Agar E.M.B
- 1. Silvia S. Montenegro Cataño Fundación Universitaria de Popayán. Ecología E.M.B. Agar (con Eosina y Azul de Metileno) BASE EMB Agar se basa en una fórmula originalmente descrita por Holt-Harris y Teague en 1916; que posteriormente fue modificada por Levine; La principal diferencia entre las dos es la inclusión de sacarosa en el medio de Holt-Harris y Teague. Ciertos microorganismos entéricos fermentan con mayor facilidad la sacarosa que la lactosa. Ahora el medio de cultivo combina las fórmulas de Holt-Harris y Teague con la de Levine, para obtener un mejor rendimiento en el aislamiento selectivo de enterobacterias y otras especies de bacilos Gram negativos. Este agar es nutritivo por la presencia de peptona que favorece el desarrollo microbiano. La diferenciación entre organismos capaces de utilizar la lactosa y/o sacarosa, y aquellos que son incapaces de hacerlo, está dada por los indicadores eosina y azul de metileno; éstos ejercen un efecto inhibitorio sobre una amplia variedad de bacterias Gram positivas. El agar es el agente solidificante. Muchas cepas de Escherichia coli y Citrobacter spp. Presentan un característico brillo metálico. Las cepas que utilizan la lactosa poseen centro oscuro con periferia azulada o rosada, mientras que las que no lo hacen son incoloras. USO Este medio (también denominado E.A.M.) es utilizado para el aislamiento selectivo y de diferenciación de bacilos Gram negativos de rápido desarrollo y escasas exigencias nutricionales. Permite el desarrollo de todas las especies de la familia Enterobacteriaceae. CONTENIDO Colorantes de azul de metileno y eosina Y, que inhiben las bacterias gram-positivas en cierto grado. Los colorantes también actúan como indicadores diferenciales en respuesta a la fermentación de la lactosa o la sacarosa por parte de los microorganismos. Los coliformes producen colonias de color negro azulado, mientras que las colonias de Salmonella y Shigella son incoloras o de color ámbar transparente. Las colonias de Escherichia coli pueden exhibir un brillo verde metálico característico debido a la rápida fermentación de la lactosa.
- 2. Silvia S. Montenegro Cataño Fundación Universitaria de Popayán. Ecología El conjunto de medios de aislamiento de baja selectividad para Salmonella en muestras fecales y de otros tipos incluye el EMB Agar (con y sin sacarosa). Este medio puede inhibir el crecimiento de las bacterias gram-positivas como los estreptococos fecales, estafilococos y levaduras, o bien favorecer su crecimiento con formación de colonias puntiformes. COMPOSICIÓN Formula por litro de agua destilada Digerido pancreático de gelatina 10,0 g Lactosa 5,0 Sacarosa 5,0 Fosfato dipotásico 2,0 Agar 13,5 Eosina Y 0,4 Azul de metileno 0,065 pH 7,2 +/- 0,2 INSTRUCCIONES Suspender 36 g del polvo en 1 litro de agua purificada, reposar 5 minutos. Calentar con agitación frecuente y llevar a ebullición hasta su disolución total. Esterilizar en autoclave 121°C durante 15 minutos, distribuir en placas de Petri estériles. INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS Microorganismos fermentadores de lactosa y / o sacarosa: Colonias de color negro azulado o amarronado. Pueden tener centro oscuro y brillo metálico. Microorganismos no fermentadores de lactosa y sacarosa: colonias del color del medio, incoloras. ALMACENAMIENTO Las placas, deben ser almacenadas en un lugar oscuro a una temperatura entre 2 y 8 °C, envueltas en su envase original, hasta justo antes de usarlas. Evitar la congelación y el calentamiento excesivo.
- 3. Silvia S. Montenegro Cataño Fundación Universitaria de Popayán. Ecología INCUBACIÓN En aerobiosis, a 35-37 °C durante 18-24 horas. Ejemplos: Características de las colonias con Agar EMB Microorganismos BD EMB Agar, Modified E. coli Colonias grandes, color negro azulado, brillo verde metálico Enterobacter/Klebsiella Colonias grandes, mucoides, color negro azulado Proteus Colonias grandes, incoloras Salmonella Colonias grandes, desde incoloras hasta color ámbar Shigella Colonias grandes, desde incoloras hasta color ámbar Pseudomonas Colonias irregulares, incoloras Bacterias gram-positivas C recimiento escaso o nulo REFERENCIAS E.M.B. Agar (con Eosina y Azul de Metileno); laboratorios Britania; argentina; 2010. BD EMB Agar (Eosin Methylene Blue Agar), Modified; Instrucciones de uso-medios en placas listos para su uso; BD; 2013 Holt-Harris, J.E., and O. Teague. 1916. A new culture medium for the isolation of Bacillus typhosus from stools. J. Infect. Dis. 18:596-600. Diagnóstico bacteriológico; Universidad Nacional del Nordeste - Facultad de Medicina - Microbiología e Inmunología