Pentox experimental

223
Original
Estudioexperimentalsobrelainfluenciainmunomoduladora
delapentoxifilinaenlatranslocaciónbacterianaproducida
porlanutriciónparenteralsinlípidos
M. J. García Coret**, F. Villalba Ferrer**, A. Vázquez Prado**, C. Fuster Diana**,
M. Ramos de Campos*, E. de la Morena Valenzuela*** y R. Trullenque Peris****
Servicio de Cirugía del Hospital Marina Alta de Denia y del Hospital General y Universitario de Valencia.
* MIR de Urología. ** Médico Adjunto de Cirugía. *** Jefe de Servicio del Hospital Marina Alta de Denia.
**** Jefe de Servicio del Hospital General y Universitario de Valencia.
Nutr. Hosp. (2002) XVII (5) 223-230
ISSN 0212-1611 • CODEN NUHOEQ
S.V.R. 318
Correspondencia: María José García Coret.
Mirasol, 10, pta. 4
46015 Valencia.
Tel.: 96 346 09 67
Recibido: 3-XII-2001.
Aceptado: 15-II-2002.
Resumen
Introducción: La translocación bacteriana (TB) pro-
voca sepsis de origen intestinal y a pesar de los avances
actuales existe una elevada morbimortalidad por sepsis
por esta causa. Hemos querido investigar si una sustan-
cia inmunomoduladora como es la pentoxifilina (PX),
podía disminuir o inhibir la TB. Hemos elegido la PX
por tener acciones inmunomoduladoras y por inhibir la
síntesis y la actuación del TNF-α, que parece tener rela-
ción con el avance hasta el fallo multiorgánico en estos
cuadros.
Material y método: Se realiza un estudio experimental
con 4 grupos de 20 ratas Wistar a las que se les ha some-
tido a una nutrición parenteral sin lípidos (NP) durante
7 días. Al grupo A: NP; grupo B: NP + 50 mg/kg de PX;
grupo C: NP + 100 mg/kg y grupo D: NP + 134 m/kg. Al
7.º día se extrae de forma estéril la cadena ganglionar
mesentérica, hígado, sangre e intestino, estas muestras
se procesan para realizar el estudio microbiológico
cuantitativo y cualitativo, estudio histológico de la mu-
cosa intestinal y cuantificación del TNF-α. A los datos
obtenidos se les aplica un estudio estadístico.
Resultados: En el estudio microbiológico cuantitativo
se observó que en el ganglio linfático, hígado y sangre
crecieron más colonias en los animales que pertenecían
al grupo A con diferencias estadísticamente significati-
vas. El germen que con más frecuencia se identificó fue
E. coli. En el estudio del TNF-α, el mayor valor medio lo
obtuvo el grupo A, con diferencias estadísticamente sig-
EXPERIMENTAL STUDY ON THE IMMUNE
MODULATION INFLUENCE OF
PENTOXIPHYLLINE ON BACTERIAL
TRANSLOCATION PRODUCED BY LIPID-FREE
PARENTERAL NUTRITION
Abstract
Introduction: Bacterial translocation (BT) leads to
sepsis of intestinal origin and, despite current advances,
there is a high level of mortality and morbidity as a re-
sult of this. We have attempted to investigate whether
such an immunity modulating substance as Pentoxiphy-
lline (PX) might diminish or inhibit BT. We have chosen
PX because it has immunity modulation actions and in-
hibits the synthesis and action of TNF-α, which seems to
be linked to the progress of these conditions towards
multiple organ failures.
Material and method: An experimental study was
performed with 4 groups of 20 Wistar rats subjected to
lipid-free parenteral nutrition (PN) over 7 days. Group
A: PN; group B: PN + 50 mg/kg of PX; group C: PN +
100 mg/kg; and group D: PN + 134 mg/kg. On day 7, a
sterile extraction was effected to remove the mesenteric
ganglial chain, liver, blood and intestine, and these
samples were processed for the quantitative and quali-
tative microbiological study, the histological study of
the intestinal mucosa and the quantification of TNF-α.
The data obtained were subsequently analyzed
statistically.
Results: The quantitative microbiological study revea-
led that, with statistically significant differences, more
colonies grew in the lymphatic ganglion, liver and blood
of animals belonging to group A. The germ most fre-
quently identified was E. Coli. In the study of TNF-α, the
greatest value corresponded to group A, again with
statistically significant differences. In the histological
study, it was observed that group A showed the greatest
atrophy.

224 M. J. García Coret y cols.Nutr. Hosp. (2002) 17 (5) 223-230
Introducción
En la clínica diaria se encuentran situaciones que
con frecuencia pueden desencadenar la translocación
bacteriana (TB). La TB, una vez se inicia, se vuelve
evolutivamente compleja y su desenlace final puede
ser el fallo multiorgánico1
. Con la teoría de la TB se
explica el origen de la sepsis en el 30% de pacientes
con bacteriemia y fallo multiorgánico que fallecen
con sepsis clínica sin poder encontrar el origen2
. El re-
servorio de gérmenes, en esta teoría, sería el propio
intestino del paciente, donde los gérmenes, tras atra-
vesar la barrera intestinal, se harían sistémicos2
. En el
57% de pacientes politraumatizados se ha visto como
son gérmenes intestinales los que producen las bacte-
riemias3
. Pape comprobó como en pacientes politrau-
matizados el fallo multiorgánico se encuentra asocia-
do a un aumento de la permeabilidad intestinal,
circunstancia que favorece la TB4
.
El concepto de TB fue nombrado por Fine en
19465
, pero cayó en desuso y quedó en el olvido du-
rante más de 30 años. Fueron Berg y Garlington quie-
nes en 1979 definieron la TB como ”el paso de bacte-
rias viables a través de la mucosa intestinal a los
ganglios mesentéricos y desde allí a otros órganos in-
ternos”6
. Este concepto se ha mantenido sin modificar
durante muchos años, hasta que Saadia7
, en una exce-
lente revisión del tema, matiza este término haciendo
hincapié en dos puntos para que se pueda tratar real-
mente de una TB: 1) la barrera gastrointestinal debe
de encontrarse íntegra, 2) la diseminación puede ser
sistémica desde el principio o ir a los ganglios mesen-
téricos y desde allí alcanzar el resto del organismo.
El porcentaje de TB, según Deitch8
, aumenta si se
produce alteración de la flora intestinal, pérdida de la
función de barrera del tracto gastrointestinal o com-
promiso de las defensas inmunológicas del huésped.
Cuando administramos una nutrición parenteral se
provoca un sobrecrecimiento bacteriano a expensas
de gérmenes gramnegativos9
, se producen cambios
morfológicos en el epitelio de la mucosa intestinal
que hace que se altere su permeabilidad y disminuye
la IgA secretora10, 11
. Se ha demostrado que si además
de administrar una nutrición parenteral ésta es sin lípi-
dos, se aumenta más el daño de la mucosa intestinal,
ya que al no disponer de lípidos no se regenera esta
mucosa dañada12
.
Las bacterias translocadas son fundamentalmente
bacilos entéricos gramnegativos facultativos13, 14
, y se-
gún los estudios de Lozano es exclusivo de bacterias
aerobias1
.
Los mecanismos íntimos por los cuales se produce
la TB aún no están claros. Hay varias teorías, la más
aceptada es la teoría “del macrófago”, donde los fago-
citos intestinales ingerirían y transportarían en su inte-
rior a las bacterias intestinales desde la luz digestiva
hacia lugares extraintestinales, por ello al usar sustan-
cias inmunomoduladoras se disminuiría la TB7
.
Con todas las técnicas de resucitación hemodinámi-
ca, descontaminación selectiva del tracto gastrointes-
tinal o el uso de fórmulas de nutrición enteral durante
el período postraumático inmediato, no se ha conse-
guido frenar el fracaso en el control del reservorio in-
testinal de gérmenes, existiendo aún hoy, a pesar de la
amplia gama de antibióticos y quimioterápicos, una
elevada morbimortalidad por sepsis y fallo multiorgá-
nico. Por ello hemos querido investigar si una sustan-
cia inmunomoduladora como es la pentoxifilina podía
disminuir o inhibir la TB o evitar el desenlace final
del fallo multiorgánico.
Hemos elegido la pentoxifilina por tener acciones in-
munomoduladoras y por inhibir la síntesis del TNF-α15-17
que parece tener relación con el avance hasta el fallo
multiorgánico en estos cuadros. Esta sustancia también
produce una inhibición del efecto del TNF-α al dismi-
nuir la expresión de los receptores ICAM-118
.
Material y método
Para valorar la influencia de la pentoxifilina en la
translocación bacteriana hemos diseñado un estudio
experimental con 80 ratas albina macho raza Wistar,
nificativas. En el estudio histológico se observó que el
grupo con más atrofia era el grupo A.
Conclusiones: Nuestro modelo experimental es válido
como modelo de TB, en el grupo A sin PX se produjeron
16 TB y en los grupos con PX se disminuye el número de
TB y las cifras de TNF-α en suero.
(Nutr Hosp 2002, 17:223-230)
Palabras clave: Fallo multiorgánico. Nutrición parente-
ral sin lípidos. Pentoxifilina. Translocación bacteriana.
Conclusions: Our experimental model is valid as a
model of BT, in group A, without PX, a total of 16 BT
occurred while in the groups with PX the number of BT
fell, as did the serum figures for TNF-α.
(Nutr Hosp 2002, 17:223-230)
Keywords: Bacterial translocation. Multiple organ failu-
re. Parenteral nutrition without lipid. Pentoxiphylline.
Tabla I
Nutrición parenteral administrada a cada grupo
Grupo NP
A........................................ Sin pentoxifilina
B ........................................ 50 mg/kg de Px
C ........................................ 100 mg/kg de Px
D........................................ 134 mg/kg de Px
NP: nutrición parenteral; PX: pentoxifilina.

entre 250 y 300 g de peso, que corresponde a una
edad de tres meses.
Se divide en cuatro grupos de 20 ratas y se les
administra una nutrición parenteral isocalórica e
isonitrogenada pero con suplementos de pentoxifilina
a distintas dosis, según al grupo que pertenezcan
(tabla I). La distribución de las tareas en los 7 días de
la experiencia se puede apreciar en la tabla II.
El día previo a la intervención se prepara la nutrición
parenteral que se administrará en perfusión continua a
partir del día de la intervención. El día de la intervención
(día 0), tras la anestesia intraperitoneal de la rata con una
mezcla de ketamina (Ketola®
) a dosis de 75 mg/kg, ace-
promacina (Calmoneosan®
) a 2,5 mg/kg y atropina a
0,05 mg/kg, se canaliza la vena yugular izquierda para la
infusión de nutriciones. Se canaliza con un catéter de si-
licona de 0,635 mm y 1,10 mm de diámetro interno y ex-
terno respectivamente (Silastic 602-155, Dow Corning®
,
Midland MI, EE.UU.). Tras la canalización se extrae el
catéter por la zona interescapular y se le coloca al animal
una chaqueta protectora de la talla 250-300 g (Alice
King Chatham, Medical Arts®
) y se introduce por el inte-
rior del aparato giratorio (APG) modelo canal simple pa-
ra fluidos, con muelle protector (Alice King Chatham,
Medical Arts®
, Los Ángeles Ca, EE.UU.) que se fija en
la parte dorsal de la chaqueta mediante un tejido adhe-
rente fijando los extremos con ligaduras de seda (fig. 1).
Con la chaqueta protectora se impide que el animal pue-
da acceder al sistema sin limitarle los movimientos. In-
troducimos al animal en una jaula metabólica e inmovili-
zamos el extremo superior de la cabeza del APG con la
nuez de la estantería donde están situadas las jaulas. La
parte fija del APG se conecta a la sonda nasogástrica pe-
diátrica que proviene de la jeringa de 50 ml con la nutri-
ción colocada en la bomba de perfusión (Harvard Appa-
ratus®
modelo 2256) (fig. 1).
Estudio experimental sobre la influencia
inmunomoduladora de la pentoxifilina en
la translocación bacteriana...
225Nutr. Hosp. (2002) 17 (5) 223-230
Tabla II
Distribución diaria de las tareas
Preparación Control diario BN
de la NP Administración NP
⇓
-1 0 1 2 3 4 5 6 7
⇑ ⇑
Intervención Reintervención
Anestesia Anestesia
Pesaje Pesaje
Canalización yugular Extracción de ganglio
Administración NP mesentérico, hígado, sangre
Pesaje de todos los órganos
Extracción de intestino
Estudio microbiológico
BN: balance nitrogenado; NP: nutrición parenteral.
Chaqueta Boton cónico
Catéter
Muelle protector
Nutrición Sonda
Cabeza del APG
Fig. 1.—Conexión del sistema de nutrición en el animal de experimentación.

Diariamente medimos ingestas y excretas para rea-
lizar el cálculo del balance nitrogenado para controlar
que no se produzca un catabolismo exagerado en
nuestros animales.
El día 7 realizamos de nuevo una anestesia intrape-
ritoneal, pesamos al animal y tras realizarle una lapa-
rotomía estéril extraemos la cadena ganglionar me-
sentérica, un fragmento de hígado, un fragmento de
intestino y sangre por punción directa de la cava infe-
rior. En último lugar, para evitar contaminaciones, ex-
traemos material fecaloideo del ciego para el estudio
microbiológico. Se realiza el procesamiento de mues-
tras para el estudio microbiológico cuantitativo y cua-
litativo y el estudio histológico de la mucosa ileal.
Estudio microbiológico cuantitativo
Las muestras obtenidas (ganglio linfático, hígado,
sangre e intestino) se homogenizan con el hemogenei-
zador de tejidos Ultra-Trurrax T-25 Jauke & Kunkel
Ikalertechnick de 5 velocidades. El material obtenido
se mezcla con la solución buffer del Millipore®
y en
ella se surge la parte de la rejilla del Millipore®
duran-
te 2 minutos. Tras este tiempo se escurre el material
sobrante y se reintroduce la rejilla en su funda protec-
tora y se incuba durante 72 h a 30 ˚C. Una vez ha pa-
sado este tiempo se cuenta el número de colonias que
ha crecido con ayuda de un microscopio.
Estudio microbiológico cualitativo
El aislamiento de cepas se realizó por la siembra de
las diferentes colonias que crecieron en el millipore®
en placas agar chocolate isovitalex, para conseguir
suficiente masa para poder realizar la identificación.
Estas placas se incuban 24 h a 37 ˚C. Se prepara un
inóculo de las cepas que han crecido y se realiza una
lectura automática con el auto-scan DADE para iden-
tificar los microorganismos.
Estudio del factor de necrosis tumoral
El estudio del TNF-α se realiza a partir de la sangre
extraída a los animales el día 7 por punción directa de
la cava inferior. Esta sangre se centrifuga y al suero
obtenido se le aplica el test de enzimoinmunoanálisis
(EIA) para ratas: RAT-TNF-α-inmunoensayo Kit
Biosurce. Y la lectura se realiza de forma automática
con un lector de absorbancia.
Estudio histológico
Para el estudio de los parámetros mucosos usamos
el íleon terminal que se abre longitudinalmente, se co-
loca de forma extendida sobre un corcho y se guarda
en frascos con formol. Los fragmentos se someten a
un proceso de inclusión de la pieza y se realizan cor-
tes de 2 a 5 mieras que se montan en portaobjetos y se
tiñen con la técnica estándar de hematoxilina-eosina.
Se valora la morfología de la mucosa, la relación
vellosidad-cripta, el tamaño de las células y el número
de mitosis en 5 criptas, con todos estos datos se les da
una puntuación y se clasifica el grado de atrofia de la
mucosa en ligera (puntuación de 4-7), moderada (pun-
tuación de 8-11) o severa (puntuación mayor de 11).
Estudio estadístico
Se realiza un análisis descriptivo de cada caso y se
aplica un análisis estadístico univariante para las va-
riables cuantitativas y un cálculo de proporciones en
las variables cualitativas.
Para comparar los resultados obtenidos en los dife-
rentes grupos y evaluar el efecto de la pentoxifilina se
le aplica el test no paramétrico de Kruskal-Wallis y
para poder comparar los grupos 2 a 2 el test no para-
métrico de U-Mann-Whitney.
El nivel de significación estadística se ha fijado en
p < 0,05.
Resultados
Se intervinieron un total de 94 ratas Wistar para
completar los 4 grupos de 20 ratas. La mortalidad fue
de un 9,4% (10 ratas) y 4 ratas (3,76%) fueron exclui-
das de la experiencia por salida del catéter o trombo-
sis del mismo.
Todos los animales presentaron una ganancia de
peso y un balance nitrogenado positivo, pero sin dife-
rencias significativas entre los grupos.
Estudio microbiológico cuantitativo
En el ganglio linfático crecieron más colonias en
los animales que pertenecían al grupo A (media:
27.000), seguido de los grupos B (media: 10.650), D
(media: 9.100) y en el grupo que crecieron menos co-
lonias fue el C (media 6.550). Cuando aplicamos el
test de Kruskal-Wallis observamos que existen dife-
rencias estadísticamente significativas entre los gru-
pos (p = 0,0003) (tabla III). Si comparamos los grupos
dos a dos observamos que estas diferencias están en-
tre el grupo A-B, A-C y A-D.
En el hígado crecieron más colonias en el grupo A
(media: 21.300), seguido del grupo B (media: 11.100)
y del C y D (media 2.200). Al aplicar el test de Krus-
kal-Wallis sí se observan diferencias estadísticamente
significativas (p = 0,0046) y al comparar los grupos
dos a dos se ven estas diferencias entre el grupo A-C y
A-D (tabla III).
En el cultivo de la sangre se observa un mayor cre-
cimiento de colonias en el grupo A (media: 19.900),
seguido del B y C (media: 4.250 y 4.600 respectiva-
mente) y el grupo con menor crecimiento fue el D
(media: 2.350). Cuando comparamos todos los grupos
se observa significancia estadística (p = 0,0197), y al
comparar los grupos dos a dos estas diferencias están
entre el grupo A-B, A-C y A-D (tabla III).

Estudio microbiológico cualitativo
En el grupo A se produjeron 16 TB. El germen que
con más frecuencia se identificó fue E. coli, detectándo-
se en 12 ocasiones en el ganglio, 7 en el hígado y 5 en
sangre. Le sigue en frecuencia Proteus que se aisló 6 ve-
ces en el ganglio, 1 en el hígado y 1 en sangre (tabla IV).
En el grupo B se produjo una TB en 8 casos. En 5 oca-
siones se detectó E. coli en el ganglio, 3 veces en el hígado
y 1 en sangre. Proteus se aisló 2 veces en el ganglio y una
vez en sangre y en el hígado. También se aisló en una oca-
sión Enterobacter cloacae y en otra S. aureus (tabla IV).
En el grupo C se encontraron 5 TB. Se aisló E. coli
en 3 ocasiones en el ganglio y 1 en sangre. Proteus se
aisló en tres ocasiones en el ganglio, en 1 en el hígado
y 1 en sangre (tabla V).
En el grupo D se produjeron 7 TB. Se aisló E. coli 5
veces en el ganglio, 1 en el hígado y otra en sangre.
Proteus 2 veces en el ganglio y 1 en el hígado. Y un S.
aureus y un Enterobacter cloacae en el ganglio linfá-
tico (tabla V).
Se anularon, por considerarse contaminación al cre-
cer Saphylococcus sp., en una muestra del grupo A,
una del C y otra del grupo D.
La detección e identificación de los gérmenes que
están presentes en el intestino nos permite saber qué
gérmenes pueden dar la TB, ya que son los gérmenes
intestinales las que la provocan. Hemos detectado una
flora constante en el ciego de nuestros animales de
gérmenes gramnegativos y grampositivos (tabla VI).
El factor de necrosis tumoral
El mayor valor medio del TNF-α en suero lo obtu-
vo el grupo A (media: 9,34), seguido del resto de gru-
pos con valores similares (grupo B: 3,83; grupo C:
3.540 y grupo D: 3.835). Al aplicar el test de Kruskal-
Wallis obtenemos que existen diferencias estadística-
mente significativas entre los grupos (p = 0,0004) y al
analizar los grupos dos a dos estas diferencias se en-
cuentran entre el grupo A y el resto de grupos.
Estudio histológico
Al valorar la atrofia de la mucosa se encontró una
mucosa normal en el 40% de animales del grupo A,
75% del grupo B, 65% del grupo C y 60% del grupo
D. Una atrofia ligera en el 50% del grupo A, 25% del
grupo B, 35% del C y 40% del grupo D. Sólo se en-
contró atrofia moderada en el 10% de animales que
componían el grupo A.
Discusión
Nuestro modelo experimental de TB se basa en la nu-
trición parenteral sin lípidos. Una nutrición parenteral
227Nutr. Hosp. (2002) 17 (5) 223-230
Tabla III
Media de las colonias en los distintos órganos estudiados
Grupo A B C D
Colonias
en ganglio 27.000 10.650 6.550 9.100 P = 0,0003
Colonias
en hígado 21.300 11.100 2.200 2.150 P = 0,0046
Colonias
en sangre 19.900 4.250 4.600 4.350 P = 0,0197
Tabla IV
Estudio microbiológico cualitativo en grupos A y B
(en cada grupo se enumeran las 20 ratas que lo forman)
Gérmenes traslocados
Ganglio Hígado Sangre
Grupo A
1 E. coli – –
2 E. coli, Proteus – E. coli
3 E. coli E. coli E. coli
4 S. aureus, E. coli – –
5 E. coli, Proteus – –
6 Proteus – Proteus
7 – – –
8 Proteus – –
10 E. coli E. coli –
11 E. coli – –
12 E. coli, Proteus E. coli, Proteus –
14 S. aureus S. aureus S. aureus
15 Saphylococcus – –
16 – – –
18 Proteus – –
20 – – –
Grupo B
1 – – –
2 – – –
3 Proteus Proteus Proteus
4 E. coli – –
5 – – –
6 E. coli, S. aureus S. aureus –
7 – – –
9 – – –
10 Enterobacter – –
12 – – –
14 Proteus – –
15 – – –
16 – – –
17 – – –
18 – – –
19 – – –
20 – – –

total ya ha sido modelo para el estudio de TB por parte
de bastantes autores3, 9, 14, 19-21
. A pesar de que hay trabajos
que correlacionan la atrofia intestinal que se produce
por la nutrición parenteral total con la TB3, 9, 14, 20
, Illing
defiende que aunque la nutrición parenteral total produ-
ce atrofia y aumento de la permeabilidad de moléculas,
esto no guarda relación con que se produzca una mayor
TB21
. Pensamos que la nutrición parenteral total va a fa-
vorecer la TB al producir los siguientes efectos:
— Alterar el equilibrio de la flora normal del trac-
to gastrointestinal y producir un sobrecrecimiento
bacteriano a expensas de gérmenes gramnegativos9, 22
.
— Disminuir el moco facilitando la adhesión de
las bacterias al epitelio y alterando la permeabilidad
intestinal11
.
— Produciendo una deprivación de la IgAs intra-
luminal, parece que esta Ig actúe uniéndose a las bac-
terias y bloqueando su fijación a las células epiteliales
evitando así la invasión10, 23, 24
.
— Provoca trastornos morfológicos en el epitelio
de la mucosa intestinal9
.
Al retirar los lípidos de la nutrición parenteral total
favorecemos aún más la TB, ya que los lípidos son pro-
tectores de la mucosa intestinal al estimular la regene-
ración de la mucosa dañada12
y además actúan sobre el
sistema inmune25
. Este efecto de protección fue proba-
do por Alverdy9
quien observó que se producía una ma-
yor TB en animales a los que les daba una nutrición pa-
renteral sin lípidos durante 2 semanas. Illing aunque
observa una mayor TB en el grupo sin lípidos no en-
cuentra diferencias estadísticamente significativas21
.
El tiempo al que tiene que estar sometido el animal
al estímulo de la nutrición parenteral varía en los dis-
tintos estudios entre 2 semanas9
a 3 días12
, siendo el
más utilizado el de 7 días20, 26-28
. Hemos utilizado los 7
días por el ser más usado y porque previamente en
nuestro grupo de investigación vimos como al 5º día
de administrar dietas de bajo residuo ya se observan
diferencias en los parámetros presivos del colon y en
la histología y el 7º día era donde mayores diferencias
se observan29
.
Hemos demostrado la validez de nuestro diseño ex-
perimental como modelo de TB, puesto que en el gru-
po control se produce un 80% de TB en los animales
que lo componen.
Con el control del balance nitrogenado y el aumen-
to de peso de los animales hemos visto que se han cu-
bierto ampliamente las necesidades calórico-proteicas
de los animales evitando así que la desnutrición o el
catabolismo importante contribuyeran a aumentar la
TB como se ha evidenciado en estudios.
Tabla V
Estudio microbiológico cualitativo en grupos C y D
(en cada grupo se enumeran las 20 ratas que lo forman)
Gérmenes traslocados
Ganglio Hígado Sangre
Grupo C
1 – – –
2 Proteus – –
3 E. coli – E. coli
4 – – –
5 – – –
6 – – –
7 – – –
9 – – –
10 – – –
11 Proteus – –
12 – – –
13 – – –
14 E. coli – –
15 – Proteus Proteus
16 – – –
17 – – –
19 – – –
20 – – –
Grupo D
1 – – –
2 – – –
3 S. aureus – –
4 E. coli – –
5 – – –
6 – – –
7 E. coli – E. coli
8 – – –
9 – – –
11 – – –
12 – – –
13 E. coli, Proteus E. coli, Proteus –
14 – – –
15 – – –
16 E. coli – –
18 – – –
19 – – –
20 Enterobacter – –
Tabla VI
Flora cecal detectada en nuestros animales
Gramnegativos
Escherichia coli
Acinetobacter sp.
Enterobacter cloacae
Pseudomona sp.
Proteus
Grampositivos
Staphylococcus aureus y sp.
Micrococcus sp.
Enterococcus faecalis, gallinarum y faecium
Streptococcus bovis
Gemella morbillorum

229Nutr. Hosp. (2002) 17 (5) 223-230
Para el estudio de TB hemos considerado que los
cultivos eran positivos si crecían 2 de 100 UFC/g de
tejido9, 14, 28
.
El estudio microbiológico cuantitativo lo hemos
llevado a cabo con el Millipore que es un sistema de
cultivo fácil de manejar del que sólo hemos encontra-
do una mención en la literatura30
. Respecto a los gér-
menes que se translocan, en la literatura revisada dan
importancia a que la TB es casi exclusiva de bacterias
aerobias1, 14, 31, 32
. Las bacterias translocadas dependen
del diseño experimental, ya que en los diseños, como
el nuestro, que se produce un sobrecrecimiento de
gramnegativas éstas son las que se translocan, pero si
el sobrecrecimiento intestinal es de grampositivas son
éstas las translocadas. En nuestro diseño, al utilizar
nutrición parenteral total y dejar en reposo al aparato
digestivo, se produce un sobrecrecimiento de gram-
negativos por ello el germen que más se transloca es
E. coli.
La determinación de la TB sobre el ganglio linfáti-
co es algo que estudian todos los autores que han rea-
lizado trabajos experimentales sobre este tema, ya que
es el tejido donde se aíslan más colonias en los anima-
les con TB14, 20, 28, 33, 34
. La positividad del ganglio linfáti-
co encontrada en la literatura varía desde el 95%14
al
40%21, 32
. Nosotros en los 37 animales con TB en 36 se
detectaron gérmenes en el ganglio, esto representa
una positividad del 97,29%. Por ello pensamos, al
igual que otros autores14, 20, 28, 33, 34
, que el estudio del
ganglio linfático para la TB es lo más importante y
hace innecesario el estudiar otros órganos. Los gér-
menes que se translocan al ganglio son los mismos,
aunque en menor medida, que pasan al hígado y en
mucha menor cuantía a la sangre. Parece que de algu-
na forma, bien sea por la barrera que supone el hígado
o por la mayor o menor gravedad de la agresión no
siempre se hace sistémico el germen translocado que
alcanza el ganglio linfático8, 19
.
En nuestro diseño se aprecia una mayor transloca-
ción en los animales del grupo A, sin pentoxifilina,
siendo mucho menor en los grupos a los que se les su-
plementa la nutrición parenteral sin lípidos con pento-
xifilina.
La bacteria que más se translocó en nuestro estudio
fue E. coli, según la literatura es la bacteria que más
se detecta en los estudios de TB9, 13
.
El TNF-α se produce con una finalidad beneficiosa
ante el shock séptico para intentar luchar contra la in-
fección, ante un estímulo inflamatorio agudo se libe-
ran las citocinas proinflamatorias que son necesarias
para iniciar y coordinar la respuesta inflamatoria pre-
coz, en esta fase inicial también actúan inhibidores de
las citocinas y mediadores inflamatorios que contro-
lan esta respuesta inicial, si hay una falta de equilibrio
entre estas respuestas dará como resultado consecuen-
cias patológicas. Así el TNF-α que en un principio es
beneficioso tiene efectos sistémicos adversos para el
organismo35
, por ello hay que recuperar la homeosta-
sis perdida actuando de cuatro formas:
1. Evitando la estimulación de macrófagos para
que no produzcan TNF-α.
2. Bloqueando la síntesis del ARNm que es el
responsable de la transcripción del TNF-α codificado.
3. Inhibir el efecto del TNF-α sobre los recep-
tores celulares.
4. Neutralizar el efecto inductor del TNF-α sobre
las células diana.
La pentoxifilina se ha visto que actúa sobre las cito-
cinas y la sepsis, disminuyendo la lesión de los órga-
nos y mejorando la supervivencia en animales con
sepsis de gramnegativos o endotoxemias15, 18, 36
. Hay
estudios que afirman que la pentoxifilina inhibe la
síntesis del TNF-α mediante la inhibición del
RNAm17
, otros trabajos indican que inhibe los efectos
del TNF-α18, 36, 37
al inhibir la sobreexpresión de los re-
ceptores ICAM-118
. En nuestro estudio hemos obser-
vado que en los animales con TB existía unos valores
en sangre de TNF-α superior a los que no tenían TB.
Para poder hablar de TB hay que estar seguros de la
integridad de la pared intestinal, que no exista dis-
rrupción. Con la nutrición parenteral producimos una
atrofia de la mucosa intestinal que mejora si se añade
a la nutrición parenteral la pentoxifilina. Esta mejoría
con la pentoxifilina se explicaría por su propio meca-
nismo de acción, ya que se ha comprobado que en
modelos experimentales de sepsis la pentoxifilina
ocasiona una reducción del daño tisular y mejora la
supervivencia de los animales. Esta disminución del
daño tisular se explica por el aumento del flujo san-
guíneo locorregional38
, el aumento de las concentra-
ciones intracelulares del cAMP39
y el bloqueo de las
acciones del TNF-α sobre las células40
. En nuestro tra-
bajo hemos comprobado que en todos los grupos hay
un grado de atrofia ligera y sólo en el grupo A encon-
tramos un grado de atrofia moderada.
Conclusiones
El modelo de una nutrición parenteral sin lípidos es
útil como modelo de TB.
La adición de pentoxifilina a la nutrición parenteral
hace que se disminuya la TB. No podemos precisar a
que dosis de pentoxifilina se obtiene una menor TB,
aunque sin valores estadísticamente significativos, se
observa que con la dosis de 100 mg/kg de pentoxifili-
na es con la que menos TB se produce. También se
observa que al añadir pentoxifilina se disminuyen los
valores de TNF en suero, coincidiendo con los anima-
les que tienen menos TB.
La pentoxifilina también provoca una disminución
del daño tisular y disminuye el grado de atrofia intes-
tinal que provoca el dar una nutrición parenteral sin
lípidos.
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