Lab micro 5
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Este documento describe el procedimiento para realizar una tinción de Gram. La tinción de Gram permite identificar la morfología y tipo de tinción de bacterias, ya sea Gram-positiva o Gram-negativa. Esto se debe a las diferencias en la pared celular. El procedimiento incluye la preparación de extensiones bacterianas y su tinción con violeta de genciana, lugol, alcohol y safranina. El resultado muestra que las bacterias Gram-positivas se tiñen de violeta y tienen una capa densa en la pared, mientras que las Gram-
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- 1. FACULTAD DE INGENIERÍA MARÍTIMA Y CIENCIAS DEL MAR FICHA DE LA PRÁCTICA PARA LABORATORIO POFCM0102-1 Hoja 1 de 5 CÓDIGO MATERIA Microbiología NOMBRE DavidQuiñonez PARALELO 1 TEMA DE LA PRÁCTICA Tinciónde gram OBJETIVOS GENERALES: Identificarlamorfología(coco,bacilo, etc.) ytipode tinción(GrampositivaoGram negativa),de la bacteria proporcionada en clase. INTRODUCCIÓN: El tamaño de la mayoría de las células bacterianas es tal que resultan difíciles de ver con el microscopio óptico.La principal dificultad es la falta de contraste entre la célula y el medio que la rodea. El modo más simple de aumentar el contraste es la utilización de colorantes. Si se desea simplemente aumentar el contraste de las célulasparala microscopía,sonsuficienteslosprocedimientos que usan un solo colorante llamadode tinciónsimple. Sin embargo, a menudo se utilizan métodos que no tiñen de igual modo todas las células, es el proceso denominado tinción diferencial. Uno muy usado en microbiología es la tinción Gram. Basándose en su reacción a la tinción Gram, las bacterias pueden dividirse en dos grupos: gram- positivas y gram-negativas. Esta tinción tiene gran importancia en taxonomía bacteriana ya que indica diferenciasfundamentales de la pared celular de las distintas bacterias. Mientras que las bacterias gram- negativassonconstantesensureacción,losmicroorganismosgram-positivospuedenpresentar respuestas variables en ciertas condiciones (son gram lábiles). (S., 2015) Por ejemplo, los cultivos viejos de algunas bacterias gram-positivas pierden la propiedad de retener el cristal violeta, y en consecuencia, se tiñen por la safranina apareciendo como gram-negativas. Análogo efectose produce en ocasiones por cambio en el medio del organismo, o por ligeras modificaciones en la ejecuciónde latécnica.Poreste motivo,esprecisoatenerse, en la práctica, al procedimiento establecido. Para explicar el mecanismo de la tinción de gram se han propuesto varias hipótesis fundadas en la naturaleza química de las paredes celulares de los microorganismos. (S., 2015)
- 2. FACULTAD DE INGENIERÍA MARÍTIMA Y CIENCIAS DEL MAR FICHA DE LA PRÁCTICA PARA LABORATORIO POFCM0102-1 Hoja 2 de 5 Aquí puedes ver las diferencias estructurales y químicas de los dos tipos de pared bacteriana: Pared Gram + capa densay uniforme de 200 a 800 A ácidosteicoicos polisacáridos proteínas(pocasveces) glicopéptido(50% del pesoseco) Pared Gram - capa internadelgadade 20 a 30 A cubiertapor capas externasde densidadmenor) lipopolisacáridos lipoproteínas proteínas glicopéptido(10% del pesoseco) Mecanismos de la tinción de gram: Productos que se utilizan Reacción y coloración de las bacterias GRAM + GRAM - 1) Cristal violeta Células color violeta Células color violeta 2) Lugol solución iodada Se forma el complejo CV-I. Las células continúan teñidas de color violeta. Se forma el complejo CV-I. Las células continúan teñidas de color violeta. 3) Alcohol Se deshidratan las paredes celulares. Se contraen los poros. Disminuye la permeabilidad. El complejo CV-I no sale de las células que continúan teñidas de color violeta. Eliminación por extracción de grasas de las paredes celulares. Aumenta la porosidad. El complejo CV-I se separa de la célula. 4) Safranina Células no decoloradas; quedan teñidas de color violeta. Células decoloradas; se tiñen de color rosado.
- 3. FACULTAD DE INGENIERÍA MARÍTIMA Y CIENCIAS DEL MAR FICHA DE LA PRÁCTICA PARA LABORATORIO POFCM0102-1 Hoja 3 de 5 EQUIPOS Y MATERIALES: Aza de platino Violeta de genciana Lugol Sulfadiacina Alcohol 95° Mechero Portaobjeto Microscopio Agua destilada Agar con bacteria PROCEDIMIENTO: Extensión: En un porta bien limpio (con alcohol, papel de filtro y flameado) se coloca una gota de agua destiladaala que con el asa de platino,previamenteesterilizada a la llama, se lleva una pequeña cantidad de suspensión de bacterias o, en su caso, de una colonia. Con el asa se extiende la gota y las bacterias sobre el porta-objeto y se fija la extensión por el calor, calentando suavemente a la llama del mechero hasta que se seque. Coloración: a) 1 minuto en violeta de genciana, b) se lava con agua destilada, c) 1 minuto en lugol, d) se decolora con alcohol de 95°, e) se lava con agua destilada, f) 1 minuto en sulfadiacina, g) se lava con agua corriente, h) se seca suavemente, Observar en el microscopio. RESULTADOS: (Puede incluir información, características)
- 4. FACULTAD DE INGENIERÍA MARÍTIMA Y CIENCIAS DEL MAR FICHA DE LA PRÁCTICA PARA LABORATORIO POFCM0102-1 Hoja 4 de 5 Fig1.- Procedimiento de la tinción de gram Fig2.- tinción de cajas Petri 10°, 101 , 102 , 103 respectivamente
- 5. FACULTAD DE INGENIERÍA MARÍTIMA Y CIENCIAS DEL MAR FICHA DE LA PRÁCTICA PARA LABORATORIO POFCM0102-1 Hoja 5 de 5 Fig3.- Portaobjetos antes y después de tinción Observaciones: Recordar que por cada reactivo que se le adicione a las muestras dejar 1 minuto cada uno. Tener todo esterilizado y cuando se coge la muestra de bacterias, coger la que este más aislada y en una proporción pequeña. Conclusión: Las bacterias gram + se tiñen de color violeta, su pared tiene una capa densa y uniforme. Las bacterias gram – se tiñen de color rosado, su pared tiene una capa interna delgada. Las bacterias que se encontraron tienen forma bacilar y coco. Debidoa ladiferenciaentre lasplacas se puede decir que las muestras tomadas estaban contaminadas ya que debió teñirse todas las placas del mismo color. Bibliografía S., S. G. (2015). http://es.scribd.com. Obtenido de http://es.scribd.com: http://es.scribd.com/doc/51627228/PRACTICA-3-La-Coloracion-de-Gram#scribd