UNIDAD V, INTRODUCCIÓN.docx
- 1. UNIDAD V: DESINFECCIÓN, ESTERILIZACIÓN, USO DEL AUTOCLAVE V.1 GLOSARIO a. Esterilización: Proceso que destruye toda forma de vida microbiana. Un objeto estéril (en sentido microbiológico) está libre de microorganismos vivos. b. Desinfección: Es la destrucción, inactivación o remoción de aquellos microorganismos que pueden causar infección u ocasionar otros efectos indeseables; la desinfección no implica necesariamente esterilización. c. Desinfectante: Agente usualmente químico, que mata las formas en crecimiento de los microorganismos, pero no necesariamente las esporas. El término se refiere a sustancias utilizadas sobre objetos inanimados. d. Antiséptico: Sustancia que impide el crecimiento o la acción de los microorganismos, ya sea destruyéndolos o inhibiendo su crecimiento y actividad. Se aplica sobre superficies corporales. e. Sanitizante: Agente que reduce la población microbiana a niveles seguros, según los requerimientos de salud pública. Se aplica en objetos inanimados de uso diario, por ejemplo utensilios y equipos para manipular alimentos, vasos, platos y otros objetos de uso similar. f. Germicida: Agente que mata a los microorganismos, pero no necesariamente a sus esporas. g. Bactericida: Agente que mata a las bacterias.
- 2. h. Bacteriostático: Agente que inhibe el crecimiento de las bacterias, mientras permanece en contacto con ellas. i. Fungicida: Agente que mata los hongos. j. Fungistático: Agente que inhibe el crecimiento de los hongos, mientras permanece en contacto con ellos. k. Virucida: Agente que destruye los virus. V.2. LIMPIEZA Y DESINFECCIÓN La limpieza se define como el proceso de remover, a través de medios mecánicos y/o físicos, el polvo, la grasa y otros contaminantes de las superficies, equipos, materiales, personal, etc. Este proceso, junto con un adecuado proceso de desinfección, es indispensable para controlar la presencia de los microorganismos en el ambiente. El primer paso del proceso de desinfección es la limpieza. La limpieza remueve restos de tejido, moco, sangre, etc., que podrían interferir con la acción del desinfectante. Para realizar una limpieza adecuada se deben considerar el tipo de acción del agente utilizado (remoción mecánica, disolución o detergente), las condiciones requeridas para aplicar la solución limpiadora y el tiempo de contacto necesario para que ésta ejerza su efecto. Los instrumentos con partes removibles deberán desensamblarse de acuerdo con las instrucciones del fabricante, para asegurarse que todas las superficies se expondrán al procedimiento de limpieza. Aproximadamente 99.8% del material orgánico puede ser removido con una limpieza meticulosa. La limpieza puede ser acompañada de lavado manual o mecánico. El agente seleccionado de limpieza deberá:
- 3. o Ser capaz de remover tejido orgánico. o Capaz de prevenir depósitos flotantes. o Con baja formación de espuma. o Capaz de ser enjuagado completamente. o Compatible con los materiales que están siendo limpiados. Los detergentes enzimáticos están específicamente diseñados para penetrar y desbaratar las proteínas y la materia orgánica. Los agentes de limpieza deberán ser preparados de acuerdo con las recomendaciones del fabricante en cuanto a dilución, compatibilidad con los artículos, el uso adecuado y la temperatura de la solución. El cual debe realizarse al menos una vez al mes y en coordinación con los jefes de cada sección del laboratorio. Los desinfectantes más usados en el laboratorio clínico son los fenoles y los hipocloritos. Los aldehídos tienen una aplicación limitada y el alcohol y las mezclas de alcoholes son manos populares, aunque merecen mayor atención. A continuación mencionaremos algunos desinfectantes, como ser: Hipoclorito sódico: Ej. Lejía de uso doméstico, son muy irritantes y pueden provocar irritaciones al contacto con la piel. Yodo: Puede provocar irritaciones en mucosas y ojos o dificultades respiratorias. Compuestos de Amonio: estos son agregados a múltiples soluciones desinfectantes y aun así hay que tener cuidado con su uso. Formaldehidos y glutaraldehído: son compuestos altamente tóxicos. Se sospecha que son agentes carcinogénicos en humanos y es conocido su poder para generar irritaciones oculares y en el tracto respiratorio.
- 4. V.3 ESTERILIZACIÓN Es un proceso esencial para el funcionamiento de un laboratorio, en el cual se deben utilizar materiales absolutamente esterilizados. La desecación y la congelación eliminan muchas especies de bacterias, pero otras simplemente permanecen en estado vegetativo. El calor seco o húmedo elimina todas las bacterias combinando adecuadamente factores como la temperatura a la que se someten y el tiempo de exposición. Cuando un objeto no resiste el calor se puede esterilizar por métodos químicos como por ejemplo los fenoles, cianuro de hidrógeno, óxido de etileno, los derivados de yodo derivados mercuriales y muchas otras sustancias más. El alcohol etílico no produce esterilización completa. Otro método de esterilización actual son las radiaciones ionizantes con rayos beta y gamma y también las filtraciones por vacío. La esterilización implica la destrucción, de todos los organismos incluyendo esporas, y la desinfección supone la destrucción de los microorganismos vegetativos que pueden causar enfermedades, pero la desinfección no mata necesariamente las esporas. Los métodos más usados corrientemente en los laboratorios microbiológicos son: Calor rojo (flameado) Calor seco (aire caliente) Vapor a presión (calor húmedo) Calor rojo:
- 5. Los instrumentos tales como las asas y alambres de siembra y varillas secas se esterilizan calentándolas en la llama de un mechero bunsen hasta que se ponen al rojo. Los microincineradores se recomiendan para esterilizar asas de inoculación contaminadas con material muy infeccioso (esputos tuberculosos) para evitar el riesgo de dispersar partículas contaminadas sobre las zonas de alrededor. Calor seco: Se aplica en un horno calentado eléctricamente que se controla mediante termostatos y que está provisto de un gran ventilador circulante que asegura la uniformidad de la temperatura en todas las partes del contenido. Los equipos modernos disponen de controles electrónicos que pueden llevar la temperatura al nivel requerido y mantenerla en ese punto durante un tiempo establecido previamente y desconectar seguidamente la corriente. En algunos modelos se incorpora una cerradura solenoide para impedir que la estufa pueda ser abierta antes de que se complete el ciclo. Este dispositivo salvaguarda y protege al personal de quemaduras accidentales. El material que puede esterilizarse por este método incluye placas de petri, matraces y pipetas de vidrio y objetos de metal. Pueden adquiriese de diversos proveedores cajas y cilindros metálicos
- 6. que almacenan convenientemente el material de vidrio durante la esterilización y lo conservan estéril hasta su utilización. Cuando se calculan los tiempos de funcionamiento para el equipo de esterilización por aire caliente, deben considerarse tres períodos: El período de ascenso de la temperatura, que es el tiempo necesario para que toda la carga alcance la temperatura de esterilización; puede llevar alrededor de 1 hora. Los períodos de mantenimiento a las diferentes temperaturas de esterilización recomendadas por el Medial Rescarch Councill que son 160ºC durante 45 minutos, 170ºC durante 18 minutos, 180ºC durante 7 1/2 minutos y 190ºC durante 1 1/2 minutos. El período de enfriamiento, que se realiza gradualmente para prevenir la rotura del material de vidrio como consecuencia de un descenso demasiado rápido de la temperatura. Este período puede llevar 2 horas.
- 7. Vapor a presión. Se realiza mediante la esterilización mediante el Autoclave. Se realiza Mediante la esterilización en autoclave. Las bacterias se matan más fácilmente por el calor húmedo (vapor saturado) que por el calor seco. El vapor mata las bacterias por desnaturalización de sus proteínas. Una condición de seguridad convenida para la esterilización es utilizar vapor a 121ºC durante 15 minutos. Esta temperatura es adecuada para medios de cultivo, soluciones acuosas, tratamiento de cultivos y muestras desechadas, etc El aire tiene una influencia importante en la eficacia de la esterilización al vapor de agua, porque su presencia modifica la relación presión/temperatura. Además, la existencia de bolsas de aire impedirá la penetración del vapor. Debe eliminarse primero todo el aire que rodea y penetra en la carga a antes de que pueda comenzar la esterilización por vapor. Autoclaves Únicamente deben usarse autoclaves diseñados para trabajo de laboratorio y que puedan recibir carga mixta. Las autoclaves de carga porosa y los esterilizadores de líquidos embotellados son raramente satisfactorios para el trabajo de laboratorio. Existen dos variedades de autoclave de laboratorio: - El tipo de olla a presión.
- 8. - Los modelos de desplazamiento de la gravedad con descarga automática de aire y vapor condensado. Por razones prácticas sólo estudiaremos el tipo olla de presión ya que es el usamos en laboratorio clínico. Tipo olla de presión: Se utilizan todavía en muchas partes del mundo. El tipo más común es un aparato para agua hirviendo a presión. Tiene una cámara vertical de metal provista de una tapa metálica fuerte que se aprieta y cierra herméticamente mediante un aro de goma. Se disponen en la tapa una espita para la salida del aire y del vapor, un indicador de presión y una válvula de seguridad. El agua del fondo de la autoclave se calienta mediante mecheros de gas exterior, un calentador eléctrico de inmersión o un serpentín de vapor. Instrucciones para su funcionamiento: Debe haber agua suficiente dentro de la cámara. Se carga la autoclave y se aprieta la tapa manteniendo la espita de descarga abierta. Se ajusta seguidamente la válvula de seguridad a la temperatura requerida y se conecta la fuente de calor. Cuando el agua hierva, fluirá vapor por la espita de descarga, arrastrando con él el aire existente en la cámara. Se deja que salgan libremente el aire y el vapor hasta que se haya eliminado todo el aire. Puede comprobarse que se ha eliminado fijando un extremo de un trozo de tubo de goma a la espita de descarga e introduciendo el otro extremo en un cubo u otro recipiente similar que contenga agua. El vapor se condensa en el agua y las burbujas de aire salen a la superficie; cuando se ha eliminado todo el aire de la cámara, cesa el burbujeo en el cubo.
- 9. Cuando se ha alcanzado esta fase, se cierra la espita de descarga de aire vapor y se quita el tubo de goma. La presión del vapor se eleva en la cámara hasta que la presión deseada, generalmente 1,054 kg/cm2, se alcanza y fluye vapor por la válvula de seguridad. Cuando la carga ha alcanzado la temperatura requerida, se mantiene la presión durante 15 minutos. Al término del período de esterilización, se apaga el calentador y se deja que la autoclave se enfríe. Se abre la espita de descarga de aire vapor muy lentamente una vez que el indicador de presión ha llegado a cero (presión atmosférica). Si la espita se abre demasiado pronto, cuando la autoclave está todavía bajo presión, cualquier líquido que haya en su interior (medios de cultivo, líquidos, etc.), hervirá de forma explosiva e incluso pueden explosionar las botellas que contengan líquidos. Se deja que el contenido se enfríe. Según la naturaleza de los materiales que se están esterilizando, el período de enfriamiento necesario puede ser de varias horas para que los grandes frascos de agar se enfríen hasta 80ºC y puedan cogerse con la mano sin riesgo
- 10. V.4 PREGUNTAS DE AUTOEVALUACIÓN 1. ¿Qué es desinfección? R/ 2. ¿Qué es esterilización? R/ 3. ¿Cuáles son los químicos que puede usar para desinfectar? R/ 1. ¿Cuáles son los tipos de calor que puede usar para esterilizar? R/ 2. ¿Cuáles son las condiciones que se necesitan para llevar a cabo la esterilización en autoclave? R/