology.org/Educ/He
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Kayhan Y, Basak B, Bulent U. Is there a human chromosomes. Lancet 1971;2:971-2.
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variants and spermatogenesis? Int J Urol Shah K, Sivapalan G, Gibbons N, Tempet H,
2005;12:984–9. Griffin DK. The genetic basis of infertility.
Reproduction 2003;126:13–25.
Matzuk MM, Lamb DJ. The biology of infertility:
research advances and clinical challenges. Wyandt HE, Tonk VS. Atlas of human
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Madon PF, Athalye AS, Parikh FR.
Polymorphic variants on chromosomes Yakin K, Balaban B, Urman B. Is there a
probably play a significant role in infertility. possible correlation between chromosomal
Reprod Biomed Online 2005;11:726–32. variants and spermatogenesis? Int J Urol
Mattei MG, Luciani J. Heterochromatin, from 2005;12:984–9.

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A U L A J O V E N
25

RELACIÓN ENTRE LOS PATRONES PRONUCLEARES Y LA CALIDAD
EMBRIONARIA SEGÚN CRITERIOS ASEBIR
RELATION BETWEEN PRONUCLEAR PATTERN AND EMBRYO QUALITY IN ACCORDANCE TO
ASEBIR CRITERIA

Marta Brossa, Xènia Blanch, Marta Antich
FertiLAB – Institut Català de Fertilitat · Alta Gironella 58, Bajos. 08017 Barcelona
laboratorifertilab@hotmail.com · Fecha recepción: 23 abril 2010 · Fecha aceptación: 26 abril 2010

RESUMEN
La observación del patrón pronuclear en estadio de zigoto se ha propuesto en varios estudios como una de las características
predictivas del desarrollo embrionario y la capacidad implantatoria. En este estudio hemos observado de forma retrospectiva
3424 embriones procedentes de 619 ciclos de FIV-ICSI realizados en nuestro centro entre 2008 y 2009, para establecer si existía
alguna relación entre el patrón pronuclear observado el día de la fecundación, a partir de cuatro grupos de clasificación
(patrones GI, GII, GIII y GIV) y la calidad embrionaria observada en estadio celular (día 2, día 3) según los criterios propuestos
por ASEBIR. Hemos comprobado con significancia estadística que, en nuestro estudio, la distribución de calidades en función
del patrón pronuclear no se da de forma aleatoria, apreciándose diferencias sobre todo en el desarrollo de los embriones
procedentes de zigotos GI (mayor porcentaje de embriones con desarrollo de calidad A: 35,6% vs. el 31,1% general) y en
embriones procedentes de zigotos GIII (mayor probabilidad de desarrollo de embriones de calidad D: 47,1% vs. 38,0% general)
para día 3.
Dado que la clasificación del patrón pronuclear se realiza simultáneamente a la valoración de la fecundación y con ello, el
aumento del estrés al que se somete el embrión en dicha valoración no es significativo, consideramos que merece la pena
seguir contando con este dato como uno más de los elementos a tener en cuenta a la hora de decidir cuál o cuáles son los
mejores embriones para transferir. Rev Asoc Est Biol Rep 2010; 15(1):25-28.
Palabras clave: patrón pronuclear, calidad embrionaria, criterios ASEBIR.

ABSTRACT
The observation of pronuclear pattern of zygote stage has been proposed in several studies as one of the predictive
characteristics of embryo development and implantation capacity. In this study, we have observed retrospectively 3424
embryos from 619 IVF-ICSI cycles performed in our centre between 2008 and 2009, to establish whether there was any
relationship between pronuclear pattern observed on the day of fertilization, from four groups of classification (pattern GI,
GII, GIII and GIV) and embryo quality observed in cell stage (day 2, day 3) according to the criteria proposed by ASEBIR. We
checked with statistical significance that, in our study, the distribution of qualities based on pronuclear pattern does not
occur randomly, appreciating differences particularly in the development of embryos from zygotes GI (greater percentage of
embryos with development of quality A: 35.6% vs. 31.1% overall) and in embryos from zygotes GIII (greater chance of
developing embryos of quality D: 47.1% vs. 38.0% overall) for day 3.
Since pronuclear pattern classification is performed simultaneously to the assessment of fertilization and thus the increase
of stress to the embryo in that evaluation is not significant, we believe that it is worth to continue taking this as one more of
all the elements to take into account when deciding what are the best embryos to transfer. Rev Asoc Est Biol Rep 2010; 15(1):25-
28.
Key words: nuclear pattern, embryo quality, ASEBIR criteria.

INTRODUCCIÓN elementos para permitirnos conseguir hasta el momento de la transferencia. En
embriones de mejor calidad y, en la bibliografía podemos encontrar varias
La valoración del desarrollo de un ciclo consecuencia, con mayor potencial características a observar, tanto en
de fecundación in vitro empieza ya el día implantatorio. La valoración exhaustiva gametos como en zigotos y embriones
de la punción ovocitaria, con la de dicho potencial en los embriones (Senn et al., 2006; Balaban et al., 2001;
determinación de la calidad de los obtenidos de FIV – ICSI es un tema al que Wittemer et al., 2000; Tesarik and Greco,
gametos para predecir el devenir del dedicamos mucha atención en los 1999; Tesarik et al., 2000; Scott et al.,
ciclo y aumentar las probabilidades de laboratorios, observándolos en todos 2000; Gámiz et al., 2003), que se
éxito. Cada vez se desarrollan nuevos sus estadios, desde el día de la punción correlacionan con la obtención de

A U L A J O V E N
Marta Brossa et al. Relación entre los patrones pronucleares y la calidad embrionaria según criterios asebir.
26

embriones de mejor calidad. Toda dicho, la determinación del patrón de mínima 19; edad máxima 47–, tomando la
observación realizada es interesante pronúcleos conlleva un mayor tiempo de edad de la persona a quien se realiza la
pero a la vez conlleva un mayor estrés observación y, por tanto, de exposición punción, es decir, la donante en los ciclos
para el embrión, dado que cada de los zigotos fuera de los incubadores de recepción y la paciente en los ciclos
determinación se acompaña de un mayor y, teniendo en cuenta que en otros propios) realizados en nuestro centro
tiempo de observación y, por tanto, laboratorios se observa la fecundación durante los años 2008 – 2009.
generalmente, de exposición fuera de sin determinar el patrón pronuclear,
los incubadores. Cada centro debería obteniendo también muy buenos Se han excluido del estudio aquellos
determinar qué características le resultados, decidimos estudiar si, en zigotos en los que, a pesar de observarse
permiten una mayor y mejor valoración nuestro centro, hallábamos una relación la presencia de 2PN, estos aparecían
de la calidad embrionaria en relación a entre el patrón pronuclear y la calidad tenues y no quedaba bien definido qué
sus resultados, puesto que no todos embrionaria, para decidir si merecía la patrón pronuclear les correspondía.
coinciden en hallar las mismas pena seguir con la valoración de dichos
correlaciones (James et al., 2006). patrones. Del total de embriones, 1335 fueron
observados hasta día 2 y 2089 hasta día 3.
En nuestro laboratorio realizamos un MATERIAL Y MÉTODOS
cultivo individualizado de los Los patrones pronucleares de
embriones, observando el patrón de Se ha realizado un estudio retrospectivo, referencia se muestran en la Figura 1,
pronúcleos (PN) que presentan en día 1 comparando la relación entre los patrones agrupándose en cuatro grupos (GI, GII,
(Gámiz et al., 2005) (ver Figuras 1 y 2) y pronucleares y la calidad embrionaria de GIII, GIV) y la clasificación de calidades
su evolución y calidad (según criterios 3424 zigotos obtenidos en 619 ciclos de sigue la propuesta por ASEBIR
ASEBIR) hasta el día de la transferencia FIV-ICSI, tanto propios como de recepción (calidades A, B, C y D).
(día 2 o día 3). Dado que, como ya se ha ovocitaria (edad media 32,0 años –edad
Los ovocitos maduros fueron
microinyectados o inseminados. Tras la
microinyección, se pasaron a gotas de 20
microlitros de G1 plus v.5 en placas
Falcon embriotestadas 60 x 15, para su
cultivo individualizado. Los ovocitos
inseminados se pasaron a microgotas de
G1 a las 3 – 5 horas post-inseminación.

Se valoraron los pronúcleos en microscopio
invertido (Nikon Eclipse TE200) a las 18h
post ICSI o post inseminación.
Seguidamente, los zigotos fueron
Fig. 1: Clasificación esquemática de los cuatro grupos de zigotos en función del patrón pronuclear. cambiados a placas de G1 nuevas,
manteniendo su posición de cultivo. Se
observó su desarrollo hasta día 2 o día 3,
anotando las características de cada
embrión (número de células, grado de
simetría entre ellas, porcentaje de
fragmentos, presencia de multinucleación)
para poder clasificarlos según la calidad
ASEBIR correspondiente (A, B, C o D).

Para estudiar si se hallaba relación entre
la observación de un patrón pronuclear
determinado y la calidad ASEBIR, se
construyeron tablas de contingencia
tanto para día 2 como para día 3, y se
aplicó un test chi-cuadrado (mediante el
paquete estadístico SPSS v. 17.0).

RESULTADOS

La frecuencia general de patrones
pronucleares observados en nuestro
Figura 2: Imágenes ejemplo de los cuatro tipos de patrones pronucleares: GI (a), GII (b), GIII (c), GIV (d).
Las imágenes a, b, d, proceden de zigotos obtenidos en nuestro centro; la imagen c procede de “An atlas of laboratorio es la siguiente: 28,2% GI;
human blastocysts” (Lucinda L. Veeck, Nikica Zaninovic). 42,1% GII; 6,0% GIII; 23,8% GIV.

A U L A J O V E N
27

En embriones cultivados hasta día 2, la fue: 31,1% calidad A; 14,1% calidad B; (día 2, día 3), sería de esperar una
distribución general de frecuencias de 16,8% calidad C; 38,0% calidad D. distribución similar de las frecuencias
calidades observadas fue la siguiente: anteriores cuando se analizara la calidad
39,1% calidad A; 20,6% calidad B; Si no hubiera correlación entre el patrón embrionaria a partir de cada grupo de
19,6% calidad C; 20,6% calidad D. Para pronuclear observado en día 1 y la patrones por separado. Para comprobar
día 3, la distribución general observada calidad embrionaria durante el cultivo si la relación existía se estudiaron las
tablas de contingencia para patrón
pronuclear vs calidad ASEBIR, las cuales
mostraron significación estadística en
ambos casos (ver Tablas I y II). Así pues,
en nuestro caso, hallamos una relación
entre la calidad embrionaria obtenida y
el patrón pronuclear.

Del estudio más detallado de las tablas
se observa, en los embriones
procedentes de zigotos GIII, una
tendencia al aumento de la calidad C
(27,5% vs. el 19,6% general) en
detrimento de la calidad A (27,9% vs. el
39,1% general) para día 2.

Por otro lado, para día 3, se observa
mayor proporción de embriones de
calidad A (35,6% vs. el 31,1% general),
así como de buena calidad (A+B) (52,1%
vs. 45,2%), derivados del patrón
pronuclear GI, en contraste con el
aumento de calidades D derivadas del
patrón GIII (47,1% vs. 38,0% general).

De los cuatro grupos de patrones
Tabla I: Tabla de contingencia Patrón PN * Score ASEBIR Día 2 pronucleares, éstos dos son los que
muestran una mayor desviación respecto
a los valores generales.

DISCUSIÓN

La observación del patrón pronuclear en
estadio de zigoto se ha propuesto en
varios estudios previos como una de las
características predictivas del desarrollo
embrionario y de la capacidad
implantatoria (Senn et al., 2006;
Balaban et al., 2001; Wittemer et al.,
2000, Tesarik and Greco, 1999; Tesarik et
al., 2000; Scott et al., 2000; Gámiz et al.,
2003), a pesar de que no siempre se haya
hallado dicha relación (James et al.,
2006).

En nuestro centro, los grupos de
patrones pronucleares utilizados para
clasificar los zigotos nos permiten
predecir de manera significativa una
distribución distinta de la calidad del
embrión celular (día 2, día 3),
especialmente en los que derivan de
patrones GI (mayor tasa de desarrollo de
Tabla II: Tabla de contingencia Patrón PN * Score ASEBIR Día 3 embriones de calidad óptima) y GIII

A U L A J O V E N
Marta Brossa et al. Relación entre los patrones pronucleares y la calidad embrionaria según criterios asebir.
28

(mayor probabilidad de desarrollo AGRADECIMIENTOS abnormal preimplantation development can
embrionario de calidad D). be predicted by a single static observation
A todas las compañeras que han on pronuclear stage morphology. Hum
Dado que la valoración del patrón colaborado en este estudio y que, con Reprod 1999; 14: 1318 - 1323.
pronuclear en nuestro laboratorio se gran esfuerzo, recopilan los datos
realiza simultáneamente a la valoración necesarios para desarrollar proyectos Tesarik J; Junca AM; Hazout A; Aubriot FX;
de la fecundación (observación del como éste. Nathan C; Cohen-Bacrie P et al. Embryos
número de PN y de CP a las 18h post- with high implantation potential after
inseminación o ICSI), y por ello no A Lluís Bassas, por su ayuda intracytoplasmic sperm injection can be
supone un aumento significativo del desinteresada en el tratamiento recognized by a simple, non-invasive
tiempo de exposición del embrión fuera estadístico de los datos. examination of pronuclear morphology.
del incubador, y, ya que nos permite Hum Reprod 2000; 15: 1396 - 1399.
establecer un pronóstico del desarrollo, REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
sobretodo en el caso de los grupos GI y Veeck LL; Zaninovic N. Overview of human
GIII, consideramos interesante seguir ASEBIR – Asociación para el estudio de la preimplantation development in vitro. En:
manteniendo este criterio de valoración biología de la reproducción. II Cuaderno de Lucinda L. Veeck, Nikica Zaninovic. An atlas
como otro de los utilizados en la elección Embriología Clínica “Criterios de Valoración of human blastocysts. The Partenon
de los mejores embriones para Morfológicos de Oocitos, Embriones Publishing group. p. 37.
transferir. tempranos y Blastocistos Humanos”. 2ª
edición, 2008. Wittemer C; Bettahar-Lebugle K; Ohl J;
A pesar de todo, y a diferencia de otros Rongières C; Nisand I and Gerlinger P.
estudios publicados, no se ha valorado Balaban B; Urman B; Isiklar A; Alatas C; Zygote evaluation: an efficient tool for
la capacidad implantatoria de los Aksoy S; Mercan R et al. The effect of embryo selection. Hum Reprod 2000; 15:
embriones derivados de cada grupo de pronuclear morphology on embryo quality 2591 - 2597.
patrones pronucleares, por tratarse de parameters and blastocyst transfer
un estudio retrospectivo en el que, a la outcome. Hum Reprod 2001; 16: 2357 - 2361.
hora de transferir, no se utilizó el patrón
pronuclear como criterio de selección. Gámiz P; Romero JL; Zulategui JF; Gadea B;
Un estudio más detallado y dirigido a la Albert C; de los Santos MJ. Valoración de la
predicción de la capacidad implantatoria fecundación. En: Remohí J., Cobo A., Romero
de un embrión a partir del patrón JL., Pellicer A., Simón C. Manual práctico de
pronuclear observado sería necesario en esterilidad y reproducción humana. 2º
nuestro caso. edición. McGraw-Hill Interamericana; 2005.
p. 392 – 402.
Otra conclusión que se desprende de la
observación de los resultados en el Gámiz P; Rubio C; de los Santos MJ; Mercader
análisis realizado, es que en día 2 se A; Simón C; Remohí J et al. The effect of
observa mayor porcentaje de embriones pronuclear morphology on early
de buena calidad (A+B) que en día 3. development and chromosomal
Esto se debe sobre todo a que, en los abnormalities in cleavage-stage embryos.
casos de transferencias en día 2, los Hum Reprod 2003; 18: 2413 - 2419.
mejores embriones se seleccionan ya sea
para transferir, ya sea para su James, AN; Hennessy S; Reggio B; Wiemer K;
criopreservación, pero no siguen el Larsen F and Cohen J. The limited
cultivo hasta día 3. De todos modos, hay importance of pronuclear scoring of human
otro grupo nada menospreciable de zygotes. Hum Reprod 2006; 21: 1599 - 1604.
embriones que, siendo de calidad
óptima en día 2, no dividen o lo hacen en Scott L; Alvero R; Leondires M and Miller B.
un grado muy bajo (sólo una división) The morphology of human pronuclear
entre día 2 y día 3, pasando a calidad D. embryos is positively related to blastocyst
Es posible que esto sea consecuencia de development and implantation. Hum Reprod
una mala activación del genoma 2000; 15: 2394 - 2403.
embrionario, que empieza a
manifestarse en este momento del Senn A; Urner F; Chanson A; Primi M-P;
desarrollo (en las primeras divisiones el Wirthner D and Germond M. Morphological
embrión depende del material genético scoring of human pronuclear zygotes for
del ovocito). Por esta razón, nuestra prediction of pregnancy outcome. Hum
elección inicial sería la de transferencia Reprod 2006; 21: 234 - 239.
en día 3, pues nos permite seleccionar
mejor los embriones. Tesarik J and Greco E. The probability of

D E B A T E

30
El debate del presente número es una serie de controversias, algunas de oocitos para retrasar la maternidad”.
“Registro SEF 2008”. Las modificaciones las cuales se presentan a continuación.
recientes a la manera de presentar los El debate está servido. Os recordamos que los temas de debate
resultados de los centros, y la son permanentes, con lo cual, podéis
publicación de estos resultados, de los En el próximo número de Diciembre, el opinar sobre ellos en cualquiera de los
centros que así lo decidan, han generado tema de debate será: “Vitrificación de números.

ES NECESARIO CONSIDERAR LOS INTENTOS PREVIOS
Dolores Pascual Llopis, Francisco Martínez Díaz, Arturo Reyes Palomares, Eva Cogollos Úbeda, Elena del Mar Martín Díaz, Ana Gallego López.
Instituto de Fertilidad Clínica Rincón, Málaga.

Desde el Instituto de Fertilidad Clínica Por otro lado y sin olvidar las forma conjunta el ámbito privado y el
Rincón, agradecemos el esfuerzo que consecuencias de que aumente el público teniendo una cobertura muy
está desarrollando la Sociedad Española impacto de la publicación, queremos distinta por factores tan diversos como
de Fertilidad (SEF) para elaborar y poner lanzar fundamentalmente una son la edad, económicos, social o
en marcha este proyecto, en el que propuesta de mejora que consideramos familiar y cualquier otro de los motivos
nosotros venimos colaborando desde muy necesaria, para que se pueda que afecten. Con lo que queremos hacer
hace algunos años. Nuestra valorar objetivamente los resultados de resaltar la importancia de evitar la
colaboración parte de nuestro propio cada centro. De no ser así por causas creación de un ranking de centros que
interés por mantener un registro único, ajenas a la buena práctica de unidades y pueda afectar negativamente sobre la
y con ello una excelente referencia con centros, pueden ocasionarse actividad profesional que desarrollamos.
la que marcar la evolución de nuestros importantes perjuicios económicos que Por otro lado queremos recordar la
tratamientos y técnicas de laboratorio. pueden influir en la participación de los importancia de que se agilice la creación
Consideramos que el registro cumple un centros al registro. Percibimos que del ya anunciado registro unificado de
papel fundamental de autocontrol para tradicionalmente el número de intentos donantes, que también puede influir
la gran mayoría de centros, y por ello lo previos en otros centros no se ha tenido directa o indirectamente en la
percibimos como una labor propia de en cuenta, probablemente porque no transparencia de los resultados
una sociedad científica como es la SEF. tuviese mucha relevancia o impacto, y emitidos. Somos conscientes del
Por esta razón mostramos nuestro ahora ante la nueva condición sí lo tiene impacto que generará la publicación de
interés en continuar con dicha por lo que consideramos que debiera nuestros resultados y por ello nos
colaboración, de ningún modo por el urgentemente solventarse. Es muy preocupamos de que al menos sea
hecho de hacerse público nos vamos a importante incluir los resultados en provechoso el cambio sin perjuicio de
retractar de esta decisión y función de intentos previos en otros una interpretación errónea de los
aprovechamos para animar al resto de centros y en el mismo centro, se hace resultados.
centros para que continúen haciéndolo. ineludible cuando consideramos de

AUDITORÍAS PARA EL 100% DE LOS CENTROS
Mª Josepa Mulet Mallafrè
BIOGEST. Centre de Reproducció Humana, Tarragona.

En nuestra opinión la idea de apostar Pensamos que en este caso, Todos sabemos que hay una cierta
por la transparencia en el registro de la obligatoriamente, se deberían de variabilidad con los resultados y si un
SEF nos parece muy correcta y acertada publicar los datos una vez corregidos. año tus resultados son peores que los de
ya que todos hemos visto tasas de un centro cercano, podrías notar un
embarazo en congresos o en páginas Otro tema relacionado con la decrecimiento en el acceso de pacientes.
Web completamente maquilladas. transparencia es la identificación de cada Es más, habrás conseguido una “fama”
centro participante con su nombre y que costará trabajo subsanar.
En cuanto a que una auditoria externa dirección, aquí es donde se arma el
pueda comprobar los datos que se revuelo. Creemos compartir nuestra Por tanto en nuestra opinión: Auditorias
presentan, pensamos que es necesario. opinión con la de otros centros privados, sí, cuantas más mejor, a ser posible el
Es más, nos parece poco que solo un 10% que este hecho nos puede afectar 100% e identificación de los centros
de los centros sean auditados y no nos económicamente y por tanto entendemos participantes mediante un código.
parece bien que si se detecta algún error que la Dirección de cada centro, cuya
en la auditoria, simplemente no se misión es asegurar su continuidad, quiera
publiquen los datos de este centro. eliminar este peligro.

D E B A T E
31

TRANSPARENCIA NO SIEMPRE ES SINÓNIMO DE HONESTIDAD
Adoración Rodríguez Arnedo, Ana Mª Fabregat Reolid, Anna Rabanal, Antonio Urbano Carrillo, Arantza Farreres, Arturo Brassesco Macazzaga,
Barbara Freijomil, Belén Lledó Bosch, Belén Murillo Guibert, Carlos García-Ochoa del Fresno, Carmen Calatayud Lliso, Carmen Puyo Gómez,
Carolina Castelló, Cristina Puche, Elsi Suárez Álvarez, Empar Ferrer Robles, Esther Velilla, Felipe del Rio Bueno, Florentino Garrido González,
Francisco Avila Suarez, Francisco de Asís Vergara Alcaide, Gemma López Granollers, Ignacio Santiago Alvarez Miguel, Jaime Guerrero Villena,
Joan Massó, Jorge Ten Morro, José Ramón Ortiz de Galisteo, Juan Manuel Moreno García, Laia Echevarría, Lara Mencía, Laura Gil Aliaga, Laura
Jimenez Díez, Luz M.Rodriguez Menes, Mª Ángeles Carracedo Caballero, Mª Dolores Casasús Bernabeu, Mª Dolores Pérez Izquierdo, Margarida
Gelabert Altayó, María Vila Marqués, Mario Brassesco Macazzaga, Marta Asensio, Marta Sala, Marta Valiente, Meritxell Rafael Palou, Miguel Ruiz
Jorro, Minerva Ferrer i Buitrago, Mireia Dominguez Vega, Mireia Poveda García, Natalia Perez Vallés, Nieves Toledo Riera, Nuria Fosas Saenz,
Nuria García Potrony, Olga Cairó Doncos, Paloma Duque Alvarez, Paula Fernández , Pilar Martin Talavera, Rafael Lafuente Varea, Ruth Alcolea
Belloso, Ruth Morales Sabater, Sara González García, Sergi Rovira Fontanals, Silvia Fernández, Sonia Gili Bonet, Sonsoles Rodriguez Fiestas,
Teresa Rubio Asensio, Víctor Masedo García.

ANACER Si piensan que hay Centros realizando En cuanto a la posibilidad del fraude,
una publicidad engañosa de sus datos, siempre fue y será una posibilidad más,
La Asociación Nacional de Clínicas de que sea el Ministerio o la Consejería de pero ahora sí tendrá trascendencia. Es
Reproducción Asistida (ANACER), que Sanidad de su Comunidad Autónoma, la difícil de aceptar que solo se audite a un
agrupa a 25 clínicas privadas que se encargue de comprobarlo y no 10% de los Centros. ¿Cómo se puede
distribuidas por todo el territorio una sociedad científica, la cual debe asegurar a los socios, que los Centros
nacional, a través de un comunicado, estar preocupada por otros temas más que presentan los ciclos son todos los
expresaba su preocupación y rechazo importantes como podrían ser el ciclos que realizan y no solo los que les
hacia la forma en que la SEF ha abordado promover las transferencias únicas, el lleven a tener los “resultados
el tema del REGISTRO este año. seguimiento de los niños nacidos por óptimos”?¿Cómo el auditor va a llegar a
TRA, entre otros muchos. esa conclusión si solo va a auditar los
Nosotros como asociados de ASEBIR, datos que se le presenten? A estas
también queremos hacernos eco de esa Es curioso como la SEF se escuda al decir preguntas se contestó en el Workshop
preocupación, utilizando este espacio que estamos practicando una medicina sobre el Registro, “que había que confiar
para hacer llegar nuestras inquietudes paternalista, al indicarles la dificultad en la honradez del científico” Realmente
sobre el Registro SEF 2008. que van a tener los pacientes para poder si se piensa en la honradez, no hacía
entender adecuadamente los resultados falta esa auditoría.
Los abajo firmantes pensamos que la que se les van a ofrecer, cuando todos
trascendencia que tiene la llamada sabemos que de la información que En el nuevo registro, nos piden, entre
“transparencia” del registro, tendría que recibirán sólo se fijarán en un dato, la otros datos, el nº de ciclos de pacientes
haber llevado a la Junta Directiva de la tasa de embarazo. extranjeras que realizamos. ¿Cuál es el
SEF a presentarla, discutirla y aprobarla fin? Podemos deducir, que esto tiene
en una Asamblea General de Socios La consecuencia de esto será que otros intereses diferentes a los que
antes de proponerla al Ministerio. Centros que están trabajando proponen y seguramente habrá más de
correctamente, con indicaciones no un país extranjero esperando saber
Por otro lado, nos llama la atención, que siempre favorables; malas cuántas de sus pacientes se facturan en
después de tantos años esforzándonos respondedoras, fallos de implantación, España para buscar la forma de
en enviar de forma voluntaria nuestros factores masculinos severos, etc, y que rescatarlas.
resultados, de pronto, su impulsor, la lógicamente sus tasas de embarazo/
SEF, sospeche de la veracidad de los ciclo van a ser menores, verán también En definitiva, nos adherimos a la opinión
mismos. De hecho, se atreve a apoyar lo disminuidos sus ciclos en el próximo año expresada por ANACER. Queremos un
que piensan otros de nuestro quehacer e incluso con pérdida de puestos de Registro honesto pero, por lo expuesto
profesional al decir que “los Registros trabajo porque, se supone, embarazan anteriormente, pensamos que
europeo y mundial prefieren menos menos. Esto es lo más preocupante y transparencia no siempre es sinónimo de
ciclos recogidos en España pero de más trascendente de la “transparencia” del honestidad. Deseamos un Registro SEF
calidad”. ¿Es que la SEF no tiene nada Registro, que los centros, por el temor a donde podamos comparar nuestros
que decir al respecto de su registro o es “poner en peligro sus resultados” resultados como veníamos haciendo
que piensa también que los datos puedan verse inducidos a no aceptar hasta ahora sin falta que nos fiscalicen.
obtenidos y publicados hasta ahora no este tipo de pacientes, incluso transferir A nuestro juicio, nos hemos cargado un
son correctos? ¿Cómo pueden pensar un mayor número de embriones que los Registro del que empezábamos a estar
que unas técnicas que venimos que vienen transfiriendo hasta ahora, lo orgullosos.
desarrollando desde hace décadas con que presumiblemente llevará a un
gran prestigio en todo el mundo se aumento de embarazos múltiples e
pongan ahora en entredicho? incluso de reducciones embrionarias.

D E B A T E

34

LA NUEVA VÍA DEL REGISTRO DE ACTIVIDAD DE LA SEF: EL AUMENTO
DE LA CALIDAD
José Luis Gómez Palomares1, Yolanda Cabello2, Juana Hernández3, Sylvia Fernandez-Shaw4, Esther Vidal5, Julio Herrero6, Francisca Luceño7,
Javier Marqueta8, José Antonio Castilla9, Buenaventura Coroleu10

1
FivMadrid, 2Fiv Recoletos Madrid, 3Hospital San Millán, Logroño, 4Unidad de Reproducción Humana García del Real de Madrid, 5Hospital Universitari
Clínic de Barcelona, 6Centro de Reproducción Asistida Sagrada Familia de Barcelona, 7Centro de Reproducción Humana de Granada, 8Instituto Balear
de Infertilidad, Ginecología y Reproducción, 9Hospital Universitario Virgen de la Nieves, 10Institut Universitari Dexeus, Barcelona.

Los cambios que el Registro de la La totalidad de los centros implica la segunda fase se han eliminado datos
Sociedad Española de Fertilidad (SEF) revisión de la totalidad de los cuadernos que, de no haber sido revisados, habrían
ha sufrido en la edición 2008 son, de recogida de datos enviados. Los sido admitidos como probablemente
quizás, los más trascendentes que ha centros fueron informados de los errores haya ocurrido en ocasiones anteriores.
experimentado hasta ahora. Esto se hallados para que hicieran las ¿No es obvio que la calidad de lo que se
debe a la entrada de un nuevo modificaciones oportunas. Esto no computa es mayor?
“colaborador” en escena: el Ministerio ocurría en ediciones previas. Ha sido
de Salud y Política Social. aquí donde se ha comenzado a percibir Pero no sólo creemos que los cambios
cuan positivo puede ser la supervisión introducidos aumentan la validez del
El acuerdo suscrito con el Ministerio del envío de resultados. Es aquí donde se Registro, sino que además:
supone que los datos del Registro se refleja, ya, el aumento en la calidad del
seguirán enviando al ministerio de registro. Pero, además, se ha dado un 1. Al poner al servicio de las parejas un
forma agregada, sin distinguir por paso más: la monitorización “in situ”. registro público, estamos facilitando su
centros, tal y como hasta ahora se venía toma de decisiones, ya que, al contrario
haciendo, pero, y ésta es la novedad, se El acuerdo suscrito con el Ministerio que en otras parcelas de la medicina, la
entregará un resumen detallado centro supone comprobar la veracidad de los mayoría de las pacientes que se someten
por centro de los datos de actividad más datos de, al menos, el 10% de los centros a técnicas de reproducción asistida
relevantes, que se harán públicos en la que hayan suministrado previamente los deben escoger centro para tratarse pues
página de la Comisión Nacional de datos de actividad. Se ha hecho en el pertenecen al sector privado.
Reproducción Humana Asistida 17%. A este proceso se le ha
(CNRHA). Es decir, por primera vez en la denominado Monitorización y ha sido 2. Se pone de manifiesto la voluntad de
historia del Registro, se harán públicos realizado por una monitora de la SEF de colaborar plenamente con las
algunos datos de cada centro, siempre y ensayos clínicos cualificada. Las administraciones sanitarias en la
cuando éstos lo autoricen. La monitorizaciones han consistido en elaboración de un registro oficial
controversia está servida, pero creemos visitas presenciales realizadas en el público validado.
que esto es sumamente positivo y ha propio centro, para verificar el máximo
redundado en un aumento significativo de historias clínicas, atendiendo 3. Se aumenta la credibilidad de los
en la calidad del registro. especialmente a los ciclos cancelados, a centros participantes ante pacientes,
las gestaciones y a los partos. organismos, e instituciones nacionales e
En años anteriores, y durante el periodo internacionales.
en el que el registro estaba abierto al En la presente edición han participado
envío de datos, ningún miembro del 119 centros, 104 de IU y 97 en FIV/ICSI. 4. Un registro transparente permitirá
Comité del Registro podía conocer los Tres centros de FIV/ICSI fueron tener datos válidos para conocer la
datos que los centros remitían de forma eliminados antes de la aleatorización, eficacia de los tratamientos y controlar
individual. Tan sólo se entregaba el por aportar datos no válidos. Se aquellos procedimientos que conlleven
informe anual de datos agregados. Este seleccionaron de forma aleatoria para la un aumento de la morbilidad de los
hecho ha cambiado en la presente monitorización 16. De estos 16, en 2 no recién nacidos (embarazos múltiples).
edición, y sí ha sido factible conocer los se pudo realizar la monitorización, por
datos de cada centro, siempre y cuando lo que fueron también eliminados del 5. Adelantarnos a otras instituciones o
se hubiera marcado la casilla Registro de este año. Finalmente, se colectivos en esta demanda social, que
aceptándolo. El objeto de acceder a los visitaron 14 centros. En uno de ellos la tarde o temprano llegará, especialmente
datos ha sido evitar que pasen al registro monitorización no fue satisfactoria, por en una sociedad de la información como
errores involuntarios. A este proceso lo lo que tampoco será incluido en el la actual, nos permitirá marcar la pauta
llamamos “filtración” y a él fueron Registro 2008. Quedaron 91 centros, de y ganar experiencia en la gestión de este
sometidos la totalidad de los centros que los que uno se eliminó por dar datos tipo de registros.
dieron su conformidad para participar. agrupados de varios centros. En esta

D E B A T E
35

6. El poner a disposición de nuestros El esfuerzo que la SEF y, en concreto, el
pacientes un registro transparente nos Comité del Registro, ha realizado ha sido
permitirá abrir canales de comunicación enorme. Pero todo es susceptible de
con el público en general e iniciar una mejora. El comité del Registro está abierto
serie de medidas encaminadas a una a cualquier sugerencia a través de su web
adecuada interpretación de resultados de (www.registrosef.com) y su blog
las técnicas de RA, que evitará las (http://registrosef.wordpress.com/).
confusiones actuales en la interpretación
de los resultados. Se puede dar el primer paso de otra
forma, pero no con mejor intención. Por
Pero los cambios introducidos también eso, apoyos tan importantes
han supuesto un coste. El más evidente conseguidos como el de diferentes
ha sido el descenso del número de ciclos sociedades científicas (ASEBIR, ASESA,
registrados. La disminución ha sido del SEGO), respaldando todas las
23,9% en FIV/ICSI (26.246 ciclos en actuaciones que el Comité del Registro
2008 frente a 34499 en 2007) y del ha llevado a cabo, no hacen más que
19,2% en inseminación (23.295 en 2008 reconocer la validez de esta nueva vía
frente a 28.834 en 2007). Menos datos hacia conseguir el definitivo registro
pero de más calidad. Una disminución oficial de técnicas de reproducción
que, seguro, se reducirá en la próxima asistida.
edición.

F O R M A C I Ó N C O N T I N U A D A

36

IMPRONTA GENÓMICA Y REPRODUCCIÓN ASISTIDA
IMPRINTING AND ASSISTED REPRODUCTION

Cristina Camprubí
Grupo de Investigación Impronta genómica y Cáncer · Programa de Epigenética y Biología del Cáncer (PEBC)
Institut d’Investigació Biomèdica de Bellvitge (IDIBELL)
E-mail: ccamprubi@idibell.cat

RESUMEN
La impronta genómica es una marca epigenética específica de alelo que regula la expresión de determinados genes del genoma
en función de su origen parental, conllevando su expresión monoalélica. El término epigenética hace referencia a cambios
heredables que no implican modificaciones en la secuencia del DNA. Estos cambios corresponden a la metilación del DNA y a
modificaciones de las proteínas histonas. La impronta genómica se establece durante la gametogénesis y debe mantenerse
después de la fecundación para el correcto desarrollo embrionario. En los últimos años, numerosos trabajos han correlacionado
anomalías en la impronta genómica con la aplicación de técnicas de reproducción asistida o con la infertilidad. Profundizar en
este área de conocimiento contribuirá en mejorar tanto el éxito como la seguridad de estas técnicas. Rev Asoc Est Biol Rep 2010;
15(1):36-41.
Palabras clave: Impronta genómica, Epigenética, Reproducción asistida

ABSTRACT
Imprinting is an allelic-specific epigenetic mark that controls certain genes expression on the basis of the parental origin
resulting in monoallelic expression. Epigenetics reffers to heritable changes that do not involve modifications in the DNA
sequence. These changes correspond to DNA methylation and histone modifications. Imprinting is established during
gametogenesis and it must be maintained after fertilization for proper embryo development. In the last years several reports
correlate imprinting abnormalities with assisted reproduction techniques or with infertility itself. The increase of knowledge
of this field will contribute to improve the success and safety of these technologies. Rev Asoc Est Biol Rep 2010; 15(1):36-41.
Key words: Imprinting, Epigenetics, Assisted reproduction

Desde el nacimiento de Louise Brown a cromosómicamente desequilibrados Epigenética e impronta genómica.
finales de los años 70, el desarrollo y (Arán et al., 1999; Vegetti et al., 2000;
aplicación de técnicas de reproducción Rubio et al., 2001) en poblaciones de El término epigenética se refiere a
asistida (TRA) ha permitido superar individuos con problemas de fertilidad. cambios heredables que no implican
muchos casos de infertilidad. Sin El estudio del cariotipo de la pareja, el variaciones en la secuencia de
embargo, considerando su impacto diagnóstico genético preimplantacional nucleótidos en la molécula de DNA, pero
social, cabe plantearse si la y estudios citogenéticos en células sí regulan la expresión génica. Estos
investigación básica asociada a las TRA germinales, permiten ofrecer consejo cambios incluyen la metilación del DNA
avanza de forma sincrónica a su genético y acotar el riesgo de que la en el carbono 5 de las bases citosina en
aplicación, con el objetivo de descendencia pueda heredar anomalías dinucleótidos CpG y modificaciones
incrementar el conocimiento de la cromosómicas o genéticas, en el caso de postraduccionales en los extremos N-
biología de gametos y embriones que alguno de los progenitores sea terminales de las histonas. Estas
procedentes de la población infértil, portador de anomalías cromosómicas o modificaciones covalentes actúan
aportando así información de gran monogénicas, en casos de abortos de conjuntamente modificando la
relevancia que permita, tanto mejorar el repetición o edad avanzada, o en casos conformación de la cromatina. El DNA de
éxito del ciclo de reproducción, como en los que existe un bloqueo meiótico células eucariotas se encuentra
garantizar la seguridad para la causado por un incremento de anomalías empaquetado mediante la formación de
descendencia. cromosómicas en las células germinales. nucleosomas que consisten en 146 pares
de bases de la molécula de DNA,
En el área de la genética humana se ha Mientras que los riesgos genéticos cada organizadas alrededor de un octámero
observado un incremento de individuos vez están más acotados, en la actualidad de 4 proteinas histonas (H2A, H2B, H3 y
portadores de anomalías cromosómicas la investigación también se centra en H4). Dependiendo del estado de
constitucionales (de Braekeleer and Dao, elucidar si existen riesgos epigenéticos metilación del DNA, así como de
1991), de anomalías meióticas asociados a la aplicación de TRA. modificaciones represoras o activadoras
(Egozcue et al., 1983) o de gametos de las proteínas histonas

37

(principalmente metilaciones y Surani y colaboradores y McGrath y Beckwith-Wiedemann y de Silver-
acetilaciones en aminoácidos lisina), la Solter crearon embriones murinos Russell, que pueden ser causados por
cromatina adopta una conformación ginogenéticos y androgenéticos, es DUP paterna del cromosoma 11 y DUP
cerrada (heterocromatina) o abierta decir, embriones con dos pronúcleos o materna del cromosoma 7,
(eucromatina) (Figura 1). La genomas maternos o con dos pronúcleos respectivamente (Eggermann et al.,
conformación de la cromatina en forma o genomas paternos, respectivamente 2008). Es también ampliamente
de heterocromatina se asocia a represión (Surani et al., 1984; McGrath and Solter, conocido que DUP del cromosoma 14
génica, dado que el DNA es inaccesible a 1984). La presencia del genoma materno causa diferentes fenotipos de
la maquinaria de transcripción, mientras y paterno implica el desarrollo de un crecimiento anómalo, dependiendo del
que la conformación en forma de embrión y tejidos trofoblásticos origen de la DUP (Murphy et al., 2003).
eucromatina se asocia a expresión normales. En cambio, los embriones
génica. ginogenéticos crecen relativamente En resumen, determinadas anomalías
fenotípicas pueden ser causadas por la
herencia de dos copias maternas o
paternas de determinados genes,
manifestando la presencia de genes con
un comportamiento específico de alelo
y su relevancia en el desarrollo. Además
de DUP, anomalías epigenéticas que
conllevan la expresión bialélica
(ausencia de metilación en ambas
copias) o no expresión (presencia de
metilación en ambas copias) de genes
regulados por impronta genómica,
pueden resultar no sólo en el desarrollo
de síndromes y anomalías del
crecimiento, sino también en el
desarrollo de cáncer, diabetes neonatal
transitoria (Temple, 2007) y
pseudohipoparatiroidismo (Bastepe,
2008), dependiendo del gen o genes
afectados. Considerando la función de
determinados genes regulados por
Figura 1. Esquema de las modificaciones epigenéticas en el DNA y en las proteinas histonas relacionadas impronta genómica en el desarrollo
con el estado de la cromatina en forma de eucromatina o heterocromatina.
cerebral y fetal, la etiología del autismo
El término epigenética engloba la bien, pero los tejidos trofoblásticos (la y de la esquizofrenia (Badcock and
impronta genómica, un sistema de placenta) son atróficos. En el caso de los Crespi, 2006) así como la preeclampsia
regulación de la expresión génica, androgenéticos, los embriones apenas (Enquobahrie et al., 2008), la
presente en especies de gestación se desarrollan aunque las placentas son restricción del crecimiento intrauterino
intrauterina (Das et al., 2009), que de gran tamaño (Surani et al., 1984; (McMinn et al., 2006; Diplas et al., 2009)
consiste en marcar diferencialmente, McGrath and Solter, 1984). La y el bajo desarrollo para la edad
mediante modificaciones epigenéticas, conclusión inmediata frente a estos gestacional (Guo et al., 2008) han sido
determinados genes en función de su resultados es que la contribución relacionados con anomalías en la
origen parental, de manera que sólo se genética paterna es primordial para el impronta genómica.
expresa el alelo materno o paterno. desarrollo de la placenta y la materna lo
Considerando el comportamiento es para el correcto desarrollo Actualmente se conocen
diferencial de alelo de estos genes, la embrionario. aproximadamente 60 genes regulados
impronta genómica es, junto con los por impronta genómica en humanos,
caracteres ligados a los cromosomas Otra evidencia de la existencia de mapados en diversos cromosomas. Cabe
sexuales y a los genes mitocondriales, impronta genómica proviene del hecho comentar que los genes regulados por
una de las excepciones al principio de que disomías uniparentales (DUP) de impronta genómica suelen encontrarse
mendeliano básico de equivalencia, el ciertos cromosomas tengan como agrupados en dominios cromosómicos
cual describe la inexistencia de consecuencia el desarrollo de síndromes formando un cluster de genes. La
diferencias en el comportamiento de los o anomalías del crecimiento. Este es el expresión monoalélica de todos los
genes de origen paterno y materno. caso de los síndromes de Prader-Willi y genes agrupados en un determinado
Angelman, que pueden ser originados dominio, se encuentra bajo el control de
Las primeras evidencias de la existencia por DUP materna o paterna del una única región, denominada centro
de impronta genómica surgieron de los cromosoma 15, respectivamente regulador de la impronta (Imprinting
resultados obtenidos en experimentos (Cassidy and Schwartz, 1998; Cassidy et Control Region; ICR). Las ICR del genoma
de transferencia nuclear. En 1984, al., 2000) y de los síndromes de se corresponden con lo que se conoce

Cristina Camprubí. Impronta genómica y reproducción asistida.
38

como región diferencialmente metilada
(Differentially DNA-Methylated Region;
DMR). Estas regiones del genoma
contienen islas CpG (regiones con un
alto contenido de CpG) y son en las que
se establece la metilación del DNA y las
modificaciones represoras de histonas
que conllevan la heterocromatinización
de toda la región de forma específica de
alelo.

Herencia epigenética y de la impronta
genómica

Después de la fecundación, el zigoto
resultante hereda la copia materna y
paterna de todos los genes del genoma,
los cuales deben transmitirse de forma
fiel a lo largo de la posterior
proliferación celular, asegurando que
todas las células del organismo
compartan la misma información
Figura 2. Reprogramación epigenética durante los primeros estadios del desarrollo embrionario (A) y de la
genética. Para el desarrollo es también impronta genómica en la línea germinal (B). En negro se indican los niveles de metilación global del genoma
imprescindible la diferenciación celular. y en gris los niveles de metilación de los genes regulados por impronta genómica.
Del hecho de que células genéticamente
idénticas sean tan diferentes funcional y regulados por impronta genómica debe consecuencias fenotípicas. Para evitar
morfológicamente, es responsable la ser heredada de ovocitos y esta situación, en las células germinales
epigenética, la cual regula la expresión espermatozoides, y debe mantenerse o primordiales la impronta genómica se
o represión de unos u otros genes del protegerse frente a la desmetilación borra, y se establecen los patrones de
genoma en función del tipo celular. Por global que permite la reprogramación metilación específicos de alelo de los
ello, después de la fecundación y epigenética del genoma. Para asegurar genes regulados por impronta genómica
durante las primeras etapas del la transmisión de la metilación durante la gametogénesis, en función
desarrollo embrionario, los patrones monoalélica de estos genes, existe el del sexo. Así, aquellos genes en los que
epigenéticos específicos de ovocito y mecanismo de reprogramación de la su patrón de impronta se correlaciona
espermatozoide son eliminados impronta genómica en la línea germinal con metilación materna, establecerán
mediante una desmetilación global de (Figura 2B). Este ciclo de dicha metilación durante la ovogénesis
ambos genomas. En el estadio de reprogramación evita que el 50% de los en todos los ovocitos. El establecimiento
blastocisto, emergen los patrones gametos haploides, procedentes de las de la impronta materna se realiza
epigenéticos específicos de cada tipo células germinales primordiales durante la maduración ovocitaria (Sato
celular (Figura 2A). Estos patrones diploides, sean portadores de la copia et al., 2007), habiéndose considerado
deben ser transmitidos a través de la metilada y el otro 50% sean portadores por algunos autores que ésta no se
mitosis, para conservar el estado de de la no metilada. Frente a esta completa hasta el momento de la
diferenciación y funcionalidad en las situación, un ovocito portador de la fecundación o justo después de ésta (El-
células hijas. copia metilada de un determinado gen Maarri et al., 2001). En el caso de los
regulado por impronta genómica, podría genes en los que su patrón de impronta
A pesar de la flexibilidad epigenética, ser fecundado por un espermatozoide se correlaciona con metilación paterna,
que permite la diferenciación celular, los también portador de la copia metilada, ésta se establecerá durante la
patrones epigenéticos que controlan la de modo que el zigoto resultante sería espermatogénesis, siendo completa en
expresión monoalélica de genes portador de una anomalía en la las espermatogonias del individuo adulto
regulados por impronta genómica son, impronta genómica dado que ambas (Kerjean et al., 2000). De este modo,
en términos generales, comunes en copias del gen se encontrarían inactivas todos los ovocitos y espermatozoides
todos los tipos celulares, y es o silenciadas, conllevando a posibles serán portadores de la impronta
especialmente crucial que se mantengan anomalías del desarrollo. Del mismo específica de alelo para cada uno de los
desde la fecundación y a lo largo de las modo, si un ovocito portador de la copia genes regulados por impronta genómica,
primeras etapas de la embriogénesis, no metilada fuera fecundado por un asegurando la herencia de un patrón
para el correcto desarrollo del embrión, espermatozoide también portador de la normal de metilación de una de las dos
de los tejidos extraembrionarios y para copia no metilada, el zigoto resultante copias de estos genes, y, por ende,
el correcto desarrollo neurológico expresaría ambas copias del gen, hecho asegurando su posterior expresión
(Figura 2A). Por lo tanto, la metilación que también se correlaciona con una monoalélica durante el desarrollo.
diferencial de alelo de los genes anomalía en la impronta genómica, con

39

Impronta genómica y técnicas de sobrecrecimiento, conocido como Large ovocitos inmaduros procedentes de
reproducción asistida offspring syndrome (LOS) y causado por exámenes laparoscópicos de población,
anomalías en genes regulados por así como ovocitos en diferentes estados
Tanto la metilación del DNA como las impronta genómica (Young et al., 1998; de maduración obtenidos mediante
modificaciones en las proteínas histonas Sinclair et al., 2000; Young et al., 2001; hiperestimulación de pacientes
son susceptibles de presentar Mann et al., 2004; Li et al., 2005). infértiles (Sato et al., 2007). Sus
alteraciones que pueden ser Además de los efectos fenotípicos resultados apuntan de forma
consecuencia de: factores genéticos inmediatos, debe considerarse la consistente la presencia de LOI de
(anomalías en los genes que codifican posibilidad de que el cultivo in vitro diversos genes regulados por impronta,
factores implicados en el pueda tener efectos a largo plazo. En que correlacionan tanto con la
establecimiento y/o mantenimiento de este contexto, se ha descrito una hiperestimulación ovárica como con la
la metilación) (Zetterberg et al., 2003; relación entre el desarrollo de obesidad, maduración in vitro de ovocitos.
Park et al., 2005; Lee et al., 2006; Zogel ansiedad y déficit de memoria asociados Además, en un estudio reciente del
et al., 2006; Kobayashi et al., 2009); a anomalías en la impronta, en efecto de la hiperestimulación en la
factores ambientales intrauterinos (Lim descendencia obtenida mediante cultivo impronta genómica, realizado en
et al., 2010); exposición a toxinas in vitro en el modelo murino modelo murino, se ha descrito un efecto
(Anway and Skinner, 2008); (Fernández-Gonzalez et al., 2007). dosis-dependiente sobre la metilación
tratamientos hormonales (Pathak et al., del DNA, no sólo en forma de pérdida de
2008, 2010); diferencias dietéticas Cabe mencionar que en embriones metilación sino también por la presencia
(Chmurzynska, 2010). murinos obtenidos por transferencia de metilación aberrante en el alelo
intrauterina de zigotos obtenidos in materno en genes en los que la
El conocimiento sobre los mecanismos y vivo, también se han descrito LOI, metilación se establece en el paterno
las etapas de establecimiento de la concretamente en tejidos (Market-Velker et al., 2010). A pesar de
impronta genómica, junto con la extraembrionarios. Estas anomalías se ser resultados concluyentes y que en
aparición de datos epidemiológicos que intensifican y están presentes, no solo modelo murino queda excluido el
relacionan un moderado incremento en en los tejidos extraembrionarios sino componente infértil, éste no debe ser
el riesgo del desarrollo de síndromes también en el embrión, cuando los excluido en humanos como
relacionados con anomalías en la embriones son cultivados in vitro antes consecuencia de la presencia de
impronta genómica en la población de de su transferencia (Rivera et al., 2008). anomalías en la impronta genómica.
niños concebidos mediante Este hecho plantea que, así como la
reproducción asistida (Cox et al., 2002; manipulación de embriones previa a su Infertilidad y anomalías en la impronta
Ørstavik et al., 2003; Maher et al., 2003; implantación puede tener un efecto genómica
Gicquel et al., 2003; DeBaun et al., deletéreo sobre el mantenimiento de la
2003), ha focalizado la atención de impronta genómica per se, la práctica Del mismo modo en que anomalías
especialistas en epigenética e impronta metodológica común en ambos casos es genéticas o cromosómicas explican
genómica en la investigación la hiperestimulación ovárica. casos de bloqueo meiótico, anomalías en
relacionada con la reproducción la impronta genómica pueden explicar
asistida. En todos los casos descritos en En la práctica habitual de técnicas de casos de infertilidad idiopática.
estos estudios epidemiológicos, la causa reproducción asistida, es complicado
del síndrome es la pérdida de metilación aislar la exposición a hormonas, que a su Este planteamiento no puede ser
(Loss of Imprinting -LOI-) en el alelo vez conlleva la maduración de múltiples demostrado experimentalmente en el
materno. ovocitos inducida por el tratamiento caso de la meiosis femenina, por la
hormonal, y el posterior cultivo limitación de obtener ovocitos sin
Cultivo in vitro de embriones, embrionario. Considerando que el hiperestimulación. Aún así, a partir de
hiperestimulación ovárica y maduración período de establecimiento de la datos epidemiológicos obtenidos de
in vitro de ovocitos impronta genómica materna es madres de pacientes con síndrome de
coincidente con la maduración de los Angelman, causado por ausencia de
La aplicación de TRA implica ovocitos, es lógico plantearse que tanto metilación materna, Ludwig y
mayoritariamente la fecundación y el la hiperestimulación ovárica como la colaboradores demostraron una
desarrollo embrionario temprano en maduración in vitro de ovocitos también correlación entre infertilidad y la
condiciones in vitro, siendo omitido del puedan influir en la impronta, en este presencia de estas anomalías (Ludwig et
proceso el ambiente uterino. Existen caso en su establecimiento. En el año al., 2005). En el caso de la meiosis
múltiples datos experimentales 2007, Sato y colaboradores presentaron masculina, han sido publicados
obtenidos de modelos animales, que un estudio de metilación de diversos múltiples trabajos experimentales
avalan una relación entre el cultivo in genes regulados por impronta confirmando la relación entre la
vitro de embriones, así como la genómica, realizado en ovocitos de presencia de anomalías en la impronta y
composición de los medios de cultivo y ratón y humanos en diferentes estados oligo-, terato- y astenozoospermia
la transferencia embrionaria en de maduración y en ovocitos madurados (Marques et al., 2004; Kobayashi et al.,
condiciones de asincronía con el estado in vitro. En el caso de los ovocitos 2007; Marques et al., 2008, 2009;
uterino, y el desarrollo del síndrome de humanos, los autores analizaron tanto Kobayashi et al., 2009; Boissonnas et

Cristina Camprubí. Impronta genómica y reproducción asistida.
40

al., 2009; Poplinsky et al., 2009; Badcock C, Crespi B. Imbalanced genomic Egozcue J, Templado C, Vidal F, Navarro J,
Hammoud et al., 2009). Cabe apuntar imprinting in brain development: an Morer-Fargas F, Marina S. Meiotic studies in
que, a pesar de que los resultados de evolutionary basis for the aetiology of a series of 1100 infertile and sterile males.
estos trabajos avalan con claridad la autism. J Evol Biol 2006; 19:1007–1032. Hum Genet 1983; 65:185-188.
presencia de anomalías en la impronta e
infertilidad, en la mayoría de ellos no se Bastepe M. The GNAS locus and El-Maarri O, Buiting K, Peery EG, Kroisel PM,
incluyen poblaciones control de pseudohypoparathyroidism. Adv Exp Med Balaban B, Wagner K, et al. Maternal
referencia, por lo que dicha relación Biol 2008; 626:27-40. methylation imprints on human
podría tener una menor incidencia que chromosome 15 are established during or
la descrita hasta la actualidad en la Boissonnas CC, Abdalaoui HE, Haelewyn V, after fertilization. Nat Genet 2001;
literatura. Si la presencia de este tipo de Fauque P, Dupont JM, Gut I, et al. Specific 27(3):341-344.
anomalías en espermatozoides de epigenetic alterations of IGF2-H19 locus in
individuos infértiles fuera tan elevada spermatozoa from infertile men. Eur J Hum Enquobahrie DA, Meller M, Rice K, Psaty BM,
como la sugerida en estos trabajos, Genet 2010; 18(1):73-80. Siscovick DS, Williams MA. Differential
cabría esperar una mayor incidencia de placental gene expression in preeclampsia.
síndromes causados por anomalías en la Cassidy SB, Schwartz S. Prader-Willi and Am J Obstet Gynecol 2008; 199(5):566.e1-11.
impronta paterna en la descendencia Angelman syndromes. Disorders of genomic
concebida mediante técnicas de imprinting. Medicine 1998; 77:140-151. Fernández-Gonzalez R, Ramirez MA, Bilbao
reproducción asistida. Contrariamente, no A, De Fonseca FR, Gutiérrez-Adán A.
existen datos epidemiológicos que Cassidy SB, Dykens E, Williams CA. Prader- Suboptimal in vitro culture conditions: an
apunten a un incremento en la incidencia Willi and Angelman syndromes: sister epigenetic origin of long-term health
de estos síndromes causados por imprinted disorders. Am J Med Genet 2000; effects. Mol Reprod Dev. 2007
anomalías paternas, a diferencia de los 97(2):136-146. Sep;74(9):1149-1156.
datos que sí apuntan a un incremento
moderado de síndromes causados por Chmurzynska A. Fetal programming: link Gicquel C, Gaston V, Mandelbaum J, Siffroi JP,
anomalías maternas. Sin embargo, between early nutrition, DNA methylation, Flahault A, Le Bouc Y. In vitro fertilization may
y teniendo en cuenta que los genes and complex diseases. Nutr Rev 2010; increase the risk of Beckwith-Wiedemann
paternos contribuyen mayoritariamente 68(2):87-98. syndrome related to the abnormal imprinting
al desarrollo de tejidos of the KCN1OT gene. Am J Hum Genet. 2003;
extraembrionarios, resulta atractivo Cox GF, Bürger J, Lip V, Mau UA, Sperling K, Wu 72(5):1338-1341.
plantear la hipótesis de que las anomalías BL, et al. Intracytoplasmic sperm injection
presentes en espermatozoides de may increase the risk of imprinting defects. Guo L, Choufani S, Ferreira J, Smith A,
individuos infértiles puedan ser, o bien Am J Hum Genet 2002; 71(1):162-164. Chitayat D, Shuman C et al. Altered gene
más deletéreas para la implantación y/o expression and methylation of the human
gestación, o bien puedan quedar Das R, Hampton DD, Jirtle RL. Imprinting chromosome 11 imprinted region in small
confinadas a la placenta y verse reflejadas evolution and human health. Mamm for gestational age (SGA) placentae. Dev
en una mayor incidencia de restricción del Genome. 2009; 20(9-10):563-572. Biol 2008; 320(1):79-91.
crecimiento uterino, consecuencia de una
transferencia limitada o anómala de DeBaun MR, Niemitz EL, Feinberg AP. Hammoud SS, Purwar J, Pflueger C, Cairns
nutrientes de la madre al feto. Será Association of in vitro fertilization with BR, Carrell DT. Alterations in sperm DNA
interesante aportar datos experimentales Beckwith-Wiedemann syndrome and methylation patterns at imprinted loci in
que contribuyan a confirmar o rehusar epigenetic alterations of LIT1 and H19. Am two classes of infertility. Fertil Steril. 2009
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spermatogenesis. Lancet 2004; infertility is strongly associated with between fetal MTHFR 677C>T and
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ICR1. Int J Androl. 2009 Oct 30. [Epub ahead human spontaneous abortion. Hum Reprod
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result in aberrant expression of imprinted modifying the risk of epimutations on
Marques CJ, Francisco T, Sousa S, Carvalho F, genes on day 9.5 of development. Hum Mol chromosome 15. Eur J Hum Genet 2006;
Barros A, Sousa M. Methylation defects of Genet 2008; 17(1):1-14. 14(6):752-758.
imprinted genes in human testicular

A G E N D A

42

V CURSO ESHRE DE ANÁLISIS BÁSICO DE SEMEN
Fundació Puigvert
20-23 Septiembre 2010
Barcelona

MÁSTER EN BIOLOGÍA DE LA REPRODUCCIÓN Y TÉCNICAS DE REPRODUCCIÓN HUMANA ASISTIDA
Del 4 de octubre de 2010 al 30 de septiembre de 2011
Institut Universitari Dexeus y Unitat de Biologia Cel·lular
de la Universitat Autònoma de Barcelona.
http://www.uab.es/postgrau/
http://www.dexeus.com/es_ES/profesionales-02-0.aspx

ASRM 2010
American Society for Reproductive Medicine
66th Annual Meeting
October 23-27, 2010
Colorado Convention Center
Denver, Colorado

IV SIMPOSIO INTERNACIONAL REPRODUCCIÓN ASISTIDA
Fundación Tambre
1-3 de diciembre de 2010, Madrid
Palacio de Congresos de Madrid

2ND BIOGENESI CONFERENCE
IN VITRO MATURATION OF HUMAN OOCYTES: BIOLOGICAL FOUNDATIONS FOR A BREAKTHROUGH.
2-4 December 2010
Milan, Italy

ESHRE 2011
27TH ANNUAL MEETING OF THE EUROPEAN SOCIETY OF HUMAN REPRODUCTION & EMBRYOLOGY
3 to 6 July 2011
Stockholm, Sweden

N O T I C I A S
43

INDEXACIÓN DE LA REVISTA ASEBIR una niña libre de una distrofia muscular modernos no sólo coincidieron con los
que padece su padre, por primera vez en neandertales, sino que compartieron
Después de varios años publicando España, gracias a la utilización del con ellos algo más que las cuevas
artículos de alta calidad científica, Diagnóstico Genético Preimplantacional (http://www.sciencemag.org/cgi/repri
demostrando que es una buena por el equipo del Hospital Quirón de nt/328/5979/710.pdf). Los europeos y
alternativa para la publicación de los Barcelona, con la colaboración de los asiáticos, y por supuesto toda su
trabajos tanto de los embriólogos Reprogenetics. Así, se demuestra una descendencia, tenemos entre un 1-4%
clínicos como de los investigadores en la vez más la utilidad de esta técnica para de DNA neandertal; no así los africanos,
biología del desarrollo en general, la que las parejas que tengan un riesgo por lo que el “encuentro” debe haber
Revista ASEBIR ha sido indexada en la genético elevado puedan conseguir el ocurrido al salir los primeros humanos
base de datos Latindex, muy utilizada en sueño de concebir un niño sano. modernos de África, probablemente en
iberoamérica, y en la base de datos de el medio oriente. Algunos de los fósiles,
ciencia y tecnología (ICYT) del Consejo CERTIFICACIÓN ASEBIR DE EMBRIÓLOGO cuya recuperación fue fruto de un
Superior de Investigaciones Científicas CLÍNICO trabajo exhaustivo de los investigadores
(CSIC) de España. También ha sido españoles, determinante para este
aceptada para su inclusión en el Índice Como se ha anunciado ya en la última hallazgo, fueron obtenidos de la cueva
Médico Español (IME), la base de datos Asamblea de ASEBIR en el marco del de El Sidrón, en Asturias. Los
de Biomedicina del CSIC. En este Congreso de la SEF de Valencia 2010, el investigadores españoles diseñaron
momento, seguimos gestionando la pasado Mayo, el proyecto de todo un protocolo para la recuperación
inclusión de la Revista ASEBIR en otras Certificación de Embriología Clínica de de los fósiles, evitando la contaminación
bases de datos, de tal manera que ASEBIR, está en marcha. En un primer del DNA neandertal con el de los propios
nuestra repercusión sea cada vez mayor. momento, habrá una etapa de investigadores.
Este logro, que fue uno de los objetivos transición, en la cual se certificará a los
prioritarios de la nueva Junta Directiva, embriólogos que ya poseen la
y una aspiración de todos los socios de Certificación de Embriólogo Clínico
ASEBIR, se ha conseguido gracias al Senior de la ESHRE, así como a los
esfuerzo especial de nuestra compañera embriólogos que acrediten una
de la Vocalía de Publicaciones, Marga experiencia determinada. De los avances
Esbert, así como a la colaboración directa de este proceso, se os informará
de nuestro Presidente, Manuel Ardoy. oportunamente a través del correo
electrónico, la página web, y nuestra
VI CONGRESO ASEBIR, GIRONA 2011 revista.

Los preparativos para nuestro VI RENOVACIÓN DE LA PÁGINA WEB
Congreso en Girona 2011 van viento en
popa. Tanto la organización local como Nuestra página web está sufriendo una
la Vocalía de Congresos están trabajando remodelación profunda, de tal manera
a marchas forzadas, para que nuestro VI que, en breve, podréis contar con una
Congreso tenga el mismo éxito, o página más atractiva, manejable e
superior, al alcanzado por el V Congreso interactiva.
de Valencia. En la última página de este
número, podéis ver ya el primer anuncio Estamos seguros de que esta renovación
del Congreso ASEBIR de Girona, como un permitirá a los socios, y al público en
avance de lo que esperamos sea, una vez general, una navegación más cómoda y
más, un momento de reunión y reflexión amigable que pondrá a nuestro alcance
científica (y lúdica) que nos sirva para una información relevante y de gran
estrechar aún más los lazos entre los interés para todos nosotros.
embriólogos clínicos, y, en general,
entre los biólogos de la reproducción. ¿SE CRUZARON NUESTROS ANCESTROS
CON LOS NEANDERTALES?
Como siempre, la base de ese éxito será
la colaboración y participación de Aunque nos toque tangencialmente,
nuestros socios, lo cual damos por también resulta interesante para la
descontado. Biología de la Reproducción. El 7 de
Mayo, la revista Science publicó un
UN LOGRO MÁS PARA EL DIAGNÓSTICO artículo firmado por prestigiosos
GENÉTICO PREIMPLANTACIONAL investigadores de diversas
nacionalidades, entre ellos varios
El pasado mes de Marzo, los medios investigadores españoles, donde se
recogieron la noticia del nacimiento de demostraría como los humanos

INFORMAC IÓN PARA LOS AUTORES
Normas de publicación.
44

NORMAS DE PUBLICACIÓN

NORMAS DE PUBLICACIÓN Claves, en Español e Inglés (Summary individuals using computer-assisted
and Key Words), así como de la analysis. Fertil Steril 1993; 59:418-423.
La Revista ASEBIR es una publicación del traducción del Título al Inglés. El orden
ámbito de la Biología de la sugerido para estos artículos es: Título B) Artículo de revista con más de seis
Reproducción, abierta a considerar en Español; Título en Inglés; Nombre y autores
cuantos trabajos afines a esta área de Apellidos de cada uno de los autores;
conocimiento puedan adaptarse a uno Nombre completo del Centro, con la Marrama P, Baraghini GF, Carani C, Celan
de los siguientes apartados: Artículos dirección para la correspondencia, MF, Giovenco P, Grande F, et al. Further
originales, Temas de Actualidad y incluido el correo electrónico del autor studies on the effects of pentoxifylline
Debate. responsable; Resumen y Palabras Clave, on sperm count and sperm motility in
en Español e Inglés; Introducción; patients with idiopathic oligo-
Además, la Revista ASEBIR también da Material y Métodos; Resultados; asthenozoospermia. Andrologia 1985;
cabida a la actualidad en sus secciones Discusión; Agradecimientos; Referencias 17:612-616.
de Noticias y Agenda. Por otra parte, la Bibliográficas; Tablas y Figuras. Las
Revista ASEBIR cuenta con un apartado tablas se numerarán con números C) Libro completo
de Formación Continuada, y un Aula romanos y las figuras con números
Joven, en la que los embriólogos jóvenes arábigos. Los pies de figura deberán ser Colson JH, Armour WJ. Spermatogenesis.
pueden publicar sus primeros trabajos. listados en una hoja aparte, al final del 2º ed. Londres:Delmar Publishers;1996.
artículo, y cada figura llevará escrita su
La Revista ASEBIR se publica numeración. D) Capítulo de libro
semestralmente, por lo que es
indispensable que los escritos sean Las citas bibliográficas deben ser Siracusa G, Felici M, Salustri A. Meiotic
enviados antes del 31 de Marzo, para el directas, consignándose en el texto el maturation of the mammalian oocyte.
primer número del año (Junio) y antes nombre del autor o de los dos autores y En: Ach RH, Balmaceda JP, Johnston I,
del 30 de Septiembre, para el segundo el año, p. ej. (Smith, 1993) o bien (Smith editors. Gamete Physiology. 2º ed. New
número del año (Diciembre). Los and Michigan, 1997); y si son más de dos York:Raven Press; 1990. p.129-144.
artículos originales serán sometidos a la autores, consignándose el primero
evaluación de dos revisores externos y seguido de “et al.,”, p. ej. (Smith et al., E) Comunicación a congreso
deberán ser acompañados de una carta 1998). Para agrupar varias citas, se
en la que se declare que el artículo no ha encadenarán con “;”, p. ej. (Smith and Bengston S. Hatching assisted. XXII
sido publicado con anterioridad en otro Michigan, 1997; Smith et al., 1998). Meeting of European Society of Human
medio, y donde se ceda los derechos de Reproduction and Embryology; 1997
publicación a ASEBIR. El formulario para Las referencias se presentarán en la Junio 20-23; Roma, Italia. p. 1561-1562.
esta carta se puede descargar desde la sección Referencias Bibliográficas por
página web de ASEBIR. Para la orden alfabético, siguiendo las normas Para la sección de Debate, se aceptarán
reproducción de material ya editado es del International Committee of Medical textos de no más de dos hojas a 30
necesaria la autorización expresa de los Journal Editors 5th Edition (dichas líneas, incluidas un máximo de cinco
propietarios del copyright. normas se pueden consultar en JAMA referencias bibliográficas y dos figuras
1997; 277:927-934). si las hubiere, que reflejen la opinión de
Los originales deberán ser enviados los firmantes sobre el tema de discusión,
a la dirección de correo electrónico Los nombres de las revistas se que se propondrá en el número anterior
de la Secretaría de ASEBIR abreviarán de acuerdo con el estilo de la revista.
(asebir@asebir.com). usado en el Index Medicus (que se puede
consultar en la List of Journals Indexed Para las secciones de Noticias y Agenda,
Los manuscritos deberán ser remitidos que se incluye todos los años en el se aceptarán escritos que informen de
en formato DOC (Times New Roman 12p, número de Enero). congresos u otros eventos o novedades
a doble espacio), acompañado del relacionados con la Biología de la
documento correspondiente en PDF. A continuación se da un ejemplo de Reproducción o la actividad asociativa
Para los artículos en general se sugiere formato de citas bibliográficas: de ASEBIR, siempre que identifiquen de
una extensión no superior a las trece manera clara los organizadores de los
hojas a 30 líneas, con no más de seis A) Artículo de revista con menos de seis mismos.
figuras y seis tablas. autores:

Los Artículos Originales, Aula Joven y Lewis SE, Moohan JM, Thompson W.
Formación Continuada deben estar Effects of pentoxifylline on human
acompañados de un Resumen y Palabras sperm motility in normospermic

ASOCIACIÓN PARA EL ESTUDIO DE LA BIOLOGÍA DE LA REPRODUCCIÓN

asebir@asebir.com | www.asebir.com

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