Practica 1
- 1. 1 UNIVERSIDAD TÉCNICA DE MACHALA “Calidad Pertinencia y Calidez” D.L NO 69-04 DE 14 DE ABRIL DE 1969 UNIDAD ACADÉMICA DE CIENCIAS QUÍMICAS Y DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA LABORATORIO DE TOXICOLOGÍA PRACTICA: BF.8.01-1 DOCENTE: Dr. Carlos García MSc. CARRERA: Bioquímica y Farmacia NOMBRE: Eliana Gabriela Pérez Ramírez CURSO: Octavo Semestre PARALELO: “B” GRUPO: # 2 PERIODO: Mayo - Agosto FECHA DE REALIZACIÓN DE LA PRACTICA: Miércoles 31 de Mayo del 2017 FECHA DE PRESENTACIÓN DE LA PRACTICA: Miércoles 07 de Junio del 2017 INICIO DE LA PRACTICA : 7 H 30 TITULO DE LA PRACTICA: INTOXICACIÓN PRODUCIDA POR METANOL ANIMAL DE EXPERIMENTACIÓN: VISERAS DE POLLO 1. OBJETIVOS DE LA PRACTICA Observar macroscópicamente las vísceras de pollo con Metanol Determinar mediante reacciones de reconocimiento la presencia de Metanol Adquirir la habilidad para realizar las reacciones de identificación Aplicar los conocimientos adquiridos cuando se necesite reemplazar algún reactivo inexistente . 2. FUNDAMENTACIÓN: El metanol se absorbe por vía oral a través de la piel, y por vía respiratoria. Su volumen de distribución es de 0.6 L/Kg. Se distribuye en el agua corporal y es prácticamente insoluble en la grasa. El hígado lo metaboliza en su mayor parte a través del alcohol-deshidrogenasa, hacia formaldehido, que es rápidamente convertido a ácido fórmico por el aldehído- deshidrogenasa, el cual es finalmente oxidado a dióxido de carbono. El metanol afecta principalmente al SNC, produciendo deterioro del nivel de conciencia, _______ 10
- 2. 2 Las reacciones particulares para reconocer al metanol como tal, prácticamente no existe por lo que es necesario identificar el formaldehído, éste se consigue mediante un sencillo método de colorimetría mediante las siguientes reacciones de identificación: Reacción de Schiff, Reacción de Rímini . Reacción con fenilhidracina, Reacción de Marquis, reacción con el ácido cromotrópico, Reacción de Hehner 3. MÁNDALA USO DEL METANOL 4. INSTRUCCIONES - Usar la bata de laboratorio e indumentaria resistente a ácidos. - Gafas de seguridad con protección lateral. - Guantes de caucho. - Mascarilla antigases tóxicos 5. MATERIALES, EQUIPOS, REACTIVOS, Y SUSTANCIAS. MATERIALES REACTIVOS, Y SUSTANCIAS Bisturí Equipo de disección Tubos de ensayo Pipeta graduada Espátula Ácido clorhídrico Ácido Oxálico Ácido sulfúrico puro Fushinabisulfatada remplazada por violeta Cloruro de fenil hidracina Ácido cromotropico Leche Cloruro férrico Agua destilada M E T A N O L Removedor de pinturas Combustible Desengrasante
- 3. 3 6. PROCEDIMIENTO. 1. Limpiar y desinfectar el área de trabajo (los mesones) 2. Colocamos las vísceras de pollo en un recipiente mediano 3. Con la ayuda del equipo de diseccionó se empieza preparar las muestras parar cada grupo. (picar las vísceras lo más pequeño posible ) 4. Mientras trascurre este proceso los demás grupos preparan los reactivos para realizar las demás reacciones de reconocimiento. 7. REACCIONES DE IDENTIFICACIÓN Reconocimiento en medios biológicos 1. REACCIÓN DE SCHIFF.- Se produce color violeta a) A una pequeña porción de la muestra, se añade 1ml de permanganato de potasio al 1% b) Después de mezclar se adiciona unas gotas de ácido sulfúrico puro, se deja reposar por tres minutos c) Se agregan algunas gotas de solución saturada de ácido oxálico (hasta que decolore la mezcla); la mezcla adquiere un color madera que se decolora totalmente luego de agregarle nuevamente algunas gotas de ácido sulfúrico puro. d) Finalmente se le añade 1ml de fushina bisulfatada (Reactivo de Schiff), con lo cual se produce un intenso color violeta en caso de positivo 2. REACCIÓN DE RÍMINI.- Origina color azul intenso. a) A 5 ml de destilado se agregan 10 gotas de cloruro de fenilhidracina al 4 %, b) 4 gotas de solución de nitroprusiato de sodioal 2.5% recién preparado y 1ml de solución de hidróxido de sodio, c) Se produce una coloración azul intensa. 3. CON LA FENILHIDRACINA.- Da color rojo grosella. a) En un medio fuertemente acidificado con ácido clorhídrico a una pequeña cantidad de muestra se agrega un pedacito de cloruro de fenil hidracina, b) 2-4 gotas de solución de ferrocianuro de potasio al 5 – 10% y algunas gotas de hidróxido de potasio al 12% c) se obtiene una coloración rojo grosella. 4. REACCIÓN DE MARQUIS.- Se obtiene un color violeta. a) Se toma 1ml de destilado y se agregan 5ml de ácido sulfúrico concentrado, b) se agita luego con una solución sulfúrica de morfina (0.2 gr de cloruro de morfina en 10ml de ácido sulfúrico concentrado), c) se obtiene enseguida o después de algún tiempo un color violeta. 5. CON EL ÁCIDO CROMOTRÓPICO.- Da color rojo.
- 4. 4 a) Con este ácido en un medio fuertemente acidificadocon ácido sulfúrico, el formaldehido produce una coloración roja después de calentarla ligeramente. 6. REACCIÓN DE HEHNER.- Se produce color violeta o color rojo violeta. a) Se mezcla una gota de destilado con algunos mililitros de leche, b) se estratifica con ácido sulfúrico concentrado al que se le han agregado trazas de cloruro férrico (5 gotas de cloruro férrico en 500ml de ácido sulfúrico); c) En caso positivo, en la zona de contacto se produce un color violeta o azul violeta. 8. GRÁFICOS GRUPOS DE TRABAJO REALIZANDO SUS RESPECTIVAS REACCIONES 1 Se realizaladisecciónde lasvíscerasde pollo 2 Agregamosmetanol durante 15minutos 3 despuésde haber trascurrido15 minutosfiltrar 4 La muestraestá listapara trabajar y serentregada losgruposde trabajo
- 5. 5 9. RESULTADOS OBTENIDOS. REACCIÓN SCHIFF Positivo no característico NO hay color violeta REACCIÓN RÍMINI Positivo no característico NO hay color azul intenso REACCIÓN FENILHIDRACINA Positivo característico SI HAY COLOR ROJO GROSELLA
- 6. 6 REACCIÓN MARQUIS Positivo NO característico No hay color rojo REACCIÓN CROMOTRÓPICO Positivo característico SI hay color rojo REACCIÓN HEHNER Positivo no característico NO hay color rojo violeta
- 7. 7 10. CONCLUSIONES. Al terminar la práctica se concluye que: El metanol es un toxico volátil extremadamente letal en pequeñas concentraciones provoca intoxicación agua y crónica. Las reacciones de reconocimientos nos ayudan a identificar la presencia de metanol en las vísceras de pollo. Que las reacciones de reconocimiento son reacciones de colorimetría 11. RECOMENDACIONES. Durante la realización de la práctica se debe tomar en cuenta lo siguiente. - Que el área de trabajo este asépticamente disponible para trabajar con las muestras biológicas - Que el ácido Sulfúrico (H2SO4): esta sustancia provoca quemaduras graves, es un fuerte oxidante, ataca la ropa, madera y otros materiales carbonizándolos. En caso de contacto con los ojos, lave inmediatamente y con abundante con agua y obtenga atención médica inmediata. NUNCA le adicione agua a este producto. - Permanganato de potasio: con esta sustancia existe peligro de fuego en contacto con materias combustibles. Nocivo por ingestión hay que evitar su liberación al medio ambiente. - Bisulfito de sodio: esta sustancia es nociva por ingestión. En contacto con ácidos libera gases tóxicos. Evítese el contacto con los ojos. - Etanol: esta sustancia es fácilmente inflamable. Manténgase el recipiente bien cerrado. Conservar alejado de toda llama o fuente de chispas. 12. CUESTIONARIO. 1. ¿QUÉ TIPO DE TOXICIDAD CAUSA EL ETANOL Y CUAL ES AL DOSIS ? Toxicidad Crónica: 10 - 30ml produce ceguera Toxicidad agua: 60ml 240ml produce la muerte. 2. ¿CUALES SON LAS VÍAS DE INGRESO QUE PUEDE CAUSAR INTOXICACIÓN POR METANOL ? La principal vía es la respiratoria, seguido de la digestión y por último la por absorción cutánea
- 8. 8 3. ¿ CUAL ES EL TRATAMIENTO DE LA INTOXICACIÓN POR METANOL. La recuperación del paciente parece estar directamente relacionada con el intervalo de tiempo transcurrido y el grado de acidosis entre la ingestión del tóxico y el inicio del tratamiento. Para prevenir la absorción se hará lavado gástrico, a ser posible en las dos primeras horas o en las 4 primeras horas si la ingesta se acompañó de alimentos. o Puede realizarse infusión de etanol para bloquear la metabolización hepática del metanol por inhibición competitiva del alcohol deshidrogenasa, y forzar la eliminación del tóxico por rutas extra hepáticas. o Para conseguir los niveles plasmáticos óptimos de etanol (entre 1 y 2 g/l), se administra un bolo vía intravenosa de 1.1 ml/Kg disuelto en 100 ml de suero glucosado al 5% a pasar en 15 minutos; a continuación 0.1 ml/Kg/h disueltos cada vez en 100ml de suero glucosado al 5%; si se trata de un alcohólico crónico, la dosis de mantenimiento es de 0.2 ml/Kg/h. o La diuresis forzada no es eficaz, pero con la hemodiálisis se consigue depurar tanto el metanol como el ácido fórmico y el formaldehido (Garcia, 2016). Los criterios para indicar la diálisis serian cualquiera de los siguientes: metanol >0.5g/l, acidosis metabólica con pH <7.20, trastornos visuales o disminución de nivel de conciencia. Si se indica diálisis deben mantenerse durante varias horas, y no interrumpirse hasta que el metanol sea <0.2g/l. Para controlar las convulsiones se utiliza diazepan y fenitoína (UNITET, 2011). 13. GLOSARIO. Perfusión: Introducción lenta y continuada de una sustancia medicamentosa o de sangre en un organismo u órgano por vía intravenosa, subcutánea o rectal (Jeff, 2014) Tromboflebitis: Inflamación de una vena que va acompañada de la formación de un trombo sanguíneo en su interior (Jeff, 2014). Miscible: Mezclable, que puede ser mezclado (Jeff, 2014). Positivo Característico: es positivo porque indica reacción y característico por que el color es el mismo de la reacción de identificación Positivo No característico: es positivo porque indica reacción y no característico por que el color no es el mismo de la reacción de identificación
- 9. 9 14. BIBLIOGRAFÍA Garcia. (5 de Marzo de 2016). Intoxicacion por Metanol. Machala. Obtenido de http://toxicologia5.blogspot.com/ Recuperado el 7 de Junio de 2017, Jeff. (Diciembre de 2014). CCM. Recuperado el 7 de Junio de 2017, de http://salud.ccm.net/faq/20605-perfusion-fisiologia-definicion UNITET. (2011). Obtenido de Barranco, F: http://tratado.uninet.edu/indautor.html 15. ANEXOS _____________________________ FIRMA ELIANA PÉREZ Cd. 0705367167