Nitrógeno ureico (BUN)
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Este documento describe la determinación del nitrógeno ureico en sangre (BUN) mediante el método enzimático de ureasa/GLDH. Explica la fisiopatología del BUN, su importancia clínica, y los pasos para realizar la prueba en un analizador automático, incluyendo la recolección de muestras, controles de calidad y cálculos. El método demostró ser preciso y veraz para la cuantificación del BUN.
Nitrógeno ureico (BUN)
- 1. Nitrógeno ureico (BUN) Nombre: Daniela Troncoso A Bioquímica clínica II Sección 1
- 2. Objetivo Comprender la fisiopatología del analito (BUN). Cuantificación del analito (BUN)en el laboratorio. Análisis de los resultados.
- 3. Introducción La mayor parte del cuerpo está conformada por agua. Riñón Nefrones Metabolitos tóxicos: amoníaco, urea y compuestos nitrogenados
- 4. Orina Se filtran 125 mL de agua. El volumen normal de orina (adulto) 400 a 2,000 mL. El volumen de orina puede variar en pacientes con: - Poliuria volumen urinario (2,5 L/24 horas en adultos) - Oliguria volumen urinario (200 mL/24 horas en adultos)
- 5. Urea Producto del metabolismo proteico, sintetizada en el hígado. Principal compuesto de desechos nitrogenado de la orina. Su peso molecular 60 KDa. El 90% se elimina por filtración glomerular y luego se reabsorbe el 40 – 70% en el túbulo proximal acompañando al agua.
- 6. Metabolismo de la Urea Carbamoil fosfato sintetasa I (Cataliza la condensación) Ornitina – transcarbamoilasa (transfiere G. Carbamoilo) Arginasa I (hidroliza) la Arginina para formar Urea y Ornitina Argininosuccinato (se hidroliza) Formando Arginina y fumarato Citrulina (se condensa) con Aspartato formando Arginio succinato a traves de Argininosuccinato – sintetasa
- 7. Alteraciones en el ciclo de la urea Alteraciones genéticas enzimas: - Carbamoil Fosfato Sintetasa I - Ornitina transcarbamoilasa - N –acetil glutamato sintetasa A.R Crom X Acumulación (eliminación de urea a través de los riñones) Patogenia Acumulación de nitrógeno Neurotóxico Hiperamonemia Muerte. Encefalopatías exceso de amonio causar alteraciones osmóticas y de neurotransmisores. El amonio junto con la glutamina–sintetasa glutamina edema cerebral. Neuronas, el amoniaco inhibe la transmisión sináptica. Amonio estimula el transporte de triptófano al cerebro y la síntesis de serotonina, alterando la neurotransmisión serotoninérgica.
- 8. Neurotóxico
- 9. BUN (Utilidad Clínica) Se ha empleado el término BUN o nitrógeno ureico sanguíneo para referirse a la urea. La urea se puede determinar en suero, plasma u orina. Midiendo la cantidad (concentración) de urea o nitrógeno ureico presente en la sangre Indicador no específico de la función renal Junto con la creatinina son las dos pruebas más usadas para evaluar la función renal. Determinación secuencial de los niveles de urea en sangre es útil para el seguimiento de un proceso renal Diagnóstico diferencial de: prerrenal, renal y posrenal.
- 10. Clínica Insuficiencia renal aguda: Alteración brusca del funcionamiento del riñón con rápida reducción del filtrado glomerular. - Niveles de creatinina y urea plasmática. - Acidosis metabólica e hiperpotasemia. Urea en sangre se denomina Azoemia, puede ser provocado por IR o ingesta aumentada de proteínas. Urea sérica se puede deber a ingesta proteica baja, enfermedades hepáticas severas.
- 11. Clínica La insuficiencia renal aguda puede ser: Prerrenal: Hemorragias, pérdidas gastrointestinales, urinarias o cutáneas excesivas, insuficiencia cardiaca o por obstrucción de la arteria renal. Renal: Necrosis de células tubulares por isquemia o toxicidad, inflamación glomerular o lesión intersticial. Posrenal: Obstrucción del aparato renal por cálculo renal o carcinoma de próstata.
- 13. Metodología y Técnica Pointe Scientific
- 14. Método Ureasa – GLDH •Ureasa cataliza la hidrólisis urea amoniaco y dioxido de carbono. •Amoníaco liberado reacciona alfa-cetoglutarato en presencia de NADH Produce glutamato, por acción de la glutamato deshidrogenasa (GLDH) •NADH se oxida NAD+ Absorbancia (340 nm) disminuye lo que es directamente proporcional a la concentración de nitrógeno de urea en la muestra.
- 15. Reactivos Reactivos líquidos listos para usar Almacenamiento de reactivos: 2 – 8 °C Precauciones Solo para diagnostico In vitro. Evitar ingesta de reactivo. Reacciones explosivas. Manual "Bioseguridad en laboratorios Microbiológicos y Biomédicos“ Materiales necesarios pero no suministrados Controles, Calibrador, Analizador, Manuales de aplicaciones e instrumentos, Agua desionizada.
- 16. Recogida y almacenamiento de muestras Se recomienda suero. No usar plasma que contengan anticoagulantes. La muestra debe estar libre de amoniaco y metales pesados. La urea en suero es estable durante 72 horas refrigeradas a 2 - 8 ° C. *Sueros sin refrigeración se debe utilizar dentro de las 8 horas. Interferencias Acción de la ureasa es inhibida por fluoruro. Niveles de amoníaco anormales dan resultados falsamente elevados de BUN Bilirrubina al nivel de 20 mg/dl (<2%) Hemoglobina al nivel de 200 mg/dl (<5%) Limitaciones Las muestras que den valores superiores a 150mg/dl deben ser diluidas con 0,9% salino (1:1), volviendo a medirla y el resultado debe ser multiplicado por 2. Si se encontró resultado de control fuera de rango, el procedimiento debe ser recalibrado.
- 17. Programación del método (Equipo Urit) Tipo de ensayo Cinético de 2 ptos Longitud de onda 340 nm Unidad Mg/dl Volumen de muestra 3 uL Volumen R1 Volumen R2 300 uL 60 uL Calibración 1 pto (lineal) Linealidad 0 – 150 uL Concentración Top kal 43,1 mg/dl Tiempo de lectura 60 seg
- 18. Control de calidad Sueros de control BUN normales y anormales conocidos. Procesarse al menos en cada turno de trabajo. Cada laboratorio debe establecer su propia frecuencia de determinación control. Cada laboratorio debe establecer su propio rango de referencia. Ensayo rango: 0 – 150mg/dl
- 19. Controles Lote: N1 – 14191 N2 – 14192 Control Promedio Rango Control N1 15 mg/dl 12 – 18 mg/dl Control N2 47,7 mg/dl 38,2 – 57,3 mg/dl
- 20. Desempeño analítico Coeficiente de variación analítico del fabricante - Intraserie/ Within Run - Interserie/ Run to Run Coeficiente de variación biológico CV w (Intra) 12,3 CVg (Inter) 18,3 Impresición (I) 6,2 % Inexactitud (Bias) 5,5 % Error total 95% 15,7 %
- 21. Run Nivel 1 Corrida Resultados Día 1 13,3 18,1 Promedio T DS CV 16,0 2,4 15,4 15,5 1,8 11,8 15,9 0,1 0,9 18,4 0,9 5,1 16,3 3,3 20,6 16,8 Día 2 15,1 17,5 13,9 Día 3 15,8 16,1 15,9 Día 4 17,5 19,4 18,4 Día 5 14,8 14,0 20,2
- 22. Run Nivel 2 Corrida Resultados Día 1 51,1 52,2 Promedio T DS CV 48,4 5,6 11,6 46,3 7,5 16,1 44,4 4,1 9,2 45,2 6,9 15,2 49,7 5,7 11,5 42,0 Día 2 53,3 47,2 38,3 Día 3 44,3 40,3 48,5 Día 4 39,8 53,1 42,8 Día 5 48,4 44,8 56,1
- 23. Run Nivel 1 Repetibilidad: Promedio :16,4 mg/dl DS :1,7 CV :10,7 % Precisión Intermedia: Promedio :16,4 mg/dl DS :2,0 CV :12,5 % Veracidad: 11,05 – 21,8 mg/dl Promedio Biorad: 14,9 mg/dl -Es veraz. Run nivel 2 Repetibilidad: Promedio :46,8 mg/dl DS :5,9 CV :12,7 % Precisión Intermedia: Promedio :46,8 mg/dl DS :5.5 CV :11,8% Veracidad: 31,3 – 62,3 mg/dl Promedio Biorad: 46,4 mg/dl -Es veraz.
- 24. Cómo se calcula BUN
- 25. Discusión El método de referencia para Urea No se ocupa (Reacción nessrelizacion) ni (Reactivo de Berthelot) Para equipos automatizados se utiliza el método ureasa/GLDH Mas especificidad, rapidez y precisión.
- 26. Conclusión La determinación de BUN en sangre es importante También se hace la determinación de creatinina que acompaña a BUN Son técnicas de bajo costo para el paciente, bastante rápida y simple Su resultado orienta al médico a solicitar otros exámenes más específicos para determinar el origen del daño.
- 27. Bibliografía Pesce, Amadeo; Kaplan, Lawrence. Química clínica “Métodos”. España: Editorial Panamericana. 1991 Hernández, Álvaro. Principios de Bioquímica clínica y Patología molecular. España: Elsevier. 2010. Marshall, William; Bangert, Stephen; Lapsley, Marta. Bioquímica Clínica. España: Elsevier Mosby. 2012. Lépez, Macarena; López, Edison; Quiroga, Guillermo. Guía de trabajos práctico. Bioquímica Clínica II. 2013. Hitachi Urea Nitrogen (BUN) Reagent Set. Pointe Scientific, INC. Recuperado de http://www.pointescientific.com/uploads/inserts/HB752-01-1362.pdf en octubre de 2013.