Tecnicas a.f.q.a.

TÉCNICAS DE ANÁLISIS FÍSICO – QUÍMICO DE
ALIMENTOS

ÍNDICE:

1. GENERALIDADES DEL ANALISIS DE ALIMENTOS
2. PREPARACIÓN DE LA MUESTRA PARA EL ANÁLISIS FÍSICO –
QUÍMICO.
3. MÉTODOS DE ANÁLISIS FISICO – QUÍMICOS DE ALIMENTOS.
4. ANÁLISIS DE LOS COMPONENTES GENERALES DE LOS
ALIMENTOS.
a. Agua y sólidos totales.
b. Compuestos nitrogenados.
c. Lípidos.
d. Hidratos de Carbono.
e. Vitaminas.
f. Sustancias minerales.
g. pH
h. Acidez valorable total
i. Alcohol

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1. GENERALIDADES DEL ANÁLISIS DE ALIMENTOS

Es necesario realizar un análisis de alimentos para asegurar que sean aptos
para el consumo y para asegurar que cumplen con las características y
composición que se espera de ellos.

El análisis de alimentos comprende tres grandes aspectos:
a. Análisis de composición y valor nutritivo
b. Análisis de impurezas
c. Detección de fraudes

En los dos primeros casos tenemos dos tipo de análisis:
• Análisis inmediato: en el que se realiza una evaluación de los
componentes globales de los alimentos. Se evalúa el contenido global en
grasa, proteínas, hidratos de carbono, humedad y cenizas.
• Análisis último: en el que se evalúan los componentes concretos y se
determinan las impurezas que se puedan detectar.

Un FRAUDE es una acción que implica un engaño al consumidor. Hay cinco
tipos de fraudes:

Adulteración: consiste añadir o eliminar alguna sustancia en el alimento
con el fin de variar su composición, peso o volumen; o bien corregir u
ocultar algún defecto que lo haga de menor calidad.
Añadir agua a la leche
Añadir colorantes al vino para enmascarar defectos de color
Falsificación: consiste en sustituir un alimento por otro de meno precio.
Vender harina de centeno (o mezcla) como harina de trigo
Alimentos alterados: un alimento está alterado cuando por causas no
provocadas presenta características o composición que mermen o anulen
su valor nutritivo (aunque el alimento sea inocuo al consumirlo).
Alimento sometido a un tratamiento térmico excesivo en el que se
han eliminado todas las vitaminas termolábiles.
Alimentos contaminados: un alimento se considera contaminado cuando
contiene gérmenes patógenos, toxinas o parásitos productores o
transmisores de enfermedades. También alimentos que contienen
agentes polucionantes o isótopos radioactivos en cantidades superiores a
la legales. El consumo de estos alimentos no tiene por qué desencadenar
daño sobre el consumidor.
Alimentos nocivos: un alimento es nocivo cuando produce daño en el
consumidor. Se puede dar a tres niveles:
Toxicidad aguda: consumo en una sola vez de cantidades grandes
del tóxico, como mayonesa con Salmonella.
Toxicidad crónica: como consumir agua con plomo, que no se
elimina y puede dar lugar a la enfermedad conocida como
saturnismo.

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Toxicidad selectiva: productos nocivos para un grupo de
consumidores, como que un celíaco coma pan.

A la hora de realizar un análisis sobre un alimentos, nos podemos encontrar
con tres problemas principalmente:

I. Gran variabilidad de componentes, que además no están en
cantidades fijas en productos similares. Dificulta el análisis porque
hay que buscar componentes que sólo se encuentren en un
ingrediente del alimento. Por ejemplo, para saber la cantidad de
huevo que tiene una pasta se estudia el colesterol, y sabiendo la
cantidad mínima de colesterol que puede tener un huevo, sabremos
cuántos huevos hay.
II. Gran cantidad de componentes en el alimento, que hace que puedan
aparecer un número alto de interferencias analíticas. Por esto,
existen diversas etapas de extracción, purificación y separación.
III. Muchas veces interesan componentes minoritarios, lo que obliga a
realizar etapas de purificación y concentración y a emplear técnicas
que sean lo suficientemente sensibles.

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2. PREPARACIÓN DE LA MUESTRA PARA EL ANÁLISIS FÍSICO -
QUÍMICO

Todo análisis se inicia con la toma, la conservación y el tratamiento de una
muestra de la sustancia en cuestión.

Si la característica o las características que se quieren evaluar son la
presencia o ausencia de una determinada sustancia en un producto
alimenticio, el control de calidad es relativamente simple, ya que basta con
inspeccionar uno de los alimentos para conseguir la información buscada.

En cambio, si la propiedad tiene carácter aleatorio, es decir, si su variación
está asociada con una cierta probabilidad y, por tanto, sólo afecta a un
cierto número de componentes de la “población” total de productos, la
valoración es más difícil.

Tales características aleatorias pueden ser el contenido en una cierta
sustancia, la carga bacteriana, el peso neto del producto...

Aunque el examen no sea destructivo, es prácticamente imposible examinar
todos los elementos de un lote de fabricación o de almacenamiento; por
tanto, debemos concretar el control a un grupo, que constituirá la muestra,
y el estudio hecho sobre ella será la estimación sobre el muestreo.

Esta estimación se puede realzar sobre atributos, es decir, asignando cada
uno de los elementos examinados a una de las dos categorías establecidas
como aceptable o no aceptable, según la propiedad analizada.

Asimismo, es posible hacer la estimación por variables; en este caso, se
mide el carácter analizado y, según esta medida, se ordenan los elementos
objeto de estudio.

Esta segunda forma de trabajo suministra más información que la primera,
pero es más compleja.

La muestra elegida debe cumplir con dos características primordiales:

*Aleatoriedad, esto es, todos los elementos que constituyen la población
han de tener la misma probabilidad de ser elegidos como componentes de
la muestra.

*Representatividad, es decir, en la muestra elegida han de estar
representados todos los posibles subgrupos que componen la población
total.

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En ocasiones ambas condiciones pueden presentar contradicción, puesto
que, por la primera, la aleatoriedad, es posible que no se escojan algunos
elementos pertenecientes a un subgrupo determinado.
Es posible obviar este inconveniente mediante procedimientos de
estratificación, es decir, subdividiendo la población inicial en subgrupos o
estratos, según uno o más criterios que se interesen para el estudio y,
dentro de esos estratos, seleccionando aleatoriamente elementos que, una
vez juntos, compongan la muestra final.

Un problema frecuente es concretar la cantidad óptima de elementos de la
muestra, ya que si ésta es demasiado pequeña, su representatividad no
estará garantizada, y si es grande en exceso, multiplicaremos esfuerzo y
tiempo inútilmente.

Hay un sistema de trabajo que consiste en obtener el número de elementos
de la muestra aplicando diferentes criterios probabilísticos.

Para el análisis químico sencillo es suficiente determinar n elementos con la
siguiente expresión:

N = C/N

En ella, N es la población total sobre la que se realiza el muestreo y C, un
factor relacionado con el grado de precisión de éste y la homogeneidad de
la población; para una población homogénea, C es menor que uno, pero, si
la heterogeneidad es alta, llega a ser mayor.

PREPARACIÓN DE LA MUESTRA

Una vez que se ha seleccionado la muestra, se preparará dependiendo
según el tipo de análisis que se vaya a hacer.

Las muestras se preparan de acuerdo con las características de los
productos; no obstante, todas las operaciones tienen por finalidad conseguir
una muestra lo más homogénea posible, porque si el tratamiento es
insuficiente, es posible que los resultados no sean representativos.

Existen diversas técnicas que aseguran un muestreo adecuado.

Una de las más simples que, además, es aplicable a la mayoría de los
alimentos, excepto a los líquidos, es la técnica del cuarteo, que consiste
en recoger el material de diferentes puntos del alimento, o de distintos
grupos del alimento, en una cantidad superior a la necesaria para el ensayo.
Este material se distribuye en cuatro cuadrantes, previa homogenización, y
se recoge el correspondiente a dos cuadrantes opuestos, que se vuelve a
mezclar y a presentar como cuatro cuadrantes, procediéndose de la misma
manera, hasta llegar a conseguir la cantidad de muestra necesaria.

Con el objeto de facilitar la preparación del alimento del que se van a
obtener las muestras, y teniendo en cuenta la enorme heterogeneidad de

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los productos alimenticios, los agruparemos en cinco clases, según el
tratamiento que reciba la muestra:

• Alimentos duros: chocolate, queso curado, frutos secos, etc. Se
rallan las muestras, evitando la separación de la grasa todo lo que
sea posible.
• Alimentos secos: cereales, legumbres, harinas, leche en polvo...Se
mezclan y muelen; finalmente, se tamiza la preparación.
• Alimentos húmedos: carnes, pescados, frutas, etc. Se quitan las
diferentes capas protectoras con cuchillos y trituradoras eléctricas y
se homogenizan.
La muestra se guarda en frascos limpios y secos, que deben quedar
llenos para prevenir pérdidas de humedad. Después, se almacena en
refrigeración con el fin de evitar su deterioro o cualquier cambio de
composición.
• Alimentos líquidos: zumos, salsas, yogures...Se recoge la muestra,
al máximo posible, dentro de un vaso o de un mortero seco y se
homogeniza el producto batiéndolo. Se pone la muestra a una
temperatura próxima a los 20 º C. Si se desea conservar, se realizará
a temperaturas de refrigeración.
• Alimentos grasos: aceites o grasas sólidas. Si las muestras son
líquidas, deben estar fluidas y estar perfectamente limpias. Si el
producto presenta turbidez o materia depositada, en algunas
determinaciones es suficiente con agitar enérgicamente antes de
extraer la muestra; para otras determinaciones, sin embargo, es
necesario calentarla, agitarla y dejarla decantar. A continuación, se
filtra sobre papel, en estufa mantenida a una determinada
temperatura. Los productos sólidos (mantequilla o manteca) se han
de fundir y filtrar en caliente.

En todas las operaciones y manipulaciones del alimento, es preciso evitar su
deterioro o cualquier cambio en su composición, ya sea de naturaleza
enzimática, oxidativa o por contaminación.

Además, hay que evitar la pérdida de componentes volátiles y la absorción
de humedad o de sustancias que puedan alterar su composición.

La cantidad de muestra está en relación con los análisis que se desee
realizar y con los métodos aplicados; en todo caso, cuando se hagan las
determinaciones específicas para cada uno de los alimentos, se tiene que
seguir el procedimiento marcado para la preparación de la muestra. En
general, se puede afirmar que, en condiciones adecuadas, ha de haber
cantidad suficiente para dividirla en tres partes, que se conservarán por
separado en recipientes limpios, secos y con un cierre que asegure su
hermeticidad, debidamente etiquetadas con todos los detalles sobre su
origen, cantidad, fecha, persona que realiza el muestreo, procedimiento de
la toma, condiciones de conservación, si existen, etc.

En la conservación de las muestras se debe tener presente el tiempo
previsto hasta el inicio del análisis y los conservantes, si se añaden, no han
de interferir las determinaciones posteriores.

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3. MÉTODOS DE ANÁLISIS FISICO – QUÍMICO EN ALIMENTOS

A continuación, vamos a ver algunas de las técnicas físico químicas que se
utilizan en el análisis de alimentos.

VOLUMETRÍAS

Las volumetrías consisten en medir el volumen de una disolución de
concentración conocida necesario para reaccionar con la sustancia
problema. A partir del volumen gastado de la sustancia valorante, se puede
determinar la cantidad de analito.

Cuando se termina la reacción se alcanza el punto de equivalencia. En ese
momento ocurren diversos cambios físico – químicos que podemos percibir
directamente o por el empleo de una sustancia indicadora. Cuando
detectamos esos cambios, se alcanza el punto final. No siempre coincide el
punto de equivalencia con el punto final, lo deseable es que coincidan.

GRAVIMETRÍAS

Las gravimetrías son técnicas en la que la determinación final se basa en
una pesada en una balanza analítica. La mayor precaución que hay que
tener es que si lo que vamos a pesar ha sido previamente calentado, el
enfriamiento se realice en ausencia de humedad, para ello se usan
desecadores. Esto es importante, porque sino se pesa agua.

EXTRACCIÓN

Las extracciones pueden ser sólido – líquido y líquido – líquido.

En las extracciones sólido – líquido, está el extractor continuo más
característico que es el Soxhlet. Con este mecanismo llega solvente
continuamente y entra en contacto con el producto. El solvente junto con el
componente que se quiere extraer, cae en una cubeta. En ella se evapora el
disolvente, no el soluto. Son extracciones muy eficaces.
DESTILACIÓN

La destilación es la técnica de separar mediante calor los distintos
componentes de la mezcla. El fundamento de la destilación consiste en
calentar una muestra y que uno de los componente destile, éste se enfría,
condensa y se puede recoger. En la corriente de vapor de agua se arrastran
también algunos componentes que luego se recogen por medio de vapor.
MÉTODOS ESPECTROMÉTRICOS

La mayoría de estas técnicas se basan en la interacción entre la radiación
electromagnética y la materia. Cuanto menor es la longitud de onda de una
radiación, mayor es la energía asociada. Dependiendo de la longitud de
onda tenemos distintas radiaciones.

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Básicamente, existen cuatro tipos de interacciones entre materia y
radiación:
• Absorción de energía. Es en lo que se basa la técnica de
colorimetría. En esta técnica se mide la concentración de una
sustancia coloreada, basándonos en que ésta es proporcional a la
intensidad de color en un intervalo determinado. El color
observado puede ser propio de la sustancia (cualquier colorante) o
bien, puede formarse tras la adición de algún reactivo.
• Emisión de energía posterior a una absorción
• Refracción de la luz por la materia. Se mide por el índice de
refracción. Cada sustancia tiene un índice de refracción específico,
y por tanto, la medida de éste índice nos sirve para caracterizar
sustancias o bien, para saber la cantidad de algún componente
determinado.
• Rotación de la luz polarizada. La técnica en la que se basa es la
polarimetría. La luz polarizada es aquella que vibra en un solo
plano. Hay sustancias que tienen la capacidad de desviar el plano
de la luz polarizada, unas hacia la derecha (dextrógiras) y otras
hacia la izquierda (levógiras). El ángulo de desviación está
relacionado n la concentración de la sustancia. Midiendo esta
desviación en las polarimetrías, podemos estimar la cantidad de
analito existente, por ejemplo la glucosa es dextrógira y la
fructosa es levógira.

Las técnicas que se basan en estas propiedades pueden ser:

Espectrometría de UV visible: se basa en que la absorción de luz
por parte de la sustancia es directamente proporcional a la concentración
de la misma. Esta técnica sirve para análisis cuantitativo
fundamentalmente.

Espectrofotometría de fluorescencia: se basa en que algunas
sustancias vuelven a emitir en forma de luz una porción de la energía
absorbida. Una parte de la luz absorbida produce luz fluorescente. En
bajas concentraciones, la intensidad de la fluorescencia es proporcional a
la concentración.

Espectrofotometría infrarroja: se da un bombardeo en la zona del
infrarrojo y se hacen barrido que nos permiten identificar estructuras
características. En general, da más información sobre el compuesto que
en el visible. Es una técnica muy usada para el análisis de cafeína, o
para ver rasa y lactosa en la leche.

Espectrometría de absorción atómica: se hace una atomización en
una cámara de grafito, de manera que se crea una niebla de la muestra.
Hay un quemador con forma de ranura que da una llama con una
determinada longitud de onda. los átomos se les hace llegar una
radiación con una longitud de onda específica, de forma que los átomos
absorben energía a esa longitud de onda. La cantidad de luz absorbida
después de pasar a través de la llama determina la cantidad de analito
en la muestra. Cuanta mayor cantidad de componente hay en la llama,

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mayor cantidad de energía se absorbe. Es una técnica muy sensible, se
usa por ejemplo para detectar metales pesados.

Fotometría de llama: se mide la intensidad de la radiación emitida
por una sustancia que ha absorbido energía al quemarse una llama. Es
muy sensible, se usa para metales.

Espectrometría de masas: lo primero que hay que hacer en esta
técnica es ionizar las sustancias y posteriormente romperlas en trozos. A
continuación se separan los distintos trozos en base a la relación masa /
carga. En los espectros se puede visualizar la abundancia de las distintas
relaciones masa / carga. Así, cada sustancia tendrá un espectro de
masas característico. La espectrometría de masas sirve para análisis
cualitativo básicamente.

Resonancia magnética nuclear (RMN) y Resonancia de spin
electrónico (RSN): En ambas se miden las propiedades magnéticas de
los spines. Esta técnica permite obtener información sobre la
composición de las sustancias y datos sobre las propiedades físicas.

MÉTODOS CROMATOGRÁFICOS

La cromatografía es un método de separación con alta resolución. Es un
método físico de separación, donde los componentes se distribuyen en dos
fases: una fase estacionaria y una fase móvil, que se va moviendo y
transporta a los componentes a distintas velocidades por el lecho
estacionario. Los procesos de retención se deben a continuas adsorciones y
desorciones de los componentes de la muestra a lo largo de la fase
estacionario.

Hay varios tipos de cromatografía. Los más importantes son:

Cromatografía en columna: que puede ser líquida o de gases.
• Cromatografía líquida (HPLC): En la cromatografía líquida, los
componentes a separar se añaden de forma soluble por la parte
superior de la columna, quedando retenidos en la misma.
Posteriormente, los componentes se desplazan arrastrados por una
fase móvil líquida. Dependiendo de la adsorción selectiva de cada uno
de ellos por la fase estacionaria se desplazan a distintas velocidades,
efectuándose la separación. Para alcanzar una alta resolución, sería
necesario emplear columnas excesivamente largas o empaquetamiento
muy compactos, lo que se traduce es un desarrollo muy lento. Estos
inconvenientes se han resuelto en la cromatografía de alta presión
(HPLC), en la que se trabaja con pequeñas columnas muy
empaquetadas y forzando el paso de la fase móvil mediante elevadas
presiones. Al final, tiene un sistema de registro gráfico
(Cromatograma), que es un registro de picos donde para cada
componente el área del pico es proporcional a la concentración.
Este tipo de cromatografía tiene muchas aplicaciones, por ejemplo,
para determinar aditivos, colorantes, vitaminas....

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• Cromatografía de gases: se basa en la separación de los componentes
de una muestra entre la fase móvil (gas portador) y la estacionaria
(líquido no volátil adsorbido en un soporte). La separación se logra
gracias a diferencias de solubilidad en la fase estacionaria y a
diferencias de volatibilidad. La fase móvil es inerte, solo arrastra
moléculas a través del sistema. La separación se debe solamente a las
interacciones entre la muestra y la fase estacionaria.

Cromatografía en papel: consiste en una tira de papel de filtro que
actúa como soporte, en la cual se marca el lugar donde se añade la muestra
dejando que el disolvente ascienda por capilaridad. Cada componente
asciende hasta una altura. Cuando se termina, se marca la posición y se
deja secar. Pueden aparecer manchas coloreadas según los distintos
componentes o utilizar técnicas de revelado.

Cromatografía en capa fina: es una técnica que se ideó para solventar
las limitaciones de la cromatografía en papel. Es una técnica de separación
e identificación de sustancias por medio de un disolvente que se mueve en
una capa delgada de un adsorbente depositado sobre una placa de vidrio
que actúa como soporte inerte.

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4. ANÁLISIS DE LOS COMPONENTES GENERALES

Las determinaciones básicas de un alimento consisten en investigar una
serie de elementos, en algunos casos de forma genérica; por eso se suele
emplear el término “bruto” para indicar que lo que se determina no son
compuestos individuales, sino conjuntos de sustancias más o menos
próximas estructural y funcionalmente.

Estas determinaciones comprenden agua (humedad y sólidos totales),
cenizas totales, fibra bruta, extracto etéreo (grasa bruta), nitrógeno y
proteína bruta.

Al resto de sustancias se las llama sustancias extractivas no nitrogenadas,
carbohidratos por diferencia o carbohidratos totales (en este caso está
incluida la fibra bruta) y se las determina restando a 100 la suma de los
porcentajes de agua, cenizas, fibra bruta, extracto etéreo y proteína bruta.
Es posible también determinar directamente los hidratos de carbono por
métodos físicos y químicos.

Además, es interesante determinar el pH y, en algunos alimentos, la acidez
valorable, el alcohol y el potencial redox.

A partir de la determinación de algunas de estas sustancias se pueden
identificar sus elementos constitutivos; así, por ejemplo, una vez extraído el
extracto etéreo, se identifican los ácidos grasos o, en el caso de las cenizas,
se pueden determinar los iones y los cationes.

1. ANÁLISIS DEL CONTENIDO EN AGUA Y SÓLIDOS TOTALES

Todos los alimentos contienen agua en mayor o menor proporción; en los
alimentos naturales hay entre un 60% y un 95 % de agua, como promedio.
El hecho de conocer este contenido y poder modificarlo tiene aplicaciones
inmediatas: saber cuál es la composición centesimal del producto, controlar
las materias primas en el área industrial y facilitar su elaboración, prolongar
su conservación impidiendo el desarrollo de microorganismos, mantener su
textura y consistencia y finalmente, frenar los intentos de fraude y
adulteración si el producto no cumple los límites fijados por la normativa
vigente.

En algunas ocasiones, es difícil determinar con exactitud la cantidad de
agua de un alimento. Se puede considerar apropiado cualquier método que
proporcione buena reproductibilidad con resultados comparables, siempre
que se siga estrictamente ese procedimiento mismo procedimiento en cada
ocasión. También es admisible el uso de métodos rápidos para los que las
casas comerciales suministran los correspondientes materiales, si sus

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resultados se contrastan con los suministrados por algún otro método
convencional.

Los resultados se suelen expresar como humedad, agua y sólidos totales.
Se habla de humedad cuando la cantidad de agua que hay en un alimento
es relativamente baja (harinas, legumbres...). Se habla de agua en
alimentos con mayor contenido acuoso (vegetales y carnes) y de sólidos
totales en alimentos líquidos que se obtienen restanto a 100 la cantidad de
agua.

La determinación de agua es necesaria ya que en muchos alimentos se
regula su contenido máximo en base a alguna de las siguiente
consideraciones:

1. La adición de agua en algunos alimentos puede suponer una
adulteración.
2. Contenidos elevados de agua en alimentos dificultan la conservación.
3. Contenidos elevados de agua en los alimentos crean dificultades
tecnológicas en algunos procesos.

Normalmente para su determinación se utilizan el método de desecación,
que se basa en el cálculo de porcentaje en agua por la pérdida de peso
debida a su eliminación. Ofrecen buenos resultados que se pueden
interpretar sobre bases de comparación, pero hay que tener en cuenta
ciertas precisiones, en algunos casos, si se utiliza calor, a temperaturas
altas el alimento puede deteriorarse y facilitar la eliminación de otras
sustancias de descomposición así como la pérdida de otras sustancias más
volátiles que el agua.

Hay distintos métodos para determinar el contenido en agua:

MEDIDAS DE PARÁMETROS FÍSICOS

- Índice de refracción (miel)
- Densidad (alimentos líquidos)
- Punto de solidificación (alimentos líquidos)
- Absorvancia en el NIR
- Parámetros eléctricos (alimentos en polvo)
Todas estas medidas van a dar unos valores apoximados. Es
necesario realizar una calibración o una comparación de resultados
con otros métodos de análisis de agua.

TÉCNICAS DE SECADO
Se realiza una gravimetría. El fundamento de la técnica es: se pesa la
sustancia con humedad, se seca y se vuelve a pesar la sustancia seca.
Con la diferencia de pesos se puede hallar fácilmente el porcentaje de
humedad.
Como la mayoría de los métodos de secado se emplea calor, es muy
importante que el último enfriamiento se realice en ausencia de
humedad (desecadores).
Para realizar el secado, contamos con:

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Estufas de desecación: es la técnica más empleada. Se utilizan
temperaturas de 102 – 105ºC (siempre por encima del punto de
ebullición del agua). Para garantizar la completa desecación de la
muestra es necesario trocearla, para así aumentar la superficie de
contacto; y en el caso de alimentos líquidos hacer previamente un
baño de vapor y retirar la capa superior que se forma para facilitar la
evaporación.

Desecación con intermedio: también se realizan en estufas y
consiste en añadir una sustancia inerte que se mezcla con el alimento
de manera que se aumente la superficie de desecación y así evitar la
formación de costras.

Desecación a vacío: se utilizan para minimizar los problemas que
pueden tener las temperaturas tan elevadas. Se emplea una estufa
donde se genera un vacío de modo que el agua se evapora a menor
temperatura y así no se produce la descomposición de sustancias.

Desecación bajo corriente de aire seco: se hace a temperatura
ambiente o menor de 100ºC, así no se produce descomposición.

Desecación con agentes deshidratantes fuertes: se hace a
temperatura ambiente o menor de 100ºC, así no se produce
descomposición.

Desecación bajo lámpara de infrarrojos: se usa poco, pero es
más rápida. Esta técnica provoca la evaporación del agua, hay que
controlar que no se queme la muestra.

Aplicación de microondas: se usa poco, pero es más rápida. Son
unos aparatos automáticos que tienen una balanza, se calientan y
dan el resultado directamente.

En cualquiera de estas técnicas el cálculo final que se ha de aplicar es:

(M − m) • 100
% Humedad = M

Siendo :
M = masa inicial, en g. de la muestra.
m = masa, en g., de la muestra seca.

TÉCNICAS BASADAS EN LA DESTILACIÓN

Se emplea una aparato llamado Dean – Stark, que consta de un matraz
de fondo redondo acoplado a un refrigerante. En el matraz colocamos el
alimento molido cuya humedad queremos determinar junto con un
disolvente orgánico volátil de punto de ebullición próximo al del agua e
inmiscible con ella. El conjunto de disolvente y alimento se calienta y se

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produce una codestilación del disolvente y el agua del alimento. Al llegar
al refrigerante condensan cayendo sobre una especie de bureta
graduada donde ambos se separan, ya que son inmiscibles. Se mide el
agua una vez que el proceso haya finalizado y se haya evaporado todo.
El empleo de esta técnica evita los problemas de degradación de
sustancias y también la pérdida de sustancias volátiles. El mayor
inconveniente es que la lectura de un volumen es mucho menos precisa
que una pesada.

MÉTODOS QUÍMICOS

Se basan en reacciones químicas en las cuales participa el agua. Estas
reacciones se llevan a cabo en un medio anhidro de modo que el agua
procede única y exclusivamente del alimento. Se suelen emplear en
alimentos con bajos contenidos en agua. Estos métodos evitan
problemas de degradación de sustancias y pérdida de volátiles. El más
utilizado es:

Método de Karl - Fischer: Va bien para productos azucarados. Se
basa en la reacción: I2 + H2O + SO2 ↔ 2I − + 2H+ + 2H2 SO 4 valorándose
el I2 que no reacciona. La muestra se pone en contacto con metanol
anhidro para que éste extraiga todo el agua y posteriormente se hace
una valoración con el reactivo de Karl – Fisher, que contiene I2 y SO2. El
yodo del reactivo va reaccionando con el agua, de manera que el punto
final de la reacción se detecta gracias al exceso de yodo cuando ya no
queda agua. Este exceso se puede detectar de forma visual, fotométrica
o electrométricamente.

La determinación de agua según este método suele emplearse cuando la
determinación de agua o humedad por pérdida de peso es imprecisa (es
decir, aquellos alimentos que tienen un contenido de humedad bajo). A
pesar de la necesidad de utilizar procedimientos bastantes exactos para
calibrar el proceso y que el número de muestras analizadas está
limitado, muchos analistas recomiendan este método como
procedimiento de referencia, particularmente para la determinación de
niveles bajos de humedad en los alimentos. Es el que se emplea en
primer lugar en productos como azúcar, chocolates, melazas y
legumbres secas.

MEDIDA DE LA ACTIVIDAD DE AGUA

El parámetro que va a estar más relacionado con la alterabilidad de los
alimentos no es el agua, sino la actividad del agua (aw). La actividad de
agua es una medida que nos da idea del agua disponible por parte de los
microoganismos, es decir, agua que no está fuertemente retenida.

Para medirla se encierra el alimento en un compartimento, se alcanza un
equilibrio y se mide la humedad en la capa de aire que rodea la muestra.

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2. NITRÓGENO Y PROTEÍNA BRUTA

En un análisis elemental de un alimento, lo más frecuente y menos
complejo es investigar la proteína bruta de los diferentes aminoácidos o
proteínas específicas. No obstante, los procedimientos más utilizados no
determinan directamente esta proteína, sino el contenido en nitrógeno,
que se expresa como nitrógeno total y que se obtiene mediante una
combustión líquida en la que, en un primer paso, el nitrógeno de la
muestra se convierte en sulfato amónico, el cual luego se transforma en
amoniaco. Este amoniaco se destila y se valora en una solución ácido
normalizada.

Esta técnica desarrollada por Kjeldahl, se ha convertido en método de
referencia con múltiples modificaciones. Determina la materia
nitrogenada total, que incluye tanto al nitrógeno proteico como al no
proteico.

La proteína bruta se halla multiplicando el nitrógeno total (N) por un
factor, que se ha calculado considerando los componentes básicos de un
gran número de muestras del mismo alimento, y expresando el
resultado como proteína. Alguno de estos factores, universalmente
aceptados, son los siguientes.

Factor General: 6,25
Leche y Derivados: 6,38
Harina de Trigo: 5,70
Gelatina: 5,55
Arroz: 5,95
Huevos: 6,68
Productos de soja: 6,00

La técnica más utilizada es el método Kjeldahl.

MÉTODO KJELDAHL

Este método se trata de una volumetría. El método puede resumirse en
tres etapas:

a) Digestión de la muestra con ácido sulfúrico concentrado en presencia
de catalizadores que aceleran el proceso, aumentando el punto de
ebullición del ácido. Con esta digestión, transformamos el nitrógeno (en
su mayor parte orgánico) en sulfato amónico (nitrógeno amoniacal).
Pasamos a medio alcalino mediante la adición de hidróxido sódico
concentrado, y se destila el nitrógeno en forma de amoniaco en corriente
de vapor de agua. NH4++OH-→NH3↑.

b)El amoniaco desprendido se recoge sobre un exceso de ácido. NH3 +
H2SO4 (exceso) →(NH4)2SO4.

c) Por ultimo se valora el exceso de ácido mediante una base. H++OH-
→H2O.

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Con este método, podemos calcular el porcentaje de nitrógeno en la
muestra. Multiplicando por un número que varía según el alimento,
podemos estimar el porcentaje de proteínas.

La desventaja de este método es que se determina todo tipo de
nitrógeno en la muestra, así, si un alimento tiene muchas bases
nitrogenadas, el porcentaje de proteína se estima por encima del valor
real. Las principales ventajas son que es un método rápido y además,
económico.

MÉTODO DUMAS
En este método se hace una combustión de la muestra (entre 700 y
800ºC) y el nitrógeno procedente de esta combustión se separa y
cuantifica mediante cromatografía de gases con detector de
conductividad térmica.

De este modo, podemos estimar la cantidad de nitrógeno en la muestra,
hallar su porcentaje multiplicando por n factor, calcular el número de
proteínas.

En este método, al igual que en el anterior, se determina todo tipo de
nitrógeno en la muestra, por lo que en ocasiones, el porcentaje de
proteína se estima por encima del valor real. Además, en este caso, el
aparato es caro. Como ventaja tiene que es un método rápido.

3. DETERMINACIÓN DE GRASA BRUTA

Como en todas las determinaciones indicadas hasta aquí, con este
procedimiento se logra identificar materia capaz de disolverse en
solventes orgánicos muy eficaces para la grasa. No obstante, en los
métodos en que se emplea calor, es posible que se pierda una parte de
esa grasa por evaporación: en el mismo sentido, existen sustancias que
se extraen de forma simultánea con la grasa verdadera, como es el caso
de algunos colorantes, y que no pertenecen estrictamente a este grupo
funcional, de ahí el adjetivo “bruta” utilizado.

Los procedimientos pueden ser la extracción directa mediante un
disolvente; la extracción indirecta tras un tratamiento con un álcali o un
ácido; la medida del volumen de grasa separada por centrifugado de una
mezcla de la muestra con reactivos ácidos, alcalinos o neutros; y la
medida de cambios en el índice de refracción o en el peso específico por
variación de la concentración de la grasa en disolución. Los métodos
implican el pesado de la grasa, aunque en análisis de rutina con una
gran cantidad de muestras, se emplean métodos volumétricos más
rápidos.

Los disolventes que se usan suelen ser el éter de petróleo, que es el
mejor agente para muestras secas; el éter dietílico, más eficiente, pero
extrae sustancias no grasas; el cloroformo; el sulfuro de carbono, el

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tetracloruro de carbono... El rendimiento y la composición de los
extractos resultantes difieren según el disolvente empleado; por eso, es
necesario indicar siempre el disolvente o la técnica que se ha utilizado en
la extracción.

Los métodos más generalizados y que sirven de referencia son los de
extracción continua tipo Soxhlet o Bailey-Walker.

Si la muestra tiene interferencias en la determinación por su riqueza en
proteínas, se hidroliza con ácidos o álcalis, o la proteína se precipita con
alcohol y se disuelve en amoniaco antes de la extracción.

TÉCNICAS DE EXTRACCIÓN

La extracción de grasa se hace por medio de disolventes. Los disolventes
polares más empleados son el hexano y el éter de petróleo. Siempre que
se realice un método de extracción hay que indicar el solvente
empleado, ya que los distintos solventes no extraen los mismos
componentes.

Cuando se realiza una extracción y el alimento es sólido, hay que
realizar una etapas previas para facilitarla:

1. Desecación de la muestra: para que el solvente penetre mejor en las
células. Además, algunos solventes como el éter dietílico son
higroscópicos y pueden captar algo de agua.
2. Troceamiento y molturación: se rompen físicamente las estructuras
del alimento. Al romper las células, el solvente extrae mejor los
lípidos.
3. En alimentos ricos en proteínas, es neceario realizar una hidrólisis en
medio ácido.
4. En algún caso se emplean intermedios (como la arena) que se
mezclan en el alimento evitando aglomerados.

Después de estas etapas se realiza la extracción con éter.

A continuación se evapora el disolvente y se pesa el residuo; así, por
diferencia, se puede conocer la cantidad de grasa y calcular el porcentaje
de lípidos en el alimento.

CARACTERIZACIÓN DE GRASAS

Sobre una grasa, se pueden evaluar unos índices físicos y químicos que
nos van a servir para caracterizarla. Estos índices son:

FÍSICOS
1. Índice de refracción.
2. Densidad.
3. Punto de solidificación.
4. Punto de fusión

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QUÍMICOS
1. Índice de acidez.
2. Índice de peróxidos (mide el enranciamiento).
3. Índice de yodo (mide dobles enlaces).
4. Índice de saponificación.

CROMATOGRAMA DE ÁCIDOS GRASOS

Para hacer un estudio del perfil de ácidos grasos se hace una hidrólisis
de los triglicéridos que pasan a ácidos grasos. Luego se separan y
cuantifican por cromatografía de gases con detector de ionización de
llama. Como los ácidos grasos no son cromatografiables hay que obtener
derivados que sí lo sean. Lo más común es la obtención de ésteres
metílicos de ácidos grasos. Estos ésteres se inyectan en el cromatógrafo,
se separan los ácidos grasos y se cuantifican. Los ácidos grasos están
directamente relacionados con la producción de colesterol.

4. ANÁLISIS DE HIDRATOS DE CARBONO

Normalmente, cuando se hace un análisis de principios inmediatos se
determina: humedad, proteína bruta, lípidos (grasa bruta) y cenizas. Los
hidratos de carbono normal mente se dan por diferencia.

Si queremos evaluar los hidratos de carbono, se siguen las siguientes
etapas:

Desecación de la muestra.
Eliminación de lípidos (extracción con éter).
Extracción de hidratos de carbono.
Purificación y cuantificación por técnicas cromatográficas (HPLC).

ANÁLISIS DE ALMIDÓN

Se trata de una polarimetría. El método comprende una doble
determinación. En la primera, la muestra se trata en caliente mediante
ácido clorhídrico diluido. Previa defecación y filtración, se medirá mediante
un polarímetro el poder rotatorio de la solución.

En el segundo, la muestra se extrae mediante etanol al 40%. Tras la
acidificación del filtrado por el ácido clorhídrico, defecación y filtración, se
mide el poder rotatorio en las mismas condiciones que en la primera
determinación.

La diferencia entre las dos multiplicada por un factor común da como
resultado el contenido en almidón de la muestra.

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El método permite determinar el contenido en almidón y sus productos de
degradación de alto peso molecular en los piensos, excepto de aquellos que
contienen peladuras, pulpas, hojas o cuellos secos de remolacha, pulpa de
patata, levadura deshidratada, productos ricos en inulina (por ejemplo,
peladuras y harina de chufas) o chicharrones.

ANÁLISIS DE FIBRA

Dentro de los hidratos de carbono hay un grupo de hidratos de carbono
complejos que nuestro organismo no es capaz de digerir y que por tanto se
engloban dentro de la fibra alimentaria. Además de esta fibra, existen otros
componentes que no son de naturaleza glucídica (no son hidratos de
carbono) y esta fibra se suele analizar a parte.

Hay varios métodos, dependiendo del método empleado evaluaremos
distintos tipos de fibra:

1. Determinación de fibra bruta
Determinación en los piensos de las sustancias orgánicas libres de grasa e
insolubles en medio ácido y alcalino, convencionalmente denominadas
fibra bruta (generalmente se evalúa el contenido en lignina y celulosa). La
muestra, en su caso desengrasada, se trata sucesivamente con soluciones
en ebullición de ácido sulfúrico e hidróxido de potasio, de concentraciones
determinadas. Se separa el residuo por filtración mediante filtro de vidrio
poroso, se lava, se seca, se pesa y se calcina a una temperatura
comprendida entre 475 y 500ºC. La pérdida de peso debida a la
calcinación corresponde a la fibra bruta de la muestra de ensayo.

2. Determinación de alimentaria o dietética.
La muestra se extrae con una solución de detergente neutro en caliente.
Al residuo se le realizan ataques con una solución amilásica o proteásica y
se filtra. El residuo resultante tras los ataque enzimáticos es más próximo
a la fibra real. La determinación de las cenizas en el residuo filtrado
permite conocer, por diferencia de peso, la cantidad de celulosa,
hemicelulosa y lignina de la muestra

5. ANÁLISIS DE VITAMINAS

Para el análisis de vitaminas existen diversos tipos de métodos:

MÉTODOS MICROBIOLÓGICOS

Se basan en cultivos de cepas de microorganismos cuyo desarrollo depende
específicamente de una determinada vitamina. Se usan básicamente en
vitaminas hidrosolubles. El medio de cultivo donde realizamos la siembra
carece de la vitamina en cuestión y ésta es aportada por extractos del
alimento donde queremos evaluar la vitamina. Paralelamente se hace un
control donde sembramos el microorganismo sin vitaminas y también se
siembra el microorganismo en diversos medios con contenido vitamínico
diverso. Se compara el crecimiento.

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MÉTODOS BIOLÓGICOS

Se observan los efectos curativos o fisiológicos de las vitaminas sobre
animales de experimentación. Son los que menos se utilizan porque la
experimentación animal es muy variable, además son ensayos muy largos e
influye el factor ético. Además, los microbiológicos son mejores.

MÉTODOS FÍSICO - QUÍMICOS

Van bien para la mayoría de las vitaminas, aunque en la mayor parte de
ellos nos encontramos con tres problemas fundamentales.

1. Son más inestables. Las vitaminas se pueden destruir por calor, ácidos,
bases, luz… Por esto, durante todo el proceso (toma de muestras,
almacenamiento, procesado y análisis) deben evitarse los factores que
provoquen la destrucción de la vitamina.

2. Baja concentración de las vitaminas en los alimentos.

3. Existencia de diversos vitámeros, que son sustancias con actividad
vitamínica y composición diferente.

Desde el punto de vista analítico hay dos tipos de vitaminas: las liposolubles
o solubles en disolventes orgánicos y las hidrosolubles o solubles en agua.
Esta clasificación es útil porque da idea de los procesos extractivos que hay
que realizar.

Normalmente, las vitaminas se analizan por técnicas de HPLC.

6. ANÁLISIS DE SUSTANCIAS MINERALES

La determinación de ceniza se hace para realizar el análisis de sustancias
minerales. Bajo el nombre de cenizas se engloba el conjunto de sustancias
que quedan como residuo tras su incineración. Básicamente está formado
por sustancias inorgánicas.

Este parámetro os puede indicar una posible adulteración del alimento, pro
ejemplo un alimento en polvo donde se añade cáscara de algún fruto seco.

DETERMINACIÓN DE CENIZAS

Se entiende por cenizas como el residuo inorgánico que queda tras eliminar
totalmente los compuestos orgánicos existentes en la muestra, si bien hay
que tener en cuenta que en él no se encuentran los mismos elementos que
en la muestra intacta, ya que hay pérdidas por volatilización y por
conversión e interacción entre los constituyentes químicos.

A pesar de estas limitaciones, el sistema es útil para concretar la calidad de
algunos alimentos cuyo contenido en cenizas totales, o sus determinaciones
derivadas, que son cenizas solubles en agua y cenizas insolubles en ácido,

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está bien definido. Facilita en parte, su identificación o permite clasificar el
alimento examinado en función de su contenido en cenizas.

La determinación consiste en incinerar la muestra en horno mufla, hasta
ceniza blanca en una cápsula. Los resultados se suelen expresar
porcentualmente tras aplicar la siguiente relación:

%cenizas =
(P1 − P2 ) • 100
P − P2

P es el peso en gramos de la cápsula más el de la muestra; P1 es el peso en
gramos de la cápsula más las cenizas; P2 es el peso en gramos de la
cápsula en vacío.

Los recipientes más empleados para la obtención de cenizas son cápsulas
de porcelana

7. DETERMINACIÓN DE pH

La acidez medida por el valor de pH, junto con la humedad son,
probablemente, las determinaciones que se hacen con más frecuencia. El
pH es un buen indicador del estado general del producto ya que tiene
influencia en múltiples procesos de alteración y estabilidad de los alimentos,
así como en la proliferación de microorganismos.
Se puede determinar colorimétricamente mediante los indicadores
adecuados, pero, para su mayor exactitud, se ha de recurrir a métodos
eléctricos mediante el uso de pH-metros.

8. ACIDEZ VALORABLE TOTAL

Además del grado de acidez expresado por el pH, el contenido total de ácido
en un alimento informa sobre la formulación del producto. Se suele
concretar valorando con hidróxido sódico y un indicador. Los resultados se
dan en términos del ácido que predomina; por ejemplo, en la leche, como
ácido láctico y en el vinagre, como acético. En algunos casos, se expresa en
términos de equivalencia de peso de un álcali determinado; así, los fosfatos
ácidos utilizados en la levadura en olvo se dan como bicarbonato sódico.

9. ALCOHOL

Normalmente, el alcohol se determina destilando un volumen medido de
muestra, diluyendo con agua este destilado hasta el mismo volumen inicial
y deduciendo el contenido en alcohol a partir de la densidad del líquido
mediante tablas alcoholimétricas. La cantidad de alcohol se expresa
porcentualmente en volumen.

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