Streptococcus y Enterococcus
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1) El documento describe las características y pruebas para identificar las bacterias Streptococcus y Enterococcus. 2) Incluye información sobre su taxonomía, localización en el cuerpo humano, medios de cultivo y pruebas bioquímicas como la bacitracina y la hidrólisis del hipurato. 3) También proporciona detalles sobre pruebas como CAMP y la tolerancia al telurito de potasio para diferenciar especies de Enterococcus.
Streptococcus y Enterococcus
- 1. PRÁCTICA No. 3 Streptococcus y Enterococcus DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGÍA ACADEMIA DE BACTERIOLOGÍA MÉDICA Equipo: 3 Grupo: 7QV1 19/ago./2019
- 2. Taxonomía
- 3. Localización de Streptococcus en el cuerpo humano
- 4. Streptococcus y Enterococcus ❖ griego: στρεπτό κοκκος; grano trenzado y ἔντερον κόκκος; grano del intestino. ❖ Cocos gram positivos ❖ Arreglo en pares o cadenas ❖ Inmóviles ❖ Anaerobios facultativos ❖ No esporulados ❖ Metabolismo fermentativo (Producen ácido láctico a partir de glucosa) ❖ Crecimiento óptimo a 37°C ❖ Catalasa negativa ❖ algunos crecen únicamente en una atmósfera enriquecida con dióxido de carbono
- 5. Clasificación del género Streptococcus
- 8. Streptococcus α- hemolíticos Resistente Susceptible Streptococcus pneumoniae* Streptococcus Viridans** NACl 6.5% Optoquina Enterococcus Streptococcus Grupo D - Bilis esculina *Crecimiento en bilis esculina yNaCl 6.5%Negativos **Crecimiento en NaCl 6.5% Negativo Identificación de Streptococcus y Enterococcus α- hemolíticos + + -
- 9. *Las pruebas de CAMP e hidrólisis son negativas. Streptococcus β-Hemolíticos SusceptiblesResistentes Streptococcus agalactiae Grupo B Streptococcus β-hemolíticos Diferentes al grupo A y B Streptococcu s pyogenes (Grupo A)* Bacitracina Identificación de Streptococcus β-hemolíticos (CAMP, Hipurato) + -
- 10. Identificación de Streptococcus y Enterococcus no hemolíticos Bilis esculina Streptococcus no Hemolíticos NaCl 6.5% Enterococcus Streptococcus Grupo D Estreptococos no hemolíticos + - + -
- 11. Enterococos -Son patógenos oportunistas y causan infecciones en las vías urinarias, bacteriemias, endocarditis. Infecciones: intraabdominales, pélvicas, de piel, del conducto respiratorio y raramente del sistema nervioso central E. faecalis y E. faecium, son las especies más frecuentemente aisladas, en estas han surgido cepas resistentes a vancomicina (VRE) lo que ha provocado que sean una amenza de la salud.
- 12. Murray, P., Rosenthal, K., Pfaller, M., Di_Francesco, P. and Angiolella, L. (2017). Microbiologia medica. 24th ed. Milano: Edra. 205-208pp
- 13. Medios de crecimiento -Caldo enriquecido Pike (azida de sodio 1:16000, cristal violeta 1:500 000) que posteriormente se resiembra en agar sangre de carnero al 5%, o gelosa sangre selectiva (medio Columbia con colistina) y ácido nalidíxico o gelosa sangre adicionada adicionada con alcohol fenil etílico al 0.25% (S. agalactiae y S. Pyogenes). -Caldo de Todd-Hewitt para aislar Streptococcus del Grupo B. -En caso de enterococos se pueden emplear para muestras estériles agar soya tripticaseina, agar Todd-Hewitt o agar sangre, -Para muestras que puedan tener biota normal, se pueden usar medios selectivos con sales biliares, esculina y azida de sodio (medio Pfizer). -
- 14. Hemolisis en Estreptococo y enterococo -Las colonias de S. Pneumoniae son alfa hemolíticas, pero cuando se incuban en aerobiosis pueden ser gamma hemolíticas o en anaerobiosis beta hemolíticas. -S. agalactiae puede ser beta o gamma hemolítica. -Las colonias de estreptococos del grupo Viridans son alfa hemolíticas y otras gamma hemolíticas. -La mayoría de los enterococos son gamma hemolíticas pero cuando se incuban de 48 a 72 horas pueden aparecer con una alfa hemolisis.
- 15. Identificación definitiva -En la identificación definitiva de los estreptococo beta, alfa y gamma hemolíticos se utilizan pruebas como Voges Proskauer, hidrólisis de arginina, y la utilización de carbohidratos. -En el caso de los enterococos, se pueden diferenciar por pruebas bioquímicas citadas más adelante.
- 17. Desarrollo 3) Incubar a 37°C/ 24h en atmósfera de CO2 al 5% asdasdsssssssss sssssssdsdssds 1) 2) 3)
- 18. Pruebas bioquímicas de acuerdo a la hemólisis
- 19. En caso de sospechar de un Enterococcus utilización de: Tolerancia al incubar 37°C / 24 h
- 20. Identificación de las especies de Enterococcus Faecalis y Enterococcus faecium
- 21. Bibliografía •Jawetz, E., Melnick, J., Adelberg, E., Morse, S., Brooks, G., Toni, M. and Butel, J. (2003). Jawetz, Melnick, Adelberg's Microbiologia medica. 25th ed. Padova: Piccin. Capítulo 14. •Murray, P., Rosenthal, K., Pfaller, M., Di_Francesco, P. and Angiolella, L. (2017). Microbiologia medica. 24th ed. Milano: Edra. Capítulo 18 y 20. •Stitt, E., Clough, P. and Clough, M. (1945). Practical bacteriology, haematology and animal parasitology. 6th ed. London: H.K. LEwis and Co., Ltd.
- 22. Medios de cultivo y pruebas bioquímicas Fundamentos
- 23. Prueba de la optoquina Se realiza con un disco impregnado con 5 µg de optoquina (clorhidrato de etilhidrocupreína) y tiene por objeto diferenciar las cepas de S. pneumoniae de las del grupo de Streptococcus viridans. Las cepas susceptibles a optoquina corresponden a S. pneumoniae. en agar gelosa sangre al 5% incubar a 37°C /24 h en atmósfera de CO2 al 5% x ≥ 14 mm
- 25. Agar bilis esculina la prueba de bilis esculina proporcionaba un medio confiable para identificar los estreptococos del grupo D (Enterococcus sp) y diferenciarlos de los estreptococos que no son del grupo D. Las cepas de Enterococcus son capaces de crecer e hidrolizar esculina, mientras que otros estreptococos no.
- 26. Composición y fundamento Las sales biliares son el ingrediente selectivo, mientras que la esculina es el componente diferencial. Los Enterococcus hidrolizan la esculina en unos subproductos que reaccionan con el citrato férrico que contiene el medio, produciendo sales insolubles de hierro que resultan en un ennegrecimiento del medio.
- 28. Prueba de CAMP La prueba (reacción) CAMP se basa en el hecho de que los estreptococos del grupo B (S. agalactiae) producen un factor (factor CAMP) que actúa de manera sinérgica con la ~B-hemolisina de S. aureus subesp. aureus en un medio de agar con sangre ovina o bovina. El sinergismo es una acción coordinada o correlacionada por dos o más microorganismos; el sinergista, factor CAMP, es un adyuvante de la acción de otro microorganismo.
- 29. Determinar la capacidad de un microorganismo para producir y elaborar el factor CAMP, que actúa de manera sinérgica con la B-hemolisina estafilocócica (0-lisina) sobre eritrocitos ovinos (oveja) o bovinos (buey) para producir un fenómeno lítico (23) en la unión de los dos microorganismos. El fenómeno lítico se denomina prueba o reacción CAMP por las iniciales de los apellidos de sus autores originales: Christie, Atkins yMunch-Petersen. Con posterioridad, el término se utilizó para otros procedimientos. Murphy y col. denominaron fenómeno lítico a la reacción CAMP y definieron la prueba CAMP como una manera de determinar la capacidad de los estreptococos de producir un agente lítico (factor CAMP) que se manifiesta como una zona hemolítica con la 0-lisina estafilocócica; de allí,la sigla CAMPo
- 30. Diferenciar e identificar de manera presuntiva cepas humanas o animales de Streptococcus agalactiae del grupo B (+) de otras especies de Streptococcus (-) cuando se incuban en aerobiosis o en condiciones reducidas de oxígeno (jarra para extinción de la vela) Con Rhodococcus equi (antes Corynebacterium equi)para identificar Listeria ivanovii(+)
- 31. La prueba (reacción) CAMP se basa en el hecho de que los estreptococos del grupo B producen un factor (factor CAMP) que actúa de manera sinérgica con la ~-hemolisina de S. aureus subesp. aureus en un medio de agar con sangre ovina o bovina (18,23). El sinergismo es una acción coordinada o correla- cionada por dos o más microorganismos; el sinergista, factor CAMP, es un adyuvante de la acción de otro . . mlcroorgamsmo.
- 32. Para cultivar todas las especies de Streptococcus deben utilizarse como medio de cultivo placas de agar con sangre (BA) ya que son microorganismos exigentes que requieren enriquecimientos adicionales pa- ra el desarrollo. Debe utilizarse sangre citratada o desfibrinada de oveja o de buey ya que no ocurre reac- ción con la sangre de caballo, conejo, cobaya ni humana (18). La presencia de l3-antitoxina en algunos lotes de sangre de oveja inhibe la producción de l3-toxina estafilocócica; para evitar esta posibilidad uti- lizar sólo células (71).
- 33. Prueba de la bacitracina La bacitracina es un antibiótico que inhibe la síntesis de pared celular bacteriana, y a la concentración que se encuentra en los discos (0,04 U) inhibe el crecimiento de los estreptococos beta hemolíticos del grupo A( Streptococcus pyogenes) de Lancefield pero no inhibe el desarrollo de otros estreptococos beta hemolíticos.
- 34. Prueba de Tolerancia al telurito de potasio La gelosa Telurito de Potasio es un medio destinado a la diferenciación de los enterococos. FUNDAMENTO La selectividad de este medio se basa en la presencia de telurito de potasio que inhibe la mayoría de los microorganismos asociados a los enterococos. ▶ La diferenciación de los enterococos se basa en su capacidad para reducir el telurito de potasio en teluro. El teluro producido colorea las colonias de negro.
- 35. Composicion Extracto de carne 8 g/l Extracto de levadura 5,5 g/l Peptona 9,5 g/l Cloruro de sodio 5 g/l Glucosa 5 g/l Agar 15 g/l Suplemento: telurito de potasio (0,8%) : 1ml / 20ml de medio
- 36. Siembra Sembrar en estrías muy juntas en un medio gelosado, a partir de un cultivo puro y recién obtenido. Incubación: Incubar durante 24 a 48 horas a 37°C. Lectura Telurito (+): colonias negras (Enterococcus faecalis) · Telurito (-): ausencia de colonias o colonias blancas (Enterococcus faecium u otros enterococos)
- 38. Prueba de hidrólisis de hipurato La prueba de hidrólisis de hipurato determina la capacidad que tienen los estreptococos del grupo B, así como otras bacterias, de hidrolizar enzimáticamente el hipurato sódico. La hidrólisis del hipurato dará como producto final glicina, que reaccionará con la Ninhidrina provocando un cambio de color a púrpura.
- 39. Procedimiento 1. Poner 0,1 ml de agua desmineralizada estéril en un pequeño tubo de ensayo de plástico. 2. Tomar 1-3 colonias de un aislamiento reciente y emulsionarlas en el agua. 3. Con unas pinzas, dejar caer el disco de hipurato en la suspensión. 4. Incubar en medio aerobio durante 2 horas a 35-37°C. 5. Dispensar 2 gotas del reactivo ninhidrina o 3 gotas de BactiDrop ninhidrina, en cada tubo de ensayo, mezclar y reincubar en medio aerobio durante 30 minutos a 35-37°C. 6. Observar el desarrollo de un color entre azul y púrpura.
- 41. Caldo todd Hewitt con NaCl 6.5% El subgrupo Enterococos hace parte de los Estreptococos fecales, los cuales están conformados por: S. faecalis, S. faecium, S. gallinarum, S. avium, S. bovis y S. equinus. Las 4 primeras especies son considerados como Enterococos y se diferencian del resto de Estreptococos por su capacidad de crecer en cloruro de sodio al 6.5%, a un pH de 9.6 y a temperaturas de 10 y 45°C;
- 42. Fundamento la fuente nutritiva del medio de cultivo que estimula el crecimiento microbiano está constituido por la infusión de cerebro corazón y la peptona los cuales proveen nitrógeno, vitaminas y aminoácidos. La glucosa es el hidrato de carbono fermentable y el cloruro de sodio al 6.5% hace selectivo al medio Por fermentación de la glucosa se generan productos ácidos que son neutralizados por las sales fosfato de sodio y carbonato de sodio, evitando así la destrucción de las hemolisinas.
- 44. Prueba de PYR-A-ENT Es una prueba rápida y simples utilizada fundamentalmente para la identificación de Streptococcus pyogenes, Enterococcus y microorganismos similares a Streptococcus.
- 45. Fundamento
- 46. Procedimiento A partir de un cultivo puro en agar sangre del microorganismo en estudio del cual se ha identificado que son cocos Gram +, catalasa negativos, hacer una suspensión densa en 50 microlitros de sol. fisiologica esteril y agregar un disco de PYR-A-ENT INCUBACIÓN En aerobiosis, de 35 a 37°C por 30 minutos, posteriormente se lee resultado Negativo:Solución alcalino o incoloro (Ausencia de PYR-asa) Positivo:Solucion o disco rojo-rosa (acción enzimática de la PYR-asa
- 48. Medio con base CTA con Arabinosa CTA Medium ™ (Medio de agar Cystine BD Trypticase ™) es un medio simple y básico para el mantenimiento y la detección de la motilidad de un amplia variedad de microorganismos. Con carbohidratos agregados, es útil para la determinación de reacciones de fermentación.
- 51. Prueba de CAMP CAMP es un acrónimo para Christie, Atkins y Munch Petersen, quienes son los tres investigadores que descubrieron el fenómeno.
Notas del editor
- #6: Aunque constituye una simplificación en exceso, es prácti- co pensar que los estreptococos se dividen en dos grupos: 1) los estreptococos b-hemolíticos, que se clasifican según los grupos de Lancefield, y 2) los estreptococos a-hemolíticos y g-hemolíticos, que se clasifican por pruebas bioquímicas. Este último grupo se denomina colectivamente estreptococos viridans, nombre derivado de viridis (en latín, «verde»), que hace referencia al pigmento verde formado por la hemólisis parcial en el agar sangre.