Lab micro 4
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Este documento describe los procedimientos para realizar diluciones seriadas de muestras de moluscos para identificar la presencia de bacterias como Pseudomonas. Se extrajo 1 gramo de concha de molusco, se trituró y se mezcló con agua destilada para crear una muestra madre que se diluyó en tres tubos de ensayo. Las diluciones se sembraron en placas de agar y luego de incubar durante 24 horas no se encontró presencia de Pseudomonas, indicando que las conchas estaban aptas para el consumo humano
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- 1. FACULTAD DE INGENIERÍA MARÍTIMA Y CIENCIAS DEL MAR FICHA DE LA PRÁCTICA PARA LABORATORIO POFCM0102-1 Hoja 1 de 6 CÓDIGO MATERIA Microbiología FMAR03749 NOMBRE David Quiñonez Acosta PARALELO 1 TEMA DE LA PRÁCTICA Diluciones seriadas en moluscos. OBJETIVOS GENERALES: Practicar el método de diluciones seriada aprendido en la práctica anterior. Identificaciónde lasbacterias específicamente pseudomonas, presentesen la concha comprada en un mercado. INTRODUCCIÓN: Anadara Tuberculosa: Conchas grandes, equivalva, de forma oblicuamente ovaladas, relativamente gruesas.El margen dorsal es angulado. Tienen valvas que muestran entre 33 a 37 costillas. Cara interna es de color blancocon tonorosado,cubiertopor unperiostraco piloso que va desde café oscuro hasta negro. (Kiara Matias, 2015) Hábitat: Viven en sustratos suaves y fangosos, arcillosos o limo-arcillosos y asociados a las raíces del mangle. Enterrados en el fango entre las raíces de mangle a profundidades de 10 a 30 cm. Alimentación: Por medio de la filtración de materia orgánica. Ciclo de vida: La madurez sexual se alcanza en individuos entre 23.2 y 26.2 mm longitud total. Reproducción:habitosedentario,tasade crecimientolento, fecundación externa con larva planctónica de vida corta, que luego se fija a un sustrato o conchas adultas y desoves durante todo el año. La alta concentración de salinidad favorece el proceso de reproducción. Son organismos dioicos. Fig1. - Anadara tuberculosa
- 2. FACULTAD DE INGENIERÍA MARÍTIMA Y CIENCIAS DEL MAR FICHA DE LA PRÁCTICA PARA LABORATORIO POFCM0102-1 Hoja 2 de 6 Diluciones seriadas: Técnica que consiste en obtener una suspensión de la mezcla de microorganismos y hacer diluciones seriadas que se vierten en una placa Petri hasta conseguir colonias aisladas. (Valera, 2015) Ci = N x D x 10 Ci = Concentración inicial (unidades: número de células / ml) N = nº de colonias D = dilución Pseudomonas: Pseudomonasesungénerode bacilosrectosoligeramente curvados,móvilesgracias a los flagelos polares que poseen, oxidasa positiva, aeróbios estrictos. Algunas especies sintetizan una capa polisacárida que facilita la adhesión celular y la formación de biopelículas aumentando así su patogenicidad. No forman esporas. (Q, 2015) Las especies más importantes son: - Pseudomonas aeruginosa - Pseudomonas fluorescens - Pseudomonas stutzeri - Pseudomonas putida Fig2.- Ilustracióndel método de dilucionesseriadasque usaremosenlapráctica.
- 3. FACULTAD DE INGENIERÍA MARÍTIMA Y CIENCIAS DEL MAR FICHA DE LA PRÁCTICA PARA LABORATORIO POFCM0102-1 Hoja 3 de 6 EQUIPOS Y MATERIALES: 3 tubos de ensayo. 3 Placas Petri. Balanza Gradilla Muestra conchas Agua destilada. Mechero de alcohol. Micropipeta. Puntas. Agar Cetrimide Bastón de vidrio. Fiola. Papel Toalla. Alcohol. Mortero. Bisturí PROCEDIMIENTO: Preparación de la muestra madre 1.- Limpiar el área de trabajo, con un papel toalla húmeda con alcohol. 2.- Pesar 14g de sal, agregarla y disolverla en el envase que contiene 90ml de agua destilada, la cual será nuestro medio de cultivo. 3.-Proceder a cortar la concha y pesar 1g. 4.- Triturarla en un mortero, es recomendable echarle el jugo que tiene la concha. 5.-Con la pipeta agregar 10ml de agua destilada en el mortero que contiene la concha triturada, mezclar bien. 6.-Ubicar esos 10ml de agua con concha en el envase que contiene los 90ml de agua con sal. Diluciones seriadas 1.-El envase que contiene los 90ml de agua con sal y el agua con concha, es la muestra madre. 2.-Tenemos 3 tubos de ensayos cada uno con 9ml de agua destilada. 3.-Ubicar 1ml de muestra madre con la pipeta en el primer tubo de ensayo tubo de ensayo (10º), homogenizarlo. 4.-Del primertubode ensayo(10º),coger con la micropipeta1ml de muestrayubicarloen el segundo tubo de ensayo (10-1 ), homogenizarlo. 5.-Del segundotubode ensayo(10-1 ),cogercon la micropipeta1ml de muestra y ubicarlo en el tercer tubo de ensayo (10-2 ). Siembra de los tubos que contienen las diluciones 1.-Se tiene preparadoel agarCetrimide,estese encontrósolidificado,porloque es necesario procederlo a calentar para se derrita. 2.-Ubicar cierta cantidad de agar Cetrimide en 3 cajas Petri, recordar que esto se debe hacerlo de forma rápida y cerca del mechero esterilizado. 3.-Esperar alrededor de 5 minutos hasta que se solidifique.
- 4. FACULTAD DE INGENIERÍA MARÍTIMA Y CIENCIAS DEL MAR FICHA DE LA PRÁCTICA PARA LABORATORIO POFCM0102-1 Hoja 4 de 6 4.-Procedemos a rotular nuestra placa, siempre hacerlo en la parte inferior de la misma, (10-1 , 10-2 , 10-3 ) 5.-Ubicar unas gotas de la muestra de agua que se encuentran en los tubos diluidos. 6.-Con el bastón de vidrio esparcir la muestra homogéneamente 7.-Y por último ubicar la placa dentro de la incubadora de manera invertida. 8.-Ir a ver el resultado de crecimiento luego de dos días. Cálculo de las diluciones 1M ∗ ml 1ml + 9ml = 1M ∗ ml 10ml = 0.1 M 0.1M ∗ ml 1ml + 9ml = 0.1M ∗ ml 10ml = 0.01 M RESULTADOS: Al ir a revisar las muestras, luego de 24h de hacer la siembra no se encontró presencias de pseudomonas por lo que se puede decir que las conchas están en buen estado y apto para consumo humano. Observaciones: Obsérvese que la1eradilución que se hace ya no es la muestra madre, porque solo se extrajo 1gr de toda la concha,así que ya estáenmenorconcentraciónenpresenciade bacteriasporloque se tendrá que hacer una regla de tres para tener el valor real de presencia de pseudomonas en este caso. Al momento de macerar el 1gr de concha triturarla bien para que no se tapone la pipeta. Conclusión: Se puede hacerdiluciones seriadas de cualquier organismo con una pequeña muestra macerándola hasta que quede bien fina e incorporarla a los tubos por medio de la pipeta. Las pseudomonas son bacilos rectos o curvados que no forman esporas y son gram negativos. Anexo:
- 5. FACULTAD DE INGENIERÍA MARÍTIMA Y CIENCIAS DEL MAR FICHA DE LA PRÁCTICA PARA LABORATORIO POFCM0102-1 Hoja 5 de 6 Fig3.- Extracción de 1gr de muestra Fig4.- Dilución de la muestra y preparación del medio de cultivo
- 6. FACULTAD DE INGENIERÍA MARÍTIMA Y CIENCIAS DEL MAR FICHA DE LA PRÁCTICA PARA LABORATORIO POFCM0102-1 Hoja 6 de 6 Fig5.- Resultados sin presencia de pseudomonas