TincióN De Gram
- 1. Tinción de gramLeidy Natalia Pérez
- 2. INTRODUCCIONExisten numerosos colorantes, en su mayoría compuestos orgánicos. Los colorantes que se utilizan son moléculas cargadas positivamente y se combinan con los componentes celulares llamados negativamente, tales como los ácidos nucleicos y los polisacáridos (azul metileno, el cristal violeta). Otros colorantes son cargados negativamente. Los que se combinan con elementos celulares cargados positivamente (eosina, la fucsina acida y el rojo Congo).
- 3. ¿QUE ES LA TINCION DE GRAM?La tinción de Gram es una técnica de coloración de contraste; fue descubierta por Hans Christian Gram en (1884). El fundamento de la técnica se hace con base a las paredes celulares de las bacterias. Gram positivas y Gram Negativas.La pared celular de las bacterias Gram positivas posee una gruesa capa de peptidoglucano. Además de dos ácidos teicocico.La capa te peptidoglucano de las Gram negativas es delgada, y se encuentra unida a una segunda membrana plasmática exterior por medio de lipoproteínas.
- 4. TINCION DE GRAMBacteria GramnegativaBacteria Grampositiva
- 5. usosEn el análisis de muestras clínicas suele ser un estudio fundamental por cumplir varias funciones:- Identificación preliminar de la bacteria causal infección. - Utilidad como control calidad del aislamiento bacteriano. - Importancia de la calidad de la muestra biológica para el estudio, se valora con esto, el número de células inflamatorias (a mayor número de células inflamatorias más probabilidad de que la flora sea representativa del lugar de la infección).
- 6. A partir de la tinción de Gram pueden distinguirse varias formas distintas:- Los cocos de forma esférica. Pueden presentarse aislados después de la división celular (Micrococos), por pares (Diplococos), formar cadenas (Estreptococos), o agruparse de manera irregular (Estafilococos).- Los bacilos poseen forma alargada. En general suelen agruparse en forma de cadena (Estreptobacilos) o en empalizada.- También pueden distinguirse los espirales, que se clasifican en espirilos si son de forma rígida o espiroquetas si son blandas y onduladas, si poseen forma de “coma”, - curvados, entonces se les llama vibriones.
- 7. TECNICA DE LA COLORACION GRAM1.El primer paso es preparar y fijar un frotis de la siguiente manera.2. Una vez obtenido el frotis con la muestra, se procede a teñir la misma con violeta cristal o violeta de genciana, utilizando una cantidad suficiente de dicho colorante sobre la muestra, como para lograr cubrirla por completo. Se deja actuar al colorante por 1 minuto. Esta tinción de 1 minuto está dada para trabajar a una temperatura ambiente de 25 grados.3. Al transcurrir el minuto, se debe enjuagar la lámina conteniendo la muestra con agua corriente. Para realizar el lavado, se debe tener en cuenta que el chorro de agua NO debe caer directamente sobre la muestra, ésta debe caer sobre la parte superior de la lámina que no contiene muestra. El chorro debe ser un chorro delgado, aproximadamente de medio a un centímetro de espesor. También el enjuague se debe realizar poniendo la lámina en posición inclinada hacia abajo4) Una vez enjuagado el portaobjetos, se aplica como mordiente yodo o lugol durante 1 minuto más.
- 8. 6) Lavar con agua para quitar los residuos de decolorante y esperar que seque la lámina al aire libre o con la ayuda de la llama de un mechero de la forma anteriormente descrita.7) Una vez que la lámina ya secó, procedemos a teñir nuevamente, pero esta vez se va a utilizar un colorante de contraste como por ejemplo la safranina, dejar actuar durante 1 minuto.8) Pasado el minuto correspondiente, se procede a enjuagar la lámina con agua, se escurre el agua sobrante y se seca en la forma anteriormente descrita.5) Pasado el minuto de haber actuado el mordiente, el frotis se decolora con etanol al 75 %, etanol al 95 %, acetona o alcohol-acetona, hasta que ya no escurra más líquido azul. Para esto se utiliza el gotero del frasco del decolorante. Se van añadiendo cantidades suficientes del decolorante, hasta lograr que éste salga totalmente transparente, es decir, hasta que ya no escurra más líquido azul