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Este documento describe un experimento para separar y demostrar la acción de la enzima láctica y la coenzima obtenidas de músculo de pollo. Se explica que la enzima fue extraída triturando el músculo, mientras que la coenzima se obtuvo calentando y triturando el músculo. Finalmente, se muestran los resultados del experimento donde se demuestra la acción de la enzima láctica al cambiar el color del azul de metileno.
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- 1. ABSTRACT The enzymes involved in oxidative processes important in the metabolism of our body, this is very important to know how these work in the same, in order to understand this we must understand the ways in which these come into operation and how our body behaves as they do, which is why both enzymes known as co enzymes is of vital importance and was visible evidence in the development of practice, through the submission of a piece of chicken muscle to demonstrate different reactions functionality and how relationship enzymes and co enzymes and how these can be inhibited. Introducción Esta práctica es de gran importancia ya que son bases esenciales para nuestra formación como estudiantes de medicina en este laboratorio vamos a realizar procedimientos interesantes para determinar reconocimiento de enzima y coenzimas hay que tener en cuenta que la coenzima son pequeñas moléculas orgánicas no proteicas que transportan grupos químicos entre enzimas y las enzimas son moléculas proteicas que cumplen una función de catalizar reacciones químicas, consta como a partir de un poco de musculo depollo se puede obtener una coenzima y enzima de cómo se separan y como lograr que nuestra reacción tome el color requerido se debe a la acción de la enzima y coenzima asociadas. Palabras claves Enzima, coenzima, actividad enzimática, oxidoreductasa, citocromo oxidasa y deshidrogenasa láctica. Generalidades Las enzimas que intervienen en procesos de oxidación se conocen como oxidasas y se puede dividir en cinco grupos: OXIDASAS: Catalizan la remoción de hidrogeno de un sustrato y usan solamente al oxigeno como aceptor de hidrogeno. Forman agua como un producto de la reacción. DESHIDROGENASAS AEROBIAS: Catalizan la remoción de hidrogeno de un sustrato pero, a diferencia de las oxidasas, pueden usar oxigeno u otras sustancias artificiales como aceptores. DESHIDROGENASAS ANAEROBIAS: Catalizan la
- 2. remoción del hidrogeno de un substrato, pero que no son capaces de usar oxigeno como aceptor de hidrogeno. Realizan dos funciones principales: a. Transferencia de hidrogeno de un sustrato a otro en una reacción de óxido reducción acoplada que no implica una cadena respiratoria. b. Enzima inicial de una cadena respiratoria de transporte de electrones desde el substrato al oxígeno. HIDROPEROXIDASAS: Enzimas que utilizan el peróxido de hidrogeno como sustrato. OXIGENASAS: Enzimas que catalizan la transferencia directa e incorporación del oxígeno a una molécula de sustrato. CITOCROMO OXIDASA: Enzima de la cadena respiratoria que se encuentra en todos los tejidos principalmente en el miocardio. Esta enzima contiene hierro, que pasa alternativamente de una forma reducida a una oxidada. La función biológica de la citocromo oxidasa es la catálisis de oxidación por O2 del citocromo C. Es inhibida por el cianuro que se acopla a la forma oxidada del hierro, bloqueando así a la enzima. Su actividad e inhibición se puede demostrarse mediante la oxidación secundaria de sustancias tales como la p-fenilendiamina que se vuelve roja o púrpura con la oxidación. Citocromo ------------------ Citocromo ------------------ p-fenilediamina DESHIDROGENASA LÁCTICA: Distribuida en todo el organismo, pero se encuentra principalmente en músculo, hígado, riñón y corazón. Su función es catalizar la oxidación reversible del lactato a piruvato, quitando o agragando dos hidrógenos. Para esto necesita NAD y pasa a una forma oxidada NADH+H+, este se re oxida con flavoproteínas termolábiles que reducen el azul de metileno a leuco MATERIALES Equipo de disección Musculo de pollo Arena Hielo Cloruro de sodio Norita Azul de Metileno
- 3. PROCEDIMIENTO Preparación de la Coenzima: 1. Tome aproximadamente 1 gramo de músculo de una de las piernas del conejo 2. Pongalo en 8 mL de agua caliente (esto para inactivar las enzimas del músculo, que pueden destruir la coenzima después de la muerte del animal). 3. Caliente en baño de maría hirviendo por 4 ó 5 minutos; 4. Luego se enfrie y se pasa todo el contenido del tubo a un mortero con1 gramo de arena y triture hasta formar una pasta fina. 5. Centrifugue la mezcla y guarde el sobrenadante que contiene la coenzima en un baño de hielo hasta ser usado. Preparación de la enzima: 1. Tome aproximadamente 1 gramo de músculo de la otra pierna y se colóco en un mortero. 2. Añada 20 mL de NaCl 0.9% y 1 a 2 gramos de arena. Triture hasta obtener una pasta fina. 3. Centrifugue la mezcla y tome el sobrenadante, que contiene la enzima láctica. Para remover cualquier resto de la coenzima de la preparación enzimática añada ½ gramo de NORITA (carbón activado). 4. Mezcle por inversión. Deje reposar la mezcla con agitaciones ocasionales por media hora. Luego centrifugue y guarde el sobrenadante que será la solución de enzima pura también en hielo hasta ser usada.
- 4. ANALISIS DE RESULTADOS Para realizar este laboratorio fue necesario una cantidad de enzimas las cuales cumplen distintas funcione en este caso realizamos la practica con el musculo de pollo, el cual no nos dio un valor exacto ya que requería de mas tiempo, independientemente, analizamos que los extractos enzimáticos y coenzima ticos mostrados en la tabla los cuales encontramos en tejidos animales, estas enzimas deterioran rápidamente los tejidos después de la muerte. Podemos analizar que en el tubo 2 presenta una decoloración más severa, debido a que los componentes en el tubo se disponen de diferentes factores que hacen posible el resultado, teniendo en cuenta que la deshidrogenasa láctica la cual actúa en ambientes faltos de oxígeno a la cual se le otorga 2 ml de aceite mineral. Lo único faltante en esta práctica fue el tiempo, ya que necesitamos de el para saber cuál de los tubos cambio de color para poder acertar más en nuestro análisis. CONCLUSIONES Se logró establecer experimentalmente que los cambios de temperatura son efectores directos que alteran o inactivan las enzimas del músculo que destruyen en la coenzima después de la muerte.Por medio de la desnaturalización se logra interaccionar biológica y químicamente la actividad enzimática de un tejido animal. Las enzimas oxidativas representan un papel químico y biológico primordial dentro del metabolismo aeróbico, sufren una variación característica en su actividad. Las enzimas son una bese fisiológica importante en el cuerpo humano, dado que las rutas metabólicas que ellos median permiten el funcionamiento óptimo de diferentes componentes estructurales del cuerpo humano. Las enzimas se establecen como órgano-específicas. La coenzima NADH al momento de interactuar durante la reacción con la enzima se reduce generando NADH, el cual es objeto de oxidación por parte de las flavoproteínas termolábiles que reducen al mismo tiempo el azul de metileno. Se logró establecer que para separar tanto coenzima como enzima son necesarios los procesos de centrifugado como maceración.