Niã‘Ostaller Lab
- 1. Estrategia para el diagnóstico mediante PCR de los niños nacidos de padres seropositivos al VIH-1. Hacer análisis de cada niño, desde el punto de vista serológico, con la edad y las veces que ha arribado la muestra al laboratorio. 1 - Realizar Western - Blot 2 - Realizar PCR para el gen GAG. 3 - Realizar PCR para el gen POL. 4 - Realizar PCR para el gen ENV. 5 - Realizar análisis de forma integral.(WB-PCR-edad). * Niños menores de 1 año hacer las 3 alternativas de PCR.(Según el algoritmo aprobado) * Niños mayores de 1 año, valorar resultados serológicos, (si estos son negativos), hacer PCR gen GAG, (si son positivos) hacer las 3 alternativas de PCR.
- 2. ESQUEMA DE DIAGNÓSTICO EN NIÑOS NACIDOS DE MADRES SEROPOSITIVAS MUESTRA 3 MESES DE EDAD PCR + CV CD4 POSITIVA Tomar muestra de inmediato y repetir TODAS las pruebas NEGATIVA Repetir TODAS las pruebas a los 6 meses de edad PCR positiva CONFIRMAR PCR negativa A los 12 y 18 meses de edad repetir ELISAs y WB ELISA Ag/Ac WB ELISA Ag P24 + En los niños con alguna enfermedad indicativa o signo de SIDA tomar muestra de inmediato y realizar el esquema recomendado Muestra sangre en seca en papel de filtro para PCR a los 15 días de nacido.
- 3. ESPECIFICIDADES EN LA TOMA DE MUESTRA PARA CADA EXAMEN PARA PCR EN PAPEL DE FILTRO SE PUEDE USAR EL PAPEL EMPLEADO EN EL ENSAYO DE FENILCETONURIA E HIPOTIROIDISMO (903) SERA NECESARIO COMPLETAR BIEN LOS CUATRO CIRCULOS CON SANGRE DEJAR SECAR, COLOCAR EN UN SOBRE CON LA IDENTIFICACION DE LA MUESTRA (NOMBRE DEL NIÑO, DE LA MADRE, FECHA DE NACIMIENTO DEL NIÑO, PROVINCIA ) LA MUESTRA PODRA CONSERVARSE A 4 ˚C O A TEMPERATURA AMBIENTE HASTA SU TRASLADO, QUE NO REQUIERE REFRIGERACION.
- 4. ESPECIFICIDADES EN LA TOMA DE MUESTRA PARA CADA EXAMEN PARA PCR USANDO SANGRE TOTAL SE TOMARAN DE 3 A 5 mL DE SANGRE DE VENA PERIFERICA COLOCAR LA SANGRE EN TUBO CON ANTICOAGULANTE (ACD O EDTA, NUNCA HEPARINA) QUE SERA SUMINISTRADO POR EL LABORATORIO DE REFERENCIA. MEZCLAR BIEN CON EL ANTICOAGULANTE Y CONSERVAR A 4 ˚C HASTA SU TRASLADO A LISIDA, EL MISMO DIA DE TOMADA. EL TRASLADO DEBERA REALIZARSE EN CONDICIONES DE REFRIGERACION (NEVERA O CONTENEDOR APROPIADO CON REFRIGERANTE)
- 5. CRITERIO DE DEFINICIÓN DE LA INFECCIÓN POR VIH EN NIÑOS (MMWR, REVISED SURVEILLANCE CASE DEFINITION FOR HIV INFECTION VOL 49/ No. RR-13, 29-31, 1999) NIÑOS CON EDAD ≥ 18 MESES, SE CONSIDERA INFECTADO SI CUMPLE CRITERIO DE LABORATORIO ►► RESULTADO POSITIVO EN ENSAYOS DE DETECCIÓN DE ANTICUERPOS (ELISA Y WB) O ►► RESULTADO POSITIVO O CANTIDADES DETECTABLES EN ENSAYOS VIROLÓGICOS (NO DE ANTICUERPOS) --- DETECCIÓN DE ÁCIDOS NUCLEICOS DE VIH (DNA O RNA) ---ENSAYO DE Ag p24 (INCLUYENDO LA NEUTRALIZACIÓN) ---AISLAMIENTO DE VIH (CULTIVO VIRAL)
- 6. EN NIÑO CON EDAD < 18 MESES SE CONSIDERA INFECTADO SI CUMPLE CRITERIO DE LABORATORIO DEFINITIVO ►► RESULTADO POSITIVO EN DOS MUESTRAS INDEPENDIENTES (EXCLUYENDO SANGRE DEL CORDÓN UMBILICAL) USANDO UNO O MÁS DE LOS ENSAYOS SIGUIENTES (NO DE ANTICUERPOS) ---DETECCIÓN DE ÁCIDOS NUCLEICOS DE VIH (DNA O RNA) ---ENSAYO DE Ag p24 (INCLUYENDO LA NEUTRALIZACIÓN) EN NIÑO ≥ 1 MES DE EDAD --- AISLAMIENTO DE VIH (CULTIVO VIRAL) PRESUNTIVO (EN NIÑO QUE NO CUMPLE LOS CRITERIOS DEFINITIVOS PERO TIENE) ►► RESULTADO POSITIVO EN SOLO UNA MUESTRA (EXCLUYENDO DE CORDÓN) USANDO LAS PRUEBAS VIROLÓGICAS Y QUE NO EXISTAN RESULTADOS SUBSIGUIENTES NEGATIVOS VIROLÓGICOS O DE Ac.
- 7. EN NIÑO CON EDAD < 18 MESES NACIDO DE MADRE VIH INFECTADA SE CONSIDERA “NO INFECTADO” SI NO CUMPLE LOS CRITERIOS ANTERIORES PERO CUMPLE LOS CRITERIOS SIGUIENTES: CRITERIO DE LABORATORIO DEFINITIVO ►► AL MENOS DOS ENSAYOS DE DETECCIÓN DE ANTICUERPOS VIH NEGATIVOS EN DOS MUESTRAS INDEPENDIENTES OBTENIDAS CON EDAD ≥ 6 MESES ►► AL MENOS DOS ENSAYOS VIROLÓGICOS NEGATIVOS EN DOS MUESTRAS INDEPENDIENTES TOMADAS CON EDAD ≥ 4 MESES Y QUE NO TENGA OTRAS EVIDENCIAS CLÍNICAS O DE LABORATORIO DE INFECCIÓN POR VIH.
- 8. PCR VIH-1 POL ENV GAG 662pb 500pb Gel de Agarosa 3 % , 100 Volts, 1 hora, tinción con Br Et 442pb
- 9. AMPLICOR HIV-1 DNA Test
- 10. 200 ul Reactivo de Extracción + VIH-1 C- 200 ul Reactivo de Extracción + VIH-1 C+ Extracción del ADN Incubar todos los tubos 30´a 60 °C y 30´a 100°C AMPLIFICACIÓN EN TERMOCICLADOR PTC-100 AMPLICOR HIV-1 DNA TEST, VERSIÓN 1.5 1 ml de BLDWS Mezclar, Incubar 5’ @ TA Centrifugar 3’, Max Vel. Remover Sobrenadante Centrifugar 3. Max Vel.’ Remover Sobrenadante 1.0 mL 1 ml de BLDWS 500 ul sangre total Almacenar seco a -70 °C Resuspender e l Pellet en 200 ul Reactivo de extracción
- 11. Control de Calidad Control Negativo < 0.2 OD A 450 units Control Positivo > 1.5 OD A 450 units Internal Control > 0.2 OD A 450 units Resultados de los especimenes HIV IC Interpretación < 0.2 > 0.2 ADN VIH-1, no detectado < 0.2 < 0.2 Invalidado . Repitir el ensayo. > 0.8 CUALQUIER ADN VIH-1, detectado ≥ 0.2,<0.8 CUALQUIER Resultado dudoso , Repitir el ensayo. AMPLICOR HIV-1 DNA TEST, VERSIÓN 1.5
- 12. ESTUDIO DE LA INFECCION PERINATAL POR VIH EMBARAZADAS 3 643 535 POSITIVO INDETERMINADO NEGATIVO 140 (0,003%) 280 (0,007%) 3 643 115 (99,9%) DECIDIERON INTERRUMPIR EL EMBARAZO SI (47) NO (74)+ ESTADO DE LOS NIÑOS (75) POSITIVO EN ESTUDIO NEGATIVO 4 ** 23 48 + AÑADIR 19 POR PRECISAR, O AÚN GESTANTES ** 2 FALLECIDOS FUENTE: LABORATORIO DE INVESTIGACIONES DEL SIDA. CUBA 28/09/06 5,3%
- 13. ESTUDIO DE LA INFECCION PERINATAL POR VIH SEROPOSITIVAS PREVIAMENTE DIAGNOSTICADAS QUE DECIDIERON NO INTERRUMPIR EL EMBARAZO 150 ESTADO DE LOS HIJOS 155 POSITIVOS EN ESTUDIO NEGATIVOS 10* 43 102 * 4 FALLECIDOS FUENTE: LABORATORIO DE INVESTIGACIONES DEL SIDA. CUBA 28/09/06 6,45%
- 14. ESTUDIO DE LA INFECCION PERINATAL POR VIH MADRES NO DIAGNOSTICADAS COMO SEROPOSITIVAS ANTES DEL PRIMER TRIMESTRE DEL EMBARAZO 65 ESTADO DE LOS HIJOS 72 14* 5 53 * 3 FALLECIDOS FUENTE: LABORATORIO DE INVESTIGACIONES DEL SIDA. CUBA 28/09/06 POSITIVOS EN ESTUDIO NEGATIVO 19,4%
- 15. TOTAL DE NIÑOS ESTUDIADOS Y SU SITUACIÓN ACTUAL SEGÚN DIAGNÓSTICO MATERNO AL NACER
- 16. TOTAL DE NIÑOS ESTUDIADOS Y SU SITUACIÓN ACTUAL POR PROVINCIAS.
- 17. NIÑOS SEROPOSITIVOS DIAGNOSTICADOS POR AÑO SEGÚN DIAGNÓSTICO MATERNO AL NACER