Simposio Saegre2010
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Este documento presenta información sobre diferentes técnicas de diagnóstico genético preimplantatorio (PGD) como PGD, PGS y aCGH. Explica cómo estas técnicas permiten seleccionar embriones no afectados por riesgos genéticos o aneuploidías para mejorar las tasas de implantación y embarazos normales. También resume los resultados de varios estudios clínicos que comparan los resultados de PGS versus sin PGS, mostrando que actualmente no hay evidencia de que el PGS mejore los resultados de nac
Simposio Saegre2010
- 1. Simposio RED LARA – SAEGRE Bs. As. 2010 “Hacia la transferencia de un solo embrión” PGD / PGS / aCGH Dr. Roberto Coco Fecunditas Instituto de Medicina Reproductiva afiliado a la UBA
- 2. PGD Por riesgo genético aumentado Sin riesgo genético
- 3. Diagnóstico Genético Preimplantatorio PGD Permite la selección de embriones no afectados para el establecimiento de un embarazo normal
- 4. Diagnóstico Genético Preimplantatorio PGS Permite la selección de embriones sin determinadas aneuploidías como criterio de selección del mejor embrión
- 5. PGS
- 6. FISH
- 7. Sondas para FISH ( 300 – 500 pb) Centromérica Locus específica 60 – 70 Kb Telomérica
- 8. FISH Enumera el segmento donde hibrida la sonda
- 10. QF - PCR Primers 18 – 30 pb STRs: Di/Tri/Tetra/Penta nucleótidos A B C D << 1 kb AC AD BC BD
- 11. QF-PCR TRANSLOCACIONES E INVERSIONES h f Alterna : a b e f ; c h g d c e Ady. I : chfe;abgd Ady. II: c h a b; e f g d a Seg. 3:1: ab;gdefch g d Seg. 4:0: chfegdab b
- 13. CGH Detecta pérdida o ganancia total o parcial de segmentos cromosómicos Metafase CGH: microscopio de fluorescencia + software CGH Array CGH: cariotipo virtual, utiliza miles de sondas, abarca los genes de la mayoría de las enfermedades Detecta secuencias de 5 – 10 kb HR-CGH: Cariotipo virtual de alta resolución Detecta anomalías de 200 pb
- 15. Meiosis
- 16. Disyunción normal No disyunción clásica Separación cromátidas
- 17. Aneuploidía en ovocitos inherente a la edad < 25 5 < 30 15 < 35 20 < 40 35 >40 50
- 18. Estudio cromosómico en Espermatozoides humanos Inseminación de ovocitos de Hamster denudados de su membrana pelúcida con espermatozoides humanos (FIV híbrida). Inyección de ovocitos de Hamster con espermatozoides humanos (ICSI híbrida) TASA ANEUPLOIDÍA: 9,4% – 13,9%
- 19. FISH EN SEMEN TASA DE ANEUPLOIDIA GRUPO 13 18 21 XY TOTAL OAT 1,9±2,59 0,64 ±0,64 1,56 ±2,40 1,70 ±1,41 24,62 ±18,09 N:53 R:4 a 83% NORMAL O,58±0,28 0,26±0,11 0,55±0,39 0,71±0,29 10,09 ±3,78 N:10 R:4,2 a 14,3% Coco et al, 2000
- 20. POSIBILIDADES DE FECUNDACIÓN NORMAL Tasa de aneuploidía Oocitos Espermios 25 15 Fecundación Normal: 63,75% Errores de Fecundación: 1 - 5% Errores post Fecundación: 5 – 15% Probabilidad de Preembriones Anormales: ~ 50
- 21. ESTUDIO CROMOSÓMICO DE PRONÚCLEOS (GAMETAS)
- 22. ESTUDIO CITOGENÉTICO DE OVOCITOS MAL FERTILIZADOS Pronúcleos Gametas En singamia Total(%) Individuales 2n 3n 4n 5n Estudiadas 48 25 30 8 5 117 Normales 18 7 9 2 1 37 (32) Hiperhaploides 15 9 4 28 (24) Hipohaploides 15 9 21 2 4 51 (44) Aneuploidía = % hiperhaploides x 2 = 48 % Coco et al, 1993
- 23. PGS por FISH Método usado para elegir el embrión con menos anomalías cromosómicas para transferir en un ciclo de FIV En la actualidad está sobre indicado en edad materna avanzada fallas iterativas en FIV abortadoras recurrentes
- 24. Munné et al, 1999 Estudio Multicéntrico PGD Control Pacientes 117 117 Edad 38.5 ± 0.23 38.5 ± 0.23 Estimulación 11,7 ± 3,2 11,1 ± 3,2 Folículos aspirados 12,6 ± 6,7 12,4 ± 5,4 Ciclos Repetidos 1,9 1,8 Embarazo clínico 17,8% 13,7% Aborto clínico 9* 23 Embarazo a término 16,1%* 10,5%
- 25. RCT Edad PGS (n) No PGS (n) Conclusión Werlin, 03 >/= 37 28 29 Igual tasa embarazo Stevens, 04 >/= 35 21 28 Igual tasa embarazo y abortos Staessen,04 >/= 37 200 200 Menor tasa nacidos Mastenbroek,07 35 –42 206 202 Menor tasa nacidos Schoolcraft,08 >/= 35 32 30 Menor tasa nacidos Hardarson,08 >37 56 53 Menor tasa nacidos Jansen,08 <38 55 46 Igual tasa nacidos Mersereau, 08 <38 28 25 Igual tasa nacidos Staessen, 08 <36 107 109 Igual tasa nacidos Meyer, 08 <39 21 22 Igual tasa nacidos total 754 744
- 26. 10 ensayos controlados randomizados 754 PGS / 744 no PGS Se documentó: No mejora en la tasa de NV en todos y en 4 disminución El resultado de una célula no puede extrapolarse a todo el embrión El mosaicismo es frecuente en los pre-embriones La extracción de la/s célula/s podría dañar el potencial implantatorio El estudio es limitado a un cierto numero de cromosomas La existencia de autocorrección o confinado en la placenta
- 27. 10 ensayos controlados randomizados 754 PGS / 744 no PGS Se documentó: No mejora en la tasa de NV en todos y en 4 disminución Los estudios por FISH tienen limitaciones en las blastómeras Disminución en la eficiencia de hibridación y más aún en las subsiguientes rondas Existencia de falsos positivos por splitting de la señal Falsos negativos por señales superpuestas o perdida durante la fijación
- 28. Comités de Opinión de ESHRE, ESHG, ASRM, SART No hay evidencias que el PGS mejore las tasas de nacidos vivos en: Edad materna avanzada Falla reiterada de implantación Perdida recurrente del embarazo
- 29. DATOS ESHRE PGD CONSORTIUM PGD PGS PGDSS Total Ciclos aspirados 8111 13053 579 21743 Ciclos PGD/S/SS 7263 12609 563 20795 Ciclos transferidos 5850 9433 419 15702 E. Clínico/asp. 19% 19% 20% 19% E. Clínico/transf. 26% 26% 29% 26% Data collection I - X
- 30. Programa PGD Fecunditas Por trastornos cromosómicos Translocaciones Recíprocas Ciclos aspirados: 25 Embarazo/aspiración = 8,0% Ciclos transferidos: 15 Embarazo/transferencia = 13,3% Embarazos evolutivos: 2 Translocaciones Robertsonianas Ciclos aspirados: 11 Embarazo/aspiración = 36,3% Ciclos transferidos: 8 Embarazo/transferencia = 50,0% Embarazos evolutivos: 4 Inversiones Pericéntricas Ciclos aspirados: 6 Embarazo/aspiración = 33,3% Ciclos transferidos: 5 Embarazo/transferencia = 40,0% Embarazos evolutivos: 2
- 31. Microarray-CGH
- 32. Nicolás Neuspiller Fecunditas Fernando Gismondi Instituto de Medicina Reproductiva Sebastian Neuspiller Andrea Perotti Afiliado a la Fac. de Medicina de la UBA Analía Venditti Pablo Dédola Alicia Gallo Valeria Longobucco Fabián Coco Iván Anduaga Marchetti Judith Mincman Paola García Estanga María Eugenia Ducatelli Sofía Medrano Martín Urquiza Irma Coco Roberto Coco Muchas Gracias