Practiqita 2 biorr

4775200-984255715-194945Instituto Politécnico Nacional Unidad Profesional Interdisciplinaria de Biotecnología Laboratorio de Biorreactores Practica No. 2 “Instrumentación para el seguimiento y control de la biorreacción” Equipo 3: Flores Avilés Irving Fonseca Elizondo Héctor Hugo Martínez Cordova Luis Yair Martínez Gómez Roberto Monroy Cañedo Sara Elena Neri Barrera Ana Perla Olvera Millan Erika Silva Estrada Tania Villalobos Santana Maribel Soledad 3BM2 Agosto 2010. MÉXICO, D. F. Índice general TOC \o \"
1-3\"
\h \z \u Objetivo PAGEREF _Toc270962050 \h 1Introducción. PAGEREF _Toc270962051 \h 1Sistema de control de espuma PAGEREF _Toc270962052 \h 4Sistema de control de pH PAGEREF _Toc270962053 \h 6Medicion de oxigeno disuelto PAGEREF _Toc270962054 \h 7Materiales y métodos PAGEREF _Toc270962055 \h 9Desarrollo experimental PAGEREF _Toc270962056 \h 10Medición y Control de pH PAGEREF _Toc270962057 \h 10Medición de oxigeno disuelto PAGEREF _Toc270962058 \h 11Medición y control de la espuma PAGEREF _Toc270962059 \h 11Resultados PAGEREF _Toc270962060 \h 12Análisis de Resultados PAGEREF _Toc270962061 \h 15Conclusiones PAGEREF _Toc270962062 \h 17Referencias PAGEREF _Toc270962063 \h 18 Practica 2 “Instrumentación para el seguimiento y control de la biorreacción” Objetivo Conocer y manejar sistemas de medición y control de variables de operación de biorreactores de tanques agitados, a través de las determinaciones en línea de pH, oxígeno disuelto, y espuma. Introducción. El ambiente existente en el interior de los biorreactores debe permitir una óptima actividad catalítica. Parámetros como la temperatura, el pH, la concentración de oxígeno disuelto, el caudal del medio de fermentación, la velocidad del agitador y la velocidad de difusión del aire tienen un importante efecto sobre el rendimiento de la biorreacción y sobre las reacciones enzimáticas. Para proporcionar el ambiente adecuado, las propiedades del sistema deben estar monitorizadas y así poder controlar cualquier desviación de los valores deseados. En la industria de la fermentación existen varios niveles de control del proceso. *Control manual: es el más simple, requiere de un operador humano para manipular los dispositivos como bombas, motores, y válvulas. *Control feed-back: control automático que se utiliza para mantener los parámetros en sus valores prefijados. Cualquier intento de comprender o controlar el estado de una biorreacción depende del conocimiento que se tenga sobre las variables críticas que afectan el proceso, estos parámetros pueden agruparse en 3 categorías como se puede observar en el cuadro 1. Cuadro 1. Parámetros medidos o controlados en los biorreactores. FISICOSQUIMICOSBIOLOGICOSTemperaturapHConcentración de biomasaPresiónOxigeno disueltoConcentración de enzimaPeso del reactorCO2 disueltoComposición de la biomasaNivel de liquidoPotencial redoxViabilidadNivel de espumaComposición del gas de salidaMorfologíaVelocidad del agitadorConductividadPotencia consumidaComposición del caldoCaudal de gasViscosidad del cultivoContenido en gas Idealmente las mediciones de estos parámetros deberían realizarse in situ y en línea, es decir, en un punto cercano o dentro del propio biorreactor durante la operación, de manera que el resultado esté disponible inmediatamente para la acción del control. Muchas variables importantes como la concentración de biomasa y la composición del cultivo, no puede medirse normalmente en línea debido a que no existen instrumentos apropiados. En vez de ello, las muestras deben ser recogidas del reactor y llevadas al laboratorio para su posterior análisis. Como las condiciones de fermentación pueden variar mientras se realiza el análisis en el laboratorio, la acción de control basado en dicha medición no resulta efectiva. Las mediciones fuera de línea se utilizan en las fermentaciones industriales para el análisis de las concentraciones de biomasa, carbohidratos, proteínas, fosfatos y lípidos, para la actividad enzimática y para la reología del caldo nutritivo. Ejemplos de mediciones que pueden realizarse en línea en la industria son: Temperatura Presión pH Concentración de oxígeno disuelto Caudal Velocidad del agitador Potencia consumida Nivel de espuma Peso del caldo La disponibilidad de la medida en línea no significa necesariamente que se aplique a procesos en escala industrial. Debido al costo que conlleva su instalación y a las consecuencias financieras que puede acarrear el fallo del instrumento durante la fermentación, los dispositivos de medida utilizados en la industria deben cumplir estrictos criterios de rendimiento. Estos incluyen: Precisión dentro del 1-2% de la escala completa Operación fiable durante al menos el 80% del tiempo Bajo mantenimiento Esterilizables con vapor Sencillez de manejo y rápida calibración Una desviación máxima inferior al 1-2% de la escala completa. El desarrollo de nuevos instrumentos para la medición en línea de las variables químicas y biológicas supone un reto importante para los investigadores de ingeniería de bioprocesos. Sistema de control de espuma La espuma causa infinidad de problemas de operación por lo que el control de la misma es un parámetro importante en el diseño de los biorreactores. Los sensores que miden y a su vez controlan los niveles de espuma dentro del biorreactor están basados en la conductividad del medio, cuando se ha cerrado el circuito entre el medio de cultivo y la espuma, se activa una bomba dispensadora de antiespumante o se activa el motor del rompe-espuma. La espuma se forma al quedar atrapadas burbujas de aire producidas durante las diversas fases del proceso, como la agitación y la dispersión del aire. La interfase aire-líquido de estas burbujas está rodeada por los agentes tenso activos presentes en la biorreación, que debido a su baja densidad emigran a la superficie. Durante este proceso, las burbujas pequeñas se pueden combinar para formar otras más grandes que suben más rápidamente. Las burbujas se acumulan en la superficie deformándose a sí mismas a la superficie de la biomasa. El aire queda atrapado por la formación de una lamela estabilizada por la presencia de los agentes tensoactivos. En general, la tensión superficial disminuye con la temperatura, ya que las fuerzas de cohesión disminuyen al aumentar la agitación térmica. La influencia del medio exterior se comprende ya que las moléculas del medio ejercen acciones atractivas sobre las moléculas situadas en la superficie del líquido, contrarrestando las acciones de las moléculas del líquido. Para eliminar la espuma se deben evitar los efectos estabilizadores haciendo uso de un antiespumante que debe tener al menos una de las siguientes propiedades: 1. Ser capaz de destruir la espuma para eliminar la ya existente. 2. Ser capaz de prevenir la espuma para impedir su formación. 3. Ser capaz de liberar el aire para facilitar que la espuma llegue a la superficie. Para que un antiespumante nos ofrezca los resultados deseados debe considerarse: -Que tenga una tensión superficial menor que el medio espumante -Que se disperse en el medio espumante -Que sea compatible y estable con medio espumante. Para seleccionar el antiespumante adecuado, se debe de tener en cuenta: el medio que se va a tratar (acuoso, no acuoso o solvente) y la cantidad de espuma que se requiere controlar o eliminar. Los antiespumantes pueden ser sustancias químicas con una tensión superficial baja como la silicona y los aceites minerales, los ácidos grasos y los compuestos fluorocarbonados. Algunos ejemplos son los siguientes: VEHICULOS Emulsiones acuosas. Aceites minerales. Aceites farmacéuticos. Polioxialcalenos. Poliaxialcalenos en dispersión. SUSTANCIAS ACTIVAS Polisiloxanos tridimensionales. Poliésteres de Siloxano. Compuestos de silicona. Siliconas en emulsión. Sílices. Estearatos. EBS.ceras. Ceras de polietileno. Polioxialcalenos Los rompedores de espuma deben ser de: Destrucción mecánica suave Baja demanda energética No requiere de corriente Libre de mantenimiento Bajo contenido de aire en espuma residual licuada Sistema de control de pH El sistema controla el pH del medio de cultivo; que es generada por los productos de desecho y el metabolismo propio del cultivo celular o microorganismos. Fig. 1 Sistema de control de pH Un sistema de control de acidez consta de: Dos subsistemas mecánicos servo controlados Sistema Dispensador de Ácido, que consta de: •Dispensador aséptico de ácido (HCl) • Filtro microporo en línea • Manguera flexible resistente al ácido • Bomba peristáltica Sistema Dispensador de Álcali, que consta de: • Dispensador aséptico de álcali (NaOH); • Filtro microporo en línea • Manguera flexible resistente al álcali • Bomba peristáltica Las mangueras flexibles se deben conectar al sistema (biorreactor) mediante un tubo de adición de reactivo para cada una de ellas. Un sistema de control formado por: • Controlador de pH: ordena y regula la acción del motor que controla a las bombas peristálticas que suministran el ácido y el álcali. Un sistema de medición formado por: • Sensor de pH: sonda o probeta electroquímica que mide la acidez y “dice” al controlador de pH, la situación del medio. • pH Óptimo: toda célula y microorganismo poseen un rango de acidez (pH) dentro del cual, es posible su crecimiento con normalidad; dentro de ese rango, existe un pH óptimo en el cual el crecimiento es máximo y muy bien definido. Medición de oxígeno disuelto El Oxígeno Disuelto (OD) es la cantidad de oxígeno que está disuelta en algún fluido al que se le proporciona agitación. El nivel de oxígeno disuelto puede ser un indicador de cuán contaminada está el agua y cuán bien puede dar soporte esta agua a la vida vegetal y animal. Generalmente, un nivel más alto de oxígeno disuelto indica agua de mejor calidad. La cantidad de oxígeno que puede disolverse en el agua (OD) expresado normalmente en ppm (partes por millón) depende de la temperatura y la elevación del sitio donde se toma la muestra. El agua más fría puede guardar más oxígeno en ella que el agua más caliente. En un biorreactor el sustrato puede llegar a sobresaturarse con oxígeno debido a que el agua de mueve rápidamente por la agitación o burbujeo proporcionado, esto puede ser dañino para los microorganismos. Los valores del Porcentaje de Saturación del OD de 80-120% se consideran excelentes y los valores menores al 60% o superiores a 125% se consideran malos. Medidor de oxigeno El medidor de oxígeno se utiliza para medir la cantidad de oxígeno disuelto en líquidos. Normalmente se utilizan dos escalas de medición: partes por millón (ppm); o porcentaje de saturación (%), que se define como el porcentaje de oxígeno disuelto en 1 litro de agua, respecto la cantidad máxima de oxígeno disuelto que puede contener 1 litro de agua. Es necesario determinar la cantidad de oxígeno disuelto en el agua porque es un indicador de la calidad del agua. Materiales y métodos Equipos: Biorreactores de laboratorio Instrumentación: Sistema de medición y control de pH Electrodo de pH con su camisa presurisable y conectores para el biorreactor Cables Medidor Controlador Bomba de adición de ácido o álcali. Sistema de medición y control de oxígeno disuelto Electrodo polarografico Cables Medidor Controlador Sistema de medición y control de espuma Electrodo Medidor Controlador Bomba de adición de antiespumante. Materiales: -Tanque de Nitrógeno puro con válvula de control de presión y flujo -Vasos de precipitado de 250 ml, 500 ml, y de 2000 ml -Probetas de 1000ml -Mangueras de silicón para bombas peristálticas. Reactivos: -Solución de NaOH 6 N -Solución de HCl 6 N -Antiespumante -Solución con detergente. Desarrollo experimental 1779270304165La variación de pH Al biorreactor NaOH 6 N Set point en un valor inferior de 5 y superior de 9.4Que el valor de pH que registra sea igual que el de la muestra tomada del biorreactor medida fuera de lineaEl equipo de medición y control de pHOBSERVARAGREGARESTABLECERESTABLECERENCENDERVERIFICARAGREGARHCl 6 N hasta que el pH registrado sea el pH inicial 00La variación de pH Al biorreactor NaOH 6 N Set point en un valor inferior de 5 y superior de 9.4Que el valor de pH que registra sea igual que el de la muestra tomada del biorreactor medida fuera de lineaEl equipo de medición y control de pHOBSERVARAGREGARESTABLECERESTABLECERENCENDERVERIFICARAGREGARHCl 6 N hasta que el pH registrado sea el pH inicial Medición y Control de pH Una velocidad de agitación del biorreactor Fig. 2 Diagrama de bloques para la medición y control de pH. Medición de oxígeno disuelto 52070235585Al biorreactor 300 mL de agua a temperatura ambienteUn flujo de aire a un valor de 0.5 VVM y verificar en el rotametroEl equipo de medición de oxigeno disuelto y espere hasta que la lectura permanezca estableEn el equipo 100% del valor de saturaciónPasar un valor de flujo de Nitrógeno tal que no sobrepase los 0.75 VVM totales y verificar en el rotámetroComo el oxigeno disuelto baja en el equipo de mediciónAGREGARESTABLLECERENCENDER ESTABLECERHACEROBSERVARCERRARCompletamente el flujo de Nitrógeno y observar como el valor de oxigeno disuelto vuelve a su valor normal.00Al biorreactor 300 mL de agua a temperatura ambienteUn flujo de aire a un valor de 0.5 VVM y verificar en el rotametroEl equipo de medición de oxigeno disuelto y espere hasta que la lectura permanezca estableEn el equipo 100% del valor de saturaciónPasar un valor de flujo de Nitrógeno tal que no sobrepase los 0.75 VVM totales y verificar en el rotámetroComo el oxigeno disuelto baja en el equipo de mediciónAGREGARESTABLLECERENCENDER ESTABLECERHACEROBSERVARCERRARCompletamente el flujo de Nitrógeno y observar como el valor de oxigeno disuelto vuelve a su valor normal. Fig. 3 Diagrama de bloques para la medición y control de oxigeno disuelto Medición y control de la espuma 170815-423545Al biorreactor 300 mL de agua y 1 gota de detergente a temperatura ambienteUna velocidad de agitación de 250 rpm y un flujo de aire de 0.15 VVM verificar en el rotametroSi a esa velocidad de forma espumaLa velocidad de agitación en intervalos de 50 rpm hasta llegar a 400 rpmPor 10 minutos cada una de las velocidades probadas y observe lo que pasa con la espumaEl flujo de aire a 75 VVM, cuando la velocidad de agitación sea de 400 rpm.Lo que sucede con la espuma en el biorreactor Antiespumante AGREGARESTABLECEROBSERVARINCREMENTARRrMANTENERINCREMENTARAGREGAROBSERVAR00Al biorreactor 300 mL de agua y 1 gota de detergente a temperatura ambienteUna velocidad de agitación de 250 rpm y un flujo de aire de 0.15 VVM verificar en el rotametroSi a esa velocidad de forma espumaLa velocidad de agitación en intervalos de 50 rpm hasta llegar a 400 rpmPor 10 minutos cada una de las velocidades probadas y observe lo que pasa con la espumaEl flujo de aire a 75 VVM, cuando la velocidad de agitación sea de 400 rpm.Lo que sucede con la espuma en el biorreactor Antiespumante AGREGARESTABLECEROBSERVARINCREMENTARRrMANTENERINCREMENTARAGREGAROBSERVAR Fig. 4 Diagrama de bloques para la medición y control de espuma. Resultados El control de los bioprocesos requiere la monitorización y el ajuste de muchos parámetros, además de que son simultáneos; En vez de que sean individuales es normal utilizar un mismo ordenador para diferentes lazos de control de realimentación Un dispositivo de medida detecta el valor de la temperatura y envía una señal al controlador. En el controlador, el valor medido es comparado con el valor deseado conocido como punto de consigna o set point La desviación entre el valor medido y el deseado es el error que es utilizado por el controlador para determinar que acción debe tomarse con el fin de corregir el proceso. Puede ser una persona que observa el proceso o un dispositivo electrónico automático El controlador produce una señal que es transmitida al actuador, que ejecuta la acción del control -21018592710Punto de consigna ControladorActuadorPROCESODispositivo de MedidaVariable medidaPerturbacionesVariable+-00Punto de consigna ControladorActuadorPROCESODispositivo de MedidaVariable medidaPerturbacionesVariable+- Figura 5. Diagrama de funcionamiento de control Feedback En la figura 5 está representado el sistema que se utiliza para el control de la mayoría de las variables medibles. En el caso de la medición del pH donde el sensor o dispositivo de medida que consta de un par de electrodos, uno de referencia y uno de vidrio envueltos en otro de mayor tamaño, se fundamenta en que la diferencia de potencial que se estable entre el contenido de la membrana y fuera de ella es proporcional a la cantidad de iones H+ (pH), el sensor envía la señal al medidor en el cual previamente establecimos el set-point, el cual fue de 4.81-9.41, se adiciono NaOH y se pudo observar cómo fue aumentando el pH, una vez que sobrepaso el valor del set-point, se adiciono HCl manualmente ya que el sistema no contaba con bomba peristáltica para su adicción, observando así el funcionamiento del sistema de medición y control del pH en un biorreactor a nivel laboratorio. El sistema de medición de espuma utilizado en la práctica, realmente representa una simulación del sistema de medición y control de espuma debido a que la instrumentación utilizada no es la ideal, se utilizó un voltímetro como medidor y una de sus salidas como sensor, el control del sistema fue un controlador humano, una persona agregó el antiespumante, sin embargo en esta simulación si pudimos conocer el principio básico de este sistema que son los circuitos eléctricos, una vez que el sensor detecta espuma se abre el circuito eléctrico lo que se aprovecha para accionar una bomba que adicione antiespumante, para mantener el nivel de espuma controlado. 00BiorreactorActuadorDispositivo de MedidaVariable medidaPerturbacionesVariable+Tanquede NBiorreactorTanquede NFiltroCompresorVálvulaFiltroSensorCompresorVálvulaVálvulaSensor00BiorreactorTanquede NFiltroCompresorVálvulaVálvulaSensor Fig. 6 Esquema del sistema de medición y control de oxígeno disuelto En la figura 6 se puede observar el esquema del sistema de medición de oxigeno disuelto utilizado en laboratorio, el cual consta de un sensor que está compuesto de un par de electrodos delimitados por una membrana, la cual detecta el oxigeno disuelto en el contenido del biorreactor, un medidor el cual tuvo que haber sido llevado a 100% de saturación, sin embargo debido a fallas en este, solo se pudo llegar a un valor de 47 % de saturación, el controlador fue una válvula que al abrirla permitió la salida de Nitrógeno, el cual provoco que el valor de saturación en el medidor bajara a 0%, y una vez que se cerró la válvula de Nitrógeno permitiendo solo el paso de aire, el valor de saturación de Oxigeno se elevó a un 62.31%. De este modo se observó el funcionamiento del sistema de medición y control de oxígeno disuelto. Análisis de Resultados La Instrumentación en un biorreactor es esencial y muy importante ya que mediante ésta se miden y controlan las distintas variables que forman parte del bioproceso, esto con el fin de aumentar la productividad del proceso. Los diferentes sistemas de medición y control de un biorreactor se basan en distintos principios, según la naturaleza de la variable por ejemplo, el principio en que se basa la medición del pH que es un parámetro químico es distinto al principio de medición de temperatura, que es un parámetro físico. Según el tipo de variable a medir, el sistema de medición y control está conformado por diferentes componentes, sin embargo un sensor, un medidor y un controlador son elementos comunes a todos los sistemas de medición y control los cuales están siempre presentes, y que según la variable a medir se encuentran diferentemente distribuidos en el sistema de medición. En el sistema de medición y control del pH el sensor es un electrodo de vidrio colocado dentro del biorreactor y está directamente conectado con el contenido dentro del biorreactor, el medidor se encuentra dentro de una caja al igual que el controlador, donde se establece el encendido de las bombas peristálticas de ácido o álcali según sea necesario. Entre las principales dificultades que se encontraron en el sistema de medición y control de pH fueron que dependiendo de la agitación será la medición mostrada para pH, ya que al estar el medidor en la parte inferior la medición no es inmediata ya que tarda en difundirse la base o el ácido, y esto representa dificultades ya que se puede adicionar más acido del necesario (o base según sea el caso). Para el sistema de medición y control de la espuma se simuló un sensor que al estar en contacto con la espuma envía una señal eléctrica que cierra o abre el circuito eléctrico y por lo tanto adicionar o dejar de adicionar antiespumante, en la práctica solo se simuló esto ya que el antiespumante se adiciono manualmente. Durante la práctica el tensoactivo utilizado Etilenglicol, no funciono como antiespumante ya que no cumplió con ninguna de las características requeridas, ya que ni destruyo la espuma ya formada ni impidió la formación de nueva espuma, esto se debe a las propiedades del etilenglicol ya que esta sustancia es utilizada para sistemas de transferencia de calor como refrigerante en mezclas con agua. Sería importante utilizar diversos antiespumantes para así poder decidir cuál es el indicado para eliminar la espuma que se forma debido al detergente en el sistema. En cuanto a los parámetros que influyeron en la formación de espuma se observó que la aireación tiene más influye sobre esta, ya que al ir aumentando la agitación la espuma que se formaba no incrementaba, en cambio al aumentar la aireación se formaba espuma a una mayor rapidez. Esto se debe principalmente a que la aireación permite un movimiento total del líquido dentro del biorreactor ya que lo mueve desde la parte inferior hasta la superior además de que ayuda a que las burbujas que se van formando por la agitación salgan a la superficie del líquido, mientras que la aireación solo forma pequeñas burbujas a los lados y estas se rompen al chocar con las aspas de los agitadores. En el sistema de medición y control de oxígeno disuelto el sensor es un electrodo con membrana semipermeable mediante la cual el oxígeno difunde, posteriormente se reduce en la superficie del cátodo y se forma cloruro de plata en el ánodo, una solución electrolítica une al ánodo estableciéndose un voltaje de polarización entre ellos, el resultado es una corriente eléctrica que es proporcional a la actividad de oxigeno disuelto. En la práctica, no se pudo realizar tal comprobación debido a fallas del equipo. La monitorización de las variables en un biorreactor mediante la instrumentación representa un área de investigación que ayuda a mejorar el rendimiento de los bioprocesos y a poder alcanzar una operación uniforme y satisfactoria, sin embargo, también representa un reto el desarrollo de nuevos instrumentos para la medición de variables que presentan más dificultades, como lo son las variables químicas y biológicas. Conclusiones La instrumentación en un biorreactor sirve para monitorizar y controlar las variables involucradas en el bioproceso con el fin de maximizar la productividad. Los sistemas de medición y control de las diferentes variables están constituidas por un sensor, un medidor y un controlador, éste último está compuesto por un transductor y un actuador. La medición en línea es el contacto directo del sistema de medición y control con el contenido del biorreactor, y es la más adecuada para la medición de variables ya que la muestra se toma directamente del medio. El pH, la concentración de oxígeno disuelto, y el nivel de espuma se miden y controlan en línea. El set-point es un ajuste a valores fijos, uno superior y uno inferior que sirven para establecer el rango de oscilación del valor medido de una variable particular. El fundamento del sistema de medición de pH es la diferencia de potencial entre las 2 caras de la membrana de vidrio a disoluciones acuosas que difieren de su valor de pH. El fundamento del sistema de medición y control de espuma son los circuitos eléctricos. Al estar el sensor en contacto con la espuma abre el circuito eléctrico, lo que se aprovecha para accionar la adición de antiespumante. Existen variables que solo pueden ser medidas fuera de línea como la concentración de la biomasa. Referencias M. Doran Pauline. PRINCIPIOS DE INGENIERIA DE LOS BIOPROCESOS. Editorial Acribia. España, 1998. Páginas 359-366. Ward OP. Biotecnología de la Fermentación. Acribia. [España], 1991. Schügerl K. Bioreaction Engineering. Vol. 2. John Wiley and Sons. [Great Britain], 1990. McNeil B, Harvey LM. Fermentation: a practical approach. In: Laboratory Fermenters. IRL press. Oxford University, 1990. Bailey JE. Biochemical Engineering Fundamentals. Second edition. McGraw-Hill. [Singapore], 1986.

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