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PRACTICA No. 4

“OBSERVACIÓN Y ESTUDIO DE PROTOZOARIOS”.

A. OBJETIVOS ESPECIFICOS

a.1.- El alumno conocerá y aplicará diversas técnicas para el estudio, observación e identificación de
protozoarios, con el propósito de desarrollar habilidades destinadas al reconocimiento de protozoarios parásitos
de los animales domésticos.

B.- MATERIAL Y EQUIPO A UTILIZAR

b.1. Microscopio compuesto
b.2. Cultivo de Paramecium sp.
b.3. Cultivo de Amoeba de vida libre
b.5. Aceite de inmersión
b.6. Pipetas Pasteur y goteros de vidrio
b.7. Porta objetos y cubre objetos de vidrio
b.8. Papel tisú para limpieza de objetivos
b.9. Láminas de ilustración de protozoarios
b.10. Catálogo de hemoprotozoarios
b.11. Laminillas permanentes de protozoarios
b.12. Estuche de colores y material de dibujo
b.13. Recuperación del conocimiento sobre protozoarios

C.- PROCEDIMIENTOS

c.1. INTRODUCCION

Los Protozoarios son organismos unicelulares del reino protista. Normalmente son microscópicos y
muestran semejanzas en la mayoría de los casos con estructuras fundamentales de las células eucarióticas,
pero también tiene muchas características fisiológicas y morfológicas, tanto individuales como colectivas, que
le son propias y que generalmente no se encuentran en células de metazoos y metafitos. A pasar de su
simplicidad los protozoarios han tenido un notable éxito en la naturaleza, sus adaptaciones les han permitido la
invasión de muy diversos hábitats. Los protozoarios se encuentran en el suelo y en todas clases de agua, tanto
dulce como marina, en todas las regiones climáticas donde haya temperaturas superiores al punto de
congelación. Contribuyen a todos los niveles tróficos de las comunidades que habitan.

Figura No. 4.1 Protozoarios diversos

Algunos son productores fotosintéticos, enriqueciendo el medio con compuestos orgánicos, algunos
absorben alimento a través de la superficie del cuerpo, contribuyen a la reducción de los retos de plantas y
animales; otros se alimentan de microorganismos microscópicos o descomponedores, actúan como

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consumidores primarios y colaborando a evitar el aumento de estas poblaciones. Algunas especies de
protozoarios viven parasitando y causando graves enfermedades en el hombre, así como en los animales
domésticos y silvestres, desde las abejas hasta el ganado vacuno.

Los protozoarios son eucarióticos es decir con un núcleo encerrado en una membrana, el cual se
encuentra en el interior del citoplasma. La porción más interna de los protozoarios es el endoplasma y es la
parte que rodea al núcleo, está compuesto de protoplasma que es un coloide en el que se puede encontrar;
lisosomas, vacuolas con material alimenticio sin digerir, mitocondrias, aparato de Golgi, ribosomas y retículo
endoplásmico. Cubriendo el endoplasma se encuentra el ectoplasma, el cual es menos granuloso y más
homogéneo. El ectoplasma funciona como aparato locomotor, sirve para la presión o captura e ingestión de los
alimentos y como órgano respiratorio, elimina los productos de catabolismo expulsándolos y protege al
protozoario. Cubriendo al ectoplasma se encuentra la membrana plasmática, la cual controla la entrada y salida
de alimento, excreciones y secreciones, mantiene una concentración normal de la sustancia citoplásmica,
tornándose permeable a ciertas sustancias. En algunos protozoarios como Histomona meleagridis o las
amibas no tienen una forma constante y cambian frecuente. En otros su contorno es más o menos constante.

Los protozoarios presentan tres tipos de organelos locomotores. La clasificación de los protozoarios se
debe en gran parte a la clase y distribución de estas partes locomotoras. Los seudópodos son proyecciones
protoplasmicas transitorias de la superficie del cuerpo. Los flagelos son estructuras como látigos que baten
impulsando a los flagelos en el seno del agua. La envoltura externa del flagelo es una continuación de la
membrana plasmática, en su interior presentan 11 fibrillas. El flagelo se origina del blefaroplasto, que tiene la
misma estructura fina que el centríolo de las células animales. En algunos flagelados, el blefaroplasto actúa
como centro organizador del huso mitótico del núcleo en división, funcionando así como centríolo y como base
de los flagelos, además tienen cerca el DNA de una mitocondria que se tiñe basofilamente y recibe el nombre de
cuerpo parabasal. El blefaroblasto y el cuerpo parabasal forman el Kinetoplasto. Los cilios se presentan en
grandes cantidades en la superficie de algunos protozoarios y presentan la misma estructura básica del flagelo,
únicamente son más pequeños y no se originan de blefaroplastos.

Figura No. 4.2 Tipos estructurales de los protozoarios

En ciertos flagelos como Tripanosoma y tritrichomonas, existe una membrana muy delicada que se
extiende hacia fuera del cuerpo y un flagelo que bordea su margen exterior, cuando esta membrana vibra,
muestra un movimiento ondulante característico llamada membrana ondulante. El complejo apical es un
organelo que presentan los protozoarios del phylum apicoplexa en al menos alguno de sus estadios. Este
organelo se encuentra en la parte anterior del cuerpo, esta formado por un conoide, anillos polares, roperías,
toxonemas, micronemas y fibras subpeliculares.

Los protozoarios usan tres métodos principales para obtener alimento, algunos son autótrofos,
sintetizando compuestos orgánicos a partir de compuestos inorgánicos obtenidos del medio externo. Otros son
heterótrofos, requiriendo para nutrirse alimento orgánico disuelto en el medio externo. Por ultimo otros son
holozoicos alimentándose de productos orgánicos sólidos.

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Se estima que los organismos del reino de los protistas pertenecientes al superfilo protozoa
(protozoarios) [reino protista] suman aproximadamente unas 25000 especies. Por razones prácticas se utilizara
la clasificación antigua de acuerdo al Código Internacional de Nomenclatura Zoológica:

Phylum: Sarcomastigophora
Clase: Rizopoda: sus movimientos y alimentación es por medio de seudópodos, se reproducen por
fusión binaria y por multiplicación en las especies que presentan fase quístita. Las especies parásitas y
comensales pertenecen al orden Amoebina y a la familia Amoebidae.

Figura No. 4.3 Morfología de una amoeba

Clase: mastigophora o Flagellata; sus movimientos son por medio de uno o dos flagelos, algunas
especies presentan fase quistica y otros estadios evolutivos deferentes incluso con localizaciones muy variadas,
en esta clase se concentran mas las especies parásitas y comensales.

Figura No. 4.4 Morfología de un flagelado

Phylum: Ciliophora
Clase: Ciliata; estos se mueven por medio de cilios se caracterizan por poseer un núcleo vegetativo ó
macronúcleo y un micronúcleo que es germinativo. Se multiplica por fusión binaria transversal. La mayoría de las
especies tienen vida libre y solo existe una parásita la cual coincide con que es la mas grande especie de
protozoario que parásita al hombre y a los animales.

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Figura No. 4.5 Morfología de un ciliado

Phylum: Apicomplexa
Clase Sporozoa: son protozoarios que carecen de órganos de locomoción, viven dentro y fuera de las
células del huésped, se alimentan por medio de la absorción y su reproducción implica fenómenos más o menos
complicados. Entre ellos existen especies mucho muy patógenas para los animales y el hombre.

Figura No. 4.6 Morfología de esporozoarios

Para el estudio e investigación experimental de estos protozoarios y de muchos otros parásitos, se
utilizan diversas técnicas, que en su mayoría apoyan el diagnostico de las parasitosis, lo cual se estudiará en
7mo. Semestre, y si bien en la generalidad de los laboratorios de diagnóstico no se utilizan con frecuencia, estas
son importantes para incrementar el conocimiento sobre el comportamiento de los parásitos. En el presente
curso, solo se abordarán las técnicas de observación para estimular el proceso educativo significativo de los
protozoarios.

c.2. OBSERVACION DE PROTOZOARIOS RIZOPODOS

Con la recuperación del conocimiento de lo aprendido en la práctica No. 1 referente al manejo del microscopio, y
el estudio sobre los rizópodos, se observarán preparaciones vitales de amoebas en cultivos de arroz. Dicho
cultivo ha sido desarrollado previamente a la presente práctica y forma parte del acervo cultural del catedrático;
sin embargo, el alumno interesado en el desarrollo extraclase de estas técnicas, deberá seguir la bibliografía
consultada, consultar con el catedrático de ésta materia o en su defecto, consultar la página
http://faunatec.spaces.live.com

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Se tomarán dos gotas del cultivo de amoebas proporcionado por el catedrático con la ayuda de una pipeta
Pasteur o un gotero, procurando tomar muestras del líquido de las paredes o el fondo del recipiente del cultivo,
ya que hay que recordar que las amoebas se encuentran sobre el sustrato y no “nadando”.

Estas gotas del cultivo se colocan en el centro de un portaobjetos, al cual se le dejará caer un cubreobjetos
como se ilustra en la figura No. 4.7

Figura No. 4.7 Colocación del cubre objeto sobre la muestra de cultivo de amoebas

El estudiante iniciará la observación con el objetivo de 10x siguiendo una ruta sobre el cubreobjetos similar a la
indicada en la figura No. 4.8, hasta encontrar alguna estructura parecida a la figura 4.3 y manipulará el revolver
del microscopio para observar con el objetivo de 40x los movimientos amiboideos. Se debe tener en cuenta que
los especimenes observados son ejemplares vivos y que no se han coloreado, por lo que las estructuras
parecerán semitransparentes. Deberá identificar el núcleo y los seudópodos principalmente y buscará la
posibilidad de ver quistes amiboideos.

Figura No. 4.8 Trayectoria a seguir en la búsqueda de especímenes en la laminilla

c.3. OBSERVACION DE PROTOZOARIOS FLAGELADOS

Con la recuperación del conocimiento previo sobre los flagelados, el alumno realizara la observación
de una preparación permanente de Trichomona sp. obtenidas de un cultivo sanguíneo de ratón, lo
que es de considerar, ya que se observarán eritrocitos, y entre estos: las Trichomonas que suelen
ser mas grandes.

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Dado que esta es una preparación permanente, el cultivo ha sido coloreado y fijado, por lo que la
apariencia de los especímenes puede estar alterada; no obstante, los protozoarios podrán verse
transparentes en un medio azuloso de contraste (los protozoarios no se tiñen, solo sus núcleos),
destacándose la membrana ondulante, el axostilo y algunas trazas de los flagelos (estos suelen ser
destruidos por el proceso de fijación).

Una vez localizado el espécimen con el objetivo de 10x, se deberá girar al de 40x para la
identificación de las estructuras básicas.

En todo momento se podrá consultar con el catedrático o auxiliar del laboratorio.

c.4. OBSERVACION DE PROTOZOARIOS CILIADOS

Con la recuperación del conocimiento previo sobre los ciliados, el alumno procederá a realizar la
observación de una preparación vital de Paramecium sp. obtenido de un cultivo de infusión de chícharo
o equivalente. El procedimiento es similar a la observación de amoebas.

c.5. OBSERVACION DE PROTOZOARIOS ESPOROZOARIOS

Con la recuperación del conocimiento previo sobre los esporozoarios, el alumno procederá a realizar la
observación de preparaciones permanentes de Toxoplasma gondii, Haemoproteus columbae y Eimeria
tenella. El procedimiento es similar a la observación de Trichomona sp., con la diferencia de que en
estos casos se podrá utilizar el objetivo de inmersión (100x), con el consecuente uso de aceite de
inmersión, toda ves de que se trata de parásitos intracelulares.

D.- EJERCICIOS.

d.1 Realiza el dibujo de especímenes encontrados en una de las preparaciones vitales. Anotará lo
observado y las experiencias.

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d.2 Realiza el dibujo de los especímenes encontrados en una de las preparaciones permanentes.
Anotará la observación y la experiencia.

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