Recombinacion
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La recombinación homóloga implica varias etapas: 1) rotura de doble cadena iniciada por endonucleasas, 2) invasión por una sola cadena y formación de ADN heterodúplex, y 3) resolución que deja una región heterodúplex. La recombinación específica de sitio involucra cortes específicos mediados por proteínas como integradas en sitios como attB y attP, simulando la actividad de topoisomerasas.
Recombinacion
- 1. Recombinación Homóloga y Específica de Sitio
- 4. Etapas de la recombinación:
- 5. ADN Heterodúplex 1.-Molécula Articulada 2.-Articulación Recombinante 3.-ADN heteroduplex(híbrido)
- 6. Resolución Se requieren dos hendiduras más… •Siempre deja una región heterodúplex como residuo •No siempre se acompaña de recombinación en los flancos •Longitud no menor de 75bp
- 7. Las roturas de la doble cadena inician la recombinación. Inicio del intercambio génico por rotura de la doble cadena. Endonucleasa: inicia la recombinación. Exonucleasa: corta una cadena a cada lado de la rotura y genera extremos 3`. Invasión por una cadena única.
- 8. Complejo Sinaptonémico. Los cromosomas se aparean para formar el complejo sinaptonemico. Cada cromosoma se condensa alrededor de una estructura llamada elemento axial. El complejo sinaptonemico se forma después de roturas de doble cadena.
- 9. Las Secuencias chi Estimulan el Sistema RecBCD Bacteriano. •Un sitio chi se puede activar con una rotura de la doble cadena. •El complejo RecBCD ejerce varias actividades. •Su participación en la recombinación es preveer una región de una sola cadena con un extremo 3` libre. •La RecBCD cuando alcanza el sitio chi el complejo entra en pausa. El reconocimiento del sitio chi hace que la subunidad RecD se desactive.
- 10. Las reacciones se coordinan en un ADN sustrato que tiene un sitio chi. La nucleasa RecBCD se acerca a una secuencia chi desde un lado y degrada el ADN a medida que avanza; en el sitio chi hace un corte endonucleolítico, pierde RecD y conserva solo la actividad de helicasa.
- 11. Proteínas de transfería: catalizan la asimilación de una sola cadena La RecA facilita la asimilación de cadenas únicas invasoras en el ADN dúplex, siempre y cuando una de las cadenas reactivas tengan un extremo libre. La RecA forma filamentos con el ADN de una o dos cadenas y cataliza la capacidad de un ADN de una sola cadena con un extremo 3´libre de desplazar a su contraparte en una cadena dúplex de ADN.
- 12. El sistema Ruv resuelve las uniones holliday El complejo Ruv actúa sobre uniones recombinantes La RuvA reconoce la estructura de la unión y la RuvB es una helicasa que cataliza la migración de ramas La RuvC escinde uniones para generar productos intermedios de recombinación. Complejo asimétrico
- 13. La conversión génica contribuye a la recombinación interalélica El ADN heteodúplex creado por recombinación puede tener secuencias con apareamiento erróneo, donde los alelos recombinantes no son idénticos. Los sistemas de reparación pueden retirar apareamiento erróneos si cambian una de las cadenas, de modo que su secuencia sea complementaria a al otra. La formación de esporas en los ascomicetos permiten la determinación de la constitución genética cada una de las cadenas de ADN involucradas en la meiosis.
- 14. Superenrollamiento Positivo Más estrecho Más pares de bases por giro Negativo Gira una en torno a otra, menos apretadas Menos bases por giro
- 15. Número de Enlaces: veces que una cadena cruza sobre la otra. Isómeros Topológicos “Diferentes números de enlaces reflejan distintos grados de superenrollamiento” Número de Contorsiones(T): Total de giros de la doble elice. Número de Torcimientos (W): Giro de eje de la cadena dúplex en el espacio. ΔL= Δ W+ΔT
- 16. Topoisomerasas Catalizan cambios en la topología. Actúan sin importar su secuencia. Los extremos generados por rotura nunca están libres, mantienen en enlaces covalentes con una molécula de tirosina de la enzima
- 17. Tipo 1.- haciendo rotura transitoria de la cadena de ADN. Tipo II.- Introducen una rotura transitoria en la doble cadena. Grupo A.-Enlace con un fosfato 5´ Grupo B.-Enlace con un fosfato 3´ Girasas: Pueden introducir superhélices negativas. Girasas inversas: Pueden introducir superhélices positivas.
- 19. Girasa
- 20. La recombinación especializada involucra sitios específicos La recombinación especializada comprende una reacción entre sitio específicos que n tienen que ser homólogos El DNA del fago circular se convierte en un profago integrado por una recombinacion reciproca entre attP y attB
- 21. La recombinación especifica de sitio comprende rotura y reunión Se hacen escisiones a intevalos de 7 bp en los genes attB y attP y los extremos se unen en forma cruzada
- 22. La recombinación especia de sitio simula la actividad de la topoisomerasa
- 23. Se muestra la reacción catalizada por una integrase. La enzima es una proteína monomérica que tiene un sitio activo capaz de cortar y ligar el DNA. La reacción comprende el ataque de una tirosina en un enlace fosfodiester.
- 24. Esta imagen muestra la reacción inmediata con base en la estructura cristalina. La estructura del complejo Cre-Lox muestra dos moléculas de Cre, cada una unida por una longitud de 15 bp al DNA.