Practica 4
- 1. “TODO ES VENENO NADA ES VENENO TODO DEPENDE DE LA DOSIS” 10 10 UNIVERSIDAD TÉCNICA DE MACHALA UNIDAD ACADEMICA DE CIENCIAS QUÍMICAS Y DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA LABORATORIO DE TOXICOLOGÍA Profesor: Bioq. Farm. Carlos García MSc. Alumno: Irma Jeanneth Ochoa Toro Curso: Quinto Paralelo: A Grupo N03 Fecha de Elaboración de la Práctica: lunes 22 de junio del 2015 Fecha de Presentación de la Práctica: lunes 29 de junio del 2015 PRÁCTICA N° 4 Título de la Práctica: INTOXICACIÓN POR CLOROFORMO Animal de Experimentación: rata wistar Vía de Administración: Vía Intraperitoneal. OBJETIVOS DE LA PRÁCTICA Observar la sintomatología que se presenta cuando hay intoxicación por cloroformo. Efectuar las reacciones químicas dispensables para detectar intoxicación por cloroformo. MATERIALES: SUSTANCIAS Vaso de precipitación 250ml cloroformo Matraz Erlenmeyer 250ml alcohol de 95º Equipo de decisión nitrato de plata Bisturí potasa alcohólica (proporción 1:10) Perlas de vidrio percloruro de hierro Pipetas beta naftol Pinza para tubos solución alcohólica de potasa Funda plástica lejía de sosa 1:2 Tubos de ensayos piridina Mangueras cristal de yodo Cronometro clorhidrato de piperacina Balón de destilación reactivo de Benedict Agitador Mechero de alcohol Tabla de disección Panema Jeringa de 10ml
- 2. “TODO ES VENENO NADA ES VENENO TODO DEPENDE DE LA DOSIS” Probeta de 50ml Refrigerante Cinta de embalaje Aro de hierro Fosforo Piola Mandil Mascarilla Guantes de látex PROCEDIMIENTO 1. Previamente antes de realizar la práctica se debe desinfectar el área de trabajo y tener os materiales limpios y secos que se emplearan en la práctica. 2. Aplicamos a la rata wistar 10 ml de cloroformo. 3. Una vez administrado el toxico se procede a colocarlo en el panema. 4. Se observaran toda la sintomatología que presente por la intoxicación de cloroformo hasta que muera tomando en cuenta el tiempo transcurrido. 5. Se coloca al animal en la tabla de disección, lo sujetamos por las extremidades con ayuda de unas piolas para facilitar abrirlo. 6. Una vez correctamente ubicado se procede a raspar el área donde se realizara el corte con el bisturí y después se abrirá con cuidado para evitar cortar los órganos. 7. Luego se observa detenidamente los órganos que se han afectado por la intoxicación de cloroformo. 8. Seguido se coloca las vísceras afectadas en un balón volumétrico picando lo más fino posible estas. 9. Luego colocamos NaOH 20% 10. Se arma el equipo de destilación correctamente, abrimos la llave de agua para empezar el proceso de destilación por 30 minutos. 11. Una vez obtenido el destilado se realizara las respectivas reacciones de reconocimiento para cloroformo. 12. Culminada la práctica se limpiara y desinfectara el área donde se realizó la práctica y se dejara los reactivos en el lugar correcto bien cerrados y los materiales empleados limpios y secos. Reacciones de reconocimiento: 1. Solución alcohólica: En el fondo de un tubo de ensayo se mezclan unas cuantas gotas de cloroformo con otras tantas de alcohol de 95% que contienen un poco de nitrato de plata, se inflama la mezcla y se observa que esta arde con una llama bordeada de verde y que el ácido
- 3. “TODO ES VENENO NADA ES VENENO TODO DEPENDE DE LA DOSIS” clorhídrico formado reacciona con el nitrato de plata disuelto originando un precipitado de cloruro de plata. 2. Reacción de Dumas: Al adicionar unas gotas de destilado que contiene cloroformo a unos milímetros de potasa alcohólica (proporción 1:10), se originan formiatos y cloruro de potasio. CHCl3 + 4KOH --- 3ClK + HCO2K + 2H2O. Se neutralizan la mezcla, y se separan en dos proporciones a una proporción se le agrega percloruro de hierro produciendo un color rojo en frío o un precipitado en caliente. A la otra proporción se le agrega solución de nitrato de plata produciéndose un precipitado de cloruro de plata que se disuelven en amoniaco diluido. 3. Reacción de Lustgarten: Al calentar la muestra con unos miligramos de beta – naftol y una solución alcohólica concentrada de potasa (preferentemente un trozo de potasa y algunas gotas de alcohol), se obtiene un franco color azul. Se sustituye el B-naftol por timol el color es amarillo más o menos oscuro; con Resorsinol la coloración es roja – violácea y con la piridina rojo. 4. Reacción de Fujiwara: En un tubo de ensayo, se vierte 2ml de legía de sosa 1:2 con una capa de 2mm de piridina y luego la muestra que contiene el cloroformo; se agita, ponemos por unos instantes en baño de María y se deja en reposos; se convierte en una materia coloreada que varía del rosa al rojo vivo, soluble en piridina. Esta reacción sensible para unos pocos microorganismos de cloroformo y es aplicable en la orina de algún sujeto que haya absorbido de 15-20 g de agua clorofórmica. 5. Reacción de Roseboom: Se disuelve un pequeño cristal de yodo en la solución muestra y se agregan unos pocos miligramos de clorhidrato de piperacina; si el cloroformo está presente en la muestra, la coloración violeta inicial cambia a amarilla – rojiza al disolverse al alcaloide 6. Reacción de Benedict: Si la solución muestra contiene cloroformo, reduce el reactivo de Benedict, y de acuerdo a la concentración del tóxico puede producirse una gama de colores que van desde el verde, amarillo, naranja o rojo ladrillo.
- 4. “TODO ES VENENO NADA ES VENENO TODO DEPENDE DE LA DOSIS” GRÁFICOS: Preparación del cloroformo Muerte de la rata Observación de los órganos afectados por el tóxico Trituración de las vísceras Colocación de la mezcla en el balón de destilación Armado del equipo de destilación Antes de administración de cloroformo Administración de cloroformo (10ml) Disección del animal con el bisturí Proceder a la destilación
- 5. “TODO ES VENENO NADA ES VENENO TODO DEPENDE DE LA DOSIS” REACCIONES DE RECONOCIMIENTO: Solución alcohólica: Reacción positivo no característico precipitación Reacción de Dunas: FeCl3 Reacción positivo característico color rojo FRIO: Con AgNO3Reacción positivo característico precipitado Reacción de Lustgarten: Reacción positivo no característico cambio de color
- 6. “TODO ES VENENO NADA ES VENENO TODO DEPENDE DE LA DOSIS” Reacción de Fujiwara: Reacción positivo característico cambio de color Reacción de Roseboom: Reacción positivo característico precipitado Reacción de Benedict: Reacción positivo no característico precipitado OBSERVACIONES Hemos observado que al administrar Cloroformo (10ml) por vía intraperitoneal la rata, se presentaron las siguientes manifestaciones: Vomito, cefalea, vértigo, nauseas. Deceso: en 30minutos
- 7. “TODO ES VENENO NADA ES VENENO TODO DEPENDE DE LA DOSIS” CONCLUSIONES En la práctica nos observamos las manifestaciones que presento la rata de wistar ante la administración del toxico; presentando depresión del SNC, perdida de la movilidad motora, hipoxia, el cual duro 30minutos hasta su deceso. A través de las reacciones de reconocimientos identificamos la presencia del toxico como es en este caso el cloroformo en el animal. RECOMENDACIONES limpiar los materiales y el área de trabajo seguir las normas de bioseguridad al momento de manipular los reactivos. Al momento de administrar la dosis realizarlo en la vía correcta, para evitar de esta manera provocar embolias. Al finalizar práctica desinfectar en área en donde se realizo la practica. CUESTIONARIO: ¿Cuáles son las principales características del cloroformo? El cloroformo es un líquido incoloro, dulcemente perfumado, que es más conocido por su uso histórico como anestésico, aunque desde entonces ha sido abandonado debido a preocupaciones sobre su seguridad. Hoy en día, el cloroformo se usa en una variedad de procesos industriales, incluyendo la fabricación de productos químicos, refrigerantes y disolventes. Se produce mediante la reacción de cloro con etanol y si bien es relativamente estable, también es tóxico y debe ser manejado con cuidado. La exposición excesiva a cloroformo puede causar daños a largo plazo para la salud de varios órganos importantes. ¿Cuáles son los usos del cloroformo? Comercialmente conocido como cloroformo, es empleado en la industria para la limpieza como desengrasante de metales, en el decapado industrial de pintura, la fabricación de productos farmacéuticos, procesado textil y en la industria de proceso químico. ¿Qué produce la exposición del cloroformo? La exposición a cloroformo puede ocurrir al respirar aire contaminado o al tomar agua contaminada o al tocar sustancias que lo contienen. Respirar cloroformo puede causar mareo, fatiga y dolores de cabeza. Respirar o ingerir cloroformo por períodos largos puede causar daño al hígado y a los riñones. El cloroformo puede causar ulceración de la piel si hay contacto con grandes cantidades.
- 8. “TODO ES VENENO NADA ES VENENO TODO DEPENDE DE LA DOSIS” ¿Aplicaciones del cloroformo? Usado como reactivo relajante por los lípidos orgánicos, el triclorometano es usado para dormir. El cloroformo es un reactivo químico útil debido a la polarización de sus enlaces C−Cl, por lo que es una herramienta apreciada en síntesis orgánica, al proporcionar el grupo CCl2. Además, debido a que es usualmente estable y miscible con la mayoría de los compuestos orgánicos lipídicos y saponificables, es comúnmente utilizado como solvente. Es también utilizado en biología molecular para varios procesos, como la extracción de ADN de lisados celulares. Asimismo, es usado en el proceso de fijación de muestras histológicas post mortem. ¿Cuáles son las Fuentes de exposición del cloroformo? Está disponible como disolvente en laboratorio y en la industria farmacéutica. Se ha prohibido su uso como sustancia aromática en pastas de dientes y otros productos como resultado de su efecto cancerígeno en animales después de exposiciones crónicas, la intoxicación aguda y crónica. GLOSARIO: Triclorometano.-El triclorometano, también conocido como cloroformo, es un líquido claro, volátil, no inflamable y con un olor característico. Se evapora muy rápidamente y posee una solubilidad en el agua escasa, aunque es miscible con la mayoría de los disolventes orgánicos. Hepatotoxicidad.- también llamada enfermedad hepática tóxica inducida por drogas implica daño —sea funcional o anatómico— del hígado inducido por ingestión de compuestos químicos u orgánicos. El hígado está especialmente expuesto a toxicidad por razón de su función en la biotransformación, metabolismo y eliminación de agentes potencialmente tóxicos. Toxicocinética.- Se define a la toxicocinética como el conjunto de fenómenos que experimenta el tóxico desde su entrada a un organismo hasta su eliminación. Fosgeno.- Es un importante componente químico industrial utilizado para hacer plásticos y pesticidas. A temperatura ambiente (70 °F / 21 °C), el fosgeno es un gas venenoso. Si es enfriado y presurizado, el gas de fosgeno puede ser convertido en líquido, de forma que pueda ser transportado y almacenado. Ictericia.- Coloración amarillenta de la piel y las mucosas que se produce por un aumento de bilirrubina en la sangre como resultado de ciertos trastornos hepáticos. BIBLIOGRAFIA: Baeder, C. y Hofmann, T. Chloroform: Supplementary inhalation embryotoxicity study in Wistar rats.1991. (consultado el 25 de junio del 2014). Disponible: en: http://www.insht.es/InshtWeb/Contenidos/Documentacion/TextosOnline/Valores_Li mite/Doc_Toxicologica/FicherosSerie2/DLEP%2026.pdf
- 9. “TODO ES VENENO NADA ES VENENO TODO DEPENDE DE LA DOSIS” Komorniski E.; Calistro S. Hospital General De Agudos Juan Fernandez.Intoicacion con Cloroformo. 2010.(consultado el 25 de junio del 2014). Disponible: file:///C:/Users/Usuario/Downloads/cloroformo.pdf Autoría Bioq. Farm. Carlos García MSc. Machala, 22 de junio del 2015 FIRMAS DE RESPONSABILIDAD: Jeanneth Ochoa ______________________
- 10. “TODO ES VENENO NADA ES VENENO TODO DEPENDE DE LA DOSIS” ANEXOS Animal en el cual se experimentó (rata wistar) Datos de la práctica realizada Cloroformo El cloroformo es el triclorometano (CHCl3). Inicialmente se empleó como agente anestésico, pero poco después se abandonó este uso por su gran toxicidad hepática y renal. Es un líquido incoloro y no inflamable, de olor y sabor dulzón, extremadamente volátil y muy liposoluble. Fuentes de exposición Está disponible como disolvente en laboratorios y en la industria química. Se ha prohibido su uso como sustancia aromática en pastas de dientes y otros productos como resultado de su efecto carcinogénico en animales después de exposiciones crónicas. La intoxicación aguda y crónica puede ocurrir por exposición a sus vapores.
- 11. “TODO ES VENENO NADA ES VENENO TODO DEPENDE DE LA DOSIS” Toxicocinética y mecanismo de acción El cloroformo es un anestésico potente y origina una profunda depresión del SNC. Entra en el organismo por vía respiratoria, digestiva o dérmica. En humanos puede producir la muerte con la ingestión oral de tan solo 10 ml. Exposiciones prolongadas o repetidas a los vapores pueden producir hepatotoxicidad, severa que se caracteriza por necrosis centrolobular. Asimismo se ha descrito degeneración grasa del hígado, el riñón y el corazón. El mecanismo de lesión parece ser la oxidación a nivel hepático del cloroformo a fosgeno a través del sistema microsomal P450. También se forma fosgeno cuando los vapores de cloroformo se exponen al calor de una llama. El fosgeno inhalado se convierte en ácido hidroclorhídrico y dióxido de carbono cuando reacciona con el agua en el alveolo; y el ácido produce edema pulmonar. Cuadro clínico La severidad de los síntomas por exposición aguda, vía respiratoria, digestiva o dérmica, está en relación directa con la dosis absorbida. El cloroformo, cuando se inhala, produce todos los niveles de anestesia, teniendo un margen de seguridad muy estrecho, debido a que causa fallo cardíaco y respiratorio de forma casi simultanea. No puede detectarse por el olfato hasta que su concentración excede de 400 ppm. Una exposición durante 10 minutos a concentraciones de 1000 ppm produce síntomas generales como nauseas, vómitos, vértigo y cefaleas. Exposiciones a una concentración de 1000 a 4000 ppm originan desorientación y concentraciones de 10000 a 20000 ppm dan lugar a pérdida de conciencia, pudiendo originar la muerte. Dependiendo de la dosis absorbida va a producir alteraciones más o menos importantes de la función hepática, renal y cardíaca. El cloroformo, por su acusado poder como disolvente de grasas, en contacto con la piel da lugar a dermatitis local, y en los ojos produce irritación corneal . Diagnóstico El diagnóstico se basa fundamentalmente en la historia clínica. La analítica de función hepática puede ser normal en exposiciones crónicas, sin embargo, suele estar alterada en las intoxicaciones agudas. En estos casos también puede ser evidente la ictericia que aparece a los 2-3 días de la exposición. Tratamiento El tratamiento es principalmente de soporte. La primera maniobra, llevada a cabo en el lugar de la exposición es retirar a la víctima del área contaminada y llevarla a una zona bien ventilada. En cuanto sea posible, se administra oxígeno suplementario, y si es necesario, por coma o por insuficiencia respiratoria, se procede a intubación y conexión a ventilación mecánica. Debe prestarse especial atención al compromiso de la función hepática y renal, y a la aparición de arritmias cardíacas.