Validación de procesos

UNIVERSITAT DE BARCELONA
FACULTAT DE FARMÀCIA

Tesi doctoral de

ENCARNACIÓN GARCÍA MONTOYA

Optimización, validación y modelización de un proceso de
fabricación de comprimidos. Desarrollo de una aplicación
interactiva multimedia

Data de lectura: 5 de juny de 2001
Lloc: Facultat de Farmacia

Directors de la tesi: Drs. Josep M. Suñé Negre, Josep R. Ticó Grau i Jordi
Gratacós Roig

JUSTIFICACIÓN DEL TEMA Y OBJETIVO -1-

JUSTIFICACIÓN DEL TEMA Y OBJETIVO

Diversas frases premonitorias que aparecen a menudo en la prensa auguran un futuro prometedor para la
tecnología multimedia y la formación universitaria. Frases como “La enseñanza a distancia será la forma general de
educar en la sociedad de la información” o “Las Universidades tradicionales llegan a sus límites físicos de capacidad” de
Reinar Roll (secretario del Internacional Council for Distance Education, ICDE), en la conferencia
inaugural del curso 1996 de la UOC (Universitat Oberta de Catalunya), pueden ser constatadas ya hoy. A lo
largo de su conferencia, él mismo se encargaba de esclarecer el titular, para concluir que los materiales
pedagógicos de la enseñanza a distancia comenzaban a converger y a mezclarse con las aulas tradicionales de
la Universidad presencial. Y realmente, así ha sido, la mayoría de asignaturas de la licenciatura de Farmacia
ofrecen hoy temas o prácticas por ordenador. Además de la creciente preocupación de la Universidad por
este tipo de temas y tecnologías y su aplicación a la docencia (véase sino los trabajos o ponencias
desarrollados en los 5 congresos o jornadas (1-5) celebrados en Barcelona por la Universidad de Barcelona
durante el año 2000).

En esta línea el Departamento de Farmacia y Tecnología Farmacéutica de la Facultat de Farmàcia de la
Universidad de Barcelona y más concretamente el equipo dirigido por los profesores JM Suñé Negre y JR
Ticó Grau acometió el diseño de una aplicación interactiva multimedia, como experiencia innovadora y
pionera dentro de la docencia farmacéutica universitaria, creada por y para la docencia universitaria. El
proyecto fue integrado y aceptado por la Universidad de Barcelona dentro del programa d’INNOVACIÓ
DOCENT DEL GAIU Nº 7/ IV/ TIM-C /18/ Suñé, en el año 1998.

CAPÍTULO 1: VALIDACIÓN FARMACÉUTICA -7-

Capítulo 1:

VALIDACIÓN FARMACÉUTICA: CONSIDERACIONES
BÁSICAS

1. 1 INTRODUCCIÓN
La vocación de la industria farmacéutica desde siempre ha sido producir medicamentos de calidad y con
total garantía de seguridad. Desde el “hágase según arte” hasta el cumplimiento de las ICH, con los años, se
han ido desarrollando recomendaciones e incorporando requerimientos que han evolucionado hasta una
reglamentación estricta. La industria farmacéutica disfruta de una imagen de calidad excelente. Al elaborar
sus productos destinados a curar la enfermedad, salvar vidas o mejorar la calidad de vida, no puede haber el
mínimo margen para el error. Sin embargo, a pesar de los esfuerzos de control y fabricación, se exige una
mejora continua y máximas garantías de la calidad. Y es en el avance para conseguir un total dominio de la
calidad, cuando surge el concepto de validación.

Hoy en día, todos los técnicos de la industria farmacéutica, incluidos los de distribución, marketing,
desarrollo, garantía de calidad, producción, registros, están de acuerdo con el axioma de que “la calidad no se
controla en un producto, la calidad se construye durante su fabricación” (1). La calidad del medicamento se consigue en
todos y cada uno de los pasos de su proceso de producción, desde su investigación hasta el último análisis
sobre el producto final (2). La garantía de la calidad de un producto (farmacéutico o no) deriva de una
cuidadosa (y sistemática) atención a todos aquellos factores que pueden influir en su calidad: selección de

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sus componentes y materiales, diseño (de producto y proceso) adecuado y control (estadístico) del proceso.
Alcanzar este nivel de calidad de los medicamentos requiere garantizar que cada una de las etapas de la
producción se realiza de forma adecuada y cumpliendo aquellos parámetros de calidad que se han
establecido previamente (cuadro 1). Y este máximo grado de seguridad tan sólo lo proporcionan los
procesos de validación. No hay que olvidar que para obtener medicamentos seguros y eficaces de forma
continuada, es necesario que su calidad sea constante. Este objetivo sólo se alcanza cuando las
especificaciones que se aplican están basadas en procedimientos validados y por lo tanto, permiten
comparar resultados de lotes de reciente fabricación con aquellos que fueron utilizados para ensayos
farmacológicos y toxicológicos (2-5).

ESPECIFICACIÓN MP
PREFORMULACIÓN
MEDICAMENTO
VALIDACIÓN MÉTODOS ANALÍTICOS

FORMULACIÓN DESARROLLO
MEDICAMENTO FÓRMULA Y FORMA FARMACÉUTICA

VARIABLES
DESARROLLO
MÉTODO DE FABRICACIÓN
MÉTODO DE FABRICACIÓN
CRÍTICAS / NO CRÍTICAS

VALIDACIÓN MÉTODO FABRICACIÓN OPTIMIZACIÓN MÉTODO FABRICACIÓN

MEJORA CARACTERÍSTICAS PRODUCTO
⇓ COSTES
⇑ RENDIMIENTOS

Cuadro 1: Resumen de las fases de formulación de un medicamento e integración de la validación.

CAPÍTULO 1: VALIDACIÓN FARMACÉUTICA -9-

1.2 CONCEPTO DE VALIDACIÓN
La validación ha sido un concepto amplio y comúnmente definido. Sin embargo, los múltiples artículos
publicados por expertos y estudiosos, poco han aportado a las ideas de Nash (6), quien en 1979 concluía en
un artículo pionero, ya clásico en la materia, que la validación tendría su apogeo y reconocimiento dentro de
al menos 15 años 1. Hoy, 20 años después, resulta que ha sido así: la validación es una especificación que se
sobreentiende cuando se está desarrollando cualquier procedimiento farmacéutico, ya sea de análisis o de
producción. Incluso los pasos y fases citados para desarrollar una validación, no difieren de algunas
validaciones que se llevan a cabo hoy en día. Nash planteaba como parámetros básicos a asegurar la
calibración de los equipos y el mantenimiento del proceso y de los equipos, la cualificación de equipos y
productos y una atención especial a los cambios: deberán ser auditados y monitorizados los pasos claves en
el proceso (6).

El concepto de validación, en concordancia con la fabricación de medicamentos, surgió hace 20 años (7-8) .
Fue cuando la FDA (Food and Drug Administration) revisó las normas relativas al control de la fabricación
de los productos farmacéuticos. Estas normas son conocidas como las GMP2 (Good Manufacturing
Practices) o cGMP3 (current Good Manufacturing Practices). En 1978, la palabra validación apareció por
vez primera en algunas secciones de las GMP. Sin embargo, en el capítulo de definiciones, el término no
aparecía. Más tarde en un documento interno de la FDA se definía validación de forma sencilla: un proceso de
fabricación validado es uno que ha sido comprobado que hace lo se proponía o intentaba hacer. En este momento destacan
las aportaciones que hizo Loftus, como inspector de la FDA, a su entendimiento y difusión. Ni que decir
tiene, que la definición ha sido revisada, corregida, completada y actualizada,...; en los 20 años posteriores y
hasta hoy se han añadido ideas que pudieron parecer subliminales o incluso novedosas pero de las cuales se
deben destacar tres aspectos principales:

! Necesidad de documentar el proceso de validación, es decir disponer de todo por escrito.

! Necesidad de que provea un alto grado de seguridad de proceso, es decir la certeza de que el sistema

1 “It has taken approximately 15 years for biopharmaceutics and drug dissolution testing to reach their present state of acceptance. Acceptance of
process validation may require just as much time” (Nash, 1979).
2 En castellano, NCF= Normas de Correcta Fabricación.

3 cGMP = current Good Manufacturing Practices. Current= se traduce por corriente, en curso o de uso corriente. Se ha de tener en cuenta que
en USA los nuevos requerimientos de las normas GMP se incorporan inmediatamente y se imponen al resto de laboratorios, aunque no estén
reflejados explícitamente en la ley. Para estar al día, conviene consultar publicaciones como Gold Sheet o GMP Trends o la página web de la FDA en el
apartado de Warning Letters.

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trabajará correctamente.

! Necesidad de que el proceso producirá repetidamente productos aptos, es decir que cumplan las
especificaciones.

En el estado español, la validación ha sido también motivo de trabajos y revisiones de expertos, entre los
cuales cabe destacar los trabajos y publicaciones llevados a cabo por AEFI [VI Jornadas Nacionales de
AEFI (9) (Pamplona, 1985) y X Encuentro de AEFI (2) (Toledo, 1989)], o los trabajos del profesor Cemeli
(10-12) que son de los más referenciados en trabajos posteriores o los desarrollados más recientemente por
el profesor Salazar Macián (13-15), que forman hasta el momento, los únicos tratados publicados en lengua
castellana en nuestro país.

La idea de cualificación o validación no es básicamente una idea nueva (16-17), sin embargo, siempre ha
estado rodeada de confusión (18). Todos los expertos coinciden (19) en que la validación no es un
descubrimiento innovador (10, 13), quizás lo único innovador sea la exigencia de formalizar y documentar
todo4 lo que se venía haciendo hasta ahora, de una forma más sistematizada. El cumplimiento de la
capacidad de calidad de los aparatos o de su funcionamiento adecuado también fue comprobado en el
pasado. Sin embargo, hoy, no sólo es comprobar o calibrar, también se deben aplicar pruebas de
optimización, monitorización y verificación tanto a los equipos como a los procedimientos de producción y
de control. Estas actividades estaban menos organizadas entonces y se hacían sin referirse a protocolos
establecidos o prácticamente sin documentación. Éste es el elemento relativamente nuevo que trae la
validación: la documentación. Debe quedar claro que el término validación como el de cualificación se
refieren al proceso formal y sistemático de establecer que el equipo es operativo y el procedimiento es
adecuado para el proceso previsto.

Quizás no existe otra definición más clara y a la vez sencilla que la que hizo Chapman (20) hace ya algunos
años: “la validación es el sentido común organizado y documentado”. En esta frase vuelven a estar resumidos los
pilares básicos de la validación: la organización y la necesidad de documentar resultados, es decir
disponer de documentación que demuestre lo que se afirma. Si no existe una estructura clara que marque
qué hacer, cómo y para qué se hace cada paso, la validación puede resultar no válida o incluso liosa. Mucho
más sencillo resulta el tema de la documentación o registro; la frase “lo que no se escribió no se hizo, lo que no está
escrito no se ha hecho” es un clásico en la terminología de la validación y todo el mundo la corrobora, ya que
cuando se lleva a cabo un ensayo, lo que menos cuesta es registrarlo. Finalmente, el programa de validación

4 “Establishing documented evidence that a system does what it purports to do” (1977).

CAPÍTULO 1: VALIDACIÓN FARMACÉUTICA - 11
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queda formalizado con la documentación que demuestra que las pruebas realizadas dan una uniformidad
entre lotes y éstos cumplen los criterios de calidad (entre límites definidos).

Paradójicamente, existe todavía alguna confusión sobre lo que es validación de un proceso y qué constituye
la documentación de un proceso de validación. Un problema claro es que genéricamente se ha venido
usando el término validación para cubrir el concepto amplio de las NCF, que en realidad versan
mayoritariamente sobre locales, equipos, componentes, procedimientos y cualificación del proceso5 (21). El
término específico de proceso de validación debería reservarse para las pruebas de las etapas finales del
producto y de la secuencia de desarrollo del proceso. Las NCF y la validación están íntimamente
relacionadas: el objetivo principal de ambas es asegurar la consistencia del proceso y del producto. Para ello
en la fase del diseño del proceso hay que identificar los parámetros críticos del mismo y la influencia que
tienen en el proceso. A continuación se debe estudiar la tolerancia máxima de cada parámetro identificado
como crítico.

Otro concepto íntimamente relacionado con los estudios de validación es aplicar la filosofía del peor caso
(22). Este estudio proporciona los intervalos seguros para el proceso, es decir aquellos que aseguran que
siempre se obtendrá producto correcto. Por supuesto que estos intervalos se habrán obtenido con pruebas
documentadas que demuestran que si se sobrepasan estas especificaciones hay probabilidad de que el
producto no cumpla las especificaciones de calidad.

Por lo tanto, la validación puede definirse como una aproximación sistemática para asegurar la calidad del
producto, basada en la identificación de las variables del proceso que más influyen en las características
de calidad del producto, con el objeto de obtener un método de fabricación y unos métodos de control
establecidos, de manera que se asegure que si se siguen al pie de la letra se alcanzarán todas las
especificaciones del producto (23). Este estudio puede y debe aprovecharse para optimizar el proceso. En la
fase de optimización se tiene que estudiar aquella combinación de parámetros que llevan a la consecución
de una mejora en la calidad del producto, la mejora del rendimiento del proceso, un tiempo adecuado del
mismo y un coste razonable. De hecho, la validación supondrá una demostración o prueba que un proceso
funciona tal y como se espera del mismo (24). Los parámetros escogidos para un programa de validación
deben ser indicadores relevantes del control del proceso, con lo cual es imprescindible demostrar la relación
parámetro ⇔ proceso durante el estudio de validación. Es decir es una progresión lógica de actividades que
acompañan al desarrollo de un producto farmacéutico. La validación no permite cambiar los métodos

5 Las llamadas en formación de personal: “Filosofía de las 5 M”. Entendiéndose por ellas: MÁQUINAS, MEDIOS, MÉTODOS,
PERSONAL (MEN), MATERIALES .

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operativos sin haber analizado al detalle el valor del cambio. Validar representa la voluntad de invertir en el
conocimiento del proceso, en la comprensión de las relaciones entre los diferentes parámetros y en la
comprensión de las relaciones entre proceso y su entorno para al final establecer las óptimas y repetirlo (25).
En caso de modificaciones o que se pretenda mejorar deberá procederse a un proceso de revalidación u
otra validación nueva.

Sin embargo, la cualificación y la validación son vocablos que también se confundían hace algún tiempo.
Definitivamente, la cualificación se refiere esencialmente al funcionamiento de la maquinaria, equipos y
aparatos de laboratorio, de los cuales se ha de demostrar experimental y documentalmente que funcionan
de acuerdo con el uso previsto. La validación se refiere a procesos, sistemas y métodos y supone establecer
una evidencia documentada de que un proceso se realiza y produce un producto que está dentro de las
especificaciones predeterminadas (14). Finalmente, cabe destacar la definición de validación promulgada por
las autoridades oficiales de la FDA (26):

“Establishing documented evidence wich provides a high degree of assurance that a specific process will
consistently produce a product meeting its pre-determinated specifications and quality attributes6”

recogida a su vez por las NCF (27):

“Validación es la obtención de pruebas, con arreglo a las Normas de Correcta Fabricación, de que cualquier
procedimiento, proceso, material, actividad o sistema produce en realidad el resultado previsto”.

1.3 PRIORIDADES DE LA VALIDACIÓN.
Desde un punto de vista industrial (y realmente práctico) los esfuerzos de validación deberían ir hacia los
productos comercialmente más importantes (23). Desde un punto de vista de seguridad farmacéutica deben
incluirse, además, los productos con dosis muy bajas, los inestables químicamente y los de baja solubilidad o
baja absorción. He aquí el trabajo del profesional al aunar sus conocimientos y experiencia para cumplir sus
objetivos de seguridad farmacéutica a la vez que provee un beneficio económico para su Compañía. Está
claro que la validación sólo puede convencer a los economistas con rentabilidad y sus influencias positivas
en la cuenta de resultados7 y por supuesto, no existe (como siempre) una única visión o planteamiento para

6 “Validación es establecer una evidencia documentada que provea un alto grado de garantía de que un proceso específico producirá, de forma
adecuada, un producto que cumpla con sus especificaciones predeterminadas y atributos de calidad”.
7 De hecho, según Tazón (33) los trabajos de cualificación y validación en un proyecto suponen aproximadamente un 12% de la inversión, pero
reduce un 20% los costes posteriores de mantenimiento de la instalación.

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llevar a cabo una validación, sino que a cada caso particular habrá que aplicar unos principios generales
extraídos de las guías publicadas por las agencias oficiales FDA (26), NCF (27).

La validación del procedimiento de fabricación en lotes piloto e industriales es indispensable para garantizar
la calidad farmacéutica del medicamento. Ni que decir tiene que la validación más económica es la que se
inicia desde el primer momento, ya que los cambios lote a lote cuestan dinero y tiempo, no sólo por los
fallos o reprocesamientos, sino también por el despliegue de controles extras, de personas o de tiempo. Si
todas estas pruebas se practican desde el inicio, dentro de la optimización del proceso, se ahorrarán
recursos. El técnico no sólo demostrará que dirige perfectamente sus procedimientos y que conoce sus
puntos críticos, debe igualmente demostrar a través de su documentación que posee la experiencia necesaria
para llevar a cabo la fabricación y la comercialización de su producto. La validación aporta la garantía de una
transposición de escala bien conducida, sin dificultad mayor, pero también aporta la equivalencia del
producto industrial con el utilizado para los ensayos clínicos. Del éxito de la validación depende igualmente
el aprovisionamiento del mercado a tiempo y en cantidad adecuada sin rupturas de stock, que son tan
perjudiciales para la empresa.

Muchas han sido las razones que se han publicado para justificar la validación (1); entre las habituales se
encuentran la reducción de costes (derivados del ahorro en el número de muestras a controlar, el propio
coste del control, la disminución de anomalías en los productos y por ende de rechazos, retratamientos y
recontroles), pero la más importante es la garantía que proporciona al fabricante ya que un proceso
validado “es un proceso sin problemas para producir calidad”. Otra razón importante es la mejora de la logística
interna del flujo de fabricación (se pueden adecuar los tiempos de suministro y espera al flujo real) y la
inestimable ventaja de detectar a tiempo los errores (detectar una anomalía en la misma fase donde se
produce gracias a los indicadores de control del proceso); por supuesto la última razón viene impuesta por
las exigencias de las autoridades sanitarias.

La validación es una operación costosa, pero desde un punto de vista de productividad económica puede
optimizarse en sí mismo, si se aplican con ciertos criterios “ahorradores” de recursos, es decir (28):

" Comenzar el ejercicio lo antes posible, al poner en marcha un procedimiento de fabricación tras el
desarrollo y asignando los parámetros de control de la misma manera.

" Definir claramente las funciones de validación y operaciones críticas y documentar sólo éstas en la
validación frente al resto de no críticas.

" Subcontratar algunas validaciones o las más complicadas a proveedores (climatización, equipos

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acondicionamiento,...).

" Disponer de documentos “tipo” de PNT y Protocolos que se adapten a las futuras validaciones.

" Practicar reagrupamientos de validación, práctica muy útil en las validaciones de limpieza, validando
sólo el producto más problemático y extrapolando las conclusiones al resto de productos,...

" Validar el caso más desfavorable (por tipo de máquina o tipo de producto).

" Utilizar herramientas estadísticas (diseño factorial, capacidad, planes de experiencias).

" Racionalizar la validación en sí misma (iniciarlo para los productos nuevos, o los más interesantes
económicamente, etc.).

1.4 TIPOS DE VALIDACIÓN
Hoy existen básicamente tres aproximaciones a la validación de un proceso de fabricación: validación
retrospectiva, validación prospectiva y validación concurrente (12, 29).

Validación retrospectiva: estudio para demostrar y establecer una evidencia documentada de que un
proceso hace lo que estaba previsto sobre la base de una revisión y análisis de información histórica.

Validación prospectiva: estudio para demostrar y establecer una evidencia documentada de que un
proceso hace lo que está previsto basado en un protocolo planificado.

Validación concurrente: estudio para demostrar y establecer evidencia documentada de que un proceso
hace lo que debe hacer basado en información generada durante una implementación real del proceso.
También se le denomina revalidación. La validación concurrente es muy utilizada cuando se ha variado
una etapa del proceso, ante cambios de proveedores de excipientes, para productos fabricados de tarde en
tarde, cambios en las fórmulas de recubrimiento, sustitución o adición de excipientes. Da una información
muy valiosa para modificar y corregir el proceso de fabricación o para cuando aparezcan problemas durante
la fabricación. Podría considerarse como una evaluación continua del proceso, mientras se controla al
máximo para procurar que el producto final sea correcto (28).

Cualquiera de ellas es aceptada y válida para dar evidencia documentada y demostrar que un proceso hace lo
que debe hacer. Sin embargo, cada aproximación tiene sus características y limitaciones y por lo tanto, antes
de desarrollar una validación deberá evaluarse qué tipo de validación puede dar la mayor información sobre
la seguridad y la estabilidad del proceso. Por ejemplo para una fase de mezclado primario, alguien podría

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aplicar una validación prospectiva para controlar una superficie de variación conocida mayor tal como la
variabilidad entre las distintas localizaciones del mezclado, la cual es correcta si es lo que se pretende. Sin
embargo, difícilmente puede ser utilizada la validación prospectiva para documentar la homogeneidad lote a
lote, porque en la validación prospectiva, sólo se usan tres lotes (es decir un número demasiado reducido).
Si se quiere evaluar y estudiar qué y cómo influyen los factores en el proceso de homogeneidad de
mezclado, será más adecuada una validación concurrente o incluso retrospectiva (si existen datos), con la
cual evaluar la homogeneidad lote a lote. Para productos nuevos se practica una validación prospectiva,
mientras que para productos existentes se suele aplicar la validación retrospectiva (ver cuadro 2) (30). Sin
embargo, la validación concurrente proporciona más información y ayuda a seguir estudiando el proceso
previamente validado prospectivamente.

En la práctica, además deben realizarse revalidaciones (29), que son “repeticiones” parciales de la validación
completa, en función de los cambios que se hayan practicado en el proceso. Cambios o hechos habituales
que obligan a revalidar son:

" cambios en componentes críticos (calidad materias primas, proveedores,…),

" cambios o sustituciones de piezas del equipo o de materiales de acondicionado,

" cambios en la planta o instalaciones (localización o tamaño),

" aumento o disminución del tamaño del lote,

" si varios lotes secuenciales no cumplen los límites.

Aunque no hayan cambios significativos, es útil revalidar el proceso periódicamente para evaluar que se
siguen cumpliendo los parámetros preestablecidos y no ha habido variaciones importantes en el proceso
que influyan en su capacidad de calidad.

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Diseñar Instalar Preparar Iniciar Producción
Probar industrial

TIEMP

DEFINICIÓN INSTALACIÓ PRUEBAS VALIDACIÓN VALIDACIÓN
PROCESO N OPERACIÓ PROSPECTIVA CONCURRENTE
Y O
RETROSPECTIVA

I+D IQ + OQ PQ

PROCESO DE VALIDACIÓN

Cuadro 2: Proceso de validación e integración de sus fases (DQ= Cualificación del diseño, IQ= Cualificación de la Instalación, OQ= Cualificación de la
operación, PQ= Cualificación del procedimiento).

Otra responsabilidad del trabajo de validación (31) de la planta piloto es la validación de los procedimientos
de limpieza para el equipo usado en la fabricación de medicamentos. La necesidad de este trabajo es obvia
por la naturaleza sensibilizante de algunos principios activos y las consecuencias potenciales de su
contaminación cruzada. Se ha de comprobar si los procedimientos de limpieza son suficientemente seguros
para garantizar que los restos de principios activos han sido retirados a un nivel eficaz. Además las
conclusiones de la validación pueden ser perfectamente utilizadas posteriormente en la fabricación
industrial. Suelen utilizarse tres métodos de validación de limpieza:

! Determinación del residuo de principio activo en las aguas de lavado.
! Valoración del principio activo recuperado según la prueba del algodón (se pasa un algodón impregnado
en disolvente sobre la superficie).
! Fabricación de un placebo en la máquina limpia; se asegura que existe el mismo riesgo que en un lote
normal y se valora el placebo respecto al principio activo del lote anterior.

1.5 METODOLOGÍAS PARA LA VALIDACIÓN
Es muy importante monitorizar el proceso constantemente de forma que los cambios significativos se
localicen antes o en el mismo tiempo que ocurren, con lo cual podría ejercerse una acción correctiva
inmediata para mantener al producto bajo control.

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Con objeto de alcanzar una validación adecuada, es esencial un profundo conocimiento del proceso
farmacéutico (32). El resultado final del proceso es variable (esterilidad, riqueza, disolución) por lo que el
enfoque estadístico es esencial para el proceso de validación. No existe una recomendación única para
validar productos y cuales son los controles o ensayos a llevar a cabo durante su fabricación. Sin embargo, sí
hay unos procedimientos comunes a discutir: muestreo, análisis estadístico y control.

Hay que partir de la idea que un proceso de fabricación es un proceso continuo que implica un número de
pasos determinados. Como ejemplo en este trabajo, si se considera el proceso de fabricación de
comprimidos a partir de una materia prima, es posible comprobar que está compuesto por una serie de
etapas críticas, entre ellas: premezclas de excipientes y principio activo, amasado, mezclado con el lubricante
y compresión. Cada etapa es crítica y pueden sobrevenir problemas durante su proceso. Por ejemplo, si no
existe una mezcla uniforme en el primer mezclado, la segregación puede ocurrir en el amasado final y
pueden tenerse pérdidas durante el trasvase del producto, desde el mezclador a los bidones en cuyo caso la
uniformidad de contenido de los comprimidos puede presentar una variabilidad difícil de aceptar. Si aparece
un problema en alguna etapa de las críticas del proceso, el producto final puede no cumplir las
especificaciones de identidad, riqueza, calidad y pureza. En la práctica, es preceptivo evaluar cada una de las
etapas críticas del proceso de fabricación para asegurar que los ingredientes están adecuadamente
mezclados, que no ha habido segregación, que no han habido pérdidas de principio activo y que se hace un
adecuado control del proceso sobre el peso de los comprimidos durante la compresión que redundará en la
confianza de que el producto será apto.

Para alcanzar este objetivo, los materiales intermedios o acabados se analizan sobre la base de su riqueza,
uniformidad de dosis, disolución o disgregación de acuerdo con los planes de muestreo premarcados (por la
Farmacopea, normas ISO, normas MIL STANDARD,...). Un proceso de fabricación pasará test si para
cada etapa crítica del proceso de fabricación y para el producto final cumple las especificaciones requeridas
de identidad, riqueza, calidad y pureza del principio activo. En la práctica, para la validación de un proceso
de fabricación los límites de aceptación se establecen en base a planes de muestreo y a las especificaciones
de la Farmacopea. Estos límites se marcan de manera que si la muestra de validación cumple los límites,
exista una alta probabilidad de que otra muestra pase el análisis (33). Estos límites se aplican usualmente
para evaluar el paso entre etapas críticas del proceso de validación (29).

1.5.1 IDENTIFICACIÓN DE LAS FASES CRÍTICAS DEL PROCESO
Se han propuesto muchas metodologías de análisis de proceso para enfocar el trabajo de validación de un

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proceso de fabricación. El más habitual desarrollado por la mayoría de autores es aplicar un método de
análisis para investigar cuáles son las fases más críticas del proceso. Como fase crítica se definió “algo que
puede ser o es probable que sea la causa de un producto inaceptable”. Esta tarea la deben llevar a cabo los
departamentos de Investigación y Desarrollo que deben reflejar los puntos débiles de la fórmula y su grado
de importancia, en función del desarrollo y pruebas llevadas a cabo; en caso de que no se haya hecho en
esta fase, el técnico de validación deberá recomponer la información de partida.

Es necesario establecer una metodología de validación, ya que no existe una normativa al respecto.
Partiendo de un producto medicamentoso, se establecen los elementos que conforman su calidad que
deberán analizarse para ver si son fases críticas, por ejemplo las siguientes para unos comprimidos:

" Especificaciones que debe cumplir (iniciales y al caducar).

" Ausencia de contaminación (microbiológica o cruzada o de sustancias relacionadas,...).

" Identificación.

" Utilización del producto (presencia y funcionamiento de los elementos y accesorios para dosificar,
aplicar o administrar el producto).

" Inviolabilidad (hermeticidad, esterilidad,...).

" Información ligada al producto (datos estabilidad, dosis).

Cualquier operación que pueda afectar a estos elementos deberá ser validada y, en su caso, ser considerada
como etapa crítica o con prioridad alta para ser estudiada en la validación.

El Plan de Trabajo se basará en:

Primera etapa: describir de forma detallada todas las operaciones o funciones a identificar y justificar su
carácter crítico o no crítico. Sólo las etapas consideradas críticas necesitarán documentación exhaustiva.

Segunda etapa: comprobar y controlar las funciones / operaciones críticas separadamente y controlar
las funciones críticas conjuntamente. Dar límites de variación para cada parámetro crítico del
procedimiento, basándose en estudios estadísticos.

Tercera etapa: comprobar la reproducibilidad del procedimiento.

Para cada tipo de validación, la FDA requiere muestras representativas y apropiadas que se analizarán
estadísticamente en cada fase crítica para evaluar que los productos cumplen con las especificaciones. Los

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resultados de cada fase crítica darán información útil sobre el cumplimiento del proceso de validación.
Además de los controles de proceso, Chapman (20) clasificó unas determinadas variables como
importantes en la caracterización del cumplimiento del proceso:

Parámetros de control: valores de las variables operativas que se usan como nivel de control de la
estabilidad del proceso. Por ejemplo: el peso máximo y mínimo obtenidos a partir de ±2,5% del peso
teórico del comprimido.

Variables operativas: factores (incluidas las variables de control), que pueden afectar potencialmente al
estado del proceso y de su control, que provocarán un producto final correcto o no. Por ejemplo para
comprimidos puede ser el % de humedad relativa del granulado; si es excesiva puede provocar problemas
de compresión.

Estado de control: condición en que todas las variables operativas que pueden afectar al cumplimiento del
proceso permanecen entre los márgenes del sistema, de manera que el proceso cumple como estaba
previsto y produce producto apto. Por ejemplo, comprimidos con dureza y peso dentro de los márgenes de
control.

Margen de fallo: valor de un parámetro de control que si se supera indica efecto adverso en el control o en
el cumplimiento del producto final. Por ejemplo si por avería del temporizador se mezcla más tiempo del
especificado en la guía podría ocurrir desagregación de la mezcla; si se ha estudiado previamente, se puede
decidir sobre la marcha para resolver la incidencia.

Peor caso: valor más alto y más bajo de un parámetro de control que es evaluado en la validación. A partir
de estos resultados se establece el margen de fallo de los parámetros de control. Por ejemplo, la altura de los
comprimidos, puede provocar fallo de que no quepan en el blíster o por ejemplo un fallo de dureza de los
comprimidos podría afectar al perfil de disolución de los comprimidos. Este parámetro ha evolucionado
con el tiempo hacia márgenes más cortos coincidentes con los intervalos de trabajo.

Cualificación de la instalación: verificación documentada de que todos los aspectos claves de la
instalación cumplen con las normas y con su diseño previo y que las recomendaciones del instalador se han
considerado exactamente. Por ejemplo, comprobar la velocidad de mezclado de un mezclador (rpm), si los
mandos han sido instalados ergonómicamente para el operador, si no hay peligro de volcado o descarga
eléctrica como consecuencia de la acumulación de carga electrostática, etc.

Cualificación operativa: verificación documentada de que un sistema o subsistema cumple (como se

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proponía) todos los márgenes de operación previstos. Por ejemplo, comprobar como tras 20 horas de
secado en estufa el granulado cumple las especificaciones de humedad residual. Si se han instalado
protecciones para el operador, mandos de seguridad, etc.

Protocolo de validación: plan experimental prospectivo que cuando se ejecuta como se propone produce
evidencia documentada de que el sistema ha sido validado. El protocolo debe incluir información tal como:
formulación, procedimiento de fabricación, objetivos, planes de muestreo, planes de análisis y criterios de
aceptación para cada ensayo que tenga que hacerse para cada fase crítica del proceso.

Los planes de muestreo, análisis y criterios de aceptación si se establecen estadísticamente (34) aseguran un
alto grado de confianza de que el proceso cumple con lo que estaba previsto. Para redactar el protocolo de
validación y dado que los procedimientos varían de producto a producto, es importante tener en cuenta los
siguientes puntos para entender perfectamente el proceso:

" cuáles son las fases críticas (establecer puntos para la monitorización de estas fases),

" equipos a usar en cada fase (que cumplan los requerimientos de cualificación),

" posibles problemas (estudiarlos basándose en el peor caso posible),

" controles a cumplir (conocer el estado de control, parámetros de control y márgenes de fallo),

" planes de muestreo (representativos del lote),

" planes de análisis (sobre la base de tamaño, riesgos, etc.),

" criterios de aceptación,

" información pertinente del proceso,

" controles o especificaciones de referencia (dados por las monografías oficiales),

" resumen y conclusión para la validación.

Antes de diseñar el procedimiento de validación, será necesaria una revisión de los pasos críticos en el
proceso de fabricación. A modo de ejemplo para comprimidos un análisis simplificado del mismo sería el
basado en:

Homogeneidad y riqueza después de mezclar y antes de comprimir. Se investigan tres tiempos de
mezclado para determinar el efecto del tiempo de mezclado en la homogeneidad de la mezcla. Si hay
muchas variables para considerar, puede hacer inalcanzable la experiencia desde un punto de vista
económico: en este caso se debe hacer diseño factorial fraccionado con márgenes concretos para las

-

variables en base a la experiencia o la bibliografía consultada.

Mantenimiento de la homogeneidad durante el almacenamiento antes de comprimir.

Efecto de compresión en la uniformidad, dureza, friabilidad, disgregación y disolución.

El análisis exhaustivo del proceso de fabricación de los comprimidos por granulación húmeda se realiza en
el capítulo 5 de este trabajo.

1.6 CUALIFICACIÓN
Otro planteamiento más moderno de la validación (35-37) es desarrollarla basándose en cuatro apartados
(ver cuadros 3 y 4) o bloques denominados: cualificación del diseño (DQ), cualificación de la instalación
(IQ), cualificación de la operación (OQ) y cualificación de la prestación (PQ). En este punto, la traducción
del término anglosajón performance ha sido difícil, y los diferentes expertos lo han ido traduciendo por
cumplimiento, proceso, funcionamiento, pero quizás la que parece más acertada es prestación, es decir la
capacidad de prestar un servicio. Algunos autores han ampliado las “Q” con dos más: Cualificación del
Mantenimiento (MQ) y Cualificación del cierre de la validación (CQ), que habitualmente son incluidas en la
PQ. Para ello el sistema se subdivide en subsistemas o unidades indivisibles a las cuales se les aplica el
estudio pormenorizado de sus características, cumplimientos, etc. (38).

SECUENCIA DE VALIDACIÓN

1. ORGANIZACIÓN / PLANIFICACIÓN: PLAN MASTER VALIDACIÓN:
CALENDARIOS, RESPONSABLES DE VALIDACIÓN

2. CUALIFICACIÓN DEL DISEÑO (DESIGN QUALIFICATION)

3. CUALIFICACIÓN DE LA INSTALACIÓN (INSTALLATION QUALIFICATION)

* CALIBRACIONES
* PROCEDIMIENTOS NORMALIZADOS DE TRABAJO

4. CUALIFICACIÓN OPERACIONAL (OPERATIONAL QUALIFICATION)

5. CUALIFICACIÓN DE LA PRESTACIÓN (PERFORMANCE QUALIFICATION)

6 DOCUMENTACIÓN Y CERTIFICACIÓN
Cuadro 3: Secuencia de validación de un producto

- 22 -

FASES DE LA CONSIDERACIONES PRUEBAS DOCUMENTACIÓN
CUALIFICACIÓN PRÁCTICAS

DQ Acordar con el Verificar Especificaciones técnicas del
CUALIFICACIÓN proveedor las documentalmente que usuario,…
DE DISEÑO condiciones, el sistema corresponde a
Documentos Técnicos del equipo:
modificaciones, reservar las exigencias definidas y
proporcionados por el proveedor
la documentación que los elementos
(planos, …)
relacionada,… críticos han sido tenidos
en cuenta,… Manuales Técnicos: mantenimiento,
utilización, limpieza, …
IQ Identificar que los Controles estadísticos Redacción de los Procedimientos
CUALIFICACIÓN elementos críticos según proveedor Normalizados de Trabajo: PNTs
DE previstos han sido (pruebas,…) mantenimiento, utilización, limpieza
INSTALACIÓN instalados
Controles estáticos: Planos, Fichas Técnicas,…
equipos, partes,....
PNTs control de equipo
Control de calibración
PNTs calibración
PNTs cambios
OQ Controlar funciones Controles estáticos de Manual de operación
CUALIFICACIÓN críticas: velocidad, los componentes sin
Procedimiento de puesta en servicio
DE OPERACIÓN temperatura, capacidad, producto ni placebo
… Guía de Fabricación (para placebo)
Controles dinámicos con
placebo PNTs relacionados

PQ Controlar que el equipo Controles dinámicos con Guía de Fabricación (para producto)
CUALIFICACIÓN funciona con nuestro producto
PNTs relacionados
DE PRESTACIÓN procedimiento de
trabajo, producto y que
cumple las
especificaciones

Cuadro 4: Resumen de las fases de la cualificación de equipos.

Aunque estos conceptos también han planteado confusiones (39), ya que en ocasiones se ha considerado
sinónimos validación y cualificación y se utilizan para cualquier concepto relacionado con la fabricación,
con este fin se ha preparado un cuadro resumen (cuadro 5). Estas confusiones se analizan en un artículo
que ejemplifica deficiencias NCF y demuestra que seguramente son consecuencia de que no se entendían (y
entonces no se aplicaban) bien los conceptos.

-

Sistemas (agua, aire, vapor, etc.) Se validan
Procesos (producción comprimidos, etc.)
Equipos Se cualifican
Materiales
Locales
Personal Se forman y certifican

Cuadro 5: Términos relacionados con la validación.

Normalmente la mayoría de autores aplican esta metodología desarrollando las IQ y OQ individualmente
en todos los equipos y a continuación se integra una PQ para el proceso completo que integraría la
validación de la elaboración del producto farmacéutico. Por ejemplo, para un producto en emulsión
semisólido, supondría cualificar todos los equipos utilizados en su elaboración individualmente (es decir que
el baño es capaz de alcanzar las temperaturas necesarias, o que el agitador hace una agitación homogénea y
adecuada a las revoluciones adecuadas, etc.) y a continuación, comprobar que el paso por todos ellos es
capaz de proporcionar un producto dentro de especificaciones.

Respecto a la cualificación de equipos puede hallarse una extensa bibliografía para desarrollarlas, aunque dos
guías interesantes son las documentadas en los artículos referenciados como 37 y 40.

En el presente trabajo se respetarán las recomendaciones de la FDA sobre las fases a desarrollar en una
validación de un nuevo producto o bien en una validación concurrente de un producto no validado
previamente; todas estas fases se han resumido en el cuadro 7, mostrando gráficamente sus interrelaciones,
mientras que en el cuadro 6 se han resumido los “resultados” de las fases de cualificación.

CON FO RM ID A D
IQ El equipo se ha instalado correctamente
M A TERIA L ¡LISTO PARA PU ESTA EN M A RCHA !
OQ El equipo funciona en condiciones estandares
D E BA SE ¡LISTO PARA PRO DU CIR!
PQ El equipo trabaja con “mis” condiciones
FU NCIONAL particulares
¡LISTO !

Cuadro 6: Resultados de las fases de la cualificación de un equipo

- 24 -

CUALIFICACIÓN DISEÑO
Planificación pre- producción
Diseño especificaciones
Revisión diseño

CUALIFICACIÓN DE LA CONSTRUCCIÓN

PRE-CUALIFICACIÓN
EQUIPO E INSTALACIONES

Procedimientos
Normalizados
de
Trabajo CUALIFICACIÓN
EQUIPO E INSTALACIONES:
CUALIFICACIÓN INSTALACIÓN,
CUALIFICACIÓN OPERACIONAL
Calibraciones Programa revalidación
Y
Mantenimiento
CUALIFICACIÓN DE PRESTACIÓN
Programas
Programa mantenimiento preventivo
control
Programa cambios calibración
Métodos PRUEBAS
cualificado PRE- CUALIFICACIÓN DEL PROCESO Programa de control rutinario proceso

Monitorización ( tendencias,..)
Métodos

Desarrollo y CUALIFICACIÓN DE
Proceso PRESTACIÓN DEL PROCESO
Optimización

Monitorización
Producto CUALIFICACIÓN DEL PRODUCTO
y proceso

PRODUCTO VALIDADO

Cuadro 7: Interrelación de las fases y pruebas de validación (41, 42, 43)

-

1.6.1 PLAN MASTER DE VALIDACIÓN
Documento que describe los propósitos o intenciones para alcanzar el objetivo. Organiza la ejecución de las
siguientes fases (DQ, IQ, OQ, PQ) y de la documentación implicada.

Entre los puntos que suele incorporar el Plan Master de Validación (15) se encuentran los siguientes:

" Introducción

" Alcance de la validación

" Glosario de términos que aparecen en el documento de validación

" Diseño

" Cualificación de las materias primas

" Clasificación ambiental de las instalaciones (aire, temperatura,…)

" Descripción del proceso

" Descripción de los equipos y complementos

" Archivo histórico de los equipos

" Documentación de la instalación y construcciones

" Descripción protocolos

" Listas PNT

" Programas de Plan de validación

" Requerimientos de los protocolos de validación

" Programas de monitorización del medio ambiente

" Procedimientos de ensayos analíticos

" Programa calibración

" Programa formación

" Programa mantenimiento preventivo

" Programa de control de cambios

" Programa de control de documentos

- 26 -

" Personal responsable

" Equipos a cualificar

" Protocolo de validación

" Procedimiento de fabricación

" Firmas de aprobación.

Dependiendo del tipo de validación el Plan Master de Validación se compondrá de unas u otras pruebas.
Ver cuadro 8, donde se resumen, según la referencia (15).

VALIDACIÓN VALIDACIÓN Desarrollo farmacotécnico Tres lotes a escala piloto
PROSPECTIVA PROSPECTIVA de la forma farmacéutica:
Ensayo de estabilidad acelerada y
PREVIA
Estudio de los factores a largo plazo
críticos del proceso
VALIDACIÓN Desarrollo de la Un lote a escala industrial
INDUSTRIAL cualificación del equipo de
fabricación (DQ, IQ, OQ)
a largo plazo8
Validación del proceso de
fabricación (PQ) con lote a Guías de fabricación
escala industrial Control proceso
Estadística de los datos:
INFORME DE
VALIDACIÓN
MÉTODO DE
FABRICACIÓN
VALIDACIÓN Validación del proceso de fabricación (PQ) con Tres primeros lotes (PQ)
CONCURRENTE tres lotes
Estadística de los datos: INFORME DE a largo plazo
VALIDACIÓN
VALIDACIÓN Validación del proceso de fabricación en base a 10 lotes consecutivos tamaño lote
RETROSPECTIVA los resultados estadísticos de un mínimo de 10 real
lotes consecutivos, sin incidencias de análisis ni
de fabricación

Cuadro 8: Programa de validación para un nuevo producto (adaptado de la referencia (15)

8 Las condiciones de estabilidad a largo plazo dependen del la zona climática. En nuestro país 25ºC/ 60% HR.

-

1.6.2 CUALIFICACIÓN DEL DISEÑO (DQ)
En este protocolo se definen los requerimientos, las especificaciones y descripciones de los equipos. Es una
fase eminentemente organizativa (saber qué se necesita, qué posibilidades presenta el mercado, qué
prestaciones y cómo satisfacen o no las necesidades y, en función del examen llevado a cabo, qué deberá
adaptarse). Constituirá una evidencia documentada de que la calidad es tenida en cuenta y construida desde
su diseño. Debe ser una fase previa a la fase de compra e instalación del equipo. Deberá requerirse
previamente a los proveedores ya que sino a posteriori resulta difícil recoger esta información y
documentos; incluso si es un equipo a desarrollar por el proveedor deben describirse ahora las
especificaciones técnicas.

Objetivos de la cualificación del diseño:

" Redactar un pliego de condiciones que debe cumplir el equipo: para ello debe realizarse un análisis de
las necesidades9 y es imprescindible la colaboración de los departamentos de ingeniería, producción,
garantía de calidad y del suministrador.

" Verificar la conformidad del equipo con los principios NCF

" Incluir las especificaciones adecuadas al equipo: operacionales, eléctricas, medioambientales, físicas..

" Asegurar que el proveedor entregará el manual de operación que incluya:

# Requerimientos para la instalación del equipo

# Procedimientos de instalación del equipo

Si la instalación/equipo estuviera en uso, puede obviarse la DQ del equipo, aunque si fuera necesario
llevarla a cabo, en la DQ se debería incluir:

" relación de productos fabricados durante el último año: fecha, nº lote y resultado,

9 Puntos a tener en cuenta en este análisis:
Análisis de las instalaciones (donde se ubicarán los equipos): clasificación, tipos,..
Descripción, esquema de las instalaciones/equipos.
Procedimientos de utilización.
Procedimientos de limpieza.
Procedimientos de mantenimiento (programas de mantenimiento, recambios,..).
Productos a emplear para la limpieza, mantenimiento,.., PNTs de uso, limpieza y mantenimiento.
Criterios de aceptación: del producto elaborado, residuos de limpieza.

- 28 -

" relación de intervenciones por averías.

1.6.3 FASE DE CUALIFICACIÓN DE LA INSTALACIÓN (IQ)
El protocolo de cualificación de la instalación (IQ) incluirá la documentación completa que demuestra que
el equipo está instalado conforme con el diseño aprobado previamente y las especificaciones técnicas,
normas, códigos y reglamentaciones. Estas actividades se llevan a cabo durante el montaje. Para ello se debe
elaborar previamente una planificación de la instalación. La verificación consistirá en: controles,
conformidad y contrastación o calibración.

La importancia de este paso está en la verificación y comparación de las características diseñadas para el
equipo frente a las instaladas:

" de las especificaciones (operacionales, eléctricas,...) del diseño original,

" de las órdenes de compra,

" de los contratos,

" identificación del equipo, nombre, número de serie, planos, características, etc.,

" conexión a servicios (vapor, agua...),

" programas de mantenimiento y limpieza,...

" que las recomendaciones del fabricante han sido adecuadamente consideradas,

" que existe una buena interrelación con otros sistemas del laboratorio, SPC10,

" que se han comprobado consideraciones referentes a seguridad operativa,

" requerimientos de uso.

En este momento debe comprobarse que se dispone de toda la documentación (planos, fichas técnicas,
etc.). Se recomienda hacer un listado previo con los puntos a comprobar y que en éste colabore el
proveedor e incluso la verificación se haga en presencia del mismo.

En resumen, el certificado IQ significa que las instrucciones han sido leídas, comprendidas y el equipo ha
sido debidamente instalado, es decir que existe conformidad material pero todavía no se ha puesto en
marcha.

10 Statistical Process Control: Control Estadístico del Proceso.

-

1.6.3.1 EJEMPLO DE INFORME PARA: CUALIFICACIÓN DE LA
INSTALACIÓN

1.6.3.1.1 INFORMACIÓN GENERAL DEL EQUIPO

" Descripción del equipo: planos, esquemas y medidas

" Características del equipo: listado de componentes (bombas, válvulas, conexiones,…), localización,
fabricante, marca, modelo, nº serie, etc.

" Especificaciones del fabricante.

" Materiales del equipo en contacto con el producto: certificación y compatibilidad con los productos.

" Materiales del equipo que no entran en contacto con el producto: instrumentos críticos (tipo,
fabricante, equipo, localización, certificado calibración, PNT calibración) y no críticos (ídem).

" Esquema, planos de las instalaciones (eléctrica, mecánica,...).

" Productos para la limpieza, certificación de origen y comprobación analítica.

" Listado de software asociado a la instalación y localización en archivos.

" Relación cambios introducidos en el sistema.

1.6.3.1.2 CONEXIONES NECESARIAS: FLUIDOS Y ENERGÍAS

Localización y características a conocer: fuente, presión, calidad y capacidad del vapor, agua, aire
comprimido, electricidad, vacío, nitrógeno, extractores de polvo, sistemas de acondicionamiento de aire...

1.6.3.1.3 DOCUMENTACIÓN

" Manual operación.

" Lista de referencias de los documentos técnicos.

" PNT instalación, PNT mantenimiento preventivo (listas de recambios, PNT sustitución piezas),
Sanitización (limpieza, productos, desinfección,...).

" Lista y referencias de los PNT de mantenimiento.

" Los procedimientos normalizados de trabajo estrictamente no son parte de la secuencia de validación.
Son una parte importante para la correcta y consistente funcionalidad del equipo.

" Estos procedimientos deberían formar la base de las calificaciones operacionales y validación, se deben

- 30 -

redactar en base a la documentación del proveedor si no se ha hecho ya en al fase DQ. Los PNT deben
contener considerables detalles y su preparación requerirá una extrema minuciosidad y rigor.

1.6.3.1.4 CONTROLES ESPECÍFICOS

" Controles de calibración o de contrastación.

Conformidad demostrada con patrones certificados o patrones de control. La calibración demuestra que
una medida o dispositivo sensor produce los resultados deseados entre los límites especificados comparado
frente a un patrón dentro de un intervalo de medida adecuado.
Todos los elementos críticos para el proceso de validación deben ser calibrados. Los patrones de calibración
usados deben compararse frente a patrones certificados. Debe mantenerse un archivo documentado de los
patrones que incluirá: nombre del instrumento, número identificación, localización, procedimiento de
calibración, intervalo de incertidumbre, fecha de calibración inicial, intervalo de recalibración y control del
instrumento usado para realizar la calibración.

" Controles de conformidad

1. conformidad con planos y documentos contractuales
2. emplazamiento, dimensiones de los instrumentos (tolvas, mandos de control,…)
3. naturaleza de los materiales: certificados de análisis
4. detalles técnicos: pendientes de tuberías, soldaduras, conexiones, etc.
5. identificación de equipos, componentes, redes de fluidos
6. controles eléctricos y neumáticos
7. sincronización de bucles de instrumentación
8. conexiones con otros servicios
Las modificaciones o discrepancias que se detecten deberán registrarse y ser descritas, justificadas y
consideradas antes de la certificación, e incluso deberá llevar a revisar la IQ o OQ previas.

1.6.3.1.5 CERTIFICADO DE ACEPTACIÓN DE LA INSTALACIÓN

(firmado por fabricante y comprador).

-

1.6.4 FASE DE CUALIFICACIÓN OPERACIONAL/ FUNCIONAL (OQ)
Es la prueba documentada que establece que el equipo es capaz de funcionar repetidamente dentro de los
límites determinados y cumpliendo las especificaciones. Después de que la cualificación de la instalación y
de que la calibración se hayan completado, es necesario determinar si el equipo o sistema trabaja como se
pretendía entre los márgenes operativos. Son ensayos en dinámico es decir con la máquina “en marcha”.

Se hace basándose en dos tipos de ensayos:

1.- Recogida y registro de los valores actuales de los parámetros críticos del equipo, para cada fase, ciclo y
punto de consigna, sin placebo.

En este ensayo se comprueba la funcionalidad de base que proporcionan los componentes eléctricos,
mecánicos, de instrumentación, comandos de control y de telecomunicación (señalizaciones, secuencias de
alarma, paros de emergencia, válvulas y bombas).

2.- Pruebas de puesta en marcha con placebo

Esta prueba es una simulación de las condiciones normales de trabajo. Se probarán las condiciones de
trabajo normales, condiciones de trabajo escalonadas (con diferentes condiciones de sobrecalentamiento,
sobrecarga, altas vibraciones, …), alarmas, paros de emergencia.

Un método para obtener un plan control completo será utilizar un PROTOCOLO DE OPERACIÓN o
PNT de utilización o Procedimiento de puesta en servicio. Este documento será el que marque los pasos y
criterios de aceptación para certificar el sistema o equipo.

Todas las características importantes de control del equipo se deberían incluir en esta comprobación:
usos, rpm, presiones, temperaturas, ciclos de tiempo y registradores de datos.

Además todos los aspectos de seguridad existentes deben controlarse, incluyendo dispositivos de
protección (para el personal y el equipo) sistemas de cierre, indicadores y alarmas.

Generalmente se hace sin producto (con placebo) o en condiciones simuladas, incluyendo los límites
extremos o anómalos que se puedan encontrar en una operación normal. En esta cualificación interviene el
personal usuario (mecánicos, operadores, técnicos,…).

- 32 -

1.6.4.1 EJEMPLO DE INFORME PARA: CUALIFICACIÓN OPERACIONAL
Los apartados que incluirá son:

1.- PNTs APLICABLES

2.- LISTA DE PRODUCTOS CON QUE SE UTILIZARÁ EL EQUIPO

3.- DESCRIPCIÓN DEL PROCESO

4.- VARIABLES CLAVES DEL PROCESO

5.- EQUIPO AUXILIAR NECESARIO PARA REALIZAR LAS PRUEBAS

6.- CALIBRACIÓN DE LOS INSTRUMENTOS o certificado de calibración

7.- CALIBRACIÓN DEL EQUIPO auxiliar o certificado de calibración

8.- VARIABLES DEL PROCESO A CONTROLAR; objetivo, criterios aceptación (valores
recomendados), procedimientos

9.- PRUEBAS DE VALIDACIÓN: tres pruebas con placebo en condiciones más adversas dentro de las
condiciones de trabajo normales (carga máxima, mínima exposición, vibración …) => demostrarán que el
proceso es reproducible y homogéneo.

1.6.5 CUALIFICACIÓN DE PRESTACIÓN (PQ)
Programa documentado para demostrar que una operación, cuando se lleva a cabo entre unos parámetros
determinados, cumplirá perfectamente la función propuesta y cumplirá los criterios de aceptación
predeterminados repetitivamente, para cada una de las localizaciones y situaciones previstas
(funcionamiento normal y extremo).

Una vez transcurrido cierto tiempo de funcionamiento, es necesario demostrar que el sistema se ha
mantenido y calibrado de forma adecuada con el fin de no perder las especificaciones funcionales.

-

1.6.6 ANÁLISIS E INFORME
Tras el cumplimiento y verificación satisfactoria de cada control y certificación, se redacta un informe
completo compilado incluyendo los resultados, fallos, revisiones, puntos mejorados, mejoras a realizar en
un futuro y las conclusiones completas.

DICTAMEN FINAL: según las conclusiones parciales de cada fase.

1.6.7 CERTIFICACIÓN
El paso final es tener el equipo y sistema certificado y aceptado por el Comité de Validación. En este
momento la instalación está validada e inspeccionable según las NCF por la FDA o la UE.

Archivo: Responsable de Validación.

1.7 OPTIMIZACIÓN DE LOS PROCESOS DE FABRICACIÓN
Otro concepto relacionado con la validación es la optimización de los procesos. Realmente, hoy nadie se
conforma con sólo validar un proceso, siempre se intenta optimizar a la vez el procedimiento de
elaboración, con lo cual se aporta alguna ventaja o mejora al proceso de fabricación sin alterar sus
especificaciones fundamentales (dosis, biodisponibilidad, etc.) en caso de productos existentes o si son
nuevos buscando una mayor eficacia y rentabilidad del proceso. Así, optimizar, será obtener una
eficiencia máxima del proceso manteniendo el estándar de calidad. La idea “siempre debería considerarse
la posibilidad de que haya una forma distinta de hacerlo mejor” (44) es una idea muy válida a tener en cuenta en los
trabajos de validación, con lo cual debería aplicarse esta metodología de optimización en las revalidaciones
periódicas o revalidación por cambios. Por otra parte no debe perderse la idea de que “un proceso óptimo es
aquél que permite obtener un producto con la calidad establecida al mínimo coste” (44); con lo cual no sólo es interesante
desde un punto de vista farmacéutico sino que la optimización es imprescindible para cualquier proyecto.
Es la gran respuesta de la validación a las personas que en sus inicios la vieron como una traba a la
competitividad económica de la empresa. Realmente la optimización demuestra que “la calidad es barata”
(15).

La optimización industrial que ha venido aplicando la industria automovilística y aeronáutica en la que la
premisa “fabricar al mínimo coste con el nivel de calidad exigido”, desde antaño ha sido una visión

- 34 -

respetada y reconocida por la sociedad, con lo cual puede servir de ejemplo para la industria alimentaria y
farmacéutica.

La calidad de diseño debería establecerse tan pronto como fuese posible durante la fase de desarrollo,
porque los cambios lote a lote cuestan tiempo y dinero. La experiencia adquirida de tales cambios conforma
el proceso de optimización, pero no puede definirse como validación. Un proceso con continuos cambios y
que no ha sido exactamente fijado no puede ser validado (45-47). Es necesario, entonces, aunar los
objetivos del departamento de desarrollo e investigación galénica con los tradicionales de un proceso de
optimización (48-49), para dar lugar a unos resultados que deberían ir en torno a:

" Confirmación de la fórmula y forma farmacéutica.

" Confirmación para empezar la fabricación de los lotes industriales.

" Descripción y fijación del proceso (parámetros de calidad, proceso, etc.).

" Bases para desarrollar la validación.

Los objetivos del desarrollo son establecer las especificaciones del producto, la calidad de diseño, los
parámetros críticos, los parámetros control de proceso, las vías de optimización y de escalado del proceso.

Los objetivos de optimización son:

" Encontrar los posibles puntos críticos de la formulación durante el desarrollo de la fórmula para evitar
que aparezcan más tarde.

" Mejorar, dentro de lo posible, los aspectos de calidad del producto.

" Marcar tolerancias para los parámetros de proceso.

" Mejorar el procedimiento de fabricación hacia un ahorro económico. Ejemplos de parámetros para
optimizar son: flujo de un granulado, tiempos de disolución, tiempos de disgregación, otros parámetros
farmacotécnicos, etc.

Por lo tanto, muchas veces se ha considerado la optimización del proceso como una consecuencia natural
del estudio de validación, que ha sido tratado científicamente en base a las variables del proceso y su control
(50).

-

1.8 HERRAMIENTAS ESTADÍSTICAS ÚTILES PARA LA
VALIDACIÓN Y LA OPTIMIZACIÓN FARMACÉUTICA
Hay muchas herramientas que pueden utilizarse como parte de una validación (51-53): cartas de control,
estudios de capacidad, diseño de experimentos, análisis de tolerancias, diseño de métodos robustos, análisis
modal de fallos y efectos, planes de muestreo y pruebas de fallos. Se ha preparado un resumen de las
mismas en el cuadro 8.

Aunque es útil detenerse en las causas de las no conformidades del laboratorio farmacéutico, éstas suelen
ocurrir por errores que cometen los operadores (entonces evitables) o por exceso de variación del
proceso (más difíciles de evitar). Obtener un proceso que cumpla repetitivamente las especificaciones
requiere una aproximación equilibrada usando herramientas de pruebas de fallos y de reducción de la
variabilidad. Cuando una falta de conformidad ocurre a causa de un error, debería utilizarse métodos de
pruebas de fallos. Estos métodos intentan hacer imposible que ocurra un error o al menos que si ocurre no
sea indetectable.

Sin embargo, algunas no conformidades no son resultados de errores, sino que son resultado de
variabilidades excesivas del proceso. Para reducir la variación y dirigir adecuadamente un proceso se
requiere identificar el proceso y sus características controlando las entradas variables (imputs) y
estableciendo controles en dichas entradas para asegurar que las salidas (outputs) cumplan los
requerimientos. Una respuesta del plan de validación es el desarrollo de un plan de control: la fase final del
proceso de validación requiere demostrar que el plan funciona (es decir que el proceso proporciona los
resultados previstos). Una herramienta será el estudio de capacidad de calidad de un proceso o de una
máquina (54-58) concreta. Un estudio de capacidad mide la aptitud para cumplir la especificación
repetitivamente11. Esta herramienta es apropiada para características mensurables donde la ausencia de
conformidad se debe a variaciones fuera de control o a la variabilidad del proceso. El análisis debe realizarse
no sólo en condiciones normales, sino también para las condiciones peores (worst case); así en caso de
errores potenciales durante la fabricación, las pruebas pueden demostrar que los métodos designados para
prevenir los errores funcionan.

Los índices de capacidad de máquina relacionan las tolerancias del producto (Cp) o el nivel de centraje de la

11 Demostrar que los datos numéricos generales para cada parámetro crítico están entre los límites estadísticos de control (es decir ± 3
desviaciones estándares) y que no existe una causa de variación asignable al proceso.

- 36 -

máquina en el valor nominal (Cpk) con la capacidad de la máquina respecto a la variable estudiada. Se
considera que un proceso es capaz siempre que el índice supere la unidad. Aunque actualmente el grado de
exigencia de calidad en el sector farmacéutico impone que supere 1,33 para decir que una máquina es capaz
(± 4σ), mientras que para el proceso se asigna 1,0 (± 3σ). En otras industrias incluso se requiere superar
1,67 (± 5σ) y las últimas tendencias en ingeniería de calidad requieren 2 (±6σ).

LTS − LTI
Cp =
6σ

 LTS − m   LTI − m 
Cpk = valor mín  ó
 3σ   3σ 
  

LTS = Límite tolerancia superior
LTI = Límite de tolerancia inferior
m = media del proceso
σ = desviación estándar del proceso.
El Cpk indica la dispersión del proceso además de controlar que no se excedan las especificaciones, ya que
un proceso descentrado puede dar un valor de Cp mayor de uno y sin embargo existir valores que se salgan
del intervalo de tolerancia.

Cuanto más centrado se encuentre el proceso más se acercará la media al valor nominal, por lo que Cpk,
siempre será menor que Cp, pudiendo llegar a ser cero, si estuviese el proceso centrado sobre un extremo
del intervalo de tolerancias y negativo si se encontrara fuera de tolerancias.

Los planes de muestreo pueden usarse para optimizar el número de muestras que han de ser controladas y
demostrar con ellas que se cumple la especificación. Una nueva tendencia en ingeniería de calidad es
plantear que el proceso esté centrado en la especificación y que a cada lado del valor nominal quede un
margen de 6 sigmas (es decir 6 desviaciones estándares del proceso), lo cual aseguraría que el 99,999 % de la
producción cumplirá tolerancias o lo que es lo mismo sólo 0,002 unidades por millón de las producidas
tiene probabilidad de ser defectuosa lo que es lo mismo que decir que habrá cero defectos; el problema para
aplicar esta metodología en el laboratorio farmacéutico es que es muy difícil o improbable que las máquinas
tradicionales lo cumplan, ya que algunas ya presentaban problemas para cumplir tres sigmas a cada lado del
valor nominal, en este caso (considerado correcto a principios de los 90) la seguridad aceptable era que si se
cumplía el 99,73% de los productos probablemente serán correctos, pero según la probabilidad 2700

-

productos de cada millón serán defectuosos respecto a esta especificación (59), número inaceptable para
otras industrias (electrónica, aeronáutica,…) pero no para la industria farmacéutica.

El objetivo se basará, para las características medibles de los productos farmacéuticos, en optimizar la media
y reducir la variación del proceso. Optimizar el proceso puede ser centrarlo, maximizar o minimizar la
media según convenga. Pero en todos los casos se requiere asegurar que todas las unidades están dentro de
especificaciones. Reducir las variaciones requiere que se alcance un proceso capaz y estable y que se
mantenga entre especificaciones. A pesar de la gran variedad de herramientas estadísticas aplicables a la
validación y optimización de los procesos, es de resaltar que la mayoría de trabajos publicados para la
optimización de comprimidos utilizan el diseño factorial (60, 61) y las superficies de respuesta (62) por su
sencillez y fácil aplicación, frente a otros métodos de mezclas o combinatorias más elaboradas (63, 64).

- 38 -

HERRAMIENTA CARACTERÍSTICAS DE LA HERRAMIENTA APLICACIÓN EN TECNOLOGÍA
FARMACÉUTICA
Plan de muestreo estadístico Mediante una muestra representativa se rechaza o aprueba un lote de producto El resultado permite dar resultados del tipo: “con un 95%
de confianza el defecto está por debajo del 1%”.
Estadística paramétrica Estudio estadístico para determinar si existen diferencias significativas entre Decidir si existen diferencias significativas entre
(t Student) resultados, muestras de poblaciones, etc. operadores, dosificadores, etc.
Análisis de la media (ANOM) Estudio estadístico para determinar si existen diferencias significativas entre Decidir si existen diferencias significativas entre
instrumentos, etc. operadores, dosificadores, etc.
Análisis de la variancia Estudio estadístico para determinar si existen diferencias significativas entre Decidir si existen diferencias significativas entre
(ANOVA) instrumentos, etc. operadores, dosificadores, etc. Para demostrar que los
resultados obtenidos cumplen las especificaciones.
Estudios de capacidad del Se toman pequeñas muestras durante el proceso, se calcula la media y su intervalo y Para determinar si los procesos o equipos son estables:
proceso se representan gráficamente respecto al tiempo. Indicadores: Cp y Cpk (12). media centrada y variación pequeña.
Control de fallos Se provocan fallos en el proceso para estudiar que reacciona de forma correcta. Útil para comprobar la estabilidad y fiabilidad del proceso
bajo control ante “el peor caso posible” (WORST CASE).
Intercambio de componentes Se comprueban qué causas provocan la diferencia entre dos unidades de producto, Útil para determinar variables críticas más importantes del
(PCA) introduciendo reducciones en los componentes. El análisis se lleva a cabo mediante proceso.
tablas y gráficas especialmente diseñadas.
Gráfica de control Para detectar cambios de condiciones durante el proceso. Se toman 5 unidades Útil en validación retrospectiva y concurrente, para
consecutivas, se calcula su media y su intervalo y se registran gráficamente. En la determinar las causas de variación del proceso.
gráfica se dibujan los límites de control, entre los que se deben mantener los puntos;
si se superan indicarán que ha existido un cambio y por lo tanto debe ser investigado
para determinar y anular la causa.
La estabilidad de la media indica si el proceso cambia, mientras que la estabilidad en
el intervalo indica que la variabilidad del proceso no aumenta.
Diseño de experimentos (doe) Supone introducir cambios controlados en 1 o 2 variables del proceso y comprobar Optimización de fabricación y en el desarrollo de formas
farmacéuticas: encontrar las variables que más afectan a la

12 Cumplir un C >1,33 implica que el proceso puede dar 64 productos no conformes sobre 1 millón de producidos.
pK

CAPÍTULO 1: VALIDACIÓN FARMACÉUTICA - 39 -

el cambio en 1 o 2 respuestas del proceso, para establecer la relación más interesante. calidad.
Utiliza: investigación de experimentos, estudios de superficie de respuesta y el análisis
de la variancia.
APROXIMACIÓN AL Se realizan estudios de superficie de respuesta para modelar la media y la variación Optimización de fórmulas y de fabricación.
DISEÑO ROBUSTO POR del proceso por separado. Los resultados se utilizan para obtener márgenes de las
RESPUESTA DUAL variables que minimicen la variación y centren la respuesta en el intervalo de control.
ANÁLISIS DE CAUSAS Y Análisis sistemático de fallos potenciales. Incluye la identificación de modelos de Útil en el diseño del proceso para identificar problemas
EFECTOS (FMEA) fallos, determinación de causas y consecuencias y el desarrollo de un análisis de potenciales.
riesgos asociados. Incluye establecer un plan de control detallado y el registro de las
acciones correctoras y controles implementados.
Se inicia desde el nivel de componentes (enfoque desde arriba) empezando con fallos
potenciales y desarrollándolo hasta sus consecuencias.
ÁRBOL DE ANÁLISIS DE Se listan las posibles consecuencias y se investigan hasta acabar en las causas. Caracterización del proceso: determinar las variables
FALLOS o “DIAGRAMA DE críticas, para eliminar las causas de problemas.
Los factores ( y sus distintos niveles) que pueden influir en la calidad o consistencia
ESPINA DE PEZ”
se listan y ensayan para conocer su efecto sobre la variable final.
ESTUDIOS DE Se estudia la precisión y exactitud de un equipo de medida y la reproducibilidad con Imprescindible para cualquier resultado farmacéutico.
CALIBRACIÓN respecto a diferentes operadores.
MÉTODOS DE ENSAYO DE Se disponen autocontroles o verificaciones dentro del proceso que hacen imposible Util en control de proceso, al detectarse se para la
ERRORES que ocurra un defecto o que si ocurre sea imposible que no se detecte. máquina.
HISTOGRAMAS, Gráficamente se determina cual es la principal causa de variación del proceso para su Útil para determinar las características críticas del proceso y
GRÁFICO control. eliminar las causas principales de error.
MULTIVARIANTE O DE
PARETO 13
ESTUDIO DE SUPERFICIES Modelo basado en establecer relaciones entre los valores de las variables de entrada y Muy útil en diseño factorial, para desarrollo de formas
DE RESPUESTA sus respuestas en las variables de salida. El proceso se experimenta en diferentes farmacéuticas.
sentidos (denominados diseños factoriales/trials) y se establece la ecuación que ajusta
Útil para la optimización del nº de variables para control
la relación entre variables de entrada y de salida. La ecuación se utiliza para buscar la

13 Pareto demostró que el 80% de la variación de un proceso es causada por sólo el 20% de las variables.

- 40 -

relación óptima usando los métodos de diseño robusto y estableciendo intervalos del proceso.
operativos usando análisis de tolerancias. El número de ensayos dependerá del
número de variables a estudiar, por lo que es importante introducir las mínimas
variables de entrada pero asegurando que sean las críticas, ya que si no el estudio
perdería valor. Para ello se suele utilizar un estudio previo (screening) para determinar
las variables críticas.
DISEÑO ROBUSTO Se trata de reducir las variaciones basándose en ajustar los blancos (targets). El Muy útil en diseño factorial, para desarrollo de formas
objetivo se propone seleccionar los blancos para las entradas de manera que resulte farmacéuticas.
un cumplimiento con una mínima variación (incluye los tres siguientes).
del proceso.
ANÁLISIS DE Implica desarrollar un diseño experimental para modelar la media de la variable de Muy útil en diseño factorial, para desarrollo de formas
TOLERANCIAS salida y entonces usando una aproximación estadística al análisis de tolerancias farmacéuticas.
predecir la variación de la variable de salida. Requiere estimar la cantidad que las
variables de entrada variarán durante la fabricación a largo término.
del proceso.
SELECCIÓN DE El objetivo principal es determinar las variables críticas. Se desarrolla el experimento Determinar las variables críticas del proceso.
EXPERIMENTOS O con diferentes valores para las entradas (ensayos) y medir los resultados en las
DISEÑOS FACTORIALES variables de salida. Con esto se puede definir que variables de entrada afectan a los
FRACCIONADOS (29, 34) resultados. Normalmente se necesitan dos ensayos por variable y así se simplifica el
tiempo, se recomienda empezar con todas las posibles variables hasta encontrar las
importantes. Las superficies de respuesta ayudan a determinar estas relaciones.
MÉTODO DE TAGUCHI Se desarrollan diseños experimentales para entender profundamente la relación entre Muy útil en diseño factorial, para desarrollo de formas
las entradas y las respuestas en la media y la variación. Los resultados se utilizan para farmacéuticas.
centrar la media y disminuir la variación. En este caso las entradas deben variarse con
pequeñas modificaciones de unas a otras para parecerse a una fabricación.
del proceso.
ANÁLISIS DE Se establecen márgenes de trabajo para las variables de entrada que aseguren que los Optimización del proceso de elaboración y su autocontrol.
TOLERANCIAS resultados serán conformes. Es necesario disponer de una ecuación que relacione
entradas y salidas (si no es posible utilizar una superficie de respuesta). Deben
establecerse intervalos (mediante estudios de capacidad) para las entradas que deben
controlarse y comprobar el intervalo para los resultados. Si el intervalo no entra en las
tolerancias del proceso, se deben estrechar los intervalos de las entradas hasta

CAPÍTULO 1: VALIDACIÓN FARMACÉUTICA - 41 -

conseguir que los resultados entren dentro de tolerancias.
ANÁLISIS DE LA Se estima la contribución a la variabilidad de diferentes superficies de variación.
VARIANCIA DE
COMPONENTES
REGRESIÓN MÚLTIPLE Se busca la mejor relación variable y respuesta. Conocer las variables independientes del proceso.
GRÁFICAS DE BURBUJA Representación gráfica de 4 variables del experimento. Conocer el proceso y la incidencia de las variables en el
mismo.
FUNCIÓN ANDREW’S Se calcula una función que relacione los experimentos. Optimización, separación de grupos.

Cuadro 8: Herramientas estadísticas útiles para la validación u optimización farmacéutica.

- 42 -

1.9 ¿Y DESPUÉS DE LA VALIDACIÓN QUÉ…?
Después de lo expuesto, se puede comprobar la incidencia e implicación económica de las validaciones en
la rentabilidad empresarial del laboratorio farmacéutico; tanto el trabajo como los recursos destinados a la
validación como el desembolso al adquirir nuevos equipos están perfectamente compensados por la
seguridad de obtener un producto final de calidad.

El principal objetivo de cualquier empresa, farmacéutica o no, es producir productos de calidad al mínimo
coste posible. Para lograr este objetivo la filosofía de la validación es esencial. En la industria farmacéutica
utiliza materiales caros, instalaciones y equipos sofisticados y personal altamente cualificado, todo lo cual
hace imprescindible el uso eficiente de estos recursos para la supervivencia de la compañía. El coste de los
fallos de producto (rechazos, reprocesos, retiradas, reclamaciones) es una parte significativa del coste directo
de producción. Y éste es uno de los únicos puntos de que se dispone para mejorar la productividad (50) y la
competitividad en la industria del futuro. La industria farmacéutica y su ámbito está movilizada para definir
y realizar una mejor validación con un mínimo coste (65).

La experiencia demuestra que la necesidad de validar debe unirse a otros ámbitos de la industria:

! Integración de las estrategias de validación en la estrategia industrial y económica.
! Transferencia o reagrupamiento de lugares de producción con modificaciones o revalidaciones de los
equipos. Puntualizar claramente las modificaciones y su documentación para hacerlos conforme a la
reglamentación en vigor. Establecer la estrategia de validación para una transferencia o cambio de equipo,
de ingredientes, de tamaño de lote, etc. Analizar y definir la necesidad real de la validación y ejecutar la
validación.
! Nuevos sistemas de soporte de validación para equipos complejos proporcionados por proveedores
(por ej. máquinas de comprimir automatizadas, líneas de acondicionado, etc.).
! La liberación paramétrica para un proceso del cual está totalmente controlada su evolución.
Y como consideración final, vale la pena reflexionar sobre las consideraciones trasmitidas por el profesor
Cemeli en la conclusión de su capítulo (11):

“…la validación tiende a garantizar la calidad del medicamento. Exige un cúmulo de requisitos que deben cumplirse en cada
momento de fabricación y control, a base de comprobaciones lógicamente establecidas y rígidamente verificadas. No
obstante no constituye innovación en modo alguno, pues desde siempre la industria farmacéutica consciente de su
grado de responsabilidad, ha actuado en el sentido de vigilar y mejorar la calidad del medicamento”.

CAPÍTULO 1: VALIDACIÓN FARMACÉUTICA -
43 -

1.10 BIBLIOGRAFÍA

18 Neal C. Back to the basics. A philosophical overview. Journal of
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53 Dills D. Quality Tools. Statistical Process control and its use in

-2-

Para su diseño se necesita establecer una modelización matemática del proceso que se pretende simular
mediante la tecnología informática. Para ello, se ha escogido y desarrollado una formulación sencilla de la
forma farmacéutica comprimidos, que fue dividida en diversos sistemas que, a su vez, fueron estudiados en
profundidad (para lo cual se ha desarrollado la cualificación de todos los equipos que integraban cada uno
de los sistemas y la validación del proceso de fabricación y de análisis). Toda esta experimentación llevada a
acabo en tiempo real, a fin de pormenorizar al máximo todas las pruebas, características y requerimientos
que están establecidos para una especialidad farmacéutica habitual. Y ha servido para desarrollar algunas
clases prácticas de laboratorio de dos asignaturas del departamento.

El Plan de Trabajo se ha establecido para cumplir los siguientes subobjetivos:

! Desarrollar una fórmula de comprimidos sencilla aplicable a las prácticas de la asignatura Farmacia
Galénica II. Este desarrollo implica:

" Fase de formulación: en la cual se estudian las características de los ingredientes de la fórmula (capítulo
2).

" Fase de desarrollo analítico: en la cual se obtiene y optimiza un método de control validado para el
principio activo y la forma farmacéutica desarrollada (capítulo 3).

" Fase de desarrollo farmacotécnico (I): formulación y compatibilidad: en la cual se desarrolla y ajusta la fórmula y
se completan los estudios de compatibilidad (capítulo 4).

" Fase de desarrollo farmacotécnico (II): cualificación del proceso: en la cual se cualifican los equipos implicados
en la producción (capítulo 5).

" Fase de desarrollo farmacotécnico (III): optimización del proceso: en la cual se establecen los márgenes de
elaboración y de seguridad (capítulo 6).

" Fase de validación prospectiva: en la cual se fabrican y analizan tres lotes y se redacta la guía definitiva
(capítulo 7).

" Fase de validación retrospectiva: en la cual se analizan los datos obtenidos en los lotes fabricados en las
prácticas por alumnos de la licenciatura (capítulo 8).

# Desarrollar una técnica analítica sencilla y robusta aplicable a las prácticas de Farmacia Galénica III.

$ Aplicar las Normas de Correcta Fabricación (NCF) en todo el proceso de fabricación (implementando


PNT1, guías de fabricación,…) tanto en el SDM2 (Servei de Desenvolupament del Medicament) como en
los laboratorios de prácticas previamente mencionadas.

% Cualificar y optimizar el proceso de fabricación de los comprimidos de paracetamol.

& Validar el proceso de fabricación: prospectiva y retrospectivamente.

- validación prospectiva del proceso:

' validación del método de análisis

' validación del proceso de fabricación

- validación retrospectiva (análisis de los datos de los lotes fabricados por los alumnos):

' datos de fabricación frente a datos de análisis

( Obtener un modelo informático como base del programa de simulación multimedia del proceso de
fabricación anterior.

) Evaluar la Aplicación Interactiva Multimedia desarrollada.

* Discusión y conclusiones.

Los planes de estudio universitarios se han ido reforzando con la voluntad de ofrecer a los estudiantes una
enseñanza de calidad orientada a una formación adecuada a las perspectivas que demanda la sociedad. Las
sucesivas reformas suponen la reorientación de los enfoques tradicionales, superando planteamientos
exclusivamente teóricos, y aumentando el carácter aplicado de las materias. Con la utilización de las nuevas
tecnologías multimedia, podrá disponerse de materiales pedagógicos capaces de ofrecer temas, detalles o
información que escapa de los objetivos de la clase tradicional. Estos materiales facilitarán a los estudiantes
otras vías opcionales de aprendizaje. Con la asistencia de estos materiales el profesor puede disponer de una
gama de recursos considerablemente mayor, aunque la responsabilidad en estos momentos recae en los
propios docentes, ya que los sistemas educativos no se adaptan a los cambios tecnológicos con la rapidez

1 A partir de ahora se utilizarán las siglas NCF para hacer referencia a Normas de Correcta Fabricación y PNT para Procedimientos
Normalizados de Trabajo.
2 Planta piloto de la Universidad de Barcelona, Facultat de Farmàcia, inaugurada en 1996.

-4-

con que cambia su entorno y cuando lo han hecho de forma impuesta, han traído al aula la llamada
“tecnofobia”.

Existen muchos ejemplos de la enseñanza multimedia con óptimos resultados. Los ámbitos más comunes o
de mayor implantación de estas tecnologías a la formación son la educación de adultos y la educación
escolar, aunque progresivamente están llegando a todas las áreas de la enseñanza, incluida la universitaria (1-
7). Por otra parte, según la base de datos TESEO (del Ministerio de Educación Cultura y Deporte) en
nuestro país se han defendido 40 tesis doctorales sobre la temática multimedia; 5 de ellas desarrollaron
sistemas de experto especialmente dirigidos a la enseñanza de la medicina, más concretamente 3 a
radiodiagnóstico y 2 simuladores para casos clínicos. Todas ellas concluyen la validez, adecuabilidad e
idoneidad de la utilización de herramientas multimedia como material didáctico para la enseñanza a nivel
universitario de materias de Ciencias de la Salud.

Otro punto interesante que aportan las tecnologías multimedia aplicadas a la educación es el económico: si
se demuestra su validez para la enseñanza práctica, será posible formar a los profesionales en todos los
campos de la tecnología farmacéutica1… Con el presente trabajo se aporta un acercamiento real, práctico y
útil que supone el aprovechamiento de las nuevas tecnologías de la información para la enseñanza
universitaria de la tecnología farmacéutica y se investiga pedagógicamente la aplicabilidad del sistema y su
validez.

En resumen en la presente memoria se estudiará en una primera fase la filosofía de la validación
farmacéutica, las diferentes metodologías y aplicaciones aplicadas hasta el momento. La segunda fase la
componen varios capítulos y servirá para definir el producto farmacéutico que servirá como base para la
programación de la tercera fase. La última parte del trabajo está compuesta por el estudio de los precedentes
tecnológicos a fin de transponerlos a la tecnología multimedia y analizar los resultados obtenidos con los
grupos piloto de alumnos. Con lo cual el trabajo ha sido dirigido a mejorar y optimizar (y en consecuencia
demostrar) que la tecnología multimedia es perfectamente aplicable a la enseñanza de las ciencias.

1 Un ejemplo típico (prohibitivo por sus connotaciones de contaminación y coste) sería la fabricación de medicamentos estériles. Mediante la
tecnología multimedia es posible disponer de unidades didácticas prácticas especialmente preparadas para la ejercitación de los futuros
profesionales, con las cuales de podrá profundizar en el proceso tecnológico y en las Normas de Correcta Fabricación (NCF).


BIBLIOGRAFÍA:
1 Jornades de Creativitat a l’Ensenyament Universitari. Barcelona,
5-7 octubre del 2000
2 II Jornades Multimedia Educativa. Barcelona, 5-7 julio de 2000
31er Congreso Internacional: “Docencia Universitaria e
Innovación”. Barcelona, 26-28 junio de 2000
4 Primera Trobada de Professors de Ciències de la Salut (20-21
/enero/2000). Campus de Bellvitge. Universitat de Barcelona.
5 IV Jornada sobre la Docència Universitària, dedicada al tema
Noves Tecnologies en la Docència Universitària. Barcelona, 7
novembre del 2000.
6 Primera Jornada de la Reflexió a la innovació pedagògica en
l’ensenyament de ciències aplicades a Farmàcia. Universitat de
Barcelona. Facultat de Farmàcia. Barcelona, 13 de febrero de
1998.
7 I Jornades Multimèdia Educatiu. Institut de Ciències de
l’Educació. Barcelona, 5-7 julio de 1999.

CAPÍTULO 2: DESARROLLO FARMACOTÉCNICOS (I): FASE DE PREFORMULACIÓN - 45 -

Capítulo 2:

DESARROLLO FARMACOTÉCNICO (I): FASE DE
PREFORMULACIÓN

2.1. INTRODUCCIÓN: JUSTIFICACIÓN DEL PRINCIPIO ACTIVO
Actualmente más de la mitad de los medicamentos se administran en la forma farmacéutica comprimidos.
La justificación de ello radica en las numerosas ventajas que presenta frente a otras formas farmacéuticas,
ya que desde un punto de vista industrial es la forma farmacéutica con una fabricación industrial más fácil a
gran escala gracias al desarrollo de su mecanización. El principio de la fabricación de los comprimidos es
muy sencillo, pero por contra su realización suele ser bastante compleja: no es suficiente con situar una
dosis de polvo en una matriz de una máquina de comprimir y comprimirla con los punzones. Para obtener
un comprimido es necesario que el polvo tenga unas propiedades físicas y mecánicas1 muy específicas (1, 2).

El punto de partida, pues, se encuentra en desarrollar unos comprimidos reproducibles desde el punto de
vista galénico, es decir que ante cualquier eventualidad de fabricación o control (por otra parte, hecho
habitual en la enseñanza práctica de la galénica) no se malogre el obtener los comprimidos dentro de
especificaciones. El proceso de desarrollo estudiado en detalle debe aportar datos suficientes para ser
transcrito como un modelo matemático y así obtener una simulación de su proceso de fabricación. Toda

1
Estas propiedades ( 1, 2) son: la capacidad de fluidez (libre y uniforme), la capacidad de apilamiento y la compresibilidad (capacidad de
compresión).

- 46 -

formulación deberá pasar por unas etapas de optimización. Se inicia con una preformulación tentativa, en
que se considera la dosis de principio activo y tamaño final del comprimido. Igualmente se tendrá en
cuenta la finalidad del comprimido, las incompatibilidades entre los componentes y los caracteres
reológicos de los mismos. Tras diversas aproximaciones sucesivas de perfeccionamiento, se llegará a la
fórmula definitiva.

ALMACÉN MATERIAL
ALMACEN DE MATERIAS PRIMAS LIBERADAS ACONDICIONAMIENTO
APROBADO
MEZCLA
MATERIAS PRIMAS EXCIPIENTES
EXTRAGRANULAR MATERIAL ACONDICIONAMIENTO

A PESADAS
BLISTER CARTONAJE Y
TAMIZADO PVC/ALU PROSPECTO
EXCIPIENTES SOLUCION
INTRAGRANULAR AGLUTINANTE

R MEZCLADO
P.A.-EXCIPIENTES

CC

VÍA VÍA COMPRESIÓN
SECA HÚMEDA DIRECTA

COMPRESION

AMASADO

PRECOMPRESIÓN
CP
GRANULACIÓN
HÚMEDA

CUARENTENA
A SECADO

GRANULACIÓN
SECA TAMIZACIÓN CC

GRANULACIÓN CP

EMBLISTADO

R MEZCLA FINAL R

ALMACEN
PRODUCTO CP
ACABADO

R
ANÁLISIS
Y LIBERACIÓN CC ACONDICIONADO
LOTE CUARENTENA

A: ARCHIVO
R: RENDIMIENTO
CP: CONTROL DE PROCESO
CC: CONTROL DE CALIDAD
VÍAS DE FABRICACIÓN DE COMPRIMIDOS

Cuadro 1: Secuencia de operaciones en la elaboración de comprimidos

Entre las diferentes posibilidades de principios activos, se escogió el paracetamol, por tratarse de una
sustancia relativamente asequible y accesible, con suficiente bibliografía publicada tanto analítica como


galénica (3) para facilitar establecer un modelo. Al limitar la variabilidad del principio activo se pretendió
evitar variabilidades aleatorias que pudieran influir en el establecimiento del modelo informático de
simulación. Además este principio activo también es escogido repetidamente para modelar estudios de
compresión (por ejemplo el estudio de varios almidones pregelatinizados, (4)) y es uno de los principios
activos más utilizados hoy en día en la práctica sanitaria. La dosis escogida fue 150 mg ya que es una dosis
pediátrica de la que existen bastantes productos comercializados) e interesaba fabricar comprimidos
pequeños para no elevar los costes de la práctica pero se quiso mantener el carácter de “realidad”
(pedagógicamente es más motivador conocer que lo que se hace es útil...).

Se estableció como vía de fabricación, la granulación por vía húmeda acuosa, con la finalidad de que al ser
una aplicación informática eminentemente educativa, los alumnos desarrollasen su formación con el
método más completo, pudiéndose así estudiar más equipos y completar más controles de proceso (ver
cuadro 1).

2.2. CARACTERIZACIÓN DEL PRINCIPIO ACTIVO

2.2.1. CARACTERIZACIÓN FARMACOLÓGICA (5-17)

Se trata de un derivado sintético del para-aminofenol, con propiedades analgésicas y antipiréticas, pero sin
actividad antiinflamatoria. Se administra por vía oral o rectal en el tratamiento del dolor leve o moderado y
para la fiebre. Es el analgésico de elección en pacientes para los cuales están contraindicados los salicilatos
u otros antiinflamatorios no esteroídicos, tales como asmáticos, individuos con historial de úlcera péptica,
o en niños en los que los salicilatos no se pueden utilizar debido al riesgo del síndrome de Reye. Por ello se
le considera uno de los antitérmicos-analgésicos más seguros y eficaces de la farmacoterapéutica actual.

El paracetamol se usa extensamente como analgésico y antipirético, sobre todo en mezclas con otros
analgésicos (ácido acetilsalicílico, fenazona, amidopirina, etc.), estimulantes (cafeína), antitusivos (codeína),
etc. Se ha demostrado su eficacia en el tratamiento de dolores de tipo agudo, con lo cual constituye uno de
los fármacos más utilizados para combatir procesos con dolor agudo de intensidad moderada y asociado
con codeína para dolores intensos. También se recomienda para el tratamiento del dolor crónico
(enfermedades reumáticas). Incluso la OMS lo considera tratamiento de primera elección farmacológica
para el dolor neoplásico.

- 48 -

La estructura de acetaminofeno es la que le confiere actividad antipirética, pero la anilina posee elevada
toxicidad para usarla en clínica. El acetaminofeno es el metabolito que se produce a partir de la acetanilida
y la fenacetina (pero no se recomienda su uso ya que ambas producen metahemoglobina). Por ello se
introduce un grupo acetilo en el grupo amino para reducir la toxicidad manteniendo la acción antipirética
(ver cuadro 2). El mecanismo de acción del paracetamol no está determinado totalmente. Actúa inhibiendo
la síntesis de prostaglandinas en el sistema nervioso central (SNC) especialmente en el tálamo y
bloqueando la generación de los impulsos dolorosos a nivel periférico.

Cuadro 2: Metabolismo del p-aminofenol
La antipiresis se debe a la acción del paracetamol sobre el centro hipotalámico regulador de la temperatura
del SNC, para producir una vasodilatación periférica que da lugar a un aumento del flujo de sangre a la piel,
de sudoración y de pérdida de calor. La acción central puede incluir la inhibición de la síntesis de
prostaglandinas en el hipotálamo.


2.2.1.1. CARACTERÍSTICAS FARMACOCINÉTICAS (5-11, 18-20)

El acetaminofeno se absorbe rápidamente y casi por completo en el tracto gastrointestinal . Cuando se
administran pequeñas dosis la absorción varía considerablemente con la velocidad de vaciado gástrico y la
presencia de alimentos (en este caso se retrasa). Se distribuye de manera relativamente uniforme por la
mayor parte de líquidos corporales (saliva,...), a excepción del adiposo y su conjugación a proteínas
plasmáticas es de un 10%, siempre que se superen las concentraciones de 60 µg/ml en plasma.

Experimenta metabolismo de primer paso y se metaboliza principalmente por conjugación para formar
glucurónidos, sulfatos o conjugados de la cisteína. La 3-hidroxilación también ocurre seguida de
conjugación u o-metilación del grupo hidroxilo.

Las vías principales de biotransformación (por los enzimas microsómicos hepáticos) son:

! desacetilación: formando metabolitos que dan lugar a metahemoglobina y otros metabolitos tóxicos,

! acetaminofeno conjugado (glucuronato y sulfato).

Aproximadamente el 2% se excreta inalterado por la orina (cuadro 3). Los conjugados glucurónico (20-
30%) y sulfato (40-60%) no son tóxicos y representan un 95% del producto excretado. Un 3% se oxida
por el sistema citocromo P450 hepático a un intermediario químicamente reactivo (probablemente la N-
acetilbenzoquinona o n-acetilbenzoquinoneimida) que se combina con el glutation hepático para dar una
sustancia atóxica: conjugado de la cisteína y el ácido mercaptopúrico.

En caso de dosis masivas únicas de paracetamol, el glutation hepático se agota y el intermediario arilante
(imidoquinona (16) reactivo en exceso se fija (hasta 10-12 días después de la dosis) mediante enlaces
covalentes a las macromoléculas hepatocelulares ocasionando necrosis del tejido hepático.

- 50 -

METABOLITOS EXCRETADOS EN ORINA

1-4 % paracetamol inalterado

<1% 3-metiltio-4-OH-acetanilida

20-30% conjugado sulfato

40-60% conjugado glucurónico

5-10%  3-OH-3-sulfato

 3- metoxiglucuronato

 3- metoxisulfato

5-10% conjugado cisteína y ácido mercaptopurínico

Cuadro 3: Metabolitos del paracetamol.
También se ha descubierto un conjugado con cisteína y metabolitos producidos por hidroxilación y
desacetilación. Los metabolitos hidroxilados son la base de la formación de la metahemoglobina y la
hepatoxicidad.

Los parámetros farmacocinéticos característicos son:

! biodisponibilidad: 75-90%

! semivida de eliminación: 1,5-3 horas

! tmáxima: 30-90 minutos

! aclaramiento total: 4,5-5,5 mg/kg /minuto

! volumen distribución: 1l/kg

2.2.1.1.1. CONCENTRACIÓN TERAPÉUTICA
En plasma, habitualmente entre 10 y 20 µg/ml. Las concentraciones plasmáticas suelen variar según los
individuos. En algunos sujetos con la función renal deteriorada se acumulan los conjugados glucurónico y
sulfato.


2.2.1.1.2. REACCIONES ADVERSAS
A dosis terapéuticas, se observan ligeros aumentos de enzimas hepáticos sin ictericia y de tipo reversible. Se
han descrito también lesiones cutáneas y muy ocasionalmente leucopenias de diversos tipos.

Una intoxicación aguda con una dosis única de 6 g o más, puede manifestarse con mareos, náuseas,
vómitos, pérdida del apetito, dolor abdominal, somnolencia, confusión, hipotensión, sensibilidad hepática,
arritmia cardiaca, ictericia e insuficiencia renal y hepática agudas, con necrosis hepática. En estos casos se
emplea como antídoto la acetilcisteína en infusión intravenosa antes de transcurrir 8 horas después de la
ingestión masiva.

El mecanismo de la intoxicación aguda, origina un cuadro tóxico de necrosis hepática, a veces complicado
con lesiones agudas renales, cardíacas y pancreáticas. Dicha intoxicación se debe a la actividad del
metabolito reactivo arilante N-acetilbenzoquinona, cuando se ha consumido el 70-78% del glutation
hepático y ya no puede fijar el metabolito, el cual reacciona con proteínas hepáticas. La dosis hepatotóxica
en adultos es de 250 mg/kg/día y en niños no se deberían superar los 150 mg/kg/día.

2.2.1.1.3. INTERACCIONES
La absorción del paracetamol se acelera con metoclopramida. Su excreción puede verse afectada y las
concentraciones plasmáticas alteradas cuando se usa junto con probenecid.

Potencia el efecto de acenocumarol y warfarina, e inhibe la acción de bromuro de glicopirronio y bromuro
de propantelina. Potencia la toxicidad del cloranfenicol.

Su respuesta se ve alterada por barbitúricos y su efecto se inhibe por colestipol, colestiramina y estrógenos.
Se incrementa su toxicidad por alcohol etílico y se aumenta el efecto y la toxicidad por isoniazida.

El paracetamol puede alterar valores analíticos en sangre, produciendo un aumento biológico de
transaminasas (ALT y AST), fosfatasa alcalina, amoníaco, bilirrubina, creatinina, lactato deshidrogenasa
(LDH) y urea; y un aumento por interferencia analítica de glucosa, teofilina y ácido úrico. En orina origina
una reducción biológica por interferencia analítica de glucosa y un aumento por interferencia analítica de
metadrenalina y ácido úrico.

- 52 -

2.2.1.1.4 SENSIBILIDAD CRUZADA
Los pacientes que presentan problemas con el ácido salicílico pueden no presentarlos al paracetamol,
aunque se han descrito broncoespasmos causados por el paracetamol en algunos asmáticos sensibles al
ácido acetilsalicílico.

2.2.2 CARACTERIZACIÓN FÍSICO - QUÍMICA (6-8, 18-25)

Polvo cristalino, blanco, inodoro y ligeramente amargo. El paracetamol es un ácido débil..

O

HN CH3

OH

Paracetamol

Figura 1: Fórmula del paracetamol

2.2.2.1. SINONÍMIAS
acetaminofeno,
p-acetamidofenol,
p-acetaminofenol,
p-acetilaminofenol,
N-acetil-p-aminofenol,
4’-hidroxiacetanilida,
p-hidroxiacetanilida,
4-hidroxifenilacetamida,
N-(4-hidroxifenil)acetamida,
N-p-hidroxifenilacetamida.

2.2.2.2 NOMBRES GENÉRICOS
acetaminophen,


acetophenum,
paracetamolum,
paracetamol.
CAS [103-90-2]

2.2.2.3. FÓRMULA MOLECULAR
C8H9NO2 Pm: 151,16

2.2.2.4. COMPOSICIÓN ELEMENTAL (18-20)

C 63.56 % H 6.00 % N 9.27 % O 21.17%

2.2.2.5. SOLUBILIDAD (18-20, 26)

Soluble en 70 partes de agua y en 20 de agua hirviendo, en 7-10 partes de etanol, en 13 partes de acetona,
soluble en metanol, dimetilformamida, dicloruro de etileno, acetato de etilo y en soluciones de hidróxidos
alcalinos. Muy ligeramente soluble en cloroformo (1 en 50) y prácticamente insoluble en éter, éter de
petróleo, pentano, benceno y diclorometano. Una solución acuosa saturada presenta un pH entre 5,1 y 6,5,
a 25 ºC (ver cuadro 4).

DISOLVENTE TEMPERATURA SOLUBILIDAD mg /ml
20 11,3-14,5
AGUA 25 11,66-13,85
37 19,20

100 52
SOL. REGULADORA pH 6,0 37 23,8

Cuadro 4: Datos sobre la solubilidad del paracetamol.

- 54 -

2.2.2.6. PUNTO DE FUSIÓN
Dependiendo de la monografía que se trate se especifican intervalos más anchos 168- 172ºC (26) o más
estrechos 169- 170,5 ºC (18-20).

2.2.2.7. CONSTANTE DE DISOCIACIÓN (18-20)
pKa 9,5 (25 ºC)

2.2.2.8. DENSIDAD (18-20)
d21ºc = 1,293

2.2.2.9. ANÁLISIS TÉRMICO DIFERENCIAL (DTA) (19, 20)
Endoterma de fusión sobre 171 ºC

2.2.2.10. CALORIMETRÍA DIFERENCIAL DE BARRIDO (DSC) (19, 20)
Endoterma de fusión sobre 171 ºC (ver figura 11, más adelante).

Calor latente de fusión: 6.8 kcalorías /mol.


2.2.2.11. ENSAYOS COLORIMÉTRICOS (18, 27)
REACTIVO COLORACIÓN λ DE REF
MEDIDA
Cloruro férrico Violeta – Azul - (18, 19)
Reactivo de Nessler Pardo2 - (18)
Reactivo Liebermann’s Violeta - (18)
Solución etanólica de α-naftol en medio Verde 420 nm (27, 28)
alcalino
Aril acilamidasa y cresol cobre amoniacado No indicada 615 nm (20)
4N-HCl diluido con agua No indicada 395 nm (20)
5% de ácido tricloroacético y Sol. 1% de No indicada 615 nm (20)
ortocresol y 4M-NH4OH
0.05N HCl y NaClO y Sol. 2% de fenol Azul 625 nm (20)
Etanol, Sol. de NaClO, 0.1N HCl, 0.4% No indicada 625 nm (20)
NaAsO2 y Sol. 6% fenol
4N NaOH, 2M-cloruro de hidroxil amonio y No indicada 520 nm (20)
6% FeCl3
Oxidación espontánea de mezclas alcalinas de No indicada 625 nm (20)
4-aminofenol y fenol
10% HCl, 0.1M-K3(CN)6, 0.1M-fenol, y 5% No indicada 627 nm (20)
NaOH
HNO2 No indicada 430 nm (20)
2-nitroanilinadiazotizado Roja 520 nm (20)
Ciocalteau-Folin Azul 660 nm (23)
Cl3CCOOH Azul 620 nm (20)
Cuadro 5: Relación de métodos colorimétricos utilizados para el análisis del paracetamol.

2.2.2.12. SÍNTESIS INDUSTRIAL (17, 19, 20, 29)
Existen diversas vías de obtención del paracetamol, aunque la tradicional se basa en la reducción del p-
nitrofenol a p-aminofenol (por tratamiento con HCl/H2O en presencia de H2 y Pd/C como catalizador y
posterior reducción hasta pH 6 con NH4OH) el cual se acetila calentando con una mezcla de anhídrido
acético y ácido acético glacial (ver figura 2). El producto se puede purificar mediante recristalización a
partir de una mezcla de etanol y agua, agua caliente u otro disolvente apropiado.

Otra síntesis publicada (30) es la llamada Hoescht-Celonese (figura 3, parte B).

2
Textualmente en inglés brown, traducido por pardo.

- 56 -

Figura 2: Síntesis del paracetamol según la referencia 19.

Figura 3: Síntesis del paracetamol según la referencia 30.

2.2.2.13. CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA
Sistema TD (18): Rf 15 (determina paracetamol). Fase móvil: cloroformo: acetona (4:1).

Sistema TE (18): Rf 45 (determina paracetamol).

Fase móvil: acetato de etilo: metanol: solución concentrada de amoníaco (85:10: 5).

Sistema TF (18): Rf 34 (determina paracetamol). Fase móvil: acetato de etilo.

Sistema USP 24 (23)

Para determinar paracetamol en comprimidos: Fase móvil: cloruro de metileno : metanol (4:1).

Para determinar impurezas (4-aminofenol): Fase móvil: hexano : acetona (3:1).


Sistema RFE I (21) y Ph Eur III (22)

Para determinar impurezas (4-aminofenol): Fase móvil: metanol: 1,1,1-tricloroetano: éter isopropílico
(1:4:5).

Sistema Analytical Profiles (20)

Para identificar paracetamol: Fase móvil: cloroformo: isopropanol (19:5), agente revelador: solución de
ácido molibdenfosfórico (Rf = 0,40).

2.2.2.14. CROMATOGRAFÍA DE GASES
Sistema GA (18, 20): RI 1687

2.2.2.15. CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA DE ALTA PRESIÓN
Sistema HD (18):

! Columna: ODS-silica (ODS-Hypersil, 5 µm, 16 cm * 5 mm ∅interno).

! Eluyente: alcohol isopropílico: ácido fórmico 0,1 M: dihidrógeno fosfato potásico 13,61 g/l
(540:1:1000).

Sistema HW (18):

! Columna: ODS-silica (ODS-Hypersil, 5 µm, 16 cm * 5 mm ∅interno).

! Eluyente: alcohol isopropílico: ácido fórmico 0,1 M: dihidrógeno fosfato potásico 13,61 g/l
(176:1:1000).

Sistema USP 24 (23) (para valorar comprimidos o cápsulas, no para la materia prima):

! Columna L1: ODS-silica (3-10 µg, 30 cm *3,9 mm ∅interno).

! Eluyente: agua, metanol (3:1).

Sistema JPXIII (25):

! Columna: ODS-silica (ODS-Silica, 5 µm, 15 cm * 4 mm ∅interno).

! Eluyente: 0,05 mmol/l solución fosfato potásico monobásico pH 4,7 : metanol (4: 1).

- 58 -

Resumen de técnicas HPLC extraídas de la referencia 20, cuadro 6.

COLUMNA ELUYENTE FLUJO λ
DETECCIÓN
Corasil (60 cm * 2,1 mm) ác. acético: cloroformo: 1 ml/min 254
diclorometano
Bio-Rad A-27 resina 10-12µm (100 0,015 M – solución reguladora 8.5 ml/min 254 o 280
cm * 0,22 cm) acetato sódico / ácido acético a
pH 4,4
Pellidon (30 cm * 2 mm) 40 mM – solución reguladora 0.35 ml /min amperometría
fosfato pH 7,4
ODS-silica 6µm (12.5 cm * 5 o 7 Agua: metanol: ácido fórmico No indicado 254
mm) (85: 15: 0,15)
Micropack CN (15 cm * 2,1 mm) Hexano: No indicado 254
diclorometano:metanol: ácido
acético
Chrosorb SI-60 No indicado No indicado No indicado
Bondapack C18 (20 cm * 3,99 mm) Solución 3,5 % de acetonitrilo 2 ml/min 254
en solución reguladora de
acetato de sodio (pH 4)
Radial- PAK C18 (20 cm *8 mm) Acetonitrilo: metanol: agua (3:3: 1.8-2.2 254
44) ml/min
Bondapack C18 10 µm (20 cm * 3,9 1% ác. Acético-metanol- No indicado No indicado
mm) etilacetato (900:150:1)
Nucleosil 5 C18 (15 cm * 4,6 mm) Metanol: solución reguladora de 1 ml/min 240
fosfato pH 3 (4:5)
Corasil 37-50 µm C18 + precolumna Metanol: agua (15:85) 1 ml/min 240
Cuadro 6: Resumen de algunas técnicas HPLC para cuantificar Paracetamol.


2.2.2.16. ESPECTRO ULTRAVIOLETA (18-20, 26)

Solución acuosa: banda principal a 244 nm (A11 ≅ 668 a) y banda secundaria a 280 nm. La adición de ácido
no afecta a ninguna de las bandas (ver figura 4).

Figura 4: (de la referencia 20): Espectro
UV en solución acuosa.
Solución ácido clorhídrico 0,1N: máximo a 245 nm (E11≅ 661).

Solución alcalina de metanol neutralizado o hidróxido sódico 0,1 N: 257 nm (A11 = 715 a). La adición de
metóxido de sodio a la solución metanólica de paracetamol causa un deslizamiento del máximo de
absorbancia de 243 nm a 262 nm (ver figura 5).

- 60 -

Figura 5: (de la referencia 20): Espectro UV en solución alcalina.


2.2.2.17. ESPECTRO INFRARROJO (18-20, 26)
Comprimido de bromuro potásico: picos principales a las frecuencias 1657, 1612, 1565, 1506, 1263, 1227
(ver figura 6) (18). Además se pueden interpretar las siguientes bandas generales en su espectro:

Frecuencia (cm-1) Asignación
800-860 Anillo benceno sustituido en posición para
1440 
1505  Vibraciones aromáticas
1560 
1651 Enlace C=O
3160 Enlace O-H

3324 Enlace N-H

Cuadro 7: Identificación de las bandas de la molécula de paracetamol.

Figura 6 (de las referencias 19 y 20): Espectro IR del paracetamol.

- 62 -

2.2.2.18. ESPECTRO DE MASAS
Principales picos del paracetamol a 109, 151, 43, 80, 108, 81, 53, 52 (figura 7); principales picos del
conjugado de cisteína 141, 43, 183, 44, 140, 80, 108, 52; principales picos del conjugado del ácido
mercaptoúrico 43, 141, 183, 42, 87, 41, 140, 165 (18).

Figura 7: Espectro NMR H.

2.2.2.19. PERFIL DE IMPUREZAS
Las impurezas que suelen acompañar al paracetamol están relacionadas con sus precursores (cuadro 4). Las
distintas Farmacopeas destacan dos principales (19-23, 25).

! p-cloroacetanilida

! p-aminofenol o amino-4-fenol.

La monografía de la materia prima exige su análisis (por cromatografía en capa fina para la p-
cloroacetanilida o colorimétrica (21-23, 25) para el p-aminofenol) y especifica los límites máximos
(<0,001% y <0,005%, respectivamente), mientras que para los comprimidos de paracetamol, no aparece
especificación al respecto. En el cuadro 8 aparecen las diferentes impurezas relacionadas con el


paracetamol en la bibliografía (19, 20).

IMPUREZA ORIGEN
p-nitrofenol Precursor sintético
p-aminofenol Intermediario sintético
p-cloroacetanilida Impureza
p-acetoxiacetanilida Impureza de síntesis (38)
o-acetilparacetamol Impureza (por acetilación del paracetamol)
Azobenceno Producto de reducción del nitrobenceno (precursor)
Azoxibenceno Producto de reducción del nitrobenceno (precursor)
Quinona Oxidación del p-aminofenol (intermediario sintético)

Cuadro 8: Impurezas y productos de degradación del paracetamol.

2.2.2.20. ESTABILIDAD (5-7, 18-23, 25, 27)
Las principales recomendaciones de conservación que se dan en las monografías (6,7, 21, 22) son:

! mantener el producto por debajo de 40 ºC (preferiblemente entre 15 y 30 ºC),

! almacenar en recipientes herméticos y protegidos de la luz.

Analizando la influencia de los diferentes factores sobre la estabilidad del paracetamol, se ha confeccionado
el siguiente resumen (cuadro 9):

- 64 -

FACTOR REFERENCIA RESULTADO

LUZ (19) Muy sensible a la luz en solución (se disocia el enlace N-C)
(31) En solución etanólica, se mostró una importante fotodegradación, que
puede retardarse si se acondiciona en frascos topacio.
CALOR (19) En estado sólido es muy estable a Tª ≤ 45 ºC
(32) A altas temperaturas (99 ºC durante 80 minutos) aparece degradación
(Figura 7, parte b).
HUMEDAD (19) Si existen trazas del p-aminofenol, se produce degradación por hidrólisis
del p-aminofenol, que después se oxida y que al final da coloración parda o
negra, produciendo la quinonimina y sustancias relacionadas.
OXIDACIÓN (19) Relativamente estable excepto por la hidrólisis del p-aminofenol
Cuadro 8: Estabilidad del paracetamol a diferentes factores.

Figura 8: Curvas UV de degradación del paracetamol.

PARTE A: Paracetamol tratado con molibdato: espectro del producto coloreado: curva 1 (3 µg/ml) y curva 2 (5,5 µg/ml). Blanco referencia: el
reactivo. El máximo a 670 nm corresponde al azul de molibdeno formado por reducción del Mo(VI) provocado por el fármaco.

PARTE B: Paracetamol puro: Curvas 3 y 4: Paracetamol (3,0 µg/ml). Curvas 5 y 6. Paracetamol (5,5 µg /ml). Curvas 3 y 5 Paracetamol
sin tratar. Curvas 4 y 6 tratado a 99ºC y 80 minutos.

En cuanto a la estabilidad en solución, la degradación del paracetamol aparece catalizada tanto en medio
ácido como en medio básico. Se mostró degradación según cinética de reacción de primer orden tanto con
respecto a la concentración de paracetamol como con respecto a la concentración de iones hidroxilo o
hidrogeniones.


Otros ensayos sobre la estabilidad en solución, en el intervalo de pH que va de 2 a 9, mostró que el pH
entre 5 y 6 es el más estable y arrojaba valores de t½ a 25 ºC entre 19,78 y 21,80 años, mientras que a pH 2
la vida media es 0,73 años y a pH 9 de 2,3 años (19, 20).

En general las fórmulas galénicas comercializadas son adecuadas ya que, según un estudio publicado en
1991 de comprimidos de paracetamol comercializadas en España (33), de las diez formulaciones analizadas
tras 5 años en estabilidad 8 se mostraron estables y sólo dos tenían problemas con la disolución del
producto.

2.2.2.21. COMPATIBILIDAD CON OTROS PRINCIPIOS ACTIVOS
La compatibilidad con excipientes ha sido revisada en algunos trabajos, mostrándose en su mayoría como
compatibles (19). El principal problema se presenta cuando se combina el ácido acetilsalicílico en
comprimidos, ya que puede darse acetilación del p-aminofenol (34) con formación de o-acetil-p-
aminofenol y diacetil-p-aminofenol (ambos aparecen en comprimidos efervescentes a los 45 meses del
estudio de estabilidad a temperatura ambiente).

2.2.3. CARACTERIZACIÓN GALÉNICA
Según el Catálogo de Especialidades Farmacéuticas del Consejo General de Colegios Oficiales de
Farmacéuticos, las formas farmacéuticas que contienen paracetamol en el mercado español son (36):

2.2.3.1 ESPECIALIDADES FARMACÉUTICAS NACIONALES
COMERCIALIZADAS DE PARACETAMOL
2.2.3.1.1. VÍA ORAL
1. cápsulas 500 mg
2. sobre efervescente 500 mg, 1 g
3. solución (por 5 ml) 120 mg
4. gotas solución (por ml) 100 mg
5. suspensión (por 5 ml) 120 mg
6. comprimidos 160 mg, 250 mg, 500 mg, 650 mg
7. comprimidos masticables 160 mg
8. comprimidos recubiertos 500 mg
9. comprimidos efervescentes 500 mg, 1 g

- 66 -

2.2.3.1.2. VÍA RECTAL
supositorios 125 mg, 150 mg, 250 mg, 300 mg, 325 mg, 500 mg, 600 mg, 650 mg

2.2.3.2. ESPECIALIDADES EXTRANJERAS COMERCIALIZADAS DE
PARACETAMOL
Por otra parte, en la bibliografía extranjera se han encontrado las siguientes formas farmacéuticas y dosis
para el paracetamol (5):

2.2.3.2.1. VÍA ORAL
1. cápsulas 500 mg
2. cápsulas (polvo para preparar solución) 80 mg y 160 mg
3. sobre (polvo para preparar solución) 1g
4. granulado 80 mg
5. suspensión (por 5 ml) 100 mg, 160 mg
6. comprimidos 325 mg, 500 mg, 650 mg
7. comprimidos masticables 60 mg, 160 mg
8. comprimidos recubiertos 160 mg, 325 mg, 500 mg
9. liofilizado oral (35) (microencapsulado con etilcelulosa) 500 mg
10. solución (por ml) 48 mg, 100 mg
11. solución (por 5 ml) 120 mg, 130 mg, 160 mg, 167 mg

2.2.3.2.2. VÍA RECTAL
supositorios 80 mg, 120 mg, 125 mg, 325 mg, 650 mg

2.2.3.2.3. VÍA INYECTABLE
En este caso se presenta como proparacetamol (DCI) clorhidrato en la dosis de 1 g y 2 g que expresadas en
paracetamol son 500 mg y 1 g, respectivamente. Vía IM e IV (35).

Existen, a su vez, diferentes combinaciones en el mercado con otros productos, entre éstas son de destacar
por el número de especialidades existentes: las de paracetamol-AAS, paracetamol-fosfato de codeína,
paracetamol-citrato de difenilamina, paracetamol-AAS-cafeína (5, 36), paracetamol-ácido ascórbico (35).
Todo lo cual demuestra que es un principio activo muy utilizado como analgésico y de amplia difusión en
la terapéutica actual.


2.2.3.3. CARACTERÍSTICAS GALÉNICAS ESPECIALES
En este punto interesa conocer si el principio activo presenta polimorfismo, eutécticos, etc. que pudieran
influir en la solubilidad y disolución del principio activo a partir de la forma farmacéutica, etc. Y todas
aquellas características que los autores hayan detectado y pudieran influir en la formulación, para establecer
unos intervalos que faciliten su modelización posterior.

2.2.3.3.1. CARACTERÍSTICAS CRISTALINAS
En los primeros artículos (19) sobre la síntesis del paracetamol se describió que cristalizaba en forma de
cristales blancos monoclínicos. Más tarde se describieron cambios en la estructura cristalina del
paracetamol, durante el proceso de fusión.

Finalmente, se ha concluido que existen dos tipos de cristales para el paracetamol:

" Prismas hexagonales: obtenidos por cristalización con alcoholes, esteres, cetonas, agua, dioxano y
acetonitrilo.

" Agujas romboédricas finas: por cristalización con benceno, tolueno, diclorometano y otros disolventes
clorados.

Figura 9: Difracción por RX del paracetamol

- 68 -

El examen de ambos tipos de cristales por calorimetría diferencial de barrido, IR y difracción de rayos X
(figura 9), no demostró evidencia de polimorfismo ni de hidratos. Aunque estudios posteriores han
planteado la tesis de que sí son polimorfos (37) (ver figuras 10 y 11, comparativas de ambos cristales, para
los análisis DSC y difracción de rayos-X) y proponen la utilización de la forma desarrollada por ellos para
compresión directa, ya que se han mejorado las características de compresibilidad del paracetamol. Otro
estudio demostró que las características de superficie específica y velocidad de disolución del fármaco
podría modificarse o controlarse mediante la cantidad de agua de cristalización de la materia prima si
durante la cristalización se añadían aditivos (38) (en concreto la p-acetoxiacetanilida que es una impureza
de síntesis del paracetamol).

Figura 10: Polimorfos del paracetamol, análisis R-X (37).


Figura 11: Análisis por DSC del paracetamol (37).

- 70 -

2.2.3.3.2 CARACTERÍSTICAS DEL PARACETAMOL (POLVO) (19)

2.2.3.3.2.1. CARGA ESTÁTICA
Las partículas de paracetamol al fluir por una tolva adquieren carga estática negativa. Esta carga puede
reducirse si se adicionan lubricantes o pequeñas cantidades de agua (0,5%).

2.2.3.3.2.2. FLUIDEZ
La densidad aparente de los gránulos de paracetamol disminuye según se incrementa el contenido de agua.
Esto representa un aumento en la cohesión interna y causa deterioro en la capacidad de flujo. La
esferonización de los gránulos para compresión mejora la velocidad de flujo. La presencia de agua en los
gránulos de paracetamol incrementa el ángulo de reposo.

2.2.3.3.2.3. CARACTERÍSTICAS DE COMPRESIÓN
La compresión uniaxial de los cristales de paracetamol da un ciclo de presión típico, produciendo
comprimidos laminados y en capas. Los efectos de la humedad y de granulación por vía húmeda mejoran
la compresibilidad del paracetamol. Un trabajo reciente comprobó que la compresión con ultrasonidos en
la tolva facilita la compresibilidad del paracetamol, incluso más que la adición de aglutinantes (39).

2.2.3.3.2.4. POROSIDAD Y SUPERFICIE (SURFACE AREA)
Se ha demostrado que varían con el contenido en humedad y la presión de compresión.

2.2.3.3.2.5. VELOCIDAD DE DISOLUCIÓN
La disolución de muestras de paracetamol puro sigue una cinética de orden pseudo-cero a los 5 minutos.
Partículas groseras (pasadas por un tamiz de 300 µm de luz de malla) arrojan datos que se ajustan a la
cinética de raíz cúbica. Partículas finas (pasadas por un tamiz de 150-125µm de luz de malla) dan un
modelo de disolución de Weibull.


2.3. CARACTERIZACIÓN DE LOS EXCIPIENTES

2.3.1 CELULOSA MICROCRISTALINA (AVICEL® PH 101) (40)
El Avicel® PH 101 es una celulosa microcristalina que se obtiene a partir de una α-celulosa
despolimerizada de alta pureza microbiológica y química, de peso molecular alrededor de 36000 y con
fórmula empírica (C6H10O5)n donde n es aproximadamente 220.

El número de registro CAS de la celulosa es [9004-34-6].

Está formado por polvos cristalinos, de tipo poroso, de color blanco, inodoro, insípido y dotados de cierta
fluidez. Es un producto higroscópico pero estable, insoluble en agua (forma dispersiones), insoluble en
ácidos (es resistente) y en la mayoría de disolventes orgánicos (es inerte), ligeramente soluble en soluciones
de hidróxido sódico al 5% p/v (presenta hinchamiento).

Su densidad aparente es de 0,32 g/cm3 y su densidad compactada 0,45 g/cm3. El área superficial específica
es de 1,18 m2/g. El tamaño medio de partícula es de 50 µm (en el tamiz 250 µm queda retenido ≤1% y en
el tamiz de 63 µm queda retenido ≤30,0%).

Es incompatible con oxidantes fuertes. Es un producto higroscópico pero estable y debe almacenarse en
zonas de humedad controlada (secas y frescas).

Se puede utilizar como diluyente en comprimidos y cápsulas, también en procesos de compresión vía
húmeda o directa. Otras aplicaciones son como lubricante y disgregante en formulación de comprimidos.
Su uso está permitido en productos cosméticos y en productos alimentarios.

Se adjunta el certificado de análisis del proveedor (ver anexo).

- 72 -

2.3.2 ALMIDÓN DE MAÍZ (41, 42)
El almidón de maíz es un polisacárido de amilosa y amilopectina, basado en la α-glucosa (C6H10O5)n donde
n=300-1000. El número de registro CAS es [9005-25-8].

Se presenta como un polvo de color blancuzco, inodoro, insípido, como gránulos esféricos y pequeños u
ovoides de tamaño y forma característicos (característica de cada variedad botánica). Es importante
destacar que las diferentes variedades botánicas presentan diferentes relaciones amilasa / amilopectina, con
lo cual se obtienen diferencias en las propiedades físicas.

Producto muy higroscópico (es su mayor inconveniente) (43), absorbe fácilmente la humedad atmosférica
debido a que presenta valores de equilibrio relativamente altos (12-18%). Es prácticamente insoluble en
etanol frío (95%) y en agua fría. En agua a ≈73ºC a concentraciones de entre el 5 y el 10% se hincha
instantáneamente formando engrudo de almidón.

La densidad aparente del almidón es de 0,462 g/cm3 y la densidad compactada es de 0,658 g/cm3. El área
superficial específica es de 0,6-0,75 m2/g. El tamaño medio de partícula es de 17 µm (entre 2-32 µm).

No presenta incompatibilidades. Presenta una buena estabilidad en ambiente seco y sin precalentar, aunque
las pastas y soluciones de almidón son inestables y presentan fácil contaminación por microorganismos.
Estos problemas pueden ser más o menos severos en función de la variedad del almidón utilizado. En
general se debe conservar en condiciones herméticas y en ambiente seco y frío (44, 40).

El almidón es un excipiente principal dentro de las formulaciones orales como aglutinante, diluyente y
disgregante. Como diluyente se utiliza para la preparación de trituraciones estandarizadas de colorantes o
fármacos potentes para facilitar las operaciones de elaboración. En comprimidos, se utiliza como
aglutinante en la granulación por vía húmeda (engrudo de almidón entre el 5 y el 25% p/p), como
disgregante (en concentraciones entre el 3 y el 15% p/p). El engrudo de almidón se usa aplicado sobre la
piel como emoliente.



2.3.3 TALCO (45)
El talco es un silicato magnésico purificado e hidratado estable que corresponde a la fórmula Mg6(Si2O5)4
(OH)4 y puede contener pequeñas cantidades de silicato de aluminio y hierro. El número de registro CAS
es [14807-96-6].

Es un polvo cristalino muy fino, de color blanco grisáceo, inodoro, impalpable y graso al tacto, se adhiere a
la piel, es suave al tacto y libre de arena. Es prácticamente insoluble en ácidos y bases diluidas, en
disolventes orgánicos y en agua.

La densidad aparente del talco es de 0,538 g/cm3 y la densidad compactada es de 0,862 g/cm3. El área
superficial específica es de 12 m2/g.

Es incompatible con compuestos de amonio cuaternario. El talco es estable y puede ser esterilizado
mediante calor seco a 160 ºC sin exceder de una hora. También puede ser esterilizado por radiación
gamma o por exposición a óxido de etileno. Debe conservarse en contenedores bien cerrados y en un
lugar seco y frío.

El talco se usa como lubricante en formulaciones sólidas por vía oral. También se utiliza en preparaciones
tópicas como polvo, aunque no debe utilizarse como polvo en guantes quirúrgicos ya que el talco es una
materia natural frecuentemente contaminada por microorganismos. Se utiliza por sus propiedades
lubricantes en cosméticos y productos alimentarios.

El talco se utiliza principalmente en las formulaciones de comprimidos y cápsulas. Sin embargo, por vía
intranasal o intravenosa los productos que contengan talco pueden producir granulomas, especialmente en
los pulmones. Es imprescindible el uso del talco libre de asbesto (impureza habitual), ya que éste sí es
carcinogénico.

El consumo de talco en grandes cantidades produce efectos laxantes o irritantes de la mucosa.


- 74 -

2.3.4 ESTEARATO MAGNÉSICO (46)
El estearato magnésico es un compuesto de magnesio mezclado con ácidos orgánicos sólidos obtenidos de
grasas y consiste principalmente en proporciones variables de estearato magnésico (C32H70MgO4) y
palmitato magnésico (C36H66MgO4). El número de registro CAS es [557-04-0].

El estearato magnésico es un polvo fino, blanco, precipitado o molturado, impalpable de baja densidad
aparente y presenta un ligero olor y un gusto característico. El polvo es graso al tacto y se adhiere a la piel.
Es prácticamente insoluble en etanol (95%), éter y agua, ligeramente soluble en benceno caliente o etanol
caliente (95%).

La densidad aparente del estearato de magnesio de 0,143 g/cm3 y la densidad compactada es de 0,224
g/cm3. El área superficial específica es de 2,45-16,0 m2/g.

El estearato magnésico es incompatible con ácidos fuertes, bases fuertes y sales de hierro. No se debe
mezclar con materiales fuertemente oxidantes. Es estable, se debe guardar en recipientes bien cerrados y en
lugares fríos y secos.

Se utiliza principalmente como lubricante en cápsulas y comprimidos entre las concentraciones de 0,25 y
2,0 %. También puede utilizarse en cosmética y en productos alimentarios.

El estearato de magnesio es hidrófobo y su presencia excesiva puede retardar la disolución de los fármacos
sólidos y disminuir la dureza de los comprimidos o aumentar la friabilidad. El tiempo de mezclado ha de
controlarse ya que también puede provocar aumento de variabilidad del proceso y disminución en la
velocidad de disolución. La inhalación de polvo de estearato magnésico es nociva y puede tener graves
consecuencias.



2.4. BIBLIOGRAFÍA

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Londres: The Royal Pharmaceutical Press; 1986. p. 849-850.
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- 76 -

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Pharmaceutical Press. 2000. p. 522-527.
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Pharmaceutical Press. 2000. p. 555-557.
46 Magnesium stearate. Handbook of Pharmaceutical
excipients. American Pharmaceutical Association 3ª ed.
London: The Pharmaceutical Press. 2000. p. 305-308.

CAPÍTULO 2: DESARROLLO FARMACOTÉCNICO (I): FASE DE PREFORMULACIÓN - 77 -

ANEXOS: CERTIFICADOS DE ANÁLISIS DE LAS MATERIAS PRIMAS

- 78 -

ANEXO: FICHA DE SEGURIDAD DEL PARACETAMOL

CAPÍTULO 3: DESARROLLO ANALÍTICO - 79 -

Capítulo 3:

DESARROLLO ANALÍTICO:
VALIDACIÓN DEL MÉTODO DE ANÁLISIS DEL
PARACETAMOL COMPRIMIDOS

3.1 MÉTODOS ANALÍTICOS DEL PARACETAMOL
Se ha realizado una búsqueda de las metódicas analíticas habituales utilizadas para el análisis del
paracetamol en medicamentos (1-3) y se han clasificado las diferentes metódicas según su aplicación para
la identificación o para la valoración del paracetamol en formas farmacéuticas, no documentándose las
múltiples metódicas utilizadas en el análisis clínico del paracetamol.

3.1.1 MÉTODOS DE IDENTIFICACIÓN DEL PARACETAMOL

3.1.1.1 PUNTO DE FUSIÓN
El paracetamol puede ser identificado por su punto de fusión (el producto purificado presenta un punto de
fusión entre 169 y 171ºC) en función de los reactivos utilizados o de los eutécticos formados (2,3), aunque
el intervalo es ampliado en otras referencias oficiales (4, 5, 6).

- 80 -

3.1.1.2 MÉTODOS FLUORIMÉTRICOS

REACTIVO COLORACIÓN λ DE MEDIDA REFERENCIA
K3Fe(CN)6 Azul – Violeta 303 nm (3)

3.1.1.3 RESONANCIA MAGNÉTICA NUCLEAR
El paracetamol aparece en el espectro entre 400 y 500 Hz (3).

3.1.1.4 MÉTODOS DE ESPECTROMETRÍA DE MASAS
En la referencia (3) se indican las condiciones particulares de este método, el cual se separa del objetivo del
trabajo, por lo que no se detalla.

3.1.1.5 MÉTODOS ESPECTROFOTOMÉTRICOS Y COLORIMÉTRICOS

REACTIVO COLORACIÓN λ DE MEDIDA
Cloruro férrico (2, 7) Violeta - Azul -
Reactivo de Nessler (2) Pardo1 -
Reactivo Liebermann’s (2) Violeta -
Solución etanólica de α-naftol en medio alcalino (8, 9) Verde 420 nm
Aril acilamidasa y cresol cobre amoniacado (2) No indicada 615 nm
HCl diluido con agua 4N (2) No indicada 395 nm
Ácido tricloroacético 5% y solución ortocresol 1% y NH4OH 4M (2) No indicada 615 nm
HCl 0.05N, NaClO y solución fenol 2% (2) Azul 625 nm
Etanol, sol. de NaClO, HCl 0.1N, NaAsO2 0.4 % y solución fenol 6% No indicada 625 nm
(2)
NaOH 4N, cloruro de hidroxil amonio 2M y FeCl3 6% (2) No indicada 520 nm
Oxidación espontánea de mezclas alcalinas de 4-aminofenol y fenol (2) No indicada 625 nm
HCl 10%, K3(CN)6 0.1M, fenol 0.1M y NaOH 5% No indicada 627 nm
HNO2 (2) No indicada 430 nm
2-nitroanilinadiazotizado (2) Roja 520 nm
Ciocalteau-Folin (2) Azul 660 nm
Metanol-HCl 0.1 M (2) No indicada 249 nm
Cl3CCOOH (2) Azul 620 nm

3.1.2 MÉTODOS DE VALORACIÓN DEL PARACETAMOL MATERIA PRIMA

3.1.2.1 VALORACIÓN QUÍMICA
La Farmacopea Europea y la Real Farmacopea Española (4, 10) indican que se debe valorar con sulfato
cérico amónico, hasta coloración amarilla y se aplica la equivalencia de 1 ml de reactivo gastado ≅ 7.560 mg

1
Textualmente en inglés brown, traducido por pardo.


paracetamol.

3.1.2.2 MÉTODOS ULTRAVIOLETA

REACTIVOS λ DE MEDIDA REFERENCIA
Agua + Metanol + Eter etílico 264 nm (3)
Metanol + Agua 244 nm USP 24(5), RFE(10), F Eur III (4), (11).
Etanol + Ácido clorhídrico diluido 249 nm BP 1963(2)
Metanol + Ácido clorhídrico diluido 249 nm Formulario Nacional US XI(2)
0.01N NaOH 257 nm BP 1968 (2)
0.1 M NaOH 257 nm BP 1980, 1988 (12-14)
Cloroformo + Etanol (3:1) 249 nm Formulario Nacional US XII y XIII (2)
n-butanol y NaHCO3 250 nm Formulario Nacional US XII y XIII (2)

3.1.2.1 MÉTODOS POTENCIOMÉTRICOS
Reactivo: Tetrabutilamonio hidróxido. Solvente: Dimetil formamida (3).

Método conductimétrico para la determinación del paracetamol (15) utilizando como reactivo de
valoración una solución acuosa de NaOH, determinando potenciométricamente el punto final de la
valoración.

3.1.2.3 MÉTODOS CROMATOGRÁFICOS

3.1.2.3.1 CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA (TLC)

Es un método muy utilizado para la determinación (principalmente identificación) del paracetamol y su
impureza (4-cloroacetanilida), existiendo diferentes fases móviles útiles (10). Ver el capítulo 2 de
preformulación (4, 5, 10, 12, 13).

3.1.2.3.2 CROMATOGRAFÍA GASEOSA (GC)

Este método se utiliza para identificar (tiempo de retención) y analizar cuantitativamente, en comprimidos,
la presencia de paracetamol junto a otros componentes. Ver el capítulo 2 de preformulación (4, 5, 10, 12,
13).

3.1.2.3.3 CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA DE ALTA PRESIÓN (HPLC)

La utilización de este método se ha dirigido para la determinación de acetominofeno en formulaciones
farmacéuticas y en fluidos biológicos. Es el método más utilizado ya que permite determinar y valorar
conjuntamente el principio activo y la impureza p-aminofenol (4, 5, 10, 12, 13).

- 82 -

3.1.3 MÉTODOS DE ANÁLISIS DE COMBINACIONES DE PARACETAMOL
CON OTROS PRINCIPIOS ACTIVOS

3.1.3.1 MÉTODOS POTENCIOMÉTRICOS
Referenciado para la determinación de paracetamol combinado con diclofenaco sódico (16).

3.1.3.2HPLC
La USP 24 (5) documenta diferentes técnicas para la determinación de varios principios activos
conjuntamente:

! paracetamol y ácido acetilsalicílico

! paracetamol, ácido acetilsalicílico y cafeína

! paracetamol y cafeína

! paracetamol, clorfeniramina, dextrometorfano y fenilpropanolamina

Por otra parte, se han publicado diversos trabajos relacionados para la determinación de:

! acetominofeno, pseudoefedrina y cafeína (17).

! paracetamol y ácido acetilsalicílico (8, 18).

! paracetamol, fenilpropanolamina, cafeína, glicerilguaiacolato y maleato de clorfeniramina es mediante
HPLC junto con diodo array (19).

! paracetamol, ácido acetilsalicílico y ácido ascórbico (20).

! paracetamol, cafeína y propifenazona (21).

! paracetamol, cafeína y ácido acetilsalicílico (22).

3.1.3.3MÉTODOS ESPECTROFOTOMÉTRICOS
Para la determinación de paracetamol y cafeína (23).

Utilización de métodos colorimétricos a través de nitración y subsiguiente quelación para la determinación de


paracetamol y salicilamida (24).

Otro método interesante basado en la función ortogonal del espectro del paracetamol (25), permite su
determinación incluso en presencia del p-aminofenol (producto de degradación principal).

3.1.3.4 ESPECTROSCOPÍA DE DIODE ARRAY
Para la determinación de paracetamol y fosfato de codeína (26).

3.1.3.5 CROMATOGRAFÍA DE CAPA FINA
Este método junto con una espectrodensitometría se ha utilizado para la determinación de paracetamol,
propifenazona y cafeína conjuntamente. Es un método específico, rápido y que presenta una buena
reproducibilidad para el control de calidad de los comprimidos (27).

3.1.4 CONCLUSIÓN DE LOS MÉTODOS DE ANÁLISIS
Tras el análisis y valoración técnica de los apartados anteriores sobre los métodos de análisis de
paracetamol, y debido a que la aplicación del método es para análisis rutinarios (laboratorio de prácticas,...)
y a los resultados de los parámetros de validación (es un método validado), se escogió un método
espectrofotométrico UV-VIS por su practicabilidad. Además una referencia encontrada (8), que comparó
un método UV-VIS y un método por HPLC para valorar paracetamol, llegó a la conclusión de que los
resultados obtenidos con el método espectrofotométrico eran más rápidos, más precisos y de mayor
sensibilidad, corroborado todo ello por evaluaciones estadísticas que demostraron que no había
diferencias significativas entre ambos.

3.2 METODOLOGÍA PARA EL DESARROLLO DEL MÉTODO
ANALÍTICO.
Para el desarrollo del método analítico de valoración del principio activo, se tuvo en cuenta la monografía
de Acetaminophen materia prima, particularmente el método de valoración de materia prima especificado
en la USP24 (5) y la Farmacopea Japonesa (6), al tratarse de un método espectrofotométrico, sencillo y
exacto, fácilmente extrapolable al laboratorio de prácticas, frente al propuesto por la Real Farmacopea
Española (10), que exige extracciones con disolventes orgánicos y al no disponer del equipo necesario para

- 84 -

llevar a cabo en el laboratorio de prácticas el método por HPLC especificado para el análisis de
comprimidos por la USP24. Aunque la especificidad de la técnica de espectrofotometría de absorción
ultravioleta - visible no es muy alta, es muy útil en análisis rutinario ya sea cuantitativo (la absorción estará
relacionada directamente con la concentración de la sustancia absorbente de la muestra) o cualitativo (como
método de identificación adicional basado sobre las longitudes de onda características de la sustancia).

Según la bibliografía consultada, se han publicado dos estudios comparativos entre el análisis por HPLC y
UV, para análisis de comprimidos concluyendo uno que ambos métodos presentaban precisiones similares
(18) y el segundo que no había diferencias estadísticamente significativas entre ambos métodos a un nivel
de confianza del 95% (8). Destacan los métodos espectrofotométricos por proporcionar resultados rápidos,
precisos y selectivos (2, 3, 18).

Metodología de ensayo:

Pesar exactamente 60 mg de paracetamol problema y disolver con 5 ml de metanol en un matraz de 250 ml
y enrasar con agua. Tomar 5 ml, filtrar por papel, lavar el filtro con cantidad suficiente de agua y diluir con
agua hasta 100 ml y mezclar. Paralelamente siguiendo exactamente el mismo procedimiento se prepara una
disolución en agua de concentración 12 µg/ml, con paracetamol patrón de referencia.

Leer la absorbancia de ambas soluciones en el máximo de absorción (alrededor de 244 nm), usando agua
como blanco. Calcular la cantidad en mg, de C8H9NO2, mediante la fórmula:

5 c (AU / AS)

en la que;

c: es la concentración en µg/ml del patrón de referencia de paracetamol
AU: es la absorbancia de solución problema
AS: es la absorbancia de la solución patrón de referencia
Se plantea como partida el método anterior y otro idéntico con la salvedad de utilizar como medio de
disolución solución reguladora fosfato a pH 5,8, tal y como marca la USP 24 para el ensayo de disolución
de comprimidos. Para estudiar la bondad de estos métodos analíticos se efectúa como ensayo previo para
cada medio una prueba de linealidad con materia prima patrón, tras la cual se procede a estudiar los
parámetros de linealidad, exactitud y precisión para muestras de placebo cargadas de materia prima patrón.
Se redactan los Procedimientos Normalizados de Trabajo necesarios de los que se adjunta la relación en el
anexo 1. Los resultados obtenidos se adjuntan en los apartados siguientes junto con la discusión sobre el


cumplimiento o no de los parámetros de validación.

Una vez comprobada la validez del método (medio disolución agua/metanol y solución reguladora fosfato)
para la cuantificación del paracetamol en comprimidos, se intentó optimizar el método, tanto su
practicabilidad como su fiabilidad, teniendo como objetivo final la máxima simplificación analítica y desde
un punto de vista económico, el mínimo coste de análisis, lo cual se concluyó en:

" Evitar el uso del metanol en el desarrollo analítico, con el ahorro económico que supone teniendo
en cuenta que el método se utilizará en el laboratorio de prácticas de Farmacia Galénica III (60-70
veces al año). Además se evitan los riesgos derivados de la peligrosidad inherente al metanol en
cuanto disolvente orgánico inflamable y tóxico.
" Evitar el uso de la solución reguladora fosfato, con el ahorro de tiempo y dinero que ello supone,
por las razones anteriormente expuestas y desde un punto de vista medioambiental evitar la
producción de residuos innecesarios. En la medida de lo posible se aplican los criterios de las normas
ISO 14000 (28).
Para ello se extrapolan los métodos anteriores a agua desionizada (teniendo en cuenta que el pH de trabajo
debería oscilar entre 5,1 y 6,02) y se estudian los parámetros de validación. En caso de obtener resultados
fiables, precisos y exactos, será el método escogido para el análisis rutinario del paracetamol en
comprimidos.

3.3 VALIDACIÓN ANALÍTICA: PARÁMETROS DE VALIDACIÓN
ANALÍTICA
Por validación analítica (29-54) se entiende “la obtención de pruebas (adecuadamente documentadas) que
demuestren que un método de análisis es lo suficientemente fiable para asegurar que el resultado obtenido
corresponde a la realidad”. Las características de fiabilidad son las que demuestran la capacidad de un
método analítico para mantener a lo largo del tiempo los criterios fundamentales de validación; junto a
éstas cabe destacar las características de practicabilidad o facilidad de llevar a cabo el método, así como las
pruebas de idoneidad. Según la Conferencia Internacional de Armonización ICH (36), los criterios
fundamentales de la validación analítica incluyen el cálculo de la precisión, la exactitud, los límites de
detección y cuantificación, la selectividad, la linealidad y el intervalo de análisis, aunque no necesariamente
son aplicables a todos los casos de análisis y dependerá de si se analiza sólo materias primas, productos

- 86 -

acabados o impurezas (ver tabla de recomendaciones de la ICH, en el apartado 3.3.6 de este mismo
capítulo).

Por otra parte, también en el laboratorio analítico, validación, cualificación y calibración son conceptos que
se suelen emplear indistintamente por el personal, sin embargo, conceptualmente son diferentes (29):

VALIDAR # comprobar y demostrar que un método o proceso cumple la función prevista

CUALIFICAR # verificar o dotar a un aparato de las cualidades o características para que pueda
cumplir su función

CALIBRAR # verificar mediante patrones la cualificación de un aparato.

3.3.1 PRECISIÓN
La precisión de un método analítico es el “grado de acuerdo entre los resultados individuales de un ensayo,
cuando éste se realiza repetidamente sobre una muestra homogénea, comenzándolo desde el principio”.

La precisión es una medida de grado de repetibilidad del método analítico, realizado en condiciones
normales y refleja el error aleatorio del método. Se expresa como la desviación típica o coeficiente de
variación (desviación típica relativa), del método repetido un mínimo de 6 veces (suele considerarse
suficiente este número).

Los valores aceptables para la precisión dependerán de la concentración del “analito”3, número de
repeticiones del ensayo y del propio método. Para ello existen estudios (55, 56) (la mayoría de Horwitz) con
recomendaciones sobre la máxima variabilidad permisible según dichos parámetros.

3.3.1.1 REPETIBILIDAD
Precisión del método bajo condiciones idénticas: mismo analista, mismo equipo, mismos reactivos y cortos
espacios de tiempo.

Se llama repetibilidad instrumental a la precisión (CV%) que daría una misma muestra analizada repetidas y

2
Intervalo de máxima solubilidad del paracetamol.
3
“analito” es un término que no está incluido en el diccionario de la Real Academia Española, aunque se utiliza en la presente memoria al ser
un término de amplia utilización en el argot de análisis y control.


consecutivas veces.

Se llama repetibilidad del método a la precisión (CV%) de muestras de concentraciones diferentes,
analizadas varias y consecutivamente.

3.3.1.2 PRECISIÓN INTERMEDIA
Precisión de las variaciones dentro de un laboratorio: distintos analistas, distintos equipos o distintos días.

3.3.1.3 REPRODUCIBILIDAD
Precisión en condiciones completamente diferentes de analistas, instrumentación, reactivos, laboratorios y
días de análisis.

3.3.2 EXACTITUD
La exactitud de un método analítico es “la capacidad para obtener resultados próximos al verdadero”.

La exactitud es una medida del rigor del método analítico y refleja los posibles errores sistemáticos del
método. Se expresa como el porcentaje de recuperación de una cantidad de “analito” añadida a la
muestra, tanto a niveles superiores como inferiores a la concentración que se espera en la muestra. Para
comprobar que el método tiene una exactitud adecuada se aplica la fórmula, derivada de la aplicación del
análisis estadístico paramétrico de t de Student:

texperimetnal = (|100-R|· √n ) / s

De esta forma en función del porcentaje de recuperación ( R), del número de muestras (n) y del coeficiente
de variación de los resultados obtenidos se calcula el valor de t experimental. Si el valor es inferior al t
tabulado para n-1 grados de libertad y 95% de confianza, se deduce que no hay diferencia significativa entre
el “analito” puesto y el recuperado por lo que se deduce que el método es suficientemente exacto.

Para determinar el valor verdadero se extrapola la respuesta obtenida en una recta patrón de referencia y se
compara con el teórico que se había pesado.

- 88 -

3.3.3 SELECTIVIDAD
La selectividad es “la capacidad para medir exacta y específicamente”, sin interferencias de impurezas de
síntesis, productos de degradación, sustancias relacionadas o excipientes que puedan estar presentes en la
fórmula. Los estudios de selectividad varían según el tipo de método analítico;

" métodos de identificación: se debe demostrar que el método funciona en presencia de otras
sustancias que pueden interferir y de las de composición similar.
" ensayos de pureza: se debe demostrar que el método de evaluación permite una evaluación de las
impurezas a analizar.
" determinación cuantitativa de un componente: se debe asegurar que la señal medida con el método
analítico procede únicamente del “analito”, sin interferencias de excipientes, productos de degradación
y/o impurezas.
La selectividad se expresa como el grado de error de los resultados obtenidos en análisis de muestras
añadidas de impurezas, frente a muestras sin adición. Para demostrar la selectividad, se comparan las
precisiones del análisis de muestras adicionadas de impurezas y otras sin adicionar. Para ello:

x a − x b
t exp =
 s 2
+ s 2 
 
 n a n b 

se calcula Fexp, dividiendo la variancia de uno de los métodos por la del otro. Si la Fexp es inferior al Ftab para
los grados de libertad establecidos (na-1 y nb -1) y 95% de probabilidad se deduce que no hay diferencias
significativas entre las precisiones de ambos métodos. Si no existen diferencias significativas, se calcula la
texp, si la texp así calculada es inferior a la ttab para [(na-1)+(nb-1)] grados de libertad y 95% de confianza se
deduce que no hay diferencia de exactitud entre ambos métodos.

3.3.4 LINEALIDAD E INTERVALO DE ANÁLISIS
Linealidad es “la capacidad de un método analítico para dar resultados directamente proporcionales a la
concentración de “analito” de la muestra, dentro de un intervalo determinado”. Se expresa como la
variación alrededor de la pendiente de la línea de regresión lineal o coeficiente de regresión lineal.
Se calcula basándose en la relación matemática (cálculo de regresión lineal) obtenida en base a muestras con
concentraciones variables de “analito” a las cuales se les ha aplicado el ajuste matemático de mínimos
cuadrados.


Intervalo de análisis es el comprendido entre la concentración más baja y la concentración más alta entre
los que se demuestra que el “analito” puede ser determinado con precisión, exactitud y linealidad.

Para calcular la linealidad se preparan muestras de concentraciones crecientes del principio activo, cada una
de ellas con un mínimo de dos replicados.

Las muestras se analizan restando escrupulosamente el método a validar. A los resultados (área, lectura de
absorbancia, etc.) se les aplica el test de homogeneidad de variancias o test de Cochran.

El Test de Cochran o de homogeneidad de las variancias intragrupo, consiste en calcular (Gexperimental), que es
la relación entre la variancia máxima del grupo elevado al cuadrado respecto a la suma de todas las
variancias de los datos al cuadrado. Las variancias de los grupos de datos se obtienen aplicando a los
resultados un análisis de la variancia (en este caso se utiliza la opción de Excel). La Gexperimetnal se compara
con la Gtabulada, n grupos , n replicados. Si la Gexperimental <Gtabulada, entonces puede considerarse que el factor comparado
no influye y existe homogeneidad de variancias entre los grupos de resultados.

2
s maxima
G EXPERIMEN = 2
s i

En caso de obtener que no hay diferencias entre las variancias de los grupos se aplicaría la regresión lineal a
los datos para ajustarlos a una recta según el método de mínimos cuadrados. Aunque en caso de que no
exista homogeneidad de variancias se suele aplicar el llamado test del factor de respuesta, que debería dar
un CV menor del 5%, para considerar suficiente y aplicar el método de mínimos cuadrados para ajustar los
datos a una recta de regresión.

El factor de respuesta se calcula dividiendo la respuesta del método analítico por la concentración de la
muestra, aunque algunos autores lo calculan al revés, lo cual no influye en el resultado ni en su análisis
posterior. Si el intervalo es lineal, los CV% de los factores de respuesta deben ser semejantes entre sí y
cercanos al valor de la pendiente. Si el coeficiente de variación de los factores de respuesta es menor de un
5%, se considera que presenta una linealidad suficiente.

Otro método para demostrar la linealidad del método se fundamenta en el estudio de los límites de
confianza de la pendiente y en el test de proporcionalidad; el primero se halla en base a la expresión:
b ± t · sb

- 90 -

siendo t el valor de la distribución t Student para n-2 grados de libertad y una probabilidad del 95% y sb la
desviación estándar de la pendiente, que se lo proporciona el ANOVA de la regresión (mediante el
programa informático Excel).

Otro test estadístico se deduce de la expresión:

b
t EXPERIMENTAL =
sb
Si el valor de t experimental es mayor que el t de las tablas de t Student, incluso para p=0,001,
indica que la probabilidad de que la pendiente sea distinta de cero es muy elevada. También es
orientativo comprobar que el intervalo de confianza de la pendiente de la recta calculada no incluye el valor
de b=0, ya que en caso de que lo incluyera no existiría recta).

Respecto al test de proporcionalidad. El valor de la ordenada en el origen (α) indica el error sistemático del
método, de manera que para considerar que existe una proporcionalidad adecuada entre concentración y
respuesta del método, el 0 debe encontrarse dentro de los límites de confianza. El caso ideal de
proporcionalidad se da cuando el término independiente de la recta de regresión es cero. Los límites de
confianza se calculan a partir de la expresión:

a ± t ⋅ sa
Siendo t el valor de la distribución de t-Student para n-2 grados de libertad con una probabilidad del 95%,
donde sa es la desviación estándar del término independiente. La significación estadística de (α) se puede
deducir también de la expresión:

a
t EXPERIMENTAL =
sa
Si el valor de t experimental es menor que el valor de t de las tablas t-Student, la probabilidad de
que (α) sea igual a 0 es muy elevada. En este caso se comprueba que el cero sí está incluido en el
intervalo de confianza del término independiente, ya que interesa que α esté lo más cerca posible del cero,
lo cual indicaría que el sesgo es mínimo.

3.3.6 LÍMITES DE ANÁLISIS
La determinación de los límites de detección (Ld) y cuantificación (Lc) es laboriosa, por lo que sólo se


efectúa cuando el nivel inferior del intervalo del método analítico se acerca a los límites de detección o
cuantificación, como ocurre en el caso de las impurezas y productos de degradación. Si las concentraciones
a determinar son elevadas, se puede sustituir su estudio por la determinación de la precisión y la exactitud a
la concentración más baja que presenta el “analito” en la práctica.

El límite de detección es “la concentración más baja de “analito” en una muestra que puede detectarse”,
pero no necesariamente cuantificarse, en las condiciones experimentales definidas. Se expresa como
concentración de “analito” en la muestra, en tanto por ciento o partes por millón.

El límite de cuantificación es “la menor concentración o cantidad de “analito” de una muestra que puede
ser determinada con precisión y exactitud aceptables bajo las condiciones experimentales establecidas”. Se
expresa como la concentración de “analito” (porcentaje, partes por millón, etc.) en la muestra.

Para calcular estos parámetros, se aplican diferentes métodos y se aplican las mismas fórmulas ajustadas. Si
se hacen replicados se multiplican las fórmulas generales por 1/√n:

(a) determinar la relación señal - ruido de fondo (para métodos instrumentales)

Se prepara una muestra blanco o placebo (con todos los excipientes y sin principio activo) y se compara su
respuesta frente a la respuesta de varias muestras de principio activo de concentraciones conocidas
próximas a cero.
! se determina el nivel de ruido o respuesta del blanco o placebo (B),
! se analizan las muestras con el blanco adicionado de pequeñas cantidades de principio activo,
! comparativamente, se halla la cantidad de “analito” que coincide con la señal de la muestra 1 y se
multiplica por 2 o 3 (aceptado como límite de detección) y por 10 (para el límite de cuantificación).

3B 10 B
LD = Lc =
b b
Otro método similar y muy utilizado (52) por su practicidad es similar al anterior, pero en este caso se basa
en realizar una recta de calibración con al menos tres puntos de concentración baja repetidos varias veces
(entre 3 y 6 veces). Se llevan a cabo todas las analíticas y se determinan las desviaciones estándares para
cada proporción ensayada. Con las desviaciones estándares obtenidas para cada proporción se calcula la
desviación estándar media. El nivel o señal de ruido se estima por la relación DSMEDIA/ b, siendo b la
pendiente de la recta.

Se considera el límite de detección la señal de ruido multiplicada por tres y el límite de cuantificación la

- 92 -

señal de ruido multiplicada por 10.

(b) menor cantidad detectable

Se preparan soluciones conteniendo unas cantidades decrecientes de “analito” desde el máximo. El límite
de detección de calcula a partir de la dilución en que no se puede distinguir la respuesta del “analito” de la
del blanco.

( c) análisis repetido del blanco

Se repite el análisis del blanco (placebo) n≥ 10 veces y se calcula su media ( Yb ) y la desviación estándar de
la respuesta de los n blancos (sb), el valor b corresponde a la pendiente de la recta de calibrado del analsita
que se calculó para la linealidad. Para los métodos espectrofotométricos donde se utiliza un blanco como
corrección de la medida se recomienda utilizar éste método. Las fórmulas para su cálculo varían si se trata
de métodos cromatográficos:

__ __
Y b + 3s b Y + 10 sb
LD = Lc = b
b b
o de métodos espectrofotométricos:

3sb 10 s
LD = LC = b
b b

(d) estimación del límite de detección mediante el valor de la ordenada en el origen expresado en unidades
de concentración

Se confecciona una recta de calibrado para un intervalo concentraciones bajas (requiere que la recta sea
lineal en este intervalo); se admite tomar a, como una estimación del límite de detección. El límite inferior
de la respuesta se toma como 3 /α/ y el límite de detección expresado en las mismas unidades que las
abscisas en la recta de calibración es:

3a
b


e) extrapolación a concentración cero de muestras conteniendo bajas concentraciones de “analito”

A partir de muestras con baja concentración de “analito” se extrapola gráfica o matemáticamente la
respuesta para concentración cero, la cual se tomará como estimación de la respuesta de un hipotético
blanco. A continuación se calcula la desviación estándar de la respuesta a concentración cero por
extrapolación gráfica o bien por cálculo matemático, la cual se tomará como estimación de la desviación
estándar de la respuesta de un hipotético blanco. Este método se aplica cuando no se hace blanco de la
muestra.

__ __
Y + 3s b Y + 10 s b
LD = LC =
b b

3.3.6 PARÁMETROS DE VALIDACIÓN: REQUERIMIENTOS
Según la finalidad de los análisis, hay que considerar unos parámetros de validación u otros. Según la
Comisión Internacional de Armonización, estos son los que se muestran en el cuadro 3:

IMPUREZAS
TIPO DE ANÁLISIS IDENTIFICACIÓN CUANTIFICACIÓN
CUANTIF IDENTIF
EXACTITUD - SI - SI
REPRODUCIBILIDAD
REPETIBILIDAD - SI - SI
PRECISIÓN
- SI (1) - SI (1)
INTERMEDIA
ESPECIFICIDAD SI SI SI SI
LÍMITE DETECCIÓN - - SI -
LÍMITE
- SI - -
CUANTIFICACIÓN
LINEALIDAD - SI - SI
INTERVALO - SI - SI
(1) Si se comprueba la reproducibilidad, la precisión intermedia no es necesaria.

En el caso del desarrollo experimental de la tesis doctoral, se está ante una valoración analítica de
cuantificación de paracetamol en una forma farmacéutica, por lo que los parámetros de validación mínimos
a tener en cuenta serán: exactitud, repetibilidad, reproducibilidad, especificidad, linealidad e intervalo de
análisis.

- 94 -

3.4 ANÁLISIS CUANTITATIVO DE COMPRIMIDOS DE
PARACETAMOL
Para la validación del método se han efectuado los ensayos siguientes:

! Controles generales: equipo de análisis, patrones, reactivos y material utilizados. Control de cubeta,
control de medio disolución, según la RFE (57).

! Redacción de los PNTs de análisis.

! Linealidad con soluciones patrón de paracetamol (patrón secundario de materia prima).

Se pesan individualmente y con exactitud cantidades crecientes de paracetamol patrón secundario para
preparar soluciones con concentraciones entre 70-130%, preparando dos soluciones para cada porcentaje
(método de doble pesada). Se preparan 5 puntos para el intervalo (70-85-100-115-130%).

Los x mg pesados con exactitud son llevados a 250 ml en matraz aforado con el medio de disolución que
aplique4 y de ésta se toman 5 ml que son llevados con exactitud a 100 ml con el medio de disolución de que
se trate.

Se leen las absorbancias de las muestras finales frente a blanco de medio de disolución y los datos
(concentración y absorbancia) se relacionan estadísticamente en una hoja de cálculo de Microsoft Excel 97
y se le aplica el test de regresión lineal por el método de mínimos cuadrados. Se considera que el método es
lineal si el coeficiente de regresión entre las dos variables es ≥ 0,99 y tras aplicar el ANOVA a la regresión,
se comprueba que la pendiente y sus límites de confianza no incluyen el cero (test de sensibilidad) ya que en
caso de incluir el cero quiere decir que no habría recta. Para comprobarlo se aplica la fórmula t exp= |b|/sb
siendo |b| el valor de la pendiente y sb la variabilidad del coeficiente de la pendiente que nos lo
proporciona Excel con el ANOVA de la regresión. El mismo resumen nos proporciona la tteórica o ttabulada
con lo cual se comparan ambas, si texperimetnal < ttablas 95% significará que la probabilidad de que b sea diferente
de cero es superior al 95-99% (dependiendo del nivel de probabilidad con el que se compare).

De la misma manera se calcula el test de proporcionalidad, para el cual se toma la ordenada en el origen y
se calcula el intervalo de confianza, el intervalo debería incluir el cero, para poder decir que el método no
presenta sesgo o error. Estadísticamente se calcula la t en base a t= |a|/sa cuyos valores se obtienen a

4
Para el método Agua-metanol sería: 5 ml de metanol y completa con agua a 250 ml. Para solución reguladora, sería diluir a 250 ml con solución
reguladora. Para el método Agua será diluir con agua desionizada sin completar el enrase, poner en ultrasonidos durante 10 minutos, dejar
atemperar y enrasar hasta 250 ml.


partir del ANOVA de la regresión. Si texp< ttab significará que es probable que a=0 (nivel 95% de
confianza).

Otro test estadístico utilizado para demostrar la linealidad de los resultados es a partir del ANOVA de la
regresión completo, calcular la Fexperimental para el error SSreg y comparada con la Ftabulada, si Fexperimental
>Ftabulada significa que existe una pendiente diferente de cero y por lo tanto una recta de ajuste. A
continuación se calcula la Fexperimetnal para la flata de ajuste Sslof y se compara con la Ftabulada.. Si la Fexperimetnal es
menor que la Ftabulada significará que existe linealidad entre los datos.

! Selectividad.

Este ensayo servirá para determinar si los excipientes interfieren en el intervalo de análisis de manera
importante, para ello se prepara suficiente placebo con la proporción que llevarán en el principio activo:

Avicel pH 101 100 mg/comprimido

Almidón maíz 90 mg /comprimido

Talco Venecia 00000 8 mg / comprimido

Estearato Mg 2 mg/comprimido

Todos los componentes se mezclan por volteo en un recipiente de plástico adecuado durante 10 minutos.
De la mezcla se tomarán las muestras de aproximadamente 200 mg que es la cantidad de excipiente que
llevan los comprimidos.

! Linealidad, precisión (repetibilidad y reproducibilidad) y exactitud para placebo cargado de patrón
paracetamol.

En este caso se prepara el placebo cargado de la siguiente manera, se preparan los excipientes necesarios
para por ejemplo 30 comprimidos y a continuación se pesa el 70% del paracetamol que les correspondería
(entonces se pesaría 1050 mg en vez de 1500 mg para 30 comprimidos) se mezcla todo durante 10 minutos
en un excipiente adecuado y de esta muestra se toman las alícuotas (los 2 analistas dos pesadas) para la
validación. La muestras se conservan en desecador a temperatura ambiente para que los analsitas tomen
muestra por duplicado y se complete la validación.

El procedimiento se repite para cada porcentaje de placebo cargado.

- 96 -

Los analistas realizan las determinaciones por duplicado (doble pesada) de estos resultados se calcula la
media, la desviación estándar y el coeficiente de variación para cada para de análisis, es decir se dispone de
una medida de repetibilidad dentro de las condiciones previstas. Se considerará repetibilidad del método el
intervalo máximo de variabilidad encontrado (debería estar por debajo del 2% de CV).

Para cada porcentaje (incluyendo datos de los dos analistas y los dos días, ocho datos) se calcula la media y
la desviación estándar y los coeficientes de variación, con lo cual se obtiene una valoración de la exactitud o
recuperación del método analítico para cada nivel estudiado (dada por la media) y una valoración de la
reproducibilidad del método analítico para cada nivel estudiado (proporcionada por los coeficientes de
variación de los grupos).

Como parámetro de exactitud global se considerará la media de las exactitudes parciales.

El procedimiento se repite para cada una de las metódicas propuestas: agua desionizada adicionada de
metanol, solución reguladora de fosfatos y agua desionizada. Al final para el método escogido se calcularán
los límites de análisis y la especificidad.

3.4.1 ANÁLISIS EN AGUA/METANOL: RESULTADOS

3.4.1.1.GENERALIDADES
Instrumentación analítica

Espectrofotómetro HELWLETT PACKARD VECTRA 286/12 (8452 A DIODE ARRAY).
SOTWARE: UV-VIS HP 89532A UV-VIS Software Rev 1.00.00

Patrones de referencia

! patrones primarios:

nombre: Paracetamol patrón. Riqueza: 99,84%
proveedor: SDM
nº lote: SDM/ PAR/ PAJ/ 95 (31/03/95)
nombre: 4-cloroacetanilida patrón. Riqueza: 97%
proveedor: SDM


nº lote: SDM/ 23121 (03/04/95)
nombre: p-aminofenol patrón. Riqueza: 98%
proveedor: SDM
nº lote: 98473 (03/04/95)

! patrones secundarios:

nombre: Paracetamol materia prima. Riqueza: 99,2%
proveedor: Mallinckrodt Chemical Inc.
nº lote: 6375994M349 (caducidad: 10/2000)

Reactivos:

Agua desionizada (SDM, conductividad <0,2 µS)
Metanol HPLC JT Baker (fabricante) Lote: 9902640006 Caducidad: 02/2001

Control de la cubeta

Se determina la absorbancia de la cubeta a 240 nm.

1 -4,4 ·10-4
2 +2,3· 10-4
3 -2,9 · 10-4
La absorbancia que aparece es mínima y en principio no afectará a las lecturas de muestras. En caso de salir
absorbancia, se limpia la cubeta llevándola a ebullición con HNO3 reactivo, se saca del baño y se deja en
agua desionizada durante 48 horas. Se adjunta la gráfica de absorbancia obtenida (figura 1):

- 98 -

Figura 1: Absorbancia de la cubeta vacía.

Control de los disolventes

Se determina la absorbancia del disolvente (agua - metanol) frente al aire a 240 nm. En esta longitud de
onda, la absorbancia será inferior a 0,40 y preferiblemente <0,20.

1 0.04849
2 0.04463
3 0.04562

Figura 2: Absorbancia del disolvente (agua - metanol) frente al aire.

Se adjunta el gráfico de absorbancia obtenida (figura 2), donde puede comprobarse que es menor que 0,20
en todo el espectro.


Comprobación de los máximos de absorbancia para el patrón secundario paracetamol

Se adjunta el gráfico de absorbancia obtenida (figura 3), observándose un máximo de absorbancia hacia 244
nm, atribuible al paracetamol.

Figura 3: Máximos de absorbancia en agua - metanol del patrón MP Paracetamol.

3.4.1.2 LINEALIDAD CON PATRÓN DE MATERIA PRIMA
La linealidad del método se ha comprobado con 6 soluciones de paracetamol patrón (doble pesada) de
distinta concentración, abarcando un intervalo que incluye la concentración teórica de la muestra problema
(50-150%).

Los resultados obtenidos son los siguientes (tabla 1):

CONCENTRACIÓN Absorbancia Factor de respuesta
(µg/ml)
5,642 0,39945 0,070799362
5,984 0,38630 0,064555481
10,100 0,67101 0,066436634
10,001 0,64322 0,064315235
12,102 0,80508 0,066524541
12,325 0,80857 0,065604057
14,900 0,96424 0,064714094
14,871 0,96024 0,064571313
17,523 1,11539 0,063652913
17,475 1,11510 0,063811159
20,100 1,27507 0,063436318
20,125 1,28000 0,063602484
Tabla 1: Resultados Agua-Metanol para MP paracetamol.

- 100 -

A estos datos (concentraciones y absorbancias) se ha aplicado el test estadístico de homogeneidad de
variancias de Cochran (tabla 3), obteniéndose una Gexperimental de 0,77404, que se compara con la Gtablas=
0,7808 para p=0,05 de probabilidad, para 6 concentraciones estudiadas y 2 replicados de cada
concentración (tabla 2). Dado que el valor experimental de G es inferior al tabulado (tabla 4), puede
afirmarse que no existen diferencias estadísticamente significativas entre las variancias de los diferentes
niveles de concentración y puede aplicarse la hipótesis de un modelo lineal, estimado por el método de
mínimos cuadrados.

A1 A2 A3 A4 A5 A6
0,39945 0,67101 0,80508 0,96424 1,11539 1,27507
0,38630 0,64322 0,80857 0,96024 1,11510 1,28000
Tabla 2: Datos tabulados para el cálculo del Test de Cochran

Análisis de variancia de un factor

RESUMEN
Grupos Cuenta Suma Promedio Variancia
Columna 1 2 0,78575 0,392875 8,6461 E-05
Columna 2 2 1,31422 0,657113333 0,00038623
Columna 3 2 1,61365 0,806825 6,0901 E-06
Columna 4 2 1,92448 0,96224 8 E-06
Columna 5 2 2,23049 1,115245 4,205 E-08
Columna 6 2 2,55507 1,277535 1,2152 E-05
Tabla 3: Resultados del ANOVA de los datos de la tabla 1.

G experimental 0,77404
G tabulada (95%, 6 concentraciones y 2 replicados) 0,7808
Tabla 4: Resultados de G de Cochran.

El factor de respuesta se calcula dividiendo la concentración (en µg/ml) por la absorbancia (tabla 1). Se
determina el valor medio, la desviación estándar y el coeficiente de variación de los factores de respuesta
calculados.

Estadística factores respuesta
Media 0,065168633
Desviación estándar 0,002058299
CV% 3,158419458
Tabla 5: Estadística de los factores de respuesta para MP paracetamol Agua-Metanol.

El coeficiente de variación presenta un valor menor al establecido como indicador de linealidad (<5%), con
lo cual puede afirmarse que existe una relación de linealidad entre ambas variables.


Se determina la ecuación de la recta de calibrado y = bx + a, tomando en abscisas las concentraciones (en
µg/ml) y en ordenadas las correspondientes absorbancias:

Absorbancia = pendiente * concentración + ordenada origen

y = 0,061698832 x + 0,040085278

Curva de regresión ajustada: patrón (agua metanol)
1,40000
1,20000
1,00000
Absorbancia

0,80000
Y
0,60000
Pronóstico para Y
0,40000
Lineal (Pronóstico para Y)
0,20000
0,00000
0 5 10 15 20 25
concentración (µg/ml)

Figura 4: Recta de calibración de MP paracetamol en agua.

Estadísticas de la regresión
Coeficiente de correlación múltiple r 0,999309244
Coeficiente de determinación r2 0,998618965
r2 ajustado 0,998480861
Error típico 0,011891193
Observaciones 12
Tabla 6: Estadística de la regresión MP Agua-Metanol.

Tanto el valor del coeficiente de correlación (cercano a 1, r=0,99930) como el de determinación r2, indican
una buena linealidad (tabla 6). El coeficiente de determinación da una indicación del grado de aproximación
de los puntos a la relación lineal. Por lo tanto, puede afirmarse que esta relación lineal explica en un 99,86%
la variancia de la absorbancia.

Para acabar de comprobar la linealidad y estudiar la proporcionalidad, se calculan los límites de confianza
de la pendiente (b); b ± sb t, y de la ordenada en el origen (a); a ± sa t (tabla 7).

- 102 -

TEST DE PROPORCIONALIDAD
Máximo Mínimo Observaciones Test de t
Límites b 0,063315402 0,06008226 no incluye el cero 85,0349665
Límites a 0,063102005 0,01706855 presenta sesgo 3,8802213
t (GL (n-2)=10, p=0.05%) 2,228
Coeficientes Error típico Estadístico t Probabilidad
Ordenada origen (a) 0,040085278 0,010330668 3,88022132 0,00305783
Pendiente (b) 0,061698832 0,00072557 85,0349665 1,237 E-15
Tabla 7: Test de proporcionalidad MP Agua-Metanol.

Test de sensibilidad:

Tomando los límites de confianza de la pendiente se comprueba que no incluye el cero, es decir que existe
una pendiente y por lo tanto una recta. El test de t:

texp = |b| / sb = 85,0349665

texp > ttablas incluso para p= 0,001, lo que indica que la probabilidad de que b # 0 es superior al 99,9%.

Test de proporcionalidad:

Tomando los límites de confianza para la ordenada en el origen y calculando, se observa que estos límites
no incluyen el cero por lo que el método presenta un ligero sesgo. El test de t:

texp = |a| / sa = 3,88022132

Este valor de t es mayor al ttablas = 2,228 (para p= 0,05 y GL= 10), por lo que la probabilidad de que a # 0
es muy elevada.

Otro test estadístico de alta significación es aplicar un análisis de la variancia (ANOVA) completo a la recta
de regresión:

ANÁLISIS DE VARIANCIA
Grados Suma de Promedio de los F F tablas
libertad cuadrados cuadrados experimental
Regresión (SSreg) 1 1,02245911 1,02245911 7230,945527 4,96
Falta de ajuste (Sslof) 4 0,00091502 0,00022875 2,750681 4,53
Error puro (SSpe) 6 0,00049898 0,00008316
Residual (SSr) 10 0,00141400 0,00014140
Total 11 1,02387311
Tabla 8: ANOVA MP Agua-Metanol.


Del cual puede concluirse, que dado que Fexp>Ftablas (p=0,05; 1; 10)= 4,96 queda demostrada la existencia
de una pendiente # 0.

Por otra parte, dado que Fexp<Ftablas (p=0,05; 4; 6)= 4,53 queda demostrada la linealidad entre los
resultados obtenidos.

3.4.1.3 SELECTIVIDAD
Se ha preparado una muestra problema de placebo en las mismas condiciones en que se tratarían los
comprimidos y se ha efectuado un espectro UV completo (figura 5). Se observa que sobre la longitud de
onda de absorción del paracetamol, existe una señal de ruido debida a alguno de los excipientes. Se analiza
la absorbancia a λ= 244 nm, para evaluar su interferencia en el análisis del paracetamol.

Figura 5: Absorbancia del placebo en agua metanol.

205,0 mg placebo 0,00840
0,00757
0,00790
199,3 mg placebo 0,00562
0,00452
0,00471

Teniendo en cuenta estas lecturas de absorbancia, pueden considerarse despreciables cuando se valoran los
comprimidos, ya que la absorbancia sería >0,9, lo cual supondría un error de lectura espectrofotométrica de
alrededor del 0,55% por exceso. Sin embargo, cuando se trabaje a bajas absorbancias, el error pasaría a ser

- 104 -

más importante con lo que debería corregirse este exceso por un método adecuado, lectura previa de
absorbancia del placebo, o añadir placebo al patrón de paracetamol que se prepara para cada ensayo.

Figura 6: Espectro de absorbancia de placebo cargado con MP patrón de paracetamol.

Se comprueba que el pico correspondiente al principio activo es puro dado que los espectros UV


completos [para muestra placebo (figura 5), patrón paracetamol (figura 3) y placebo cargado de patrón
paracetamol (figura 6)] son idénticos y muestran los máximos característicos del paracetamol de referencia.

3.4.1.4 PRECISIÓN (REPETIBILIDAD Y REPRODUCIBILIDAD) Y
EXACTITUD CON PLACEBO CARGADO.
Para realizar este ensayo se ha preparado un placebo con la proporción de excipientes del comprimido y a
diferentes alícuotas del mismo se han añadido cantidades conocidas de paracetamol patrón, de manera que
las concentraciones de dicho producto expresadas como µg/ml, quedan entre 70 y 130% del contenido
teórico. Se han efectuado 8 valoraciones de cada una de las concentraciones, en 2 días diferentes y por 2
analistas.

Durante el primer día, tanto el analista A como el analista B han efectuado 2 determinaciones de cada nivel
de concentración (tablas 9-12):

ANALISTA 1

% % Concentración real ABSORBANCIA concentración extrapolada %
REAL (µg/ml) (µg/ml) RECUPERACIÓN
70 71,2 8,54 0,5668 8,51 99,6
71,3 8,56 0,5726 8,59 100,4
85 81,9 9,82 0,6610 9,92 101,0
82,0 9,84 0,6671 10,01 101,7
100 103,3 12,40 0,8247 12,38 99,8
103,6 12,43 0,8320 12,49 100,4
115 116,7 14,01 0,9568 14,36 102,5
116,5 13,98 0,9498 14,26 101,9
130 129,9 15,59 1,0452 15,75 101,0
130,2 15,06 1,0251 15,39 102,2
Tabla 9: Resultados analista 1, día 1.

- 106 -

ANALISTA 2

% % Concentración ABSORBANCIA Concentración extrapolada %
REAL real (µg/ml) RECUPERACIÓN
(µg/ml)
70 68,2 8,18 0,5420 8,14 99,4
67,5 8,10 0,5213 7,82 96,5
85 83,5 10,02 0,6758 10,14 101,2
84,3 10,12 0,6781 10,18 100,6
100 100,1 12,02 0,8124 12,19 101,5
104,1 12,50 0,8457 12,69 101,6
115 116,5 13,98 0,9400 14,11 100,9
116,8 14,02 0,9325 14,00 99,9
130 132,3 15,88 1,0587 15,99 100,7
131,6 15,79 1,0555 15,84 100,3

En el segundo día, tanto el analista A como el B efectuaron 2 determinaciones de cada nivel de
concentración:

ANALISTA 1

(µg/ml)
70 69,3 8,32 0,5432 8,15 98,0
70,0 8,40 0,5589 8,39 99,9
85 83,3 10,00 0,6785 10,18 101,8
86,7 10,40 0,6958 10,44 100,4
100 102,0 12,24 0,8305 12,46 101,8
101,5 12,18 0,8320 12,49 102,6
115 116,5 13,98 0,9456 14,19 101,5
116,2 13,94 0,9498 14,26 102,2
130 130,1 15,62 1,0147 15,54 99,5
130,7 15,68 1,0626 15,95 101,7


ANALISTA 2

(µg/ml)
70 70,0 8,40 0,5568 8,36 99,5
70,5 8,46 0,5600 8,41 99,4
85 84,9 10,18 0,6748 10,13 99,5
85,3 10,24 0,6758 10,14 99,1
100 101,1 12,14 0,8025 12,04 99,2
101,4 12,17 0,8204 12,31 101,2
115 116,7 14,01 0,9422 14,14 101,0
118,7 14,24 0,9495 14,25 100,1
130 133,3 16,00 1,0599 15,99 99,9
134,1 16,09 1,0690 16,04 99,7

En el cuadro resumen de la validación (tabla 13) se adjuntan todos los cálculos efectuados:

! la media de los dos resultados y su coeficiente de variación (repetibilidad del método), para cada
analista, nivel de concentración y día.
! la media (exactitud o recuperación), desviación estándar y coeficiente de variación global
(reproducibilidad) para cada una de las cinco concentraciones.

En la tabla 14, aparece el resumen de los parámetros estudiados.

- 108 -

VALIDACIÓN PARACETAMOL (AGUA –METANOL)

% DÍA 1 DÍA 2
99,62 97,99
ANALISTA 1 100,40 99,86
M 100,01 98,93
70% CV % 0,55 1,34 m 99,1
99,40 99,49 SD 1,23176513
ANALISTA 2 96,55 99,40 CV % 1,24308771
M 97,97 99,44
CV % 2,06 0,06
101,03 101,84
ANALISTA 1 100,50 100,42
M 100,77 101,13
85% CV % 0,37 1,00 m 100,5
101,19 99,45 SD 0,90665942
ANALISTA 2 100,57 99,05 CV % 0,90209028
M 100,88 99,25
CV % 0,31 0,20
99,82 101,83
ANALISTA 1 100,44 100,40
M 100,13 101,12
100% CV % 0,44 1,00 m 100,7
101,48 99,25 SD 0,91975674
ANALISTA 2 101,58 101,19 CV % 0,9129225
M 101,53 100,22
CV % 0,07 1,37
102,52 101,49
ANALISTA 1 101,94 102,23
m 102,23 101,86
115% CV % 0,40 0,52 m 101,2
100,89 100,95 SD 0,97342419
ANALISTA 2 99,86 100,08 CV % 0,96146485
M 100,37 100,52
CV % 0,73 0,62
101,00 99,52
ANALISTA 1 102,16 101,71
M 101,58 100,62
130% CV % 0,81 1,54 m 100,6
100,67 99,94 SD 0,94568166
ANALISTA 2 100,32 99,73 CV % 0,93975784
M 100,49 99,83
CV % 0,25 0,15
Tabla 13: Resultados totales para Placebo Agua-Metanol.


REPETIBILIDAD CV% entre 2,06 0,06
REPRODUCIBILIDAD 70% 1,24
CV % 85% 0,90
(n=8) 100% 0,91
115% 0,96
130% 0,94
EXACTITUD 70% 99,09
RECUPERACIÓN (%) 85% 100,51
(n=8) 100% 100,75
115% 101,24
130% 100,63
EXACTITUD GLOBAL M 100,44
(n=5) SD 0,8073
CV % 0,8037
t experimental 1,22899265
t tablas 2,776
P= 0.05 GL= 4
Tabla 14: Resumen de las estadísticas de validación.

CONCLUSIONES SOBRE LA REPETIBILIDAD

Los coeficientes de variación están comprendidos entre 0,06 % y 2,06%, por lo tanto puede concluirse que
el método analítico es repetitivo dado que, en todos los casos, excepto para el analista 2 el día 1 al 70% que
obtuvo un alto coeficiente de variación fuera de límites (límite máximo especificado por las normas ICH
(2%)). La investigación de los datos primarios no dio indicios de error, con lo cual en caso de ser éste el
método se debería verificar este resultado o reducir el intervalo de validación.

CONCLUSIONES SOBRE REPRODUCIBILIDAD

Viene dada por el coeficiente global para cada concentración ensayada los CV% son similares para todos
los niveles de concentración ensayados. Puede afirmarse que el método es reproducible (tabla 14).

CONCLUSIONES SOBRE LA EXACTITUD

De los resultados anteriores (tabla 14) se desprende que el intervalo de concentraciones en estudio se
encuentra comprendido entre el 99 y 101,24%, por lo que la técnica cumple con el requisito de exactitud,
siendo la recuperación media para todo el intervalo en estudio de 100,44 %, la cual es satisfactoria.

Se confirma con un test de t student que no hay diferencias significativas entre las recuperaciones medias
para cada nivel de concentración:

- 110 -

texp= |100 - R| * √n / SD = 1,228

ttab (p=0.05 y GL= 4) = 2,776

texp < ttab, lo que significa que ambos valores no son estadísticamente diferentes, es decir no existen
diferencias significativas entre la exactitud a nivel bajo (70, 85%), medio (100%) o alto (115, 130%) de
concentración del “analito”.

70% 85% 100% 115% 130%
99,6 101,0 99,8 102,5 101,0
100,4 100,5 100,4 101,9 102,2
98,0 101,8 101,8 101,5 99,5
99,9 100,4 100,4 102,2 101,7
99,4 101,2 101,5 100,9 100,7
96,5 100,6 101,6 99,9 100,3
99,5 99,5 99,2 101,0 99,9
99,4 99,1 101,2 100,1 99,7
Tabla 15: Datos tabulados para el cálculo del ANOVA.

Si se aplica un ANOVA de una dirección (cuadro 15) sobre los resultados de recuperación individuales
obtenidos para cada nivel, se obtiene una Fexperimental =5,1855, frente a la Ftablas(p=0,05; 4; 35) de 2,641, lo que
indica que el factor de concentración afecta a la recuperación, lo cual es a priori una dificultad del método,
ya que a bajas concentraciones las recuperaciones son menores que a altas concentraciones. Si interesase
definitivamente este método sobre los otros dos, debería reducirse el intervalo de validación para
comprobar que todos los parámetros de las validación demuestran la validez del método propuesto. Sin
embargo, la exactitud del método se considera adecuada ya que todas las recuperaciones están
comprendidas en un margen estrecho entre 99-101,2%, en todo el grupo de concentraciones estudiado.

Origen de las Suma de Grados de Promedio de F Probabilidad Valor crítico para F
variaciones cuadrados libertad los cuadrados
Entre grupos 20,8544945 4 5,213623632 5,185520 0,002181 2,641463936
Dentro de los grupos 35,1896830 35 1,005419516

Total 56,0441776 39
Tabla 16: análisis de la variancia del método de análisis agua-metanol.

3.4.1.5 LINEALIDAD PRINCIPIO ACTIVO Y PLACEBO
La linealidad del método para las muestras placebo adicionadas de patrón ha sido comprobada con las 5
concentraciones de paracetamol patrón (doble pesada) adicionadas de placebo, abarcando un intervalo que


incluye la concentración teórica de la muestra problema (70-130%) efectuando 8 replicados de cada
concentración.

Los resultados obtenidos son los siguientes:

CONCENTRACIÓN ABSORBANCIA FACTOR DE RESPUESTA
8,54 0,5668 0,06637
8,56 0,5726 0,06689
8,32 0,5432 0,06529
8,40 0,5589 0,06654
8,18 0,5420 0,06623
8,10 0,5213 0,06433
8,40 0,5568 0,06629
8,46 0,5600 0,06623
9,82 0,6610 0,06731
9,84 0,6589 0,06696
10,00 0,6785 0,06785
10,40 0,6958 0,06690
10,02 0,6758 0,06742
10,12 0,6781 0,06701
10,18 0,6748 0,06626
10,24 0,6758 0,06600
12,40 0,8247 0,06650
12,43 0,8320 0,06692
12,24 0,8305 0,06785
12,18 0,8145 0,06689
12,02 0,8124 0,06761
12,50 0,8457 0,06768
12,14 0,8025 0,06613
12,17 0,8204 0,06742
14,01 0,9568 0,06830
13,98 0,9498 0,06792
13,98 0,9456 0,06762
13,94 0,9498 0,06811
13,98 0,9400 0,06722
14,02 0,9325 0,06653
14,01 0,9422 0,06726
14,24 0,9495 0,06668
15,59 1,0452 0,06703
15,06 1,0251 0,06807
15,62 1,0147 0,06498
15,68 1,0626 0,06777
15,88 1,0587 0,06667
15,79 1,0555 0,06684
16,00 1,0599 0,06624
16,09 1,0690 0,06645
Tabla 17: Resultados Placebo en Agua-Metanol.

A estos datos (concentraciones y absorbancias, tabla 18) se ha aplicado el test estadístico de comparación

- 112 -

de variancias de Cochran, obteniéndose una Gexperimental de 0,36855, que comparado con la Gtablas para
p=0,05, 5 concentraciones y 8 replicados que es 0,4564, el valor experimental es inferior al tabulado, con lo
cual no existen diferencias significativas entre las variancias de los diferentes niveles de concentración y
puede aplicarse la hipótesis de un modelo lineal, estimado por el método de mínimos cuadrados.

70 85 100 115 130
0,5668 0,6610 0,8247 0,9568 1,0452
0,5726 0,6589 0,8320 0,9498 1,0251
0,5432 0,6785 0,8305 0,9456 1,0147
0,5589 0,6958 0,8145 0,9498 1,0626
0,5420 0,6758 0,8124 0,9400 1,0587
0,5213 0,6781 0,8457 0,9325 1,0555
0,5568 0,6748 0,8025 0,9422 1,0599
0,5600 0,6758 0,8204 0,9495 1,0690
Tabla 18: Absorbancias obtenidas tabuladas para el cálculo del Test de Cochran


RESUMEN
70 % 8 4,42166 0,5527075 0,00027075
85 % 8 5,39874 0,67484313 0,00013008
100 % 8 6,58257 0,82282156 0,00018073
115 % 8 7,56609 0,94576125 5,5699E-05
130 % 8 8,39062 1,0488275 0,00037194
Tabla 19: ANOVA de los datos obtenidos Placebo Agua-Metanol.


El factor de respuesta se calcula dividiendo la concentración (en µg/ml) por la absorbancia. Se determina el
valor medio, la desviación estándar y el coeficiente de variación de los factores de respuesta calculados.

Media 0,06686
CV% 1,27654
Tabla 21: Estadística de los factores de respuesta.

El coeficiente de variación presenta un valor menor que el establecido como indicador de linealidad (<5%),
con lo cual puede afirmarse que existe una relación de linealidad entre ambas variables (tabla 21).



µg/ml) y en las ordenadas las correspondientes absorbancias (figura 9):


y = 0,06777 ·x - 0,010237

Curva de regresión ajustada (agua metanol): placebo + patrón

1,2000
ABSORBANCIA

1,0000
0,8000 Y
0,6000 Pronóstico para Y
0,4000 Lineal (Pronóstico para Y)
0,2000
-
0,00 5,00 10,00 15,00 20,00
CONCENTRACIÓN (mcg/ml)

Figura 7: Recta de calibración Placebo + Paracetamol patrón en agua - metanol.

r2 ajustado 0,99691
Observaciones 40
Tabla 22: Estadísticas de la regresión Placebo Metanol-Agua.

Tanto el valor del coeficiente de correlación (cercano a 1, r=0,99849, tabla 22) como el de determinación r2
indican una buena linealidad. El coeficiente de determinación da una indicación del grado de aproximación

de la pendiente (b); b ± sb t, y de la ordenada en el origen (a); a ± sa t (tabla 23).

- 114 -

LÍMITES DE b 0,068993057 0,0665481 No incluye el cero 112,2605454
LIMITES DE a 0,004889072 -0,025365 Incluye el cero -1,370510322
t (GL(n-2)=38, P=0.05%) 2,025
Ordenada en el origen (a) -0,010237783 0,0074701 -1,370510322 0,178569757
Pendiente (b) 0,067770585 0,0006037 112,2605454 1,55677E-49
Tabla 23: Análisis de los parámetros de la regresión.



texp = |b| / sb = 112,26



incluyen el cero por lo que el método no presenta sesgo. El test de t:

texp = |a| / sa = -1,37

Este valor de t es menor que el de ttablas = 2,228 (para p= 0,05 y GL= 10), por lo que la probabilidad de que
a = 0 es muy elevada.

de regresión:

ANOVA DE LA REGRESIÓN
Grados de Suma de Promedio de los Fexperimental F tablas
libertad cuadrados cuadrados
Regresión (SSreg) 1 1,283959426 1,283959426 12602,43006 4,098168915
Falta de ajuste (SSlof) 3 -0,0102602 -0,003420066 -8,47047589 2,874187999
Error puro (SSpe) 35 0,014131709 0,000403763
Residuos (SSr) 38 0,003871512 0,000101882
Total 39 1,287830938
Tabla 24: Análisis completo de la Regresión Placebo Agua-Metanol.




3.4.1.6 CONCLUSIÓN SOBRE EL MÉTODO AGUA-METANOL
La mayoría de los parámetros de validación cumplen las especificaciones para considerar como validado el
método, aunque se han encontrado ciertas dificultades que deberían ser resueltas si éste es el método
escogido como método de análisis final. Las dificultades son las siguientes:

! la absorbancia del placebo es importante (provoca un error de aproximadamente un 1% por exceso en
las lecturas), lo cual exigirá preparar patrón cargado como patrón cuando se analicen comprimidos por
este método.

! la recuperación resulta algo afectada (probabilidad del 2,2%) por el porcentaje de principio activo
presente en la muestra (aunque no es importante ya que pasa del 99% para el placebo al 70% a por
encima del 100% para el resto).

! Ha habido un “fuera de especificaciones” en la repetibilidad de 1 análisis de los 12 realizados, el
correspondiente al analista 2, día 1, placebo cargado al 70%, aunque es casi insignificante CV 2,06%
frente a la especificación prevista de 2% CV.

En todo caso las acciones a seguir serían acortar el intervalo de análisis para verificar si la recuperación no
resulta afectada.

3.4.2 ANÁLISIS EN SOLUCIÓN REGULADORA: RESULTADOS

3.4.2.1 GENERALIDADES

SOFTWARE: UV-VIS HP 89532A UV-VIS Software Rev 1.00.00

- 116 -



proveedor: SDM
nº lote: SDM/PAR/PAJ/95 (31/03/95)
proveedor: SDM
nº lote: SDM/23121 (03/04/95)
proveedor: SDM
nº lote: 98473 (03/04/95)


proveedor: Mallinckrodt Chemical Inc
lote: 6375994M349 (caducidad 10/2000)

Reactivos:

Agua desionizada (SDM, conductividad <0,2 µS).
Ácido fosfórico 85% Probus Lote: 25587 Caducidad: no aparece.
Hidróxido sódico lentejas para análisis ACS-ISO. Panreac. Lote: 139853270.
Disodiohidrogenofosfato trihidrato Merck Lote: A232099.



1 -4,0 ·10-4
2 +4,1· 10-4
3 -2,3 ·10-4


agua desionizada durante 48 horas.

Se adjunta la gráfica de absorbancia obtenida (figura 8):



Se determina la absorbancia del disolvente solución reguladora fosfato a pH 5,8 a 240 nm frente al aire. En
esta longitud de onda, la absorbancia será inferior a 0,40 y preferiblemente <0,20.

1 + 5 · 10-4
2 -1,5 · 10-3
3 +0,1 · 10-4

Se adjunta el gráfico de absorbancia obtenida (figura 9), donde puede comprobarse que es menor de 0,20
en todo el espectro:

- 118 -

Figura 9: Absorbancia del disolvente (solución reguladora de fosfatos a pH 5,8).

Por otra parte, se comprueba el máximo de absorbancia del paracetamol (λ= 244 nm) en el medio
especificado (figura 10):

Figura 10: Máximo de absorbancia del paracetamol en solución reguladora de fosfatos pH 5,8.



(60-140%).


CONCENTRACIÓN (µg/ml) Absorbancia Factor de respuesta
9,30 0,63271 0,068033
10,01 0,68127 0,068059
12,45 0,82288 0,066095
13,01 0,86549 0,066525
14,63 0,96443 0,065921
15,10 0,99477 0,065879
18,11 1,20250 0,066400
19,97 1,29100 0,064663
Tabla 25: Resultados MP solución reguladora.

A estos datos (concentraciones y absorbancias, tabla 26) se ha aplicado el test estadístico de homogeneidad
de variancias de Cochran (tabla 27), obteniéndose una Gexperimental de 0,605908 que se compara con la
tabulada (Gtablas) para una probabilidad de p=0,05, para 4 concentraciones ensayadas y 2 replicados de cada
concentración, que toma un valor de 0,9065. Como el valor experimental es inferior al tabulado, no existen
diferencias estadísticamente significativas entre las variancias de los diferentes niveles de concentración y
puede aplicarse la hipótesis de un modelo lineal (estimado por el método de mínimos cuadrados). Por otra
parte, también se aplica el test estadístico de los factores de respuesta, que corrobora la existencia de
linealidad entre ambos factores.

A1 A2 A3 A4
0,6327 0,8229 0,9644 1,2025
0,6813 0,8655 0,9948 1,2910
Tabla 26: Absorbancias tabuladas para el Test de Cochran.


RESUMEN
Columna 1 2 1,31398 0,65699 0,00117904
Columna 2 2 1,68837 0,844185 0,00090781
Columna 3 2 1,9592 0,9796 0,00046026
Columna 4 2 2,4935 1,24675 0,00391612
Tabla 27: ANOVA de MP en Solución Reguladora.


- 120 -

El factor de respuesta (tabla 25) se calcula dividiendo la concentración (en µg/ml) por la absorbancia. Se
calculados.

Media 0,066446897
CV% 1,709152503
Tabla 29: Estadística factores de respuesta MP Solución Reguladora.


µg/ml) y en ordenadas las correspondientes absorbancias (figura 11):


y = 0,062712906 x + 0,049393073

Curva de regresión ajustada: patrón (solución reguladora)
1,40000
1,20000
Absorbancia

1,00000
0,80000 Y
0,40000 Lineal (Pronóstico para Y)
0,20000
-
- 5,00 10,00 15,00 20,00 25,00

concentración (µg /ml)

Figura 11: Recta de calibrado de MP paracetamol en solución reguladora de fosfatos a pH 5,8.

r2 ajustado 0,99848
Observaciones 8
Tabla 30: Estadística de la regresión Mp Solución Reguladora.


Tanto el valor del coeficiente de correlación (cercano a 1, r=0.99935) como el de determinación r2, indican
una buena linealidad (tabla 30). El coeficiente de determinación da una indicación del grado de
aproximación de los puntos a la relación lineal. Por lo tanto, puede afirmarse que esta relación lineal explica
en un 99,87% la variancia de la absorbancia.

de la pendiente (b); b ± sb t, y de la ordenada en el origen (a); a ± sa t.

Líimites a 0,08219 -0,071472 incluye el cero 3,68513813
t (GL(n-2)=6, P=0.05%) 2,4470
Ordenada en el origen (a) 0,04939 0,013403 3,685138 0,010267820
Pendiente (b) 0,06271 0,000925 67,795222 6,9282 E-10
Tabla 31: Estadísticas de los parámetros de la regresión.



texp = |b| / sb = 67,79522203



no incluyen el cero por lo que el método presenta un ligero sesgo. El Test de t:

texp = |a| / sa = 3,685138132

Este valor de t es mayor que el tabulado (2,4470) para una probabilidad del 95% y 6 grados de libertad, por
lo que la probabilidad de que a # 0 es muy elevada.

de regresión:

- 122 -

ANÁLISIS DE LA VARIANCIA
Grados de Suma de cuadrados Promedio de los F F
libertad cuadrados Experimental tablas
Regresión (SSreg) 1 0,375323748 0,375323748 4596,192 5,987
Error puro (SSpe) 4 0,006463226 0,001615806
Residual (SSr) 6 0,000489958 8,16597E-05
Total 7 0,375813706
Tabla 32: ANOVA MP Solución Reguladora.



Se ha preparado una muestra problema de placebo en las mismas condiciones que se tratarían los
onda de absorción del paracetamol, existe una señal de ruido debida a los excipientes. Se analiza la
absorbancia a λ= 244 nm, para evaluar su interferencia en el análisis del paracetamol.

200,5 mg placebo 0,0282
0,0342
0,0392
195,3 mg placebo 0,0245
0,0310
0,0471


Figura 12: Absorbancia del placebo en solución reguladora de fosfatos a pH 5,8.

comprimidos, ya que la absorbancia esperada sería >0,9, lo cual supondría un error de lectura
espectrofotométrica de alrededor del 1% por exceso. Sin embargo, cuando se trabaje a bajas absorbancias,
el error pasaría a ser más importante con lo que debería corregirse este exceso por un método adecuado,
lectura previa de absorbancia del placebo, o añadir placebo al patrón de paracetamol que se prepara para
cada ensayo o se extrapolan en la recta patrón con placebo.

completos (para muestra placebo 100% (figura 12), patrón paracetamol (figura 10) y placebo cargado de
patrón paracetamol (figura 13)) son idénticos y muestran los máximos característicos del paracetamol de
referencia.

- 124 -

Figura 13: Espectro de absorbancia del placebo cargado con paracetamol en solución reguladora de fosfatos a pH 5,8.

Para realizar este ensayo se ha preparado un placebo y a diferentes alícuotas del mismo se han añadido
cantidades conocidas de paracetamol patrón, de manera que las concentraciones de dicho producto
expresadas como µg/ml, quedan entre 70 y 130% del contenido teórico. Se han efectuado 8 valoraciones
de cada una de las concentraciones, en 2 días diferentes y por 2 analistas.

Durante el primer día, tanto el analista A como el analista B han efectuado 2 determinaciones de cada nivel
de concentración:


ANALISTA 1

% % Concentración real ABSORBANCIA Concentración extrapolada %
REAL (µg/ml) (µg/ml) RECUPERACIÓN
70 58,3 8,75 0,6047 9,01 103,0
62,7 9,40 0,6390 9,53 101,3
85 81,3 12,20 0,8147 12,14 99,5
84,0 12,60 0,8398 12,52 99,4
100 102,0 15,30 1,0075 15,02 98,2
102,7 15,40 1,0179 15,17 98,5
115 114,7 17,20 1,1591 17,28 100,5
118,7 17,80 1,1660 17,80 100,0
130 130,0 19,50 1,2688 19,25 98,7
129,3 19,40 1,2664 18,88 97,3

ANALISTA 2

% % REAL Concentración ABSORBANCIA Concentración extrapolada % RECUPERACIÓN
Real (µg/ml)
(µg/ml)
70 61,3 9,2 0,6139 9,21 100,2
70 64,0 9,6 0,6453 9,69 100,9
85 79,3 11,9 0,7959 11,95 100,4
85 85,3 12,8 0,8488 12,74 99,5
100 100,0 15,0 0,9931 14,90 99,4
100 100,0 15,0 1,0029 15,05 100,3
115 118,7 17,8 1,1660 17,50 98,3
115 115,3 17,3 1,1471 17,22 99,5
130 126,7 19,0 1,2547 18,80 99,0
130 132,7 19,9 1,2879 19,33 97,1

concentración:

- 126 -

ANALISTA 1

% % REAL Concentración ABSORBANCIA Concentración extrapolada %
real (µg/ml) RECUPERACIÓN
(µg/ml)
70 59,3 8,9 0,6077 9,06 101,8
61,3 9,2 0,6265 9,34 101,5
85 79,3 11,9 0,7959 11,86 99,7
80,7 12,1 0,8084 12,05 99,6
100 100,0 15,0 1,0021 14,94 99,6
101,3 15,2 1,0029 14,95 98,4
115 110,7 16,6 1,0998 16,39 98,8
112,7 16,9 1,1090 16,53 97,8
130 124,7 18,7 1,2840 18,81 100,6
128,7 19,3 1,2758 19,02 98,5
Tabla 35: Analista 1, día 2.

ANALISTA 2

(µg/ml)
70 64,7 9,7 0,6453 9,69 99,8
64,0 9,6 0,6516 9,78 101,9
85 83,3 12,5 0,8298 12,45 99,6
85,3 12,8 0,8564 12,85 100,4
100 105,3 15,8 1,0524 15,80 100,0
102,7 15,4 1,0154 15,24 99,0
115 113,3 17,0 1,1409 17,12 100,7
116,0 17,4 1,1534 17,31 99,5
130 128,7 19,3 1,2602 18,94 98,2
130,0 19,5 1,2854 19,29 98,9

En el cuadro resumen de la validación (tabla 37 y 38) se adjuntan todos los cálculos efectuados:
! la media de los dos resultados y su coeficiente de variación (repetibilidad), para cada analista, nivel
de concentración y día.
! la media (exactitud o recuperación), desviación estándar y coeficiente de variación global


VALIDACIÓN PARACETAMOL (SOLUCIÓN REGULADORA)

% DÍA 1 DÍA 2
103,02 101,78
ANALISTA 1 101,34 101,51
m 102,18 101,64
70% CV % 1,16 0,19 m 101,3
100,16 99,85 SD 1,00850892
ANALISTA 2 100,89 101,88 CV % 0,9312531
m 100,52 100,86
CV % 0,51 1,42
99,54 99,69
ANALISTA 1 99,35 99,59
m 99,45 99,64
85% CV % 0,13 0,07 m 99,8
100,38 99,64 SD 0,40127898
ANALISTA 2 99,53 100,41 CV % 0,37623368
m 99,96 100,03
CV % 0,60 0,55
98,16 99,59
ANALISTA 1 98,53 98,35
m 98,34 98,97
100% CV % 0,27 0,88 m 99,2
99,37 99,97 SD 0,79241351
ANALISTA 2 100,35 98,96 CV % 0,74751939
m 99,86 99,47
CV % 0,70 0,72
100,45 98,76
ANALISTA 1 100,00 97,82
m 100,23 98,29
115% CV % 0,32 0,68 m 99,4
98,32 100,73 SD 0,95792153
ANALISTA 2 99,52 99,49 CV % 1,03039831
m 98,92 100,11
CV % 0,86 0,87
98,72 100,57
ANALISTA 1 97,30 98,54
m 98,01 99,55
130% CV % 1,02 1,44 m 98,5
98,96 98,15 SD 1,00703518
ANALISTA 2 97,14 98,94 CV % 1,09253427
m 98,05 98,54
CV % 1,31 0,56
Tabla 37: Resultados en conjunto Placebo solución regualdora.

- 128 -

REPRODUCIBILIDA 70% 0,93
D
CV % 85% 0,38
(n=8) 100% 0,75
115% 1,03
130% 1,09
EXACTITUD 70% 101,30
RECUPERACIÓN 85% 99,77
(n=8) 100% 99,16
115% 99,38
130% 98,54
(n=5) m 99,63
SD 0,9259
CV % 0,9293
t 0,88903032
experimental
t tablas 2,776
P= 0.05 GL= 4
Tabla 38: Estadística de los resultados Placebo Solución Reguladora.


Los coeficientes de variación están comprendidos entre 0,07 % y 1,44 %,(tablas37 y 38). por lo tanto puede
concluirse que el método analítico es repetitivo dado que, en todos los casos, se obtienen valores por
debajo del límite máximo especificado por las normas ICH (2%).

CONCLUSIONES SOBRE LA REPRODUCIBILIDAD

Viene dada por el coeficiente global para cada concentración (tabla 38); los CV% son similares (sobre el
1%) para todos los niveles de concentración ensayados.


De los resultados anteriores (tablas 37 y 38) se desprende que la exactitud en el intervalo de
concentraciones que se estudia (70-130%) se encuentra comprendido entre el 98,54 y 101,3%, por lo que la
técnica cumple con el requisito de exactitud, siendo la recuperación media para todo el intervalo en estudio
del 99,63%, la cual es satisfactoria. Se confirma con una t student, que no hay diferencias significativas entre
las recuperaciones medias para cada nivel de concentración:

texp= |100 - R| * √n / SD = 0,889

ttab (p=0.05 y GL= 4) = 2,776


diferencias significativas entre la exactitud a nivel bajo (70%), medio (100%) o alto (130%) de
concentración del “analito”, aunque parece que si las haya ya que el intervalo 85-115% presenta
recuperaciones del 99%, mientras que los dos extremos presentan recuperaciones más alejadas.

Si se aplica un ANOVA de una dirección o con un sólo criterio de clasificación sobre los resultados de
recuperación individuales obtenidos para cada nivel (tabla 39), el test de F, da una Fexperimental =10,679, frente
a la Ftablas(p=0,05; 4; 35) de 2,641, lo que indica que el factor de concentración sí afecta a la recuperación
(aunque con una probabilidad baja), como se suponía por los datos. Sin embargo, la exactitud del método
se considera adecuada ya que todas las recuperaciones están comprendidas en un margen estrecho entre 96-
102%, en todo el intervalo de concentraciones estudiado.

70 85 100 115 130
103,0 99,5 98,2 100,5 98,7
101,3 99,4 98,5 100,0 97,3
101,8 99,7 99,6 98,8 100,6
101,5 99,6 98,4 97,8 98,5
100,2 100,4 99,4 98,3 99,0
100,9 99,5 100,3 99,5 97,1
99,8 99,6 100,0 100,7 98,2
101,9 100,4 99,0 99,5 98,9
Tabla 39: Resultados de recuperación tabulados para el cálculo de ANOVA.


RESUMEN
70 % 8 810,4123 101,301537 1,01709024
85 % 8 798,146766 99,7683458 0,16102482
100 % 8 793,274366 99,1592958 0,62791917
115 % 8 795,079867 99,3849834 1,04870132
130 % 8 788,307274 98,5384093 1,15899412

ANÁLISIS DE
VARIANCIA
Origen de las Suma de Grados de Promedio de F Probabilidad Valor crítico
variaciones cuadrados libertad los cuadrados para F
Entre grupos 34,2907325 4 8,57268312 10,6791984 9,1888E-06 2,64146394
Dentro de los 28,0961077 35 0,80274593
grupos

Total 62,3868401 39
Tabla 40: Resultados del análisis de la variancia.

- 130 -

3.4.2.5 LINEALIDAD

La linealidad del método para las muestras placebo adicionadas de patrón ha sido comprobada con 5
incluye la concentración teórica de la muestra problema (70-130%) y obteniendo 8 replicados de cada
concentración. Los resultados obtenidos aparecen en la tabla 41:

CONCENTRACIÓN ABSORBANCIA FACTOR DE RESPUESTA
8,75 0,6047 0,06911
9,40 0,6390 0,06798
8,90 0,6077 0,06828
9,20 0,6265 0,06810
9,20 0,6139 0,06673
9,60 0,6453 0,06722
9,70 0,6453 0,06653
9,60 0,6516 0,06788
12,20 0,8147 0,06678
12,60 0,8398 0,06665
11,90 0,7959 0,06688
12,10 0,8084 0,06681
11,90 0,7959 0,06688
12,80 0,8488 0,06632
12,50 0,8298 0,06638
12,80 0,8564 0,06690
15,30 1,0075 0,06585
15,40 1,0179 0,06610
15,00 1,0021 0,06681
15,20 1,0029 0,06598
15,00 0,9931 0,06620
15,00 1,0029 0,06686
15,80 1,0524 0,06661
15,40 1,0154 0,06594
17,20 1,1591 0,06739
17,80 1,1660 0,06550
16,60 1,0998 0,06625
16,90 1,1090 0,06562
17,80 1,1660 0,06550
17,30 1,1471 0,06630
17,00 1,1409 0,06711
17,40 1,1534 0,06629
19,50 1,2688 0,06507
19,40 1,2664 0,06528
18,70 1,2840 0,06866
19,30 1,2758 0,06610
19,00 1,2547 0,06604
19,90 1,2879 0,06472
19,30 1,2602 0,06530
19,50 1,2854 0,06592
Tabla 41: Resultados Placebo Solución-Reguladora.


de variancias de Cochran, obteniéndose una Gexperimental de 0,34119, que comparada con la Gtablas para
p=0,05, 5 concentraciones y 8 replicados que es 0,4564, el valor experimental es inferior al tabulado, con lo
cual no existen diferencias significativas entre las variancias de los diferentes niveles de concentración y
puede aplicarse la hipótesis de un modelo lineal, estimado por el método de mínimos cuadrados.

70 85 100 115 130
0,6047 0,8147 1,0075 1,1591 1,2688
0,6390 0,8398 1,0179 1,1660 1,2664
0,6077 0,7959 1,0021 1,0998 1,2840
0,6265 0,8084 1,0029 1,1090 1,2758
0,6139 0,7959 0,9931 1,1660 1,2547
0,6453 0,8488 1,0029 1,1471 1,2879
0,6453 0,8298 1,0524 1,1409 1,2602
0,6516 0,8564 1,0154 1,1534 1,2854
Tabla 42: Resultados tabulados para Test Cochran.


RESUMEN
70 % 8 5,03404588 0,62925574 0,00034605
85 % 8 6,58965374 0,82370672 0,00055117
100 % 8 8,09415525 1,01176941 0,00033154
115 % 8 9,14119133 1,14264892 0,0006381
130 % 8 10,1832186 1,27290233 0,00015196
Tabla 43: análisis de la variancia de la respuesta según el factor concentración.


calculados.

Media 0,066570438
CV% 1,458943764
Tabla 45: Estadística de los factores de respuesta Placebo Solución Reguladora.

El coeficiente de variación presenta un valor menor (tabla 45) que el establecido como indicador de

- 132 -

linealidad (<5%), con lo cual puede afirmarse que existe una relación de linealidad entre ambas variables.

µg/ml) y en las ordenadas las correspondientes absorbancias (figura 14):


y = 0,063378053 ·x + 0,0429532

Curva de regresión ajustada (solución reguladora): placebo + patrón

1,4000
1,2000
ABSORBANCIA

1,0000 ABSORBANCIA
0,8000
0,6000 Pronóstico ABSORBANCIA
0,4000
0,2000 Lineal (Pronóstico
ABSORBANCIA)
-
0,00 5,00 10,00 15,00 20,00 25,00
CONCENTRACIÓN (mcg/ml)

Figura 14: Recta de calibración del placebo cargado de paracetamol en solución reguladora fosfato a pH 5,8.

Coeficiente de correlación múltiple (r) 0,998722677
r2 ajustado 0,9973798
Observaciones 40
Tabla 46: Estadísticas de la regresión Placebo solución Reguladora.

Tanto el valor del coeficiente de correlación (cercano a 1, r=0,998722) como el de coeficiente de
determinación r2 indican una buena linealidad. El coeficiente de determinación da una indicación del grado
de aproximación de los puntos a la relación lineal. Por lo tanto, puede afirmarse que esta relación lineal
explica el 99,74% de la variancia de la absorbancia.




LÍMITES DE b 0,065256508 0,0631229 no incluye el cero 121,8456442
LIMITES DE a 0,048840903 0,0165762 no incluye el cero 4,105706625
t (GL(n-2)=38, P=0.05%) 2,025
Pendiente (b) 0,06154 0,0005051 57,795222 5,5982 E-10
Tabla 47: Test de proporcionalidad del recta de calibración Placebo Solución Reguladora.



texp = |b| / sb =121,8456442



no incluyen el cero, con lo cual el método presenta un ligero sesgo. El test de t:

texp = |a| / sa = 4,105706625

Este valor de t es superior al tabulado (para p= 0.05 y GL= 38), por lo que la probabilidad de que a # 0 es
muy elevada y por otra parte el método presenta un ligero sesgo.

Otro test estadístico de alta significación estadística es aplicar un análisis de la variancia (ANOVA)
completo a la recta de regresión:

Grados de Suma de Promedio de los Fexperimenta F tablas
libertad cuadrados cuadrados l
Regresión (SSreg) 1 2,093789499 2,093789499 14846,361 4,098168915
Error puro (SSpe) 35 0,014131709 0,000403763
Residuos (SSr) 38 0,005359158 0,00014103
Total 39 2,099148658

- 134 -

Tabla 48: ANOVA de la regresión Placebo Solución Reguladora.



3.4.2.6 CONCLUSIÓN MÉTODO DE ANÁLISIS CON SOLUCIÓN
REGULADORA
En esta validación analítica se han comprobado la bondad del método para el intervalo 70-130%, lo única
salvedad que aparece es que en el análisis el factor de concentración para la recuperación influye y presenta
ligeras diferencias aunque éstas son significativas. Además presenta un ligero sesgo positivo lo cual ya se
conocía pues el placebo absorbe en la misma longitud de onda que el paracetamol.

En caso de ser este el método escogido, debería reducirse en el intervalo de análisis y ser utilizado con un
patrón adicionado de placebo para corregir el sesgo positivo del análisis.

3.4.3 ANÁLISIS EN AGUA: RESULTADOS

3.4.3.1 GENERALIDADES

SOTWARE: UV-VIS HP 89532A UV-VIS Software Rev 1.00.00



proveedor: SDM
nº lote: No aparece (31/03/95)
proveedor: SDM


proveedor: SDM


proveedor: Mallinckrodt Chemical Inc.
nº lote: 6375994M349 (caducidad 10/2000)

Reactivos:

Agua desionizada de red (SDM) obtenida por intercambio iónico (conductividad <0,2 µS).



1 -2,1 · 10-4
2 -1,9 · 10-4
3 +2,3 · 10-4


- 136 -

agua desionizada durante 48 horas. Se adjunta la gráfica de absorbancia obtenida (figura 15).


Se determina la absorbancia del disolvente agua desionizada frente al aire a 240 nm. En esta longitud de
onda, la absorbancia será inferior a 0,40 y preferiblemente <0,20.

1 - 4,6 *10-5
2 +3,4 * 10-4
3 +2,4 * 10-4
Se adjunta el gráfico de absorbancia obtenido (figura 16):

Figura 16: Absorbancia del disolvente (agua desionizada) frente al aire.

Se hace la comprobación del máximo de absorbancia de la materia prima (paracetamol) en agua que
coincide con el de Farmacopea (244 nm). Se adjunta el gráfico de absorbancia obtenido (figura 17):


Figura 17: Máximo de absorbancia del patrón paracetamol en agua desionizada.


(50-150%).


CONCENTRACIÓN (µg/ml) Absorbancia factor de respuesta
7,47 0,5067300 0,067835
7,70 0,5088940 0,066090
10,00 0,6371300 0,063713
10,20 0,6628310 0,064983
15,03 0,9602500 0,063889
15,20 0,9707040 0,063862
20,04 1,2634000 0,063044
20,11 1,2701200 0,063159
22,57 1,4258000 0,063172
22,50 1,4269000 0,063418
Tabla 49: Resultados MP en Agua.

de variancias de Cochran, obteniéndose una Gexperimental de 0,805863 que se compara con la Gtablas de 0,8412
para p=0,05, 5 concentraciones y 2 replicados. El valor experimental es inferior al tabulado, con lo cual no
existen diferencias estadísticamente significativas entre las variancias de los diferentes niveles de
concentración y puede aplicarse la hipótesis de un modelo lineal, estimado por el método de mínimos

- 138 -

cuadrados. Por otra parte, también se aplica el test estadístico de los factores de respuesta, para averiguar la
existencia o no de linealidad entre ambos factores.

50% 75% 100% 125% 150%
0,5067 0,6371 0,9603 1,2634 1,4258
0,5089 0,6628 0,9707 1,2701 1,4269
Tabla 50: Resultados de Absorbancia tabulados para el cálculo de Test de Cochran.

Análisis de varianza de un factor

RESUMEN
Grupos Cuenta Suma Promedio Varianza
50% 2 1,015624 0,507812 2,3414E-06
75% 2 1,299961 0,6499805 0,00033027
100% 2 1,930954 0,965477 5,4643E-05
125% 2 2,53352 1,26676 2,2579E-05
150% 2 2,8527 1,42635 6,05E-07
Tabla 51: ANOVA de MP en Agua.


calculados (tabla 53).

Media 0,06462037
CV% 2,48870445
Tabla 53: Estadística factores respuesta MP en Agua.

con lo cual puede afirmarse que existe una relación de linealidad entre ambas variables.



y = 0,0615592 x + 0,034840041


Absorbancia Curva de regresión ajustada (agua): patrón paracetamol

1,5000000
1,0000000
0,5000000
0,0000000 Y
- 5,00 10,00 15,00 20,00 25,00 Pronóstico para Y

Figura 18: Recta de calibrado del patrón paracetamol en agua.

R2 ajustado 0,999626848
Observaciones 10
Tabla 54: Estadísticas de la regresión MP en Agua.

Tanto el valor del coeficiente de correlación (cercano a 1, r=0,99983, tabla 54) como el de determinación r2,
indican una buena linealidad. El coeficiente de determinación da una indicación del grado de aproximación


Límites a 0,04957 0,020105 no incluye el cero 5,4524817
t (GL(n-2)=8, P=0.05%) 2,306006
Pendiente (b) 0,0615592 0,000396448 155,276739 3,3102 E-15
Tabla 55: Test de proporcionalidad de la regresión MP en Agua.



- 140 -


texp = |b| / sb = 155,2767394



no incluyen el cero por lo que el método presenta un ligero sesgo. El Test de t:

texp = |a| / sa = 5,452481758

Este valor de t es mayor de 2,306 (para p= 0,05 y GL=8), por lo que la probabilidad de que a # 0 es muy
elevada.

de regresión:

ANÁLISIS DE LA VARIANCIA
Grados de libertad Suma de Promedio de los F F tablas
cuadrados cuadrados Experimental
Regresión (SSreg) 1 1,224297092 1,224297092 24110,865 5,31764499
Error puro (SSpe) 4 1,224292875 0,306073219
Residual (SSr) 8 0,000406223 5,07778E-05
Total 9 1,224703315
Tabla 56: Análisis de la variancia de la regresión MP en Agua.

Del cual puede concluirse, que dado que Fexp>Ftablas (p=0,05; 1; 8)= 5,32 queda demostrada la existencia de
una pendiente # 0.


Se ha preparado una muestra problema de placebo en las mismas condiciones que se tratarían los
onda de absorción del paracetamol, existe una señal de ruido debida a alguno de los excipientes. Se analiza


la absorbancia a λ= 244 nm, para evaluar su interferencia en el análisis del paracetamol.

200,0 mg placebo 0,01099
0,01341
0,01075
183,0 mg placebo 0,00850
0,00871
0,00951

Figura 19: Absorbancia del placebo en agua desionizada.

comprimidos, ya que la absorbancia esperada sería >0,9, lo cual supondría un error de lectura
espectrofotométrica de alrededor del 0,55% por exceso. Sin embargo, cuando se trabaje a bajas
absorbancias, el error pasaría a ser más importante con lo que debería corregirse este exceso por un método
adecuado: lectura previa de absorbancia del placebo, o añadir placebo al patrón de paracetamol que se
prepara para cada ensayo o extrapolar la absorbancia en una recta adicionada de placebo.

completos (para muestra placebo 100% (figura 19), patrón paracetamol (figura 17) y placebo cargado de
patrón paracetamol (figura 20)) son idénticos y muestran los máximos característicos del paracetamol de
referencia.

- 142 -

Figura 20: Espectro de absorbancia del placebo cargado con MP paracetamol.

Para realizar este ensayo se ha preparado un placebo y a diferentes alícuotas del mismo se han añadido
cantidades conocidas de paracetamol patrón, de manera que las concentraciones de dicho producto
expresadas como µg/ml, quedan entre 50 y 150% del contenido teórico. Se han efectuado 8 valoraciones
de cada una de las concentraciones, en 2 días diferentes y por 2 analistas. Durante el primer día, tanto el
analista A como el analista B han efectuado 2 determinaciones de cada nivel de concentración:


ANALISTA 1

% % REAL Concentración real ABSORBANCIA Concentración % RECUPERACIÓN
(µg/ml) extrapolada (µg/ml)
50 50,5 7,57 0,5090 7,61 100,5
50,9 7,63 0,5102 7,62 99,9
75 74,7 11,20 0,7540 11,27 100,6
74,1 11,11 0,7510 11,22 101,0
100 103,7 15,55 1,0350 15,47 99,5
100,9 15,14 1,0069 15,04 99,4
125 125,7 18,86 1,2436 18,58 98,5
125,4 18,81 1,2531 18,72 99,5
150 149,9 22,48 1,5104 22,46 99,9
150,7 22,61 1,5047 22,48 99,4

ANALISTA 2

% % REAL concentración real ABSORBANCIA Concentración % RECUPERACIÓN
50 49,7 7,45 0,4952300 7,43 99,8
50,8 7,62 0,5124000 7,69 100,9
75 72,7 10,90 0,7169703 10,76 98,7
74,0 11,10 0,7401200 11,11 100,1
100 97,3 14,60 0,9750300 14,63 100,2
96,7 14,50 0,9623410 14,44 99,6
125 130,0 19,50 1,2799667 19,21 98,5
132,7 19,90 1,3214000 19,83 99,7
150 151,0 22,65 1,4985647 22,49 99,3
151,7 22,75 1,5142510 22,73 99,9

- 144 -

concentración:

ANALISTA 1

50 50,9 7,63 0,5301 7,58 99,3
50,3 7,55 0,5296 7,57 100,3
75 82,0 12,30 0,8546 12,21 99,3
82,9 12,43 0,8577 12,26 98,6
100 99,5 14,20 1,0020 14,32 100,9
99,6 14,94 1,0304 14,73 98,6
125 113,5 17,40 1,2010 17,17 98,7
122,1 18,32 1,2780 18,27 99,7
150 143,5 21,53 1,4752 21,23 98,6
142,8 21,01 1,4567 20,82 99,1
Tabla 59: Resultados analsita1, día 2.

ANALISTA 2

50 49,3 7,35 0,4851019 7,28 99,1
50,1 7,52 0,4978108 7,47 99,4
75 80,0 12 0,7927535 11,90 99,2
80,7 12,1 0,7985200 11,99 99,0
100 94,7 14,2 0,9282177 13,93 98,1
95,0 14,25 0,9306807 13,97 98,0
125 126,7 19,01 1,2503412 18,77 98,7
127,0 19,05 1,2745360 19,13 100,4
150 150,1 22,51 1,4875000 22,54 100,1
150,5 22,57 1,5061000 22,61 100,2

En el cuadro resumen de la validación (tabla 60 y tabla 61) se adjuntan todos los cálculos efectuados:

• la media de los dos resultados y su coeficiente de variación (repetibilidad), para cada analista, nivel
de concentración y día.

• la media (exactitud o recuperación), desviación estándar y coeficiente de variación global


VALIDACIÓN PARACETAMOL (AGUA DESIONIZADA)

% DÍA 1 DÍA 2
100,47 99,30
ANALISTA 1 99,92 100,26
m 100,19 99,78
50% CV % 0,39 0,68 m 99,9
99,77 99,06 SD 0,64131137
ANALISTA 2 100,93 99,36 CV 0,64207555
%
m 100,35 99,21
CV % 0,81 0,21
100,59 99,30
ANALISTA 1 101,01 98,62
m 100,80 98,96
75% CV % 0,29 0,49 m 99,6
98,72 99,15 SD 0,88588998
ANALISTA 2 100,08 99,05 CV 0,88975011
%
m 99,40 99,10
CV % 0,96 0,07
99,46 100,85
ANALISTA 1 99,37 98,58
m 99,41 99,71
100% CV % 0,06 1,62 m 99,3
100,23 98,11 SD 0,9983419
ANALISTA 2 99,61 98,03 CV 1,00558395
%
m 99,92 98,07
CV % 0,44 0,06
98,52 98,65
ANALISTA 1 99,54 99,71
m 99,03 99,18
125% CV % 0,73 0,75 m 99,2
98,52 98,72 SD 0,7091783
ANALISTA 2 99,66 100,42 CV 0,7147686
%
m 99,09 99,57
CV % 0,82 1,21
99,93 98,62
ANALISTA 1 99,44 99,10
m 99,69 98,86
150% CV % 0,35 0,34 m 99,6
99,30 100,12 SD 0,54708004
ANALISTA 2 99,90 100,16 CV 0,54943288
%
m 99,60 100,14
CV % 0,42 0,02
Tabla 61: Resultados completos validación Placebo en Agua.

- 146 -

REPRODUCIBILIDAD 50% 0,64
CV% 75% 0,89
(n=8) 100% 1,01
125% 0,71
150% 0,55
EXACTITUD 50% 99,88
% RECUPERACIÓN 75% 99,57
(n=8) 100% 99,28
125% 99,22
150% 99,57
EXACTITUD GLOBAL m 99,50
(n=5) SD 0,2658
CV % 0,2672
t experimental 4,15693372
t tablas 2,776
P= 0.05 GL= 4
Tabla 62: Resultados validación Placebo en Agua.


Los coeficientes de variación están comprendidos entre 0,02 y 1,62% (tabla 62) , por lo tanto puede
concluirse que el método analítico es repetitivo dado que, en todos los casos, se obtienen valores por
debajo del límite máximo especificado por las normas ICH (2%).

CONCLUSIONES SOBRE LA REPRODUCIBILIDAD

Viene dada por el coeficiente global para cada concentración; los CV% son similares para todos los niveles
de concentración ensayados (tabla 62).


De los resultados anteriores se desprende que la exactitud en el intervalo de concentraciones que se estudia
(50-150%) se encuentra comprendido entre el 99,22 y 99,88%, por lo que la técnica cumple con el requisito
de exactitud, siendo la recuperación media para todo el intervalo en estudio del 99,5%, la cual es
satisfactoria (tabla 62). Se confirma con una t student, que no hay diferencias significativas entre las
recuperaciones medias para cada nivel de concentración:

texp= |100 - R| * √n / SD = 4,1569

ttab (p=0.05 y GL= 4) = 2,776


diferencias significativas entre la exactitud a nivel bajo (50%), medio (100%) o alto (150%) de
concentración del “analito”.

Si se aplica un ANOVA de una dirección sobre los resultados de recuperación individuales obtenidos para
cada nivel, el test de F, da una Fexperimental =0,9438 frente a la Ftablas(p=0,05; 4; 35) de 2,641, lo que indica que
el factor de concentración no afecta a la recuperación. Y la exactitud del método se considera adecuada ya
que todas las recuperaciones están comprendidas en un margen estrecho entre 98-100%, en todo el
intervalo de concentraciones estudiado.

50% 75% 100% 125% 150%
100,46548 100,593759 99,4552404 98,524695 99,9301457
99,9156761 101,005168 99,371948 99,5438995 99,4413643
99,2966657 99,3047678 100,853669 98,6520427 98,6244357
100,255425 98,6207192 98,5751793 99,7051767 99,0960608
99,7707303 98,7249979 100,234586 98,5182133 99,3024058
100,926829 100,076392 99,6124141 99,6629423 99,9007955
99,0599523 99,1538034 98,110163 98,7185809 100,123459
99,3571059 99,0496411 98,0253346 100,417546 100,155483
Tabla 63: Resultados en %recuperación del Placebo en Agua.

Origen de las Suma de Grados de Promedio de F Probabilidad Valor crítico
variaciones cuadrados libertad los cuadrados para F
Entre grupos 2,26150873 4 0,56537718 0,94386895 0,45023255 2,64146394
Dentro de los 20,9649881 35 0,59899966
grupos

Total 23,2264969 39
Tabla 64: ANOVA de la tabla 63.

3.4.3.5 LINEALIDAD
La linealidad del método para las muestras placebo adicionadas de patrón ha sido comprobada con 5
incluye la concentración teórica de la muestra problema (50-150%) y obteniendo 8 replicados de cada
concentración.


- 148 -

CONCENTRAC IÓN ABSORBANCIA FACTOR DE RESPUESTA
7,57 0,5090 0,06724
7,63 0,5102 0,06687
7,63 0,5301 0,06947
7,55 0,5296 0,07014
7,45 0,4952 0,06647
7,62 0,5124 0,06724
7,35 0,4851 0,06600
7,52 0,4978 0,06620
11,20 0,7540 0,06732
11,11 0,7510 0,06760
12,30 0,8546 0,06948
12,43 0,8577 0,06900
10,90 0,7170 0,06578
11,10 0,7401 0,06668
12,00 0,7928 0,06606
12,10 0,7985 0,06599
15,55 1,0350 0,06656
15,14 1,0069 0,06650
14,20 1,0020 0,07056
14,94 1,0304 0,06897
14,60 0,9750 0,06678
14,50 0,9623 0,06637
14,20 0,9282 0,06537
14,25 0,9307 0,06531
18,86 1,2436 0,06594
18,81 1,2531 0,06662
17,40 1,2010 0,06902
18,32 1,2780 0,06976
19,50 1,2800 0,06564
19,90 1,3214 0,06640
19,01 1,2503 0,06577
19,05 1,2745 0,06690
22,48 1,5104 0,06719
22,61 1,5047 0,06655
21,53 1,4752 0,06852
21,01 1,4567 0,06933
22,65 1,4986 0,06616
22,75 1,5143 0,06656
22,51 1,4875 0,06608
22,57 1,5061 0,06673
Tabla 65: Resultados Placebo en Agua

de variancias de Cochran (tabla 67), obteniéndose una Gexperimental de 0,431634 que comparado con la Gtablas
para p=0,05, 5 concentraciones y 8 replicados que es 0,4564, el valor experimental es inferior al tabulado
(tabla 68), con lo cual puede afirmarse que no existen diferencias significativas entre las variancias de los
diferentes niveles de concentración y puede aplicarse la hipótesis de un modelo lineal, estimado por el


método de mínimos cuadrados.

50% 75% 100% 125% 150%
0,5090 0,7540 1,0350 1,2436 1,5104
0,5102 0,7510 1,0069 1,2531 1,5047
0,5301 0,8546 1,0020 1,2010 1,4752
0,5296 0,8577 1,0304 1,2780 1,4567
0,4952 0,7170 0,9750 1,2800 1,4986
0,5124 0,7401 0,9623 1,3214 1,5143
0,4851 0,7928 0,9282 1,2503 1,4875
0,4978 0,7985 0,9307 1,2745 1,5061
Tabla 66: Resultados en Absorbancia para el cálculo del Test de Cochran.


RESUMEN
50% 8 4,06939601 0,5086745 0,0002524
75% 8 6,26564707 0,78320588 0,00272906
100% 8 7,87053613 0,98381702 0,00172925
125% 8 10,1019105 1,26273882 0,00121941
150% 8 11,9534157 1,49417696 0,0003925
Tabla 67: ANOVA del Placebo en Agua.

G tabulada 0,4564
Tabla 68: Resultados de la G de Cochran.

Por otra parte, también se aplica el test estadístico de los factores de respuesta, para comprobar la existencia
de linealidad entre ambos factores.. El factor de respuesta se ha calculado dividiendo la concentración (en
µg/ml, tabla 65) por la absorbancia. Se determina el valor medio, la desviación estándar y el coeficiente de
variación de los factores de respuesta calculados.

Media 0,0671789
CV% 2,136968
Tabla 69: Estadística de los factores de respuesta.



- 150 -


y = 0,065341402·x + 0,016331568

Curva de regresión ajustada (agua): placebo + patrón

1,6000
1,4000
1,2000
Absorbancia

1,0000
0,8000 Y
0,4000
0,2000
-
0,00 5,00 10,00 15,00 20,00 25,00

Figura 21: Recta de calibración del placebo cargado con MP paracetamol en agua desionizada.

Observaciones 40
Tabla 70: Estadística de la regresión Placebo en Agua.

Tanto el valor del coeficiente de correlación (cercano a 1, r =0,99817, tabla 70) como el de coeficiente de
determinación r2 indican una buena linealidad. El coeficiente de determinación da una indicación del grado
de aproximación de los puntos a la relación lineal. Por lo tanto, puede afirmarse que esta relación lineal
explica el 99,63% de la variancia de la absorbancia.



LÍMITES DE b 0,068005563 0,0653522 no incluye el cero 101,7781761
LIMITES DE a 0,027735216 -0,01439 incluye el cero 0,641497932
t (GL(n-2)=38, P=0.05%) 2,025
Pendiente (b) 0,066678905 0,0006551 101,7781761 6,37886E-48
Tabla 71: Test de proporcionalidad de la regresión Placebo en Agua.



texp = |b| / sb =101,778



incluyen el cero y el método presenta un ligero sesgo. El test de t:

texp = |a| / sa = 0,641497

Este valor de t es inferior al tabulado (para p= 0.05 y GL= 38), por lo que la probabilidad de que a = 0 es
muy elevada.

de regresión:

Grados de libertad Suma de Promedio de los Fexperimental F tablas
cuadrados cuadrados
Regresión (SSreg) 1 4,84004055 4,840040552 10358,79712 4,098168915
Error puro (SSpe) 35 0,04425841 0,001264526
Residuos (SSr) 38 0,01775511 0,00046724
Total 39 4,85779566
Tabla 72: ANOVA de la regresión Placebo en Agua.


- 152 -



3.4.3.6 CONCLUSIÓN MÉTODO ANÁLISIS EN AGUA
Todos los parámetros estudiados demuestran que el método es válido para el análisis del paracetamol en
comprimidos. La exactitud o reproducibilidad es adecuada en todo el intervalo analizado. El único
problema analítico es la absorbancia de los excipientes que puede ser corregida añadiendo al patrón de
referencia la mezcla de excipientes a fin de que se tenga en cuenta.

3.5 ANÁLISIS COMPARATIVO DE LOS MÉTODOS DE ANÁLISIS
VALIDADOS
En base a los resultados obtenidos, los tres métodos se han demostrado como válidos y fiables para la
determinación del paracetamol como materia prima y en comprimidos. Se resumen los parámetros
tabulados, todos ellos similares:

MATERIA PRIMA PLACEBO CARGADO DE PRINCIPIO ACTIVO
INTERVALO r INTERVALO r EXACT. REPET REPROD AL
LINEALIDAD LINEALIDAD GLOBAL (CV%) 100% (CV%)
Agua -Metanol 50-150 0.9993 70-130 0.99858 100.44 2.06-0.06 0.91
Sol. Reguladora 60-140 0.9993 70-130 0.99872 99.63 1.44-0.07 0.75
Agua Desionizada 50-150 0.9998 50-150 0.99817 99.50 1.62-0.02 1.01
Tabla 73: Parámetros de los métodos validados.

Para la materia prima el método de análisis en agua desionizada presenta el intervalo de análisis más amplio
de entre los ensayados (50-150%) y el coeficiente de correlación es más alto aunque probablemente las
diferencias no serían significativas. No obstante los tres métodos resultan interesantes ya que los
parámetros de validación cumplen en todos los casos y las diferencias (si existen no parecen significativas).
Para el análisis del placebo cargado, la reproducibilidad de las muestras al 100%, la exactitud son similares
con la salvedad de que el intervalo de linealidad es mayor (50-150%) frente a 70-130% del resto, con lo cual
parece el más interesante a priori.

Con el fin de concluir si existen diferencias estadísticamente significativas entre ellos o no, se prepara una


misma muestra homogénea (una de paracetamol materia prima y otra de placebo y paracetamol de
concentraciones aproximadas a 12 µg /ml) que se analizan seis veces por los tres métodos. De cada grupo
de resultados obtenidos se hace un estudio comparativo entre las tres técnicas mediante un análisis
estadístico de ANOVA en una dirección.

3.5.1 ANÁLISIS DE LA MATERIA PRIMA

Se prepararon 6 muestras de paracetamol patrón de una concentración aproximada de 12,00 µg/ml, las
muestras fueron analizadas en paralelo según los tres métodos, los resultados se muestran en la tabla 74.

SOLUCIÓN AGUA AGUA-METANOL SOL. REGULADORA
1 0,8008 0,8010 0,8032
2 0,8019 0,7961 0,8030
3 0,8057 0,7949 0,8057
4 0,8043 0,7972 0,7980
5 0,8113 0,8082 0,8000
6 0,7994 0,7976 0,7956
Tabla 74: Absorbancias de las 6 soluciones patrón preparadas por los tres métodos.

Para ver si el factor método influye en la respuesta se aplica un análisis de la variancia (ANOVA), ver tabla
75 y tabla 76.

AGUA 6 4,82323 0,803872333 1,847 E-05
AGUA-METANOL 6 4,79491 0,799151667 2,372 E-05
SOL. REGULADORA 6 4,80539 0,800898333 1,393 E-05

Tabla 75: Análisis de la variancia de los grupos.

Origen de las variaciones Suma de Grados de Promedio de F Probabilidad Valor crítico
cuadrados libertad los cuadrados para F
Entre grupos 6,836 E-05 2 3,41802 E-05 1,827295 0,194890 3,682316
Dentro de los grupos 0,00028058 15 1,87054 E-05
Total 0,00034894 17

Tabla 76: Resultados del ANOVA.

Los resultados del ANOVA de una dirección da una Fexperimental =1,82729 frente a la Ftablas(p=0,05) de 3,6823,
lo que indica que el factor de método analítico no afecta al resultado obtenido y por lo tanto las variancias

- 154 -

entre los métodos son similares. Es decir, no existen diferencias estadísticamente significativas entre los tres
métodos ensayados.

3.5.2 ANÁLISIS SOBRE PLACEBO CARGADO DE PRINCIPIO ACTIVO

Las muestras analizadas contenían una concentración de 12,00 µg/ml en paracetamol y estaban cargadas
con la parte correspondiente de placebo.

SOLUCIÓN PLACEBO AGUA AGUA-METANOL SOL. REGULADORA
1 0,81772 0,82593 0,81876
2 0,82619 0,81955 0,82172
3 0,80797 0,81914 0,81853
4 0,79286 0,81331 0,80093
5 0,81129 0,81458 0,80467
6 0,81254 0,81308 0,80374
Tabla 77: Resultados de absorbancia de las soluciones placebo analizadas por los tres métodos.

AGUA 6 4,86857 0,8114283 0,0001231
AGUA-METANOL 6 4,90557 0,8175965 2,472 E-05
SOL. REGULADORA 6 4,86835 0,8113916 8,502 E-05

Tabla 78: Análisis de las variancias de los grupos estudiados.

Origen de las variaciones Suma de Grados de Promedio de los F Probabilidad Valor crítico
cuadrados libertad cuadrados para F
Entre grupos 0,0001531 2 7,65476E-05 0,98627 0,39589 3,682316
Dentro de los grupos 0,0011641 15 7,76128E-05
Total 0,0013172 17

Tabla 79: Parámetros del ANOVA de los grupos estudiados.

Los resultados del ANOVA de una dirección da una Fexperimental =0,98627 frente a la Ftablas(p=0,05) de 3,6823,
lo que indica que el factor método analítico no afecta al resultado obtenido y por lo tanto las variancias
entre los métodos son similares. Es decir, no existen diferencias estadísticamente significativas entre los tres
métodos ensayados.

Con lo cual y en base a los resultados obtenidos puede considerarse el método de análisis en agua
desionizada como válido, por lo que, siendo el más práctico respecto al resto de métodos, es lógico, que se


escoja como el método de análisis a aplicar en las prácticas de Farmacia Galénica III. Para completar la
validación analítica del paracetamol en agua se llevan a cabo el estudio de los parámetros de:

! reproducibilidad (misma muestra leída en diferentes espectrofotómetros)

! límite de detección y límite de cuantificación

! selectividad

3.6 REPRODUCIBILIDAD O ROBUSTEZ DEL MÉTODO DE
ANÁLISIS EN AGUA DESIONIZADA
La reproducibilidad es la medida de la precisión de los resultados de un método analítico efectuado sobre la
misma muestra pero en condiciones diferentes (analista, aparato, día, etc.). Para llevar a cabo el estudio de
reproducibilidad se prepararon muestras de paracetamol en concentraciones crecientes correspondientes a
un ensayo de linealidad. Las muestras se analizaron en tres equipos espectrofotométricos diferentes5
calibrados según el procedimiento general aprobado del SDM (cal01001.doc). De cada muestra se
realizaron tres réplicas de absorción y se confeccionaron las rectas de calibración de los tres
espectrofotómetros siendo los resultados los siguientes:

ESPECTROF. 1 ESPECTROF. 2 ESPECTROF. 3
Coeficiente correlación 0.999804 0.999739 0.999814
Coeficiente determinación 0.999960 0.999479 0.999628
Factor de respuesta 1.000345 1.001125 0.999365
DS factor de repuesta 0.001035 0.003661 0.001680
CV factor de respuesta (%) 0.103473 0.365780 0.168125
Tabla 80: Resumen de los resultados de robustez.

Se demuestra que las rectas en los tres casos son lineales y proporcionales. A continuación se tabula el
resultado medio obtenido para cada espectrofotométro y se calcula la media, desviación estándar y
coeficiente de variación de las tres respuestas:

5
Espectrofotómetro nº 1: UNICAM del SDM (sala control galénico, nº código ), espectrofotómetro nº 2: UNICAM (laboratorios generales de
prácticas de la Facultat de Farmacia) y espectrofotómetro nº 3 (HP del SDM de control de calidad, nº código ).

- 156 -

CONCENTRACIÓN ESPECT 1 ESPECT 2 ESPECT 3 A MEDIA DS CV (%)
PATRÓN (mg)
7,5 0,4776667 0,4713333 0,4803633 0,4764544 0,0037848 0,7943727
7,6 0,4883333 0,4800000 0,4907833 0,4863722 0,0046155 0,9489687
9,9 0,6286667 0,6146667 0,6371833 0,6268389 0,0092828 1,4808914
10,1 0,6470000 0,6390000 0,6566033 0,6475344 0,0071965 1,1113633
15,2 0,9700000 0,9480000 0,9750300 0,9643433 0,0117375 1,2171503
15,1 0,9483333 0,9293333 0,9550900 0,9442522 0,0109039 1,1547673
20,0 1,2866667 1,2553333 1,2799667 1,2739889 0,0134721 1,0574712
20,1 1,3080000 1,2713333 1,2866333 1,2886556 0,0150372 1,1668941
22,7 1,4570000 1,4170000 1,4323333 1,4354444 0,0164774 1,1478984
22,8 1,4573333 1,4196667 1,4514000 1,4428000 0,0165361 1,1461125
Tabla 81: Resultados de Absorbancia de los tres espectrofotómetros utilizados.

Se puede observar que todos los coeficientes de variación son inferiores al 5%, luego aceptables para todos
los casos (cumple la reproducibilidad). Se adjunta los parámetros de la recta de calibrado calculada y su
representación gráfica (figura 22) con los resultados obtenidos.

CONCENTRACIÓN PATRÓN (mg) Curva de regresión ajustada
1,8000000

y = 0,0635x + 0,0016
A MEDIA

1,2000000 A MEDIA
Pronóstico A MEDIA
0,6000000 Lineal (Pronóstico A MEDIA)

0,0000000
0,0 5,0 10,0 15,0 20,0 25,0
CONCENTRACIÓN PATRÓN (m g)

Figura 22: Recta de calibrado obtenida con las lecturas medias de tres espectrofotómetros.

Coeficiente de correlación múltiple 0,99985104
R2 ajustado 0,99966488
Observaciones 10
Tabla 82: Estadísticas de la regresión de robustez.


Grados de Suma de Promedio de los F Valor crítico de F
libertad cuadrados cuadrados
Regresión 1 1,3323694 1,3323694 26847,690 2,1534 E-15
Residuos 8 0,0003970 4,9627 E-05
Total 9 1,3327665
Tabla 83: Análisis de la variancia del ensayo robustez.

Pendiente (b) 0,06346739 0,00038734 163,852649 2,1534E-15
Tabla 84: Parámetros del ANOVA.

Por lo tanto, queda demostrada la robustez del método aunque se varíe de espectrofotómetro para
determinar la Absorbancia, hecho altamente probable en las prácticas de laboratorio de alumnos.

3.7 LÍMITE DE DETECCIÓN DEL MÉTODO DE ANÁLISIS EN
AGUA DESIONIZADA
El límite de detección es la cantidad o concentración mínima de “analito” a partir de la cual es factible
realizar el análisis para dar un resultado significativo. De entre los diferentes métodos existentes para su
cálculo se han escogido dos:

! Análisis repetido del blanco de la muestra (entendiéndose como blanco el placebo sin principio activo)
y se ha determinado diez veces su absorbancia.

! Recta patrón a baja concentración.

7.1 LÍMITES DE ANÁLISIS SEGÚN EL MÉTODO DE ANÁLISIS REPETIDO
DE UN BLANCO (PLACEBO)
De la mezcla placebo disponible, se prepararon 10 soluciones que fueron diluidas por el método en
estudio.

- 158 -

solución MÉTODO DEL BLANCO (ABSORBANCIA)
1 - 0,015000
2 - 0,011000
3 - 0,015000
4 - 0,011000
5 0,003500
6 0,003700
7 - 0,004400
8 0,005200
9 - 0,003500
10 - 0,004300
Tabla 85: Absorbancias leídas de los blancos.

Se halla el valor medio y la desviación estándar de los datos:

Estadística
Media -0,0052
CV% -147,6909
Tabla 86: Estadística básica de las lecturas de los blancos.

Al tratarse de un método espectrofotométrico, se hace corrección frente al blanco, con lo cual se aplican las
fórmulas indicadas en el apartado 3.3.5 c) de este mismo capítulo:

un replicado (ppm) tres replicados (ppm)
LIMITE DE DETECCIÓN 0,18258 0,10541
LIMITE DE CUANTIFICACIÓN 0,60859 0,35137
Tabla 87: Límites de análisis por el método del blanco.

Para su cálculo se utiliza la pendiente de la recta de calibrado calculada para un intervalo amplio que incluya
concentraciones muy bajas del “analito”(ver a continuación). Además no debe aplicarse ningún factor de
corrección al cálculo ya que el ajuste de la recta de calibrado es bueno (r= 0.99987) y la desviación estándar
del blanco (0,0077) es mayor que la desviación estándar de los términos de la recta (0,004586104 y
0,000805979), con lo cual puede asumirse que la mayor fuente de error se debe a la desviación estándar del
blanco.

En el caso de hacer las lecturas por triplicado, puede observarse que los límites de detección y
cuantificación disminuirían ostensiblemente, de aquí el interés en análisis de llevar a cabo los ensayos por
duplicado (como mínimo).

Un resultado negativo de detección de paracetamol debe darse como “inferior a 0.1825 µg/ml” y uno


positivo solo podrá expresarse en su valor numérico si es superior a 0,60859 ppm. En caso de que los
análisis se realicen por triplicado los límites se hacen menores.

3.7.2 LÍMITES DE ANÁLISIS POR RECTA A BAJAS CONCENTRACIONES
Por otra parte se ha calculado una recta de calibrado con paracetamol patrón que abarca concentraciones
bajas de paracetamol desde la concentración 0,34 ppm hasta 13,66 ppm. Cada muestra se analiza tres veces
y se calcula la desviación estándar de los 3 análisis. Todas las desviaciones estándares calculadas son
promediadas para obtener la desviación estándar del método analítico. La desviación estándar media se
divide por la pendiente de la recta de calibración para obtener una estimación del ruido asociado al método
analítico. Este valor de ruido analítico multiplicado por 3 será una estimación aceptable del límite de
detección y multiplicado por 10 será una estimación del límite de cuantificación.

La recta ajustada es la siguiente y sus parámetros de ajuste demuestran la calidad del ajuste.

CONCENTRACIÓN ABSORB 1 ABSORB 2 ABSORB 3 ABSORB. SD muestra Factor de
(µg/ml) MEDIA respuesta
0,3415 0,0489 0,0479 0,0487 0,0485 0,0005 0,141972
0,6830 0,0928 0,0940 0,0938 0,0936 0,0007 0,136979
1,3660 0,1786 0,1783 0,1780 0,1783 0,0003 0,130517
2,0490 0,2633 0,2623 0,2625 0,2627 0,0005 0,128189
2,7320 0,3724 0,3711 0,3710 0,3715 0,0008 0,135991
3,4150 0,4385 0,4396 0,4422 0,4401 0,0019 0,128871
6,8300 0,8797 0,8816 0,8790 0,8801 0,0013 0,128856
13,6600 1,7206 1,7227 1,7218 1,7217 0,0011 0,126040
Tabla 88: Lecturas de las soluciones patrón en cada espectrofotómetro estudiado

SD media 0.008844
NIVEL DE RUIDO = 0.00740
Pendiente 0.1257075
LÍMITE DE DETECCIÓN 0.02111 ppm
LÍMITE DE CUANTIFICACIÓN 0.07035 ppm
Tabla 89: Cálculo de límites de análisis.

Coeficiente de correlación múltiple 0,99987669
Observaciones 8
Coeficientes Error típico
Intersección 0,011229912 0,004586104
Pendiente 0,125707551 0,000805979
Tabla 90: Estadística de la regresión.

- 160 -

Se obtiene la recta de calibrado:

y = 0,125707551 x + 0,011229912

siendo x = concentración de paracetamol en µg/ml en la muestra, mientras que y = absorbancia de la
muestra.

CONCENTRACIÓN (mcrg/ml) Curva de regresión ajustada
1,8000

1,2000 media
media

Pronóstico media
Lineal (Pronóstico media)
0,6000

-
-2,0 0,0 2,0 4,0 6,0 8,0 10,0 12,0 14,0
CONCENTRACIÓN (mcrg/ml)

Figura 23: Recta de calibrado para determinar el límite de detección del método espectrofotométrico de análisis

Ambos métodos arrojan unos límites de análisis bajos (menos de 1 ppm) lo cual significa que el método de
análisis es muy sensible y es capaz de detectar señal aunque haya poco principio activo en la muestra.

3.8 SELECTIVIDAD O ESPECIFICIDAD DEL MÉTODO DE
ANÁLISIS
En el caso que nos compete la selectividad del método espectrofotométrico UV de análisis está
comprometida ya que tanto la impureza 4-cloroacetanilida (figura 24), como el p-aminofenol (figura 25)
absorben en esta zona del espectro.

Con lo cual la propia definición de este parámetro, la no interferencia de impurezas o productos de
degradación o compuestos relacionados o excipientes en la muestra. La determinación de la selectividad se
realiza por comparación de los resultados analíticos de un patrón de referencia con los de un patrón
conteniendo todas las sustancias anteriores que potencialmente pudieran estar presentes. Respecto al


análisis de las MP, este método no es suficiente puesto que la monografía obliga a determinar y cuantificar
las impurezas, con lo cual si el test de impurezas no pasa, el resultado de contenido no importa puesto que
la MP será rechazada por no cumplir las especificaciones.

Respecto al análisis de comprimidos la USP24 no requiere que se realice análisis de impurezas en el
comprimidos. Para comprobar que realmente no influirán en los resultados del análisis se han analizado y
comparado los siguientes muestras:

Placebo (recién preparado, figura 19) # Placebo (envejecido dos años, figura 26). Puede comprobarse que
no se han encontrado señales o un incremento importante de la absorbancia.

Placebo + patrón (figura 20) # Patrón (figura 17). No hay modificación del espectro ni superposición de
picos, etc.

Placebo + patrón (figura 20) # Producto en estabilidad de 2 años (figura 27). Tampoco en este caso
aparecen señales que indiquen problemas de degradación o similar.

Figura 24: Espectro de absorción de la impureza 4-cloroacetanilida al 0,001% en metanol.

- 162 -

Figura 25: Espectro de absorción de la impureza p-aminofenol al 0,001% en agua - metanol.

Por otra parte, para comprobar la selectividad del método del análisis en los comprimidos también se había
analizado las muestras:

placebo (figura 19)
placebo envejecido (figura 26)
comparación de un placebo cargado de patrón y patrón (figura 20 y figura 17, respectivamente)
comparación de un medicamento degradado (próximo a la fecha de caducidad, figura 27)

Figura 26: Espectro de absorbancia de un placebo envejecido (2 años)


Figura 27: Espectro de absorbancia de un comprimido caducado (2 años)

- 164 -

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