Urea (spinreact)
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Este documento describe un método para determinar cuantitativamente la urea a través de una reacción colorimétrica. La urea en la muestra reacciona con o-ftalaldehído formando un complejo coloreado cuya intensidad es proporcional a la concentración de urea. El método proporciona valores de referencia para suero y orina, así como detalles sobre la precisión, exactitud e interferencias del análisis de urea.
Urea (spinreact)
- 1. Urea o-Ftalaldehído 37ºC. Colorimétrico BSIS35-E Ed.02/2007 SPINREACT,S.A.U Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) SPAIN Tel. +34 972 69 08 00 Fax +34 972 69 00 99. e-mail: spinreact@spinreact.com UREA -37 Cont. Determinación cuantitativa de urea IVD Conservar a 2-8ºC PRINCIPIO DEL MÉTODO La urea presente en la muestra reacciona con el o-ftalaldehido en medio ácido originando un complejo coloreado que puede cuantificarse espectrofotométricamente: Urea + o-ftalaldehído H Isoindolina La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de urea en la muestra ensayada1 . SIGNIFICADO CLÍNICO La urea es el resultado final del metabolismo de las proteínas; se forma en el hígado a partir de su destrucción. Puede aparecer la urea elevada en sangre (uremia) en dietas con exceso de proteínas, enfermedades renales, insuficiencia cardíaca, hemorragias gástricas, hipovolemia y obstrucciones renales 1,4,5 . El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de laboratorio. REACTIVOS R 1 o-Ftalaldehído 4,8 mmol/L R 2 Solución borato Ácido sulfúrico 87 mmol/L 3 mol/L UREA CAL Patrón primario acuoso de Urea 50 mg/dL PRECAUCIONES R2: Corrosivo (C). R35: Provoca quemaduras graves. S26: En caso de contacto con los ojos, lávense inmediata y abundantemente con agua y acúdase a un médico. S30: No echar jamás agua a este producto. S45: En caso de accidente o malestar, acúdase inmediatamente al médico (si es posible, muéstresele la etiqueta). PREPARACIÓN Todos los reactivos están listos para su uso. CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD Todos los componentes del kit son estables, hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta del vial, cuando se mantienen los viales bien cerrados a 2-8ºC, protegidos de la luz y se evita su contaminación. No usar reactivos fuera de la fecha indicada. Indicadores de deterioro de los reactivos: - Presencia de partículas y turbidez. - Absorbancia (A) del Blanco a 510 nm > 0,20. MATERIAL ADICIONAL - Espectrofotómetro o analizador para lecturas a 510 nm. - Cubetas de 1,0 cm de paso de luz. - Equipamiento habitual de laboratorio(Nota 1) . MUESTRAS - Suero o plasma heparinizado1 : No usar sales de amonio o fluoruro como anticoagulantes. - Orina1 : Diluir la muestra al 1/50 en agua destilada. Mezclar. Multiplicar el resultado obtenido por 50 (factor de dilución). Evitar el crecimiento bacteriano, manteniendo el pH < 4. La urea es estable 5 días a 2-8ºC. PROCEDIMIENTO 1. Condiciones del ensayo: Longitud de onda: . . . . . . . . . . . . . . . . 510 nm (500-550) Cubeta:. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. .1 cm paso de luz Temperatura : . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 37ºC 2. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada. A) Cinética 1. Pipetear en tubos de ensayo: Blanco Patrón Muestra R 1 (mL) 1,0 1,0 1,0 Patrón (Nota2-3) ( L) -- 50 -- Muestra ( L) -- -- 50 2. Mezclar e incubar 1 minuto y añadir: R 2 (mL) 1,0 1,0 1,0 3. Mezclar, incubar a 37ºC y leer las absorbancias a 1 minuto (A1) y a los 2 minutos (A2). 4. Calcular el incremento de la absorbancia A= A2 – A1 . Cálculos Calibrador)A( Muestra)A( x 50 (Conc. Calibrador) = mg/dL de urea en la muestra B) Punto final 1. Pipetear en una cubeta: Blanco Patrón Muestra R 1 (mL) 1,0 1,0 1,0 Patrón (Nota2-3) ( L) -- 25 -- Muestra ( L) -- -- 25 2. Mezclar y añadir: R 2 (mL) 1,0 1,0 1,0 3. Mezclar e incubar 15 minutos a 37ºC. 4. Leer la (A) del calibrador y la muestra, frente al Blanco de reactivo. CÁLCULOS Calibrador)A( Muestra)A( x 50 (Conc. Calibrador) = mg/dL de urea en la muestra 10 mg/L urea BUN dividido por 0,466 = 21 mg/L de urea = 0,36 mmol/L urea1 . Factor de conversión: mg/dL x 0,1665 = mmol/L. CONTROL DE CALIDAD Es conveniente analizar junto con las muestras sueros control valorados: SPINTROL H Normal y Patológico (Ref. 1002120 y 1002210). Si los valores hallados se encuentran fuera del rango de tolerancia, revisar el instrumento, los reactivos y el calibrador. Cada laboratorio debe disponer su propio Control de Calidad y establecer correcciones en el caso de que los controles no cumplan con las tolerancias. VALORES DE REFERENCIA 1 Suero: de 15 a 45 mg/dL (2.49-7.49 mmol/L) Orina: de 20 a 35 gr/24 horas Estos valores son orientativos. Es recomendable que cada laboratorio establezca sus propios valores de referencia. CARACTERÍSTICAS DEL MÉTODO Rango de medida: Desde el límite de detección de 0,70 mg/dL hasta el límite de linealidad de 200 mg/dL. Si la concentración es superior al límite de linealidad, diluir la muestra 1/2 con ClNa 9 g/L y multiplicar el resultado final por 2. Precisión: Intraserie (n=20) Interserie (n=20) Media (mg/dL) 43,2 145 41,9 147 SD 1,51 1,10 0,80 2,83 CV (%) 3,49 0,76 1,92 1,91 Sensibilidad analítica: 1 mg/dL = 0.00459 A. Exactitud: Los reactivos SPINREACT (y) no muestran diferencias sistemáticas significativas cuando se comparan con otros reactivos comerciales (x). Los resultados obtenidos con 50 muestras fueron los siguientes: Coeficiente de correlación (r): 0.9884 Ecuación de la recta de regresión: y=0.975x + 0.6 Las características del método pueden variar según el analizador utilizado. INTERFERENCIAS Como anticoagulante se recomienda la heparina. En ningún caso deben utilizarse sales de amonio o fluoruro1 . Se han descrito varias drogas y otras substancias que interfieren en la determinación de la urea2,3 NOTAS 1. UREA CAL: Debido a la naturaleza del producto, es aconsejable tratarlo con sumo cuidado ya que se puede contaminar con facilidad. 2. El material empleado así como el agua destilada que se utilice deben estar libres de amoniaco y/o sus sales1 . 3. La calibración con el Patrón acuoso puede dar lugar a errores sistemáticos en métodos automáticos. En este caso, se recomienda utilizar calibradores séricos. 4. Usar puntas de pipeta desechables limpias para su dispensación. 5. SPINREACT dispone de instrucciones detalladas para la aplicación de este reactivo en distintos analizadores. BIBLIOGRAFÍA 1. Kaplan A. Urea. Kaplan A et al. Clin Chem The C.V. Mosby Co. St Louis. Toronto. Princeton 1984; 1257-1260 and 437 and 418. 2. Young DS. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC Press, 1995. 3. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001. 4. Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999. 5. Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995. PRESENTACIÓN Ref. 1001323 2 x 50 mL. Ref: 1001325 2 x 250 mL Ref. 1001326 2 x 100 mL.
- 2. Urea o-Phthalaldehyde 37ºC. Colorimetric BSIS35-I Ed.02/2007 SPINREACT,S.A.U Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) SPAIN Tel. +34 972 69 08 00 Fax +34 972 69 00 99. e-mail: spinreact@spinreact.com UREA -37 Quantitative determination of urea IVD Store at 2-8ºC PRINCIPLE OF THE METHOD Urea in the sample reacts with o-fhthalaldehyde in acid medium forming a coloured complex that can be measured by spectrophotometry: Urea + o-fhthalaldehyde H Isoindoline The intensity of the color formed is proportional to the urea concentration in the sample1 . CLINICAL SIGNIFICANCE Urea is the final result of the metabolism of proteins; it is formed in the liver from their destruction. It can appear the urea elevated in blood (uremia) in: diets with excess of proteins, renal diseases, heart failure, gastrointestinal hemorrhage, dehydration or renal obstruction1,4,5 . Clinical diagnosis should not be made on a single test result; it should integrate clinical and other laboratory data. REAGENTS R 1 o-Phthalaldehyde 4.8 mmol/L R 2 Borate solution Sulphuric acid 87 mmol/L 3 mol/L UREA CAL Urea aqueous primary standard 50 mg/dL PRECAUTION R2: Corrosive (C). R35: Causes severe burns. S26: In case of contact with eyes, rinse immediately with plenty of water and sep medical advice. S30: Never add water to this product. S45: In case of accident or if you feel unwell, sep medical advice immediately. PREPARATION All the reagents are ready to use. STORAGE AND STABILITY All the components of the kit are stable until the expiration date on the label when stored tightly closed at 2-8ºC, protected from light and contaminations prevented during their use. Do not use reagents over the expiration date. Signs of reagent deterioration: - Presence of particles and turbidity. - Blank absorbance (A) at 510 nm > 0.20. ADDITIONAL EQUIPMENT - Spectrophotometer or colorimeter measuring at 510 nm. - Matched cuvettes 1.0 cm light path. - General laboratory equipment(Note 1) SAMPLES - Serum or heparinized plasma1 : Do not use ammonium salts or fluoride as anticoagulants. - Urine1 : Dilute sample 1/50 in distilled water. Mix. Multiply the results by 50 (dilution factor). Preserve urine samples at pH < 4. Urea is stable at 2-8ºC for 5 days; PROCEDURE AND CALCULATIONS 1. Assay conditions: Wavelength: . . . . . . . . . . . .. . . . . 510 (500-550) nm Cuvette: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . .1 cm. light path Temperature . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . 37ºC 2. Adjust the instrument to zero with distilled water. A) Kinetic method 1. Pipette into a cuvette: Blank Standard Sample R 1 (mL) 1.0 1.0 1.0 Standard(Note 2-3) ( L) -- 50 -- Sample ( L) -- -- 50 2. Mix, wait 1 minute and add: R 2 (mL) 1.0 1.0 1.0 3. Mix, incubate at 37ºC and read the absorbance after 1 minute (A1) and after 2 minutes (A2). 4. Calculate the increase of the absorbance A= A2 – A1 . Calculations Calibrator)A( Sample)A( x 50 (Calibrator conc.) = mg/dL urea in the sample B) End point 1. Pipette into a cuvette: Blank Standard Sample R 1 (mL) 1.0 1.0 1.0 Standard(Note 2-3) ( L) -- 25 -- Sample ( L) -- -- 25 2. Mix, and add: R 2 (mL) 1.0 1.0 1.0 3. Mix and incubate 15 min at 37ºC. 4. Read the absorbance (A) against the Blank. Calculations Calibrator)A( Sample)A( x 50 (Calibrator conc.) = mg/dL urea in the sample 10 mg/L urea BUN divided by 0.466 = 21 mg/L urea = 0.36 mmol/L urea1 . Conversion factor: mg/dL x 0.1665 = mmol/L. QUALITY CONTROL Control sera are recommended to monitor the performance of assay procedures: SPINTROL H Normal and Pathologic (Ref. 1002120 and 1002210). If control values are found outside the defined range, check the instrument, reagents and calibrator for problems. Each laboratory should establish its own Quality Control scheme and corrective actions if controls do not meet the acceptable tolerances. REFERENCE VALUES 1 Serum : 15- 45 mg/dL (2.49-7.49 mmol/L) Urine : 20 - 35 gr/24 h. These values are for orientation purpose; each laboratory should establish its own reference range. PERFORMANCE CHARACTERISTICS Measuring range: From detection limit of 0.70 mg/dL to linearity limit of 200 mg/dL. If the results obtained were greater than linearity limit, dilute the sample 1/2 with NaCl 9 g/L and multiply the result by 2. Precision: Intra-assay (n=20) Inter-assay (n=20) Mean (mg/dL) 43.2 145 41.9 147 SD 1.51 1.10 0.80 2.83 CV (%) 3.49 0.76 1.92 1.91 Sensitivity: 1 mg/dL = 0.00459 A. Accuracy: Results obtained using SPINREACT reagents (y) did not show systematic differences when compared with other commercial reagents (x). The results obtained using 50 samples were the following: Correlation coefficient (r): 0.9884 Regression equation: y=0.975x + 0.6 The results of the performance characteristics depend on the analyzer used. INTERFERENCES It is recommended to use heparin as anticoagulant. Do not use ammonium salts or fluoride1 . A list of drugs and other interfering substances with urea determination has been reported by Young et. al2,3 . NOTES 1. UREA CAL: Proceed carefully with this product because due its nature it can get contamined easily. 2. Glassware and distilled water must be free of ammonia and ammonium salts 1 . 3. Calibration with the aqueous standard may cause a systematic error in automatic procedures. In these cases, it is recommended to use a serum Calibrator. 4. Use clean disposable pipette tips for its dispensation. 5. SPINREACT has instruction sheets for several automatic analyzers. Instructions for many of them are available on request. BIBLIOGRAPHY 1. Kaplan A. Urea. Kaplan A et al. Clin Chem The C.V. Mosby Co. St Louis. Toronto. Princeton 1984; 1257-1260 and 437 and 418. 2. Young DS. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC Press, 1995. 3. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001. 4. Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999. 5. Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995. PACKAGING Ref. 1001323 2 x 50 mL Ref: 1001325 2 x 250 mL Ref. 1001326 2 x 100 mL Cont.