Practica 3
- 1. CETIS 62 PRACTICA No. 3 IDENTIFICACION DE CARBOHIDRATOS EQUIPO: 1 Lerma acosta Nohemí yunuen Leyja Rangel Selene Guadalupe Pereza Álvarez Ernesto Valenzuela Toledo Katya Elizabeth Yepez Vázquez Mariana OBJETIVO: Realizar diferentes experimentos, donde se identifiquen, las características de los carbohidratos.
- 2. Los carbohidratos comprenden los azucares, los almidones, las celulosas y las sustancias inmediatamente relacionadas con ellos. Es difícil formular una definición del termino “carbohidrato” que incluya todos los miembros de esta familia de compuestos pero a partir de formulas estructurales. Deberá notarse que un carbohidrato es un polioxiadehido una polioxicetona o una sustancia que produce por hidrólisis cualquiera o ambas de estos tipos de compuestos. Ejemplo: la glucosa y la arabinosa son polioxialdehídos, mientras que la fructuosa es una polioxicetona. Los nombres de los carbohidratos se caracterizan por la terminación “osa”. Los principales grupos de carbohidratos se designan como monosacáridos. Los monosacáridos comprenden todos los carbohidratos sencillos que no se pueden hidrolizarse en sustancias de menor estructura molecular. Los disacáridos incluyen aquellos carbohidratos que pueden hidrolizarse en dos azucares simples. De la misma manera, un trisacárido proporciona por hidrólisis tres moléculas de monosacáridos y una molécula de polisacárido origina muchas moléculas de monosacáridos. Todos los carbohidratos con excepción de los polisacáridos, se disuelven en agua, poseen un sabor más o menos dulce y son llamados azúcares. El metabolismo de los carbohidratos en el cuerpo animal es esencialmente el de la glucosa y sustancias a fines de la misma en sus procesos metabólicos. El azúcar característica de la sangre y líquidos titulares es la glucosa. La digestión de los alimentos ricos en carbohidratos, como almidón, sacarosa y lactosa, produce los monosacáridos: glucosa, fructuosa y galactosa, que pasan al torrente circulatorio. La galactosa y fructuosa son transformados en el hígado. REACCIÓN DE LA BENCIDINA La bencidina es una sustancia que cristaliza con una molécula de agua si se hace la cristalización por debajo de 60° C, y anhidrasis porque el sulfato de bencidina
- 3. es insoluble. Se emplea también para investigar la adición de agua oxigenada a la leche y para identificar la sangre en líquidos biológicos, empleada también en la preparación de colorantes, para perfumar jabones baratos y en las cremas para el calzado. Su constante criocóspica (6.9; agua 1.8) lo hace útil, junto con su poder disolvente, en criometría BENCIDINA (primaria) Prueba específica para pentosas. Una pentosa está formada por 5 átomos de carbono, por lo tanto cuando se habla de una aldopentosa se hace referencia a un monosacárido que contiene 5 átomos de carbono y puede contener también el grupo cetosa, por el cual toma el nombre de cetohexosa. MATERIAL REACTIVOS 5 tubos de ensayo Reactivo de bencidina 1 gradilla Carbohidratos al 1% 6 pipetas de1 ml 1 baño maría TÉCNICA 1. En un tubo de ensayo colocar 0.5ml del reactivo de bencidina. 2. Añadir 1 ó 2 gotas de solución de carbohidrato. 3. Calentar en agua hirviendo durante varios minutos, inmediatamente después enfriar con agua. 4. Si se forma un color rosa o rojo la prueba es positiva. Esta prueba parece muy satisfactoria para pentosas, las hexosas comunes no interfieren en esta prueba. PRUEBA DE ANILINA Esta prueba sirve para diferenciar las pentosas de los ácidos urónicos y de las hexosas que no dan la prueba.
- 4. Por deshidratación de las pentosas, se forman furfural, que reaccionan primero con una molécula de anilina dando un compuesto que es una base de Schiff, de poco color Con otra molécula de anilina, se parte del ciclo del furano dando un compuesto que por tener doble enlace conjugador, tiene un color rojo intenso. Dando también la prueba positiva los polisacáridos que por hidrólisis dan pentosas. MATERIAL REACTIVOS 5 tubos de ensayo Ácido acético glacial 1 gradilla Anilina 3 pipetas de 5ml Carbohidratos al 1% 1 baño maría TÉCNICA 1. Colocar 1 ml de carbohidrato. 2. Añadir 2 ml de ácido acético glacial y 3 gotas de anilina. 3. Calentar a hervir durante 1 minuto la coloración roja es positiva
- 5. Esta prueba la dan positiva las pentosas, puede servir para diferenciar las pentosas de ácidos urónicos. AZÚCARES REDUCTORES (Tollens, Fehling, Benedict) OXIDACIÓN Aunque la oxidación de los aldehidos, y en algunos casos las cetonas pueden emplearse como un método de preparación de ácidos carboxílicos, las reacciones que se describen son principalmente como pruebas cualitativas que permiten diferenciar los aldehídos y determinar acetonas de otras clases de compuestos orgánicos. La oxidación de los aldehídos a ácidos carboxílicos se efectúa muy fácilmente en una solución alcalina. Estos reactivos alcalinos son agentes oxidantes moderados, oxidan los aldehídos al mismo tiempo que ellos se reducen. El reactivo Tollens se prepara por la adición de hidróxido de amonio en una solución de nitrato de plata hasta que el precipitado de óxido de plata formado inicialmente se disuelve nuevamente es conveniente considerar a este reactivo como óxido de palta en lugar de Ag + 2OH -H2O Ag2O +4NH3 2Ag (NH3)2OH Una solución que contiene el ión plata amonicéo, y a menudo así es considerado en sus reacciones como aldehído. H O CH3-C-C=O + Ag2O CH3-C-OH + 2Ag La reacción conocida, la “prueba del espejo de plata” (Tollens), comprende en realidad al aldehído, una pequeña concentración de ión plata y los iones oxidrilo. La solución de Fehling consiste en dos partes:
- 6. a) Una solución de sulfato cúprico. b) Una solución de hidroxilo de sodio y tartrato de sodio y potasio (sal de Rochelli). Cuando se mezclan cantidades iguales de estas soluciones, se forma un complejo soluble de tartrato cúprico de color azul obscuro, el cual proporciona una pequeña concentración de iones cúprico. Los aldehídos reducen la solución de Fehling y forman un precipitado rojo de óxido cuproso. OH OH CH3-C=O + 2Cu + 5OH CH3-C=O + Cu2 + 3H2O La solución de Benedict es semejante a la de Fehling con la modificación de que se utiliza citrato de sodio en lugar del tartrato de sodio y potasio. Tiene como ventaja sobre la solución de Fehling de que no es necesario dividirla en dos reactivos separados. Las 3 soluciones mencionadas nos sirven para distinguir los aldehídos de las acetonas sencillas, porque las últimas no reaccionan. Pueden además indicarse que la reducción de las soluciones permite diferenciar un aldehído de un alcohol. Aunque los alcoholes pueden oxidarse por agentes oxidantes fuertes no son atacados por estos reactivos moderados. El benzaldehído puede oxidarse hasta ácido benzoico con el reactivo de Tollens, pero no es atacado por las soluciones de Fehling o de Benedict. Los aldehídos reducen con dificultad las soluciones neutras o ácidas de las sales de plata o de cobre. Solo en soluciones alcalinas se observa la fuerte acción reductora de los aldehídos, aunque no se conoce con certeza el papel que en ella juega el ión oxidrilo. PRUEBA DE TOLLENS MATERIAL REACTIVOS Tubos de ensayo Reactivo de Tollens Pipeta de 1 ml Carbohidratos en polvo
- 7. Mechero Baño María TÉCNICA 1. Colocar en un tubo de ensayo 1 ml de carbohidrato. 2. Añadir 1 ml de reactivo de Tollens. 3. Agitar perfectamente. 4. Calentar a baño maría durante 5 minutos máximo. Observar la forma de espejo que se forma en los positivos. PRUEBA DE FEHLING MATERIAL REACTIVOS 5 tubos de ensayo Fehling “A” 2 pipetas de 1 ml Fehling “B” 1 mechero Carbohidratos al 1% TÉCNICA 1. Colocar en un tubo de ensayo 1 ml de carbohidratos. 2. Añadir 1 ml de Fehling “A” y 1 ml de Fehling “B”. 3. Mezclar bien y ponerlo a baño maría o en la flama del mechero durante cierto tiempo. 4. Sí mira a marrón o rojo la prueba es positiva. Esta prueba es una reacción de oxido-reducción, los alcoholes del azúcar se oxidan a aldehídos y ácidos, el cobre se reduce de cúprico a cuproso por eso cambia de color la solución y se forma el precipitado. PRUEBA DE BENEDICT MATERIAL REACTIVOS 5 tubos de ensayo Reactivo de Benedict 6 pipetas de 5 ml Carbohidratos de 1% 1 gradilla
- 8. 1 baño maría TÉCNICA 1. Colocar en varios tubos de ensayo 1 ml de solución de Benedict 2. Añadir 3 gotas de cada solución de carbohidratos en cada tubo. 3. Agitar y colocar los tubos al mismo tiempo en agua hirviendo durante 3 minutos. 4. Enfriar la solución y hacer comparaciones. 5. Obsérvese el precipitado formado. Un cambio de color NO indica reacción positiva, solo el precipitado. NOTA: Deberán darse los resultados comparativos de las 3 pruebas de azúcares reductores. PRUEBA DEL ÁCIDO PICRICO 2, 4,6 TRINITROFENOL Se puede obtener, pero con mal rendimiento, por acción de la mezcla sulfónica sobre fenol. Se obtiene mejor la acción sucesiva de los ácidos sulfúricos y nítricos. O por nitración de coloro benceno, hidrólisis de nitrito cloro benceno obtenido a dinitrofenol, y después nitración de este por mezcla sulfonítrica.
- 9. El ácido pícrico es un sólido cristalizado, amarillo pálido (p.f. 122°C), un poco soluble en agua, con sabor amargo (picros-amarillo) Su descomposición explosiva, desencadena por un detonador (fulminante de mercurio) lo hace útil como explosivo (melenita), si bien tiene el inconveniente de corroer el alma del cañón por su carácter ácido, por lo que tiene más empleo en bombas de aviación. El ácido pícrico es un ácido relativamente fuerte que ataca los metales dando picratos metálicos muy inestables y explosivos, lo que requiere proteger el acero de abuses con un barniz o vidriados. Los picratos de amonio C6H2(NO2)3(ONH4) y de potasio, son pocos solubles en agua. El picrato de amonio se utiliza como explosivo. El ácido pícrico se emplea para teñir de amarillo la lana, como reactivo de alcaloides y proteínas (investigación de albúminas en líquidos biológicos: reactivo de Esboch). El ácido pícrico, como otros nitrofenoles, existe en dos formas: la normal que da cristales cuando se cristaliza la ligroína.
- 10. Y la ací, que da soluciones amarillas en agua y cristales amarillos de esta solución, especialmente si es alcalina. Así el 2,4, dinitrofenol se utiliza como indicador del pH en la escala de Michaelis, debido a la mayor intensidad de coloración amarilla que presenta una solución según variaciones pH del medio, se utiliza también para adelgazar, pero su empleo es muy delicado, debido a su toxicidad. El grupo aldehído le da característica reductora a monosacáridos. El grupo aldehído de las aldohexosas se oxida con facilidad el carboxílico correspondiente. Esto sucede con un pH neutro o poco alcalino, empleando agentes oxidantes o enzimas. El ácido monocarboxílico que se produce se conoce con el nombre de ácido aldónico (a partir de galactosa). En presencia de este agente oxidante se oxidan tanto el grupo aldehídico como la función alcohólica primaria. MATERIAL REACTIVOS 6 pipetas de 5 ml Ácido pícrico saturado 1 pipeta de 1 ml Carbonato de sodios al 10% 1 gradilla Carbohidratos al 1% 1 baño maría 5 tubos de ensayo TÉCNICA 1. A 3 ml de solución de carbohidratos añadir 1 ml de solución saturada de ácido pícrico. 2. Agregar 0.5 ml de solución de carbonato de sodio al 10%. 3. Calentar en agua hirviendo durante 1.5 minutos. Un color café denota prueba positiva.
- 11. RESULTADOS Y OBSERVACIONES: REACCIÓN DE LA BENCIDINA N.º TUBO CARBOHIDRATO RESULTADO 1 L-arabinose negativo 2 miel Negativo 3 dextrosa Negativo 4 sacarosa Negativo 5 fructuosa Negativo 6 maltosa Negativo 7 glucosa Positivo 8 glactosa Negativo 9 Xilosa Negativo En esta reacción solo hubo una coloración rosada con naranja en el carbohidrato de Glucosa y en los demás carbohidratos fue muy poca la diferencia de color. PRUEBA DE ANILINA N.º TUBO CARBOHIDRATO RESULTADO 1 L-arabinose Positivo 2 miel Negativo 3 dextrosa Negativo 4 sacarosa Negativo 5 fructuosa Negativo 6 maltosa Negativo 7 glucosa Negativo 8 glactosa Positivo
- 12. 9 Xilosa Positivo REACCION DE TOLLENS N.º TUBO CARBOHIDRATO RESULTADO 1 L-arabinose Positivo 2 miel Positivo 3 dextrosa Negativo 4 sacarosa Negativo 5 fructuosa Positivo 6 maltosa Negativo 7 glucosa Positivo 8 glactosa Positivo 9 Xilosa Positivo En la mayoría de los carbohidratos se noto una reacción positiva y reacciono de una manera de espejo color plata. PRUEBA DE FEHLING Arabinose NEGATIVO, No se formo precipitado Miel POSITIVO, Si se formo precipitado
- 13. Dextrosa POSITIVO, Si se formo precipitado Glactosa POSITIVO, Si se formo precipitado Glucosa Anhidra NEGATIVO, No se formo precipitado Sacarosa NEGATIVO, No se formo precipitado Fructuosa POSITIVO, Si se formo precipitado Maltosa NEGATIVO, No se formo precipitado Xilosa POSITIVO, Si se formo precipitado Durante la realización de la practica observamos un cambio de tonalidades a la hora de agregar los reactivos, y al ser sometidas al baño María durante al menos 5 minutos solo algunos de los 9 carbohidratos presentaron coloración “Marrón” que indica una reacción oxidativa. PRUEBA DE BENEDICT
- 14. Se pudieron observar varios cambios de color oscuro al entrar en baño maria pero muy poquitos dieron con resultado positivo. • Mediante la reacción de Benedict podemos identificar azúcares reductores • La reacción de Benedict identifica azúcares reductores (aquellos que tienen su OH libre del C anomérico), en disacáridos la sacarosa negativo porque no es un azúcar reductor y la maltosa positiva. PRUEBA DEL ACIDO PICRICO CARBOHIDRATO RESULTADO Arabinose POSITIVO Miel POSITIVO Dextrosa POSITIVO Sacarosa NEGATIVO Fructuosa NEGATIVO Glucosa Anhidra POSITIVO Xilosa POSITIVO Maltosa POSITIVO Galactosa POSITIVO compuesto caracteristicas resultado miel Se mostro un color café y en la parte inferior se quedo el color azul Negativo sacarosa Color azulado con rojizo negativo fructosa cambio a un color rojizo Negativo dextrosa Se mostro un cambio de color café oscuro espesoso Negativo arabinosa Se mostro un color café oscuro mas intenso en el precipitado Negativo g-lactosa Se observaron dos capas una de colo café oscuro y otra con el precipitado azulado negativo xilosa Se observaron dos capas una rojiza y la inferior azulada negativo maltosa No se produjo ningún cambio de coloración positivo amDRA Se observaron dos capas una de colo café oscuro y otra con el precipitado azulado negativo
- 15. Esta práctica fue sencilla y con su elaboración pudimos identificar propiedades de los carbohidratos, como se dijo anteriormente los resultados arrojaron positivo a 7 de 8 carbohidratos, su identificación pudo ser notoria por la coloración café después de realizar el procedimiento de la manera indicada. CUESTIONARIO 1. Escribe las formulas de los carbohidratos utilizados en la practica. CARBOHIDRATO FORMULA Arabinose C5H10O5 Miel Dextrosa C6H12O6 Sacarosa C12H22O11 Fructuosa C6H12O6 Glucosa Anhidra C6H12O6 Xilosa C5H10O5 Maltosa C12H22O11 Galactosa C6H12O6 Estrutura:
- 16. 2. ¿Qué es un azúcar reductor? Los azúcares reductores son aquellos azúcares que poseen su grupo carbonilo intacto, y que a través del mismo pueden reaccionar como reductores con otras moléculas. 3. ¿Qué usos tiene el reactivo de Fehling? Sirve para demostrar la presencia de glusosa, así como para detectar derivados de ésta tales como la sacarosa o la fructosa. El ensayo con el licor de Fehling se fundamenta en el poder reductor del grupo carbonilo de los aldehídos. Éste se oxida a ácido y reduce la sal de cobre en medio alcalino a óxido de cobre, formando un precipitado de color rojo. 4. Explica por que el yodo da coloración azul marino, con el almidón. El yodo entra a la estructura helicoidal del almidón, es decir, que los átomos de yodo se introducen entre las espirales provocando la absorción o fijación de yodo en las moléculas del almidón
- 17. 5. ¿Qué importancia farmacológica, tiene el identificar los carbohidratos? Para analizar el metabolismo celular. OBSERVACIONES: En cada reactivo existió una reacción con los carbohidratos. En algunos resulto positiva inmediatamente al estar en contacto con el agua hirviendo y en otros tardo más. Es importante cuidar manejar el tiempo correcto en que se debe poner el reactivo con el carbohidrato en el agua caliente. CONCLUSIONES En la realización de esta práctica aprendimos de manera fácil como es que algunos reactivos nos ayudan a identificar los carbohidratos. Como identificar los colores y cambios en cada tipo de reacción, como cambia su color y aspecto. BIBLIOGRAFÍA CONSULTADA. https://www.google.com.mx/url? sa=t&rct=j&q=&esrc=s&source=web&cd=2&cad=rja&uact=8&ved=0ahUKEwjU2czK7LLMAhUis4M KHSgPDwoQFggdMAE&url=https%3A%2F%2Fes.wikipedia.org%2Fwiki%2FAz %25C3%25BAcar_reductor&usg=AFQjCNHj_rg8wYiWx59lGLW7Ps4VbDf0bw&sig2=iHrEnWveIl2hA FdAznGE1g https://blog.uchceu.es/eponimos-cientificos/reactivo-de-fehling/ https://sites.google.com/site/laboratoriosbioquimica/bioquimica-i/prueba-del-almidon https://www.google.com.mx/#q=formula+quimica+de+la+GALACTOSA https://www.google.com.mx/#q=formula+quimica+de+la+Glucosa https://www.google.com.mx/#q=formula+quimica+de+la+MALTOsa http://www.ecured.cu/Reactivo_de_Fehling