Staphylococcus

UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO
FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES ZARAGOZA
CARRERA DE MEDICO CIRUJANO

MICROBIOLOGIA LABORATORIO

PRACTICA #2: DIFERENCIACION DE CEPAS DE ESTAFILOCOCOS PATOGENOS
DE NO PATOGENOS

JNJNJNJNJNKJKKNKJNJKNJKNJKNK

(+)S.aureus

(+) *Staphylococos
*Micrococous *Bacilos
*Listeria
monocytogenes
(+) *Streptococos
*Staphylococos
*Neumococos
*Planococos

Tinción de
Gram

(-) *Shigella
*Salmonella
*E. coli
*Klebsiella
*Yersenia

*******

Catalasa
(-)*Streptococos
*Clostridium
*Terysipelothrix
*Corynebacterium
pyogenes

Coagulasa
S. epidermidis
S.saprophiticus
S. haemolyticus

Características generales
•
•
•
•

Son inmóviles.
Carecen de esporas.
Son Gram positivas.
Su metabolismo es de
tipo fermentativo
• Son aerobios y
anaerobios facultativos

Bernard D. Davis., [et al.] (1999) Tratado de microbiología 4a. ed. Barcelona. Masson.

Patógenas
Fermentan manitol
Produce: *hemolisinas
*fosfatasa
*lipasa
Proteolíticas
(licuefacción de
proteínas)
En medio con telurito
→ negro azabache

Temperatura óptima37 °C
Se encuentran en:
*leche
*agua negra
*alimentos con
inadecuada cocción
Forman glucosa en
anaerobiosis
Oxidasa negativo
Produce ADNasa


No patógenas
• Es la causa menos
común en infecciones
oportunistas
• Es un mediador de
infecciones
nosocomiales
• Su crecimiento es no
hemolisis
• No fermenta manitol

*Coagulasa negativo

*Se presenta
frecuentemente en la
piel de humanos y de
animales y en
membranas mucosas
*No es pigmentado


Clasificacion por
especie

Fermentacion de manitol

s. Aureus (+ ) (SIM)

Formacion de acido percibible a
partir del rojo de fenol con
cambio a un halo amarillo

Elmer W. Koneman... [et al.] (1999). Diagnostico microbiologico : texto y atlas color. (5ªed) Buenos Aires

S110
Medio selectivo para el
aislamiento y
diferenciación:
• producción de pigmentos
• fermentación de manitol
• hidrólisis de gelatina, a
partir de alimentos y otras
muestras.
Mac Faddin, J (1991). Pruebas bioquimicas para la identificacion de bacterias de importancia clinica. (2ºed) México, Panamericana

Es una
hemoproteina
hidroxiperoxidasa
pH optimo 7

Catalasa
Sistema
citocromo

Catalizan
Exceso: tóxico
para la
Bacteria

*Descomposición
aeróbica de
azucares

Peróxido de
hidrogeno

Oxigeno gaseoso

Agua


http://www.telmeds.net/AVIM/Abacterio/cocos%20gram%20positivos/images/CatalaseResults1.jpg

Fermentación de manitol
• unas gotas de púrpura de
bromocresol a las zonas
donde se encuentran las
colonias sospechosas y en
una zona de la placa donde
no
hay
desarrollo
bacteriano.
• Comparar
el
color
desarrollado entre estas
dos zonas.

• Prueba positiva: cambio
de color del indicador del
medio en la zona de
crecimiento bacteriano. El
medio sin desarrollo de
microorganismos
permanece sin cambio.

Prueba negativa: no hay
diferencias de color entre
las zonas de crecimiento
bacteriano y la zona sin
inocular.


http://pathmicro.med.sc.edu/fox/Mannitol.jpg

Hidrólisis de la gelatina
cubrir la placa 5 ml de una
solución saturada de
sulfato de amonio y
colocar en estufa, a 35-37
ºC, en aerobiosis durante
10 minutos.
• Positiva: halo transparente
alrededor de las colonias.
Negativa: ausencia de halo
transparente alrededor de
las colonias.

Microorganismo Pigmento Fermentació Hidrólisis Prueba de

n de manitol

de la
la
gelatina coagulasa

S. aureus ATCC
25923

+

+

+

+

S. epidermidis
ATCC 14990

-

-

+

-


COAGULASA
EN PORTA OBJETOS

1 gota de
solución
salina

1 colonia de
estafilococos
más

más
Asa de
plasma de
conejo con
EDTA

Si aglutina es positiva

EN TUBO

Inoculación de
0.5 ml

Dilución de 1:4
de plasma de
conejo con EDTA

Formación de 1
coagulo (1-4 hr
35º)

1 asa de la
colonia
sospechosa

Positiva


•

ESTÁNDAR

Perlas de látex

Perlas de látex

Más

Más

Fibrinógeno

Inmunoglobulina

(detecta factor de agregación
en las cels. Estafilocócicas)

(detecta proteína A de la
pared cel. de S. aureus)

Aglutinación

s. aureus


MANITOL
La mayor parte de cepas de S. aureus
producen manitol y forman ácido
Excelente medio es agar-manitol
saldo para poblaciones mixtas

S. aureus crece
bien en medio
rojo naranjado

Produce colonias
con halo amarillo

Inhibe a S.
aureus (7.5% de
NaCl)

Indica la
producción de
ácido


DNA-asa
Agar nutriente
incorpora

DNA

más

Se agrega azul de
toluidina O

Baña la placa con
ácido clorhidrico

Si el microorganismo
crece y produce
DNAsa

El agar que rodea
colonia de S. aureus
cambia

Azul-rosa

Se inocula el
microorganismo en el
agar

Incuba (18-24 hrs)

Producción de
hidrólisis de DNA


ADNasa

Comprobación

Azul de toloudina

Prueba adicional
para la
identificación de
muchas cepas

Rodeada con una
zona clara, zonas
opacas(-)

(+) de azul a rosa

Baño con acido
clorhídrico
diluido(+)

Adenasa después de
18 a 24 horas

(-)azul


FERMENTACIÓN DE GLUCOSA EN
ANAEROBIOSIS
Se utiliza para la diferenciación de
micrococos y estafilococos

Los micrococos son oxidativos y no
fermentadores en su metabolismo
Hay que determinar si el aislamiento
pude producir glucosa en condiciones
anaerobias

estafilococos

cerrado

Abierto
Micrococos
acidificaran


Enfermedades producidas por cepas
no patógenas

Infecciones de las prótesis articulares
• Se debe principalmente a
estafilococos
coagulasa
negativos.
• Los pacientes presentan
únicamente dolor localizado
y un fallo mecánico de la
articulación.
• Los signos sistémicos como
la fiebre y la leucocitosis no
son
llamativos
y
los
hemocultivos suelen arrojar
resultados negativos.
Murray, P. R. (2007) Microbiología médica (5° ed.) Elsevier

Enfermedades producidas por cepas
patógenas

Las ampollas contiene un liquido claro, sin microorganismos ni leucocitos. De 7 a 10 el epitelio recupera su estructura gracias a los anticuerpos protectores.

Sindrome de la piel escaldada
Las ampollas contiene un
liquido claro, sin
microorganismos ni
leucocitos.
De 7 a 10 dias el epitelio
recupera su estructura
gracias a los anticuerpos
protectores.

Impétigo ampolloso
• Las cepas especificas
productoras de toxina (p. ejm el
fago tipo 71) se asocian a la
formación de ampollas cutáneas
superficiales.
• Aquí se muestran resultados
positivos en los cultivos.
• El eritema no se extiende mas
allá de de los límites de la
ampolla y no está presente el
signo de Nikolsky.


Sindrome del shock toxico
• La producción de la toxina
impone una atmosfera
aerobia y un pH neutro.
• Las
manifestaciones
clínicas aparecen de forma
brusca y consiste en
fiebre, hipotensión y
exantema macular difuso.
• Se observa una afectación
multiorgánica y toda la
piel
se
descama
incluyendo palmas y las
plantas.


Intoxicación alimenticia estafilocócica
Estafilococos
penetran los
alimentos

Inicio de la
enfermedad

• Puede ser por un estornudo
• Debe permanecer a temperatura ambiente
• No presentan olor ni sabor desagradable
• El calentamiento posterior destruye a las bacterias pero no inactiva las toxinas

• Abrupto y rapido
• Periodo de incubacion de 4 horas( tras la ingestion)
• Los sintomas duran generalmente menos de 24 hrs.
• Vomitos importantes, diarrea (acuosa y no sanguinolienta), dolor abdominal, nauseas,
sudoracion y cefalea

• Alivio de los sintomas, no se recomienda antibioticos porque se trata de una toxina
Tratamiento


• 2 tubos con plasma citratado
• 2 tubos con caldo manitol rojo de fenol con
campana de Durham
• 2 tubos con caldo glucosa rojo de fenol con
campana de Durham
• 2 tubos con caldo de glucosa rojo de fenol con
campana de Durham y sello de Vaspar
• 2 tubos con gelatina bacteriológica

•
•
•
•
•
•

Microscopio
Mechero
Asa y porta asa bacteriológica
Peróxido de hidrogeno
Colorantes para Gram
Porta objetos

• 1.- de los cultivos de la sesión anterior, realizar
tinción de Gram.
• 2.- sembrar los tubos de caldo a partir de los
medios de agar S-110, escogiendo las colonias
mas típicas y etiquetando con cuidado un juego
de medios para las colonias blancas y otro para
las colonias amarillas.
• 3.- sembrar el tubo de gelatina por picadura y
dejar incubar a temperatura ambiente por 24 hrs

• Observar si hay licuefacción.
• 4.- incubar el resto de los medios de cultivo a
37° C durante 24 hrs.
• 5.- la prueba de la coagulasa se efectúa
tomando una asada de la cepa e inocular por
suspensión en el tubo de plasma
citratado, incubar a 37°C durante 4, 8 y 24
hrs, observar la formación de coagulo.

• Si en este tiempo no se ha formado reportar la
prueba como negativa.
• 6.- para efectuar la prueba de la catalasa,
tomar una asada de la cepa y suspender en
una gota de agua sobre un portaobjetos,
adicionarle una o dos gotas de peróxido de
hidrogeno y esperar la formación inmediata
de burbujas, de ser así reportar la prueba
como positiva.

• 7.- hacer una tabla donde se indiquen todos
los resultados.
• 8.- interpretar los resultados.

Bibliografia
• Bernard D. Davis., [et al.] (1999) Tratado de microbiología 4a.
ed. Barcelona. Masson.
• Elmer W. Koneman... [et al.] (1999). Diagnostico
microbiologico : texto y atlas color. (5ªed) Buenos Aires
• Mac Faddin, J (1991). Pruebas bioquimicas para la
identificacion de bacterias de importancia clinica. (2ºed)
México, Panamericana
• Murray, P. R. (2007) Microbiología médica (5° ed.) Elsevier
• http://www.telmeds.net/AVIM/Abacterio/cocos%20gram%20
positivos/images/CatalaseResults1.jpg
• http://pathmicro.med.sc.edu/fox/Mannitol.jpg

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